标题：细菌培养技术 版本号：A 修订号：0
文件编号：XXX-XJ-SOP-002 发布日期：2006年06月06日
生效日期：2006年07月01日 发布部门：管理层
编制人：XXX 审核人： XXX
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细菌培养技术
目的：无菌操作接种、培养是细菌学实验室中最基本、最重要的操作技术，它是鉴定细菌的首要前提。
器材：酒精灯、95%酒精、接种环（针）、培养皿（瓶）、烛缸、火柴等。
一、 无菌操作技术的基本要求
1、 临床细菌检验的所有操作，均必须在无菌条件下进行，即在酒精灯火焰附近或在超净工作台内进行。
2、 由临床标本或培养物中取材作检查时，必须使用接种环（针），使用前后均需火焰灭菌。
3、 从培养瓶或试管培养物中取标本时，在打开瓶口、试管口或关闭前，均要在火焰上通过1—2次，瓶塞或试管塞用无名指及小指夹住，操作完毕后塞回。
4、 不慎打破培养物瓶（管）时，应报告负责人后，用0.2%消毒灵处理污染的台面或至少覆盖30分钟。打破的器皿集于容器内高压灭菌，台面及地面再进一步消毒清洗。
5、 工作完毕后，实验台用0.2%消毒灵擦拭，双手用0.2%消毒灵浸泡，再用肥皂和清水刷洗干净。.
二、 接种方法
（一） 平板接种法：平板划线接种是细菌分离培养的常用技术，主要使标本或培养物中的混合细菌能在培养基表面分散生长形成单个菌落。
1、 曲线划线分离法：接种环菌灭后挑取标本或菌液少许呈45度角，在平板1/5处轻轻涂布，然后左右来回以曲线形成划线接种，倒置37℃温箱内培养24h后观察结果。
2、 分区划线分离法：接种环于平板内分划五区，每划完一个区域烧灼环一次后倒置35—37℃培养。
（二） 穿刺接种法：多用于保存菌种观察动力及做厌氧培养，亦可用于观察细菌对糖类的分解反应，培养基为半固体。
方法：1、左手持细菌培养物。
2、右手持接种针酒精灯上烧灼，冷却后挑取细菌。
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细菌培养
细菌培养是一种将细菌放置在适当的培养基上，以便它们能够繁殖和生长的方法。在细菌培养的过程中，细菌会利用培养基中的营养物质、水和氧气等物质进行代谢活动，从而生长和繁殖。下面是细菌培养的一些基本步骤：
选择适当的培养基：不同的细菌需要不同的培养基，选择适当的培养基可以促进细菌的生长和繁殖。
准备培养基：将适当的培养基配制好，并将其倒入培养皿中。
接种细菌：将需要培养的细菌接种在培养基上，可以用匀菌器在培养基表面均匀涂抹，也可以用注射器在培养基中注入细菌。
培养：将培养皿放入恒温培养箱中，控制好温度、湿度和氧气等条件，让细菌在培养基上生长和繁殖。
观察：观察细菌的生长情况，可以通过肉眼、显微镜等方法观察细菌的数量、形态、颜色等特征。
存储：将培养好的细菌进行存储，可以用冷冻保存或冷藏保存等方法，以备后续实验或使用。
需要注意的是，在进行细菌培养的过程中需要严格遵守无菌操作规范，避免细菌污染。这包括使用无菌器材、消毒培养器具、穿戴无菌手套等。同时，也需要注意控制好培养条件，比如温度、湿度、氧气等，以避免影响细菌的生长和繁殖。
细菌培养是微生物学和生物技术领域中非常重要的实验技术，它可以用于研究细菌的生理代谢、毒力、抗药性等方面，也可以用于生产抗生素、发酵食品、制备生物材料等方面。因此，掌握细菌培养技 2 / 2
术对于相关领域的研究和应用具有重要意义。
微生物培养及实验基本操作技术
一、培养基配制
培养基是指人工配制的、适合于微生物生长繁殖或累积代谢产物所需的各种营养物的混合基质。
配制培养基是进行微生物检验工作的基础,甚至是任何与微生物有关工作的基础。
注意事項 – 灭菌锅的使用
①加水盖过底部铁板—②放入东西—③关门—④調整溫度時間—⑤关紧泄压阀
灭菌結束後，等压力降回零時才可打開門
