重组人P53腺病毒基因经介入治疗肝癌实验探究
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华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文
1中英文缩写词表
重组人P53腺病毒基因 recombinant human adenovirus P53
gene rAd-p53
肝动脉化疗栓塞 transcatheter arterial chemoembolization TACE
Bax蛋白 Bax protein
Bcl-蛋白 Bcl-2 protein
血管内皮生长因子 vascular endothelial growth factor VEGF
微血管密度 microvessel density MVD
凋亡指数 Apoptosis index AI
生理盐水 normal saline NS
末端DNA转移酶dUTP缺刻末
端标记法 TdT-mediated dUTP nick end labeling
method TUNEL
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2重组人P53腺病毒基因经介入途径治疗肝癌实验研究
中文摘要
第一部分 兔VX2移植性肝癌模型的建立及经介入途径重组人P53
腺病毒基因的表达
摘 要
目的 探讨兔VX2移植性肝癌模型的建立及重组人P53腺病毒基因
（rAd-p53 ,1X1012
VP/支）经介入途径在兔VX2移植性肝癌模型中的表达特点。
材料与方法 将60只新西兰大白兔采用移植法建立兔VX2移植性肝癌模型，于移植
术11天行磁共振（MRI）、CT检查，计算其体积（V1）。随机抽取27只移植成功的
荷瘤兔，平均分成三组：A组：经肝动脉单纯灌注rAd-p53（5X106
VP）；B组：rAd-p53
（5X106
VP）+超液态碘油0.5ml/只经肝动脉灌注；C组：瘤内rAd-p53（5X106
VP）
直接导入。所有荷瘤兔术中均行DSA摄影。介入术后24h、72h、6天分别处死实验
兔，通过免疫组织化学方法检测肿瘤组织及瘤周P53和Bax、Bcl-2蛋白的表达。
结果 所有60只大白兔经MRI及CT检查证实有57只种瘤成功，成功率95%。兔
VX2移植性肝癌模型CT平扫呈低密度或等密度影；MRI扫描TW1表现为低信号，
TW2表现为高信号，信号均匀，边界清楚；DSA显示瘤灶血供主要来自于肝动脉，
为富血管性，可见肿瘤染色。检测到A组P53蛋白在24h、72h及6天平均表达率分
别为19.65±5.29, 62.43±3.27, 18.73±3.45；B组P53蛋白在24h、72h及6天平均表达
率分别为20.28±4.34， 65.43±2.13 ，19.63±4.23；C组P53蛋白在24h、72h及6天
平均表达率分别为26.53±6.07，70.36±3.43 ，26.36±4.35。A组Bax蛋白在24h、72h
及6天平均表达率分别为8.56±1.27 ,35.75±1.35 ,9.84±2.46；B组Bax蛋白在24h、72h
及6天平均表达率分别为11.32±2.13 ，37.63±2.46，10.34±2.13；C组Bax蛋白在24h、
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372h及6天平均表达率分别为17.64±2.25 ，43.76 ±2.19 ，16.89±1.67。A组Bcl-2蛋
白在24h、72h及6天平均表达率分别为30.43±3.06 ，18.03±4.36 ，29.65±4.32；B
组Bcl-2蛋白在24h、72h及6天平均表达率分别为28.36±2.25 ，16.21±3.17 ，
27.70±3.39；C组Bcl-2蛋白在24h、72h及6天平均表达率分别为24.27±4.37 ，
12.07±2.64 ，23.84±2.51。P53和Bax蛋白的表达呈与时间相关性正态分布，以C组
表达最高，Bcl-2蛋白表达随P53蛋白表达的增多而减少。
结论 兔VX2移植性肝癌模型影像学特点与人肝癌相似，可用于肝癌的实验研究；
P53蛋白在兔VX2肝癌模型中的表达呈正态分布，Bax、Bcl-2蛋白的表达与P53蛋
白表达相关；不同的rAd-p53介入导入方式P53、Bax、Bcl-2蛋白表达不同，以瘤内
及瘤周直接注射方式表达最高，与超液态碘油混合灌注及单纯肝动脉灌注次之。
关键词 兔VX2 肝癌模型 磁共振 计算机断层摄影 数字血管减影 P53
腺病毒 基因表达
第二部分 重组人P53腺病毒基因经介入途径治疗兔VX2移植性肝
癌模型实验研究
摘 要
目的 观察重组人P53腺病毒基因经不同介入导入方式对兔VX2移植性肝癌模型治
疗效果。
材料与方法 采用第一部分成功建立的30只兔VX2移植性肝癌模型，介入术14天
分别行CT、MRI检查，计算其体积（V2），对其生长率进行比较，所有荷瘤兔术中
均行DSA摄影。随机分成五组，A组：经肝动脉灌注生理盐水0.5ml；B组：经肝动
脉灌注超液态碘油0.5ml/只行栓塞治疗；C组：经肝动脉单纯灌注rAd-p53（5X106
VP）；
D组：rAd-p53（5X106
VP）+超液态碘油0.5ml/只经肝动脉灌注；E组：瘤内rAd-p53
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4（5X106
VP）直接导入。介入术后2周处死实验兔，先行大体病理观察，再分别通过
