9荧光法定量测定维生素B2的含量

荧光分光光度法测定维生素B2片的含量

张群英;吴培云;袁孝友

【期刊名称】《安徽中医学院学报》

【年(卷),期】2006(25)4

【摘 要】目的:建立荧光分光光度法测定维生素B2 (VB2)片剂的含量.方法:激发波长为464 nm,发射波长为520 nm.结果:VB2片剂在0.2～1.0 mg/L浓度范围内,荧光强度与浓度呈良好线性关系,回收率为98.8%(n=5),RSD=2.32%.结论:该方法简便、准确,专属性强,试样量少,可用于对VB2片剂的质量控制.

【总页数】2页(P50-51)

【作 者】张群英;吴培云;袁孝友

【作者单位】安徽中医学院药学院,安徽,合肥,230031;安徽中医学院药学院,安徽,合肥,230031;安徽大学化学化工学院

【正文语种】中 文

【中图分类】R927.2

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荧光光度分析法测定维生素B的含量

荧光光度分析法（Fluorescence Spectrophotometry）是一种基于样品激发光发射强度的分析方法。在荧光光度分析法中，样品分子被短波长紫外光（激发光）激发后，可以发射长波长光（发射光）。通过测定样品在不同波长下的发射光强度，可以获得样品的不同信息，如分子结构、浓度等。本文将介绍如何使用荧光光度分析法测定维生素B的含量。

维生素B是一类对机体新陈代谢具有重要作用的维生素，包括维生素B1（硫胺素）、维生素B2（核黄素）、维生素B6（吡哆醇）等。这些维生素在人体内参与各种酶的催化作用，维持机体正常代谢的平衡。因此，测定维生素B的含量对于保障人体正常代谢具有重要意义。

在荧光光度分析法中，维生素B的浓度与样品在激发光下的发射光强度有关。一般情况下，维生素B在紫外光下被激发后，会发射出荧光光谱。根据维生素B的结构和光学性质，可以选择适当的激发波长和检测波长。

维生素B1的测定方法是比较常见的。其分子结构中含有吡啶环，能够在紫外光下吸收，同时也能发射荧光。一般情况下，选择激发波长为370nm，检测波长为440nm。在给定的激发波长下，维生素B1的发射光强度与其浓度呈良好的线性关系。可以通过制备一系列已知浓度的标准溶液，绘制标准曲线，从而测定未知样品中维生素B1的浓度。

维生素B2的测定方法类似于维生素B1、其分子结构中含有咪唑环和吡咯环，能够在紫外光下吸收，同时也能发射荧光。一般情况下，选择激发波长为450nm，检测波长为525nm。在给定的激发波长下，维生素B2的发射光强度与其浓度呈良好的线性关系。可以通过制备一系列已知浓度的标准溶液，绘制标准曲线，从而测定未知样品中维生素B2的浓度。 维生素B6的测定方法与维生素B1和B2略有不同。其分子结构中含有吡啶环和嘧啶环，能够在紫外光下吸收，同时也能发射荧光。一般情况下，可以选择激发波长为330nm，检测波长为385nm。通过制备一系列已知浓度的标准溶液，绘制标准曲线，从而测定未知样品中维生素B6的浓度。

表一 标准系列测定结果

维生素B2标准溶液浓度（mg/L） 0.00 0.16 0.32 0.48 0.64 0.80

荧光强度If 0.116 6.2475 12.5255 18.4275 24.1115 30.3305

荧光强度差值△If 0.0000 6.1315 12.4095 18.3115 23.9955 30.2145

图一 维生素B2的标准曲线y = 37.834x r = 0.999850510152025303500.20.40.60.81浓度（mg/L）荧光强度差值△If

维生素B2的分子荧光测定

一、目的要求

1、 了解分析荧光分析法的原理

2、 掌握用荧光法测定维生素的分析方法

3、 掌握荧光光度计的基本操作坊法

二、方法原理

基态分子吸收某波长光能后在很短的时间内，发出较入射波长更长的荧光，荧光的强度与物质浓度的关系If=KΦI0(1e-klc)当溶液较稀时If=KφI0 klc，If是光强度，K为仪器常数

Φ为荧光物质的荧光量子率，I0为入射光强度，l为样品池厚度。当条件一定时荧光强度与物质浓度成正比。

维生素B2称核黄素，微溶于水，在强酸、强碱下易分解性，弱酸条件下较稳定，在pH6-7荧光强度最大，浓度为0.5%的乙酸溶液中是一个强荧光物质

性和酸性溶液中，对热稳定，在碱性溶液中较易被破坏。通过实验确定它的最佳激发波长（370~440nm左右）和发射波长（560nm左右），在所确定的波长条件下，测定维生素B2标准系列溶液的荧光强度和浓度的工作曲线。用标准曲线法测定生物样品中维生素B2含量。

三、实验步骤

1、标准系列同业的配制

用吸管移取维生素B2标准贮备溶液10.00mL于100mL容量瓶中，用W为0.05的乙酸稀释至刻度，摇匀。吸取该稀释溶液（10.0mg·L-1）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00和4.00mL，分别放入6只100mL容量瓶中，用W为0.05的乙酸稀释至刻度，摇匀。此标准系列溶液的浓度为别为0.00，0.050，0.10，0.20，0.30和0.40mg·L-1（实验室提供）。

2、工作曲线绘制

取标准系列溶液之一，试验实验条件，找出最佳荧光发射波长。在所确定的波长条件下测定标准系列溶液的荧光强度，绘制荧光强度与浓度的工作曲线。

3、测定

将样品溶液（实验室提供），在实验条件下测定溶液的荧光强度，从标准曲线上找出样品溶液维生素B2的浓度。

四、结果处理

1、在坐标纸上绘出荧光强度与浓度的工作曲线。

2、从工作曲线上查出待测溶液中VB2的浓度（mg/L）。