紫外可见分光光度计的应用(六)

对于具有两个以上最大吸收的药物可以进一步简化操作无需费时作吸收光谱曲线只要测出各最大吸收波长处的吸收度求出这些吸收度的比值测出它们相对位置的比值即12278361应为170188应为31534526维生素b2水溶液的吸收光谱27若一种化合物对紫外光和可见光区的某一波段呈光学透明即不吸收或几乎不吸收而不纯杂质有吸收时则该物质的生产精制应当进行到规定波长处的吸收系数降到最低时为止
• 除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长 2nm以内；否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器 波长的准确性。
• 应以吸光度最大的波长作为测定波长。
• 一般供试品溶液的吸光度读数，以在0.3-0.7之间的误 差较小。
• 仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否 则测得的吸光度会偏低。狭缝宽度的选择，应以减小狭 缝宽度时供试品的吸光度不再增加为准。
3.纯度检查：
若一种化合物对紫外光和可见光区的某一 波段呈光学透明（即不吸收或几乎不吸收）， 而不纯杂质有吸收时，则该物质的生产精制 应当进行到规定波长处的吸收系数降到最低 时为止。有些药物就以此作为杂质限度检查 的依据。此外，有些药物的杂质是通过比色 法与杂质对照品比较进行控制的。
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• 检查肾上腺素中的酮体：取肾上腺素，加 0.1mol/L盐酸溶液，制成每1ml中含2mg的 溶液，照分光光度法，在310nm的波长处测 定，吸光度不得过0.05。
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•红外光区的灵敏度和精密度较低，一般需要 数百微克（g）的供试品进行测定，此区域 内，物质对光的吸收系由分子中振动和转动能 级的跃迁引起，红外光谱的特征性很强，特别 是在7-15m（称为“指纹区”），吸收峰很 多，而且尖锐。除光学异构体外，不会遇到两 种不同的化学物质完全相同的红外吸收光谱， 故红外区主要用于鉴别和分析物质的结构。

如果用△ E电子，△ E振动以及△E转动表示各能级 差，则：
E电 E振 E转
能级差 E h h c
由分子中的电子能级、振动能级和转动能级跃迁产 生的光谱称分子吸收光谱。
2．分子吸收光谱的分类： 分子内运动涉及电子能级、振动能级和转动
能级三种跃迁能级，
E电 E振 E转
对应的波谱区范围如下：
吸收曲线与最大吸收波长 max
①同一种物质对不同波长光的吸光度 不同。如KMnO4在400nm吸收少， 在525nm吸收最大，吸光度最大处 对应的波长称为最大吸收波长λmax ②不同浓度的同一种物质，其吸收曲 线形状相似,λmax不变。而对于不同 物质，它们的吸收曲线形状和λmax 则不同。 ③吸收曲线可以提供物质的结构信息，
电子的基团。 例： C＝C；C＝O；C＝N；—N＝N— 注：当出现几个生色团共轭，则几个生色团所产生的
吸收带将消失，代之出现新的共轭吸收带，其波 长将比单个生色团的吸收波长长，强度也增强。
下面为某些常见生色团的吸收光谱
生色团 烯 炔 羧基 酰胺基 羰基 偶氮基 硝基 亚硝基 硝酸酯
溶剂 正庚烷 正庚烷 乙醇 水 正己烷 乙醇 异辛酯 乙醚
称最小吸收波长(λmin) 。
3.肩峰:在一个吸收峰旁边 产生的一个曲折。 4.末端吸收:只在图谱短波 呈现强吸收而不成峰形的
部分。
5. 生色团
所谓生色团，是指有机化合物分子结构中含有p -
p*和n-p*中跃迁的基团,即能在紫外-可见光范围内产 生吸收的原子团。 对有机化合物：主要为具有不饱和键和未成对
概述
一、紫外-可见分光光度法：是研究物质在紫外可见光区(200 ~ 800 nm)分子吸收光谱的分析方 法。
可见光区 400~760nm；紫外光区200~400nm。 二.紫外—可见分光光度法的特点 （1）灵敏度较高：灵敏度可达10-5~10-7g/mL （2）选择性较好：多组分共存溶液中，无需化学

