实验7动物染色体标本制备

1．器材：解剖器具、注射器、离心机、离心管、恒 温水浴箱、载玻片、酒精灯等；
2．试剂 0.1%秋水仙素溶液、Carnoy’s固定液 （甲醇：冰醋酸＝3：1）、0.075 mol / L KCI溶 液、Giemsa染液等。
3．材料：小鼠
方法与步骤：
1.取材前3～4 h，向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动 物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断 在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。
2.腹腔内注射秋水仙素3～4小时后，断头处死小鼠。 3.取出小鼠的后肢骨，注意不要将股骨剪断，否则容易造
成骨髓细胞的流失。Fra bibliotek 4.滴加适量生理盐水进行冲洗，并仔细地将皮肤、肌肉等 组织清除干净。
5.加入适量低渗液，用剪刀将骨充分剪碎，并用吸管吹 打，使骨髓细胞全部释放出来。
6.用滤网将获得的液体过滤到离心管中，加低渗液至8ml 左右，室温下静置20～30分钟，进行低渗。低渗结束后， 加入1ml左右的Carnoy’s 固定液进行预固定，轻轻混匀 后，离心。
15分钟，弃去染液，水洗，镜检。
结果：
作业:
绘图表示动物染色体的典型形态。 说明在小鼠骨髓染色体的制备过程中的关键步
骤。
7. 1200转/分，离心5分钟，弃上清，加入固定液，混匀 后，室温放置30分钟，再次离心去上清，重复固定一次， 离心后，向沉淀中加入1ml预冷的固定液，将细胞重悬。
8.取洁净冰水中预冷的载玻片，稍作倾斜，用吸管吸取一 滴上述细胞悬浮液，于载玻片上方适当高度滴在载玻片 上；
9.滴片后，将片子晾干，滴加适量Giemsa染液染色10～
小鼠骨髓瘤细胞染色体标本的制备
实验目的：
掌握小鼠骨髓细胞染色体的原理和制备方法，识别小鼠染 色体的数目及特点。

良好小鼠染色体标本的关键步骤染色体标本制备是进行细胞遗传学与基因组学研究的重要步骤之一，尤其在小鼠模型中。

良好的染色体标本可以为后续的染色体分析提供准确可靠的数据基础，因此染色体标本的制备过程至关重要。

本文将介绍良好小鼠染色体标本制备的关键步骤。

1. 细胞培养与预处理在开始染色体标本制备之前，首先需要对小鼠细胞进行培养和预处理。

细胞应该在无菌条件下培养，以确保细胞的健康状态和纯度。

同时，在细胞培养的过程中，应加入适量的细胞分裂抑制剂，如科林霉素或染色体解旋酶抑制剂，以防止染色体的损伤和断裂。

2. 细胞采集与固定经过适当的培养和预处理后，可以开始进行细胞采集与固定的步骤。

通常采用离心沉淀法或原位固定法进行细胞的采集。

离心沉淀法适用于大规模采集细胞，而原位固定法适用于对特定细胞进行选择性标本制备。

无论采用哪种方法，细胞在采集后应立即进行固定以避免细胞结构的变形和损伤。

3. 细胞裂解与染色体释放细胞固定后，接下来需要进行细胞的裂解与染色体释放。

常用的裂解方法有加入低渗透压缓冲液或高渗透压缓冲液，使细胞膜破裂释放染色体。

此外，还可以通过超声波处理或机械剪切等方法促进细胞的裂解和染色体的释放。

裂解后的细胞溶液应进行离心，以分离出染色体。

4. 染色体的固定与染色离心后的染色体需要进行固定与染色，以保持其形态结构和增强对染色体的观察。

常用的固定方法包括加入甲醛或醋酸乙酯等，固定时间需根据实验需求进行调整。

染色体的染色可以通过Giemsa染色、DAPI染色等方法进行。

染色后的染色体应进行洗涤以去除多余染料。

5. 染色体的显微观察与分析经过固定和染色的染色体标本可以进行显微观察与分析。

通常使用光学显微镜或荧光显微镜进行观察，并可以利用图像分析系统对染色体进行计数、测量和分析。

在观察和分析过程中，应注意保持显微镜和标本的清洁，以避免杂质的干扰和误判。

良好小鼠染色体标本的制备是一个复杂的过程，需要经过细胞培养与预处理、细胞采集与固定、细胞裂解与染色体释放、染色体的固定与染色以及染色体的显微观察与分析等关键步骤。

细胞及遗传学实验报告陈香燕201008030103 生科1班实验七植物染色体标本的制备与观察(一实验目的学习植物染色体标本的制备技术,掌握染色体的技术方法,了解染色体的生物学意义。

(二实验原理植物染色体标本的制备,常用分生组织,如根尖、茎尖和嫩叶做材料。

常规压片法仍是当今观察植物染色体常用的方法,其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤。

由于秋水仙素可以阻断细胞在分裂中期纺锤体(微管二聚体的形成,以至于不能拉动染色体分开向细胞两极,因此可以使细胞分裂停止在分裂中期,再经过染色,压片,镜检之后便可观察到细胞的染色体形态。

(三实验用品一、材料:蚕豆二、试剂1.Carnoy固定液2.0.1%秋水仙素溶液3.1mol/L HCl4.Schiff试剂5.亚硫酸水溶液(漂洗液6.Carbor fuchsin (卡宝品红染液(四实验方法步骤1.取材:将蚕豆种子培养在培养皿内的湿滤纸上,室温或28°C下发芽,待胚根长达1~2cm时,切取0.5cm长的根尖部分。

2.预处理:将切下的根尖浸入0.1%秋水仙素液中,室温下处理3~4h。

3.水解:把根尖投入预热的58~60°C 1mol/L热HCl中,恒温条件下水解14~15min4.染色:倒去热HCl,滴加卡宝品红少许,染色5~10分钟。

5.洗涤:吸去卡宝品红试剂,用蒸馏水换洗2~3次,每次1~2min。

除去残留染色液后加几滴45%醋酸。

6.压片:用吸管从醋酸中吸取材料,置干净载玻片上,材料周围保留半滴45%醋酸,盖上盖玻片,其上放一片吸水纸。

左手指压住吸水纸的左边,右手指从吸水纸的左端向右方轻轻抹去,再用铅笔擦头从盖玻片上轻轻敲打,使细胞均用散开。

7.镜检:把压好的片子放在显微镜下,先观察细胞分散状况和中期分裂相的多少,再检查分裂中期细胞中染色体是否完全散开。

如若染色体分散不好而难以分辨和计数,可取下片子,平放桌面上,用手指隔着吸水纸在盖玻片上稍施压力,如果操作细心,用力适度,便可很容易得到染色体分散良好的压片标本,供观察,计数和照相用。

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