免疫组织化学方法检测肿瘤细胞凋亡、血管内皮因子（VEGF）及Von-Willebrand-factor
（VIII因子）表达情况，对VIII因子阳性血管内皮细胞进行微血管（MVD）计数，
并结合其病理特征进行分析。
结果 各组治疗前肿瘤体积无显著性差异（P>0.05），治疗后肿瘤体积及肿瘤增长率
比较均不相同，两两比较分析显示，任意两组间比较均有显著性差异（p<0.05），C、
D、E组较A、B组增长率低，C、D、E组组间有显著性差异（p<0.05），以D组为低，
说明B、C、D、E组有显著抑制肿瘤生长作用，以D组最为明显。各组间肝表面转
移灶及显微镜下瘤周0.5cm肝组织转移灶不完全相同，两两比较结果示B组较A、C
组低（P〈0.05），而B、D组间无显著性差异（P>0.05），E组较C、D组高（P〈0.05），
D组较E组低（P〈0.05）。五组肿瘤细胞平均凋亡率分别12.06%、14.56%、17.65%、
18.69%、19.65%，经统计学分析C、D、E组较A、B 组高（P<0.05），C、D组较E
组低（P<0.05）。五组VEGF阳性率分别为50.0%、83.3%、83.3%、50.0%、50.0%，
统计分析B组较A组高（P<0.05），D、C、E三组间有显著性差异（P<0.05），D和E
组间无显著性差异（P>0.05）；五组间MVD不完全相同，分别为81.62±16.13 、85.23
±24.34 、75.20±23.91 、71.16±21.34 、72.34±25.29 ，统计学分析B组较A组
高（P<0.05），B组较D、C、E组高（P<0.05），D、C、E三组中以D组最高（P<0.05），
D和E组间无显著性差异（P>0.05）；MVD与VEGF之间存在较好的相关性。
结论 经介入途径导入重组人P53腺病毒基因能安全高效促进兔VX2肝癌细胞凋亡、
抑制肿瘤血管生成进而抑制肝癌细胞复发转移；不同的rAd-p53介入导入方式对肝癌
治疗效果不同，以与常规介入治疗联合灌注最为有效，瘤内及瘤周直接注射方式次之，
单纯肝动脉灌注稍差。
关键词 兔VX2 肝癌模型 磁共振 计算机断层摄影 化疗栓塞 腺病毒
P53 介入 免疫组化 凋亡 血管内皮生长因子 微血管密度
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5Experimental studies of recombinant human adenovirus P53 injection in
treatment for VX2 rabbit transplanted hepatocarcinoma through
interventional therapy
Abstract
Part one Establishing rabbit VX2 hepatocarcinoma model and the
features of expression of recombinant human adenovirus P53 injection in
the model through interventional guiding
Abstract
Objective: To investigate the feasibility of establishing rabbit VX2 hepatocarcinoma
model and study the features of expression of recombinant human adenovirus
P53(rAd-p53 ,1X1012
VP) injection in the model through interventional guiding.
Materials and methods: Sixty Newzealand rabbits hepatocarcinoma model were
established by VX2 tumor implantation, the tumor volume(V1) was measured by magnetic
resonance imaging(MRI) and CT scanning 11 days after implantation. Twenty-seven rabbits
were extracted randomizedlly after the successful implantation. Then they were divided
into three groups. Group A was infused through hepatic artery with rAd-p53(5×106VP) and
group B was ultrofluid lipiodol 0.5ml+rAd-p53(5×106VP) as well, then the group C was
injected in tumors with rAd-p53(5×106VP) through surgery directly. All the rabbit model
were performed DSA examination during operation. All the rabbits were detected by stain
of immunohistochemical method about the expression of P53、Bax and Bcl-2 protein in the
tumors and around tumors after the operation in 24h, 72h and 6 days.