T6新世纪紫外可见分光光度计操作规程
一、开机自检：打开仪器主机电源，仪器开始初始化；约3分钟时间初始化完成。
初始化完成后，仪器进入主菜单界面。
二、进入光度测量状态：按 键，进入光度测量界面。
三、进入测量界面：按 键进入样品测定界面。
四、设置测量波长：按 键，输入测量的波长，按 键确认，仪器将自动调整波长。
如果需要测量下一个样品，取出比色皿，更换为下一个测量的样品按 键既可读数。
如果需要更换波长，可以直接按 键，调整波长。
如果每次使用的比色皿数量是固定个数，下一次使用仪器时可以跳过第五、六步骤直接进入样品测量。
注意：更换波长后必须重新按 进行空白校正。
八、结束测量：
测量完成后记录数据,退出程序或关闭仪器后测量数据将消失。确保已从样品池中取出所有比色皿，清洗干净以便下一次使用。按 键直到返回到仪器主菜单界面后再关闭仪器电源.
3.2吸收曲线的绘制
准确吸取未知液5mL，于100mL容量瓶中配成浓度约为10 的待测溶液，以蒸馏水为参比，于波长200~350nm范围内测定吸光度，作吸收曲线，从曲线上查得最大吸收波长（230nm和297nm附近）。
3.3标准曲线的绘制
准确吸取水杨酸标准溶液若干体积，稀释成一系列不同浓度的标准溶液（0~16 ），于最大吸收波长分别测出其吸光度。然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制出标准曲线。
1.2石英比色皿（1cm）：2个
1.3容量瓶（100mL）：7只
1.4吸量管（1mL、2mL、5mL、10mL）：各1只
2.试剂
2.1水杨酸标准溶液（1mg/mL）;
2.2未知液：浓度约为50~55 。
3.实验操作
3.1吸收池配套性检查
石英吸收池在220nm装蒸馏水，以一个吸收池为参比，调节 为100%，测定另一吸收池的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，记录第二比色皿的吸光度值作为校正值。

例：Cd2+浓度为140 umol ·L-1 ，双 硫腙法显色测定波长为520nm，液
层厚度2cm，吸光度为0.22，求 和
透光率T。
解： (1) A = b c
0.22 = 2 140 10-6
= 785.7 L ·mol-1 ·cm-1
(2) A =－lgT = 0.22 lgT = －0.22 T = 10－0.22 = 0.60 = 60%
（ε=200-2000L /（mol*cm ），如苯环。
（4） 210-250 nm有强吸收峰，表明可能含有2个共轭双键 ；在260nm,300 nm,330 nm有强吸收峰，说明是3个或3个以 上双键的共轭体系。
（5)若吸收峰延伸至可见光区，则可能是长链共轭或稠环 化合物
习题P46第21,22题
第三节 紫外可见分光光度法的定量分析 P9
照射分子，由于分子、原子或离子的能级是量子化的，不
连续的，只有光子的能量(h)与被照射物质粒子的基态和
激发态能量之差(E)相等时，才能被吸收。
△ E = h （ h为普朗克常数）
不同物质的基态和激发态的能量差不同，选择吸收光
子的能量也不同，即吸收的波长不同。
2、光的种类 P7
➢具有单一波长的光叫单色光，比如红，蓝光等。 ➢由不同波长的光组成的光叫复色光。比如日光等 ➢如两种适当颜色的单色光按适当的强度比例混合 能得到白光，则这两种颜色的光叫做互补色光。
A = K·b ·c
c：物质的量浓度(mol ·L-1) K:吸光系数。
b：为液层厚度(cm)
应用的条件：
入射光必须是单色光； 吸收发生在稀的均匀的介质中； 吸收过程中，吸收物质互相不发生作用。
3、吸光系数（K）