進入灭菌锅 之物品，蓋子不可關太緊或太鬆
拿滅菌後物品請記得帶耐熱手套
培养基中的主要成分及其作用：
营养物质： N源、C源、无机盐、生长因子、水
常用的N源：蛋白胨、牛肉膏、肉浸汁、酵母膏
常用的C源：糖、醇类物质（单糖：葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖 双糖：蔗糖、麦芽糖、乳糖；多糖：淀粉、纤维素、菊糖；醇类：甘露醇、卫茅醇、甘油）
水：用蒸馏水，不能用自来水 凝固剂：琼脂、明胶、血清等
抑制剂：
1、作用：鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖，增加待检菌的检出率
2、种类：
盐类：氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾（钠）、亚硒酸钠等
染色剂类：煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、孟加拉红、玫瑰红
胆盐类：猪（牛、羊）胆盐、混合胆盐、三号胆盐、去氧胆酸盐、胆石酸盐
抗菌素：青霉素、链霉素、杆菌肽、多粘菌素
指示剂
1、作用：用于指示鉴别细菌可否利用分解糖醇类物质和含氮化合物，产酸产碱的能力。
2、常用的指示剂：酚红、溴甲酚紫、中性红、中国蓝、甲基红、复红、伊红、美蓝、孔雀绿等。
培养基的类型：
根据培养基的物理状态来区分：
1、液体培养基 ：主要用于增菌培养、鉴别性培养
2、固体培养基：用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定
3、半固体培养基：观察微生物的动力，有时用来保藏菌种
4、脱水(商品)培荞基：脱水培养基也称为商品培养基、预制干燥培养基。
将各种营养成分按比例配制完全,制成脱水的干粉状,装瓶出售;使用时只需按比例加人定量的水溶化、灭菌便可。
第二节 细菌培养检测技术
节概述
细菌的培养技术是微生物实验中基本技术之一。大多数细菌均可用人工方法培养，只有将细菌
培养出来才能对它进行研究和鉴定
知识点导航
一.培养基的种类
培养基（culture medium）是细菌生长繁殖所需要的各种营养物质的人工制品。适宜的培养基
能使细菌在体外迅速生长繁殖，便于对细菌进行分离和鉴别。可分为基础培养基、营养培养基、选
择培养基、鉴别培养基、厌氧菌用培养基和特殊培养基。
（一）基础培养基
只含有细菌生长所需的最基本营养成分，应用最广泛，为制备多种培养基的基础，常见的有肉
汤培养基、琼脂培养基。
（二）营养培养基
在基础培养基中加入葡萄糖、血液、血清、腹水或酵母浸膏等有机物，可供营养要求较高的细
菌生长需要或增菌用。如结核分枝杆菌培养基中添加鸡蛋、马铃薯、甘油等。
（三）选择培养基
利用不同种类细菌对化学物质的敏感性不同而制成，使分离菌大量繁殖而抑制其它细菌生长的
培养基。培养基中含有的抑制剂能抑制非目的菌生长或使其生长不佳，有利于目的菌的检出和识别
。选择培养基多为固体平板，用于从标本中分离某些特定的细菌。
（四）鉴别培养基
培养基中加有某些特定成分，如糖、醇类和指示剂等，用于检查细菌的各种生化反应，以资鉴
别和鉴定细菌。
（五）厌氧菌用培养基
专性厌氧菌须在无氧条件下才能生长，故需在培养基中加入半胱氨酸、硫乙醇酸钠等还原剂，
降低培养基中氧化还原电势，并应与外界空气隔绝，使培养基本身为无氧的环境。
（六）特殊培养基
为某些需要在特殊条件下才能生长的细菌培养之用。如高渗盐增菌培养基、高渗糖增菌培养
基、改良 Kagan氏培养基等。
二.培养基的制备
制备一般培养基的主要过程基本相似，包括调配、溶化、调整 pH、过滤、分装、灭菌及检定和
保存。
三.细菌检验室的注意事项及无菌技术 细菌培养必须随时为防止污染和病原菌的扩散而进行操作，即无菌操作。细菌检验室的注意事
