研究与探讨 Ｖｏ １．２３，Ｎｏ．８，２００２
大豆肽的理化性质
及其￣＇Ｊｇ５防霸台酶活性的影晌
（华中农业大学食品科技系，武汉４３００７０） 荣建华 李小定 谢笔钧
■要用中性蛋白酶ＡＳ１．３９８水解大豆分离蛋白，经超滤分离 得到具有抗氧化活性的大豆肽。研究了大豆肽的一些理 化特性及其对脂肪氧合酶活性的影响。结果表明，大豆肽 的氨基酸组成和大豆分离蛋白基本相同，并具有良好的 溶解性，大豆肽在０．１－５００ｍｇ／ｍｌ浓度范围内对大豆脂肪 氧合酶有明显的抑制作用，在低浓度（Ｏ＿１￣ｏ．５ｍｇ／ｍ１）与 高浓度（２５０￣５００ｍｇ／ｒｒｄ）下抑制率较高，均大于９Ｏ％，而在 中等浓度（１－１ＯＯｍｇ／ｍ１）下抑制率较低，均不到８Ｏ％。 关ｔ调大豆肽理化特性 脂肪氧合酶 活性 Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｓｏｙｂｅａｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｓｏｌａｔｅｓ（ＳＰＩ）ｗｅｒｅ ｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄ ｂｙ ｎｅｕｔｒａＩ ｐｒｏｔｅａｓｅ ＡＳｌ ３９８， ｓｏｙｂｅａｎ ｐｅｐｔｉｄｅｓ（ＳＰ） ｗｉｔｈ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｕｌｔｒａ— ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ Ｓｏｍｅ ｏｆ ｔｈｅ ｐｈｙｓｉｃａＩ ａｎｄ ｃｈｅｍｉｃａＩ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＳＰ ｏｎ ｓｏｙｂｅａｎ ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ＳＰ ｗａｓ ａｌｍｏｓｔ ｔｈｅ ｓａｍｅ ａｓ ｔｈａｔ ｏｆ ＳＰＩ．ａｎｄ ｔｈｅ ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ Ｏｆ ＳＰ ｗａｓ ｂｅｔｔｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ＳＰＩ Ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｒａｎｇｅ ｏｆ ０．１—５００ｍｇ／ｍ１．ｔｈｅ ＳＰ ｃｏｕｌｄ ｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ Ａｔ Ｉｏｗｅｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（０ １～０．５ｍｇ／ ｍＩ）ｏｒ ｈｉｇｈｅｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（２５０～５００ｍｇ／ｍ１），ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒａｔｅ ｏｆ ＳＰ ｏｎ ｓｏｙｂｅａｎ ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ ｗａｓ ｏｖｅｒ ９０％ ｗｈｉｌｅ ａｔ ｍｉｄｄｌｅ ｃＯｎｃｅｎｔｒａｔｉＯｎ（１ １ ｏｏｍｑ／ｍＩ），ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒａｔｅ ｗａｓ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ８Ｏ％ ｙ ｗｏｒｄｓ ｓｏｙｂｅａｎ ｐｅｐｔｉｄｅｓ；ｐｈｙｓｉｃａｌ ａｎｄ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ；ｓｏｙｂｅａｎ ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ；ａｃｔｉｖｉｔｙ 中图分类号：ＴＳ２０１．２ ｌ 文献标识码：Ａ 文章编号：１ｏｏ２—０３０６（２００２）０８—００１９—０３
第 1 页，共 2 页植物中脂氧合酶（LOX）活性检测试剂盒说明书微量法 注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。货号：BC0325规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。试剂名称规格保存条件提取液液体110 mL×1瓶4℃保存粉剂一粉剂×1瓶4℃保存试剂一液体20 mL×1瓶4℃保存试剂二液体3mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、提取液：临用前将粉剂一倒入提取液中，溶液为悬浊液，使用前需摇匀。产品说明： LOX广泛存在于植物组织中，特别是黄豆种子中。LOX催化不饱和脂肪酸氧化反应，导致膜脂过氧化。在植物的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。LOX催化亚油酸氧化，氧化产物在234nm处有特征吸收峰；测定234nm吸光度增加速率，来计算LOX活性。注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。需自备的仪器和用品： 研钵/匀浆器、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪和蒸馏水。操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）称取约0.1g样本，加提取液1mL，冰上充分研磨，16000g 4℃离心20min，取上清液置冰上待测。二、测定步骤1. 分光光度计/酶标仪预热30 min以上，调节波长到234nm，蒸馏水调零。2. 试剂一在25℃水浴中预热30min以上。3. 空白管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL蒸馏水、160μL试剂一和20μL试剂二，迅速混匀后于234nm比色，记录15s和75s的吸光值，分别记为A1和A2。空白管只需做1-2次4. 测定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、160μL试剂一和20μL试剂二，迅速混匀后于234nm比色，记录15s和75s的吸光值，分别记为A3和A4。三、LOX活性计算a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下Beijing Solarbio Science & Technology Co., LtdTel: 400-968-6088 第 2 页，共 2 页1.按蛋白浓度计算活性单位定义：在1mL体系下，25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.001个单位为一个酶活单位。LOX (U/mg prot) = [(A4-A3)-(A2-A1)]÷0.001÷(Cpr×V样)÷T×V反总=10000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷Cpr2.按样本质量计算活性单位定义：在1mL体系下，25℃中每克样本每分钟催化吸光值变化0.001个单位为一个酶活单位。LOX (U/g 质量) = [(A4-A3)-(A2-A1)]÷0.001÷(V样÷V样总×W)÷T×V反总=10000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷W Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL（需另外测定）；W：样本质量，g；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02mL；V样总：上清液总体积，1mL；T：反应时间，1min；V反总：反应总体系，0.2mL。b.使用96孔UV板测定的计算公式如下3.按蛋白浓度计算活性单位定义：在1mL体系下，25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.0006个单位为一个酶活单位。LOX (U/mg prot) = [(A4-A3)-(A2-A1)]÷0.0006÷(Cpr×V样)÷T×V反总=16667×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷Cpr4.按样本质量计算活性单位定义：在1mL体系下，25℃中每克样本每分钟催化吸光值变化0.0006个单位为一个酶活单位。LOX (U/g 质量) = [(A4-A3)-(A2-A1)]÷0.0006÷(V样÷V样总×W)÷T×V反总=16667×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷W Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL（需另外测定）；W：样本质量，g；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02mL；V样总：上清液总体积，1mL；T：反应时间，1min；V反总：反应体系总体积，0.2mL。注意事项：1．样本处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日完成酶活性测定。2．正式实验前做1~2个预实验，保证∆A的值在0.02~1.2（微量石英比色皿）/0.01~0.72（96孔板）范围内；若反应后为明显的悬浊液，则需稀释后再测。相关发表文献：[1]Dou S, Liu S, Xu X, et al. Octanal inhibits spore germination of Penicillium digitatum involving membrane peroxidation[J]. Protoplasma, 2017, 254(4): 1539-1545.相关系列产品：BC0590/BC0595 游离脂肪酸（FFA）含量检测试剂盒BC2340/BC2345 脂肪酶（LPS）活性检测试剂盒BC1080/BC1085 乙醇脱氢酶（ADH）活性检测试剂盒BC1070/BC1075 丙酮酸脱羧酶（PDC）活性检测试剂盒BC0620/BC0625 甘油三酯（TG）含量检测试剂盒BC1890/BC1895 游离胆固醇（FC）含量检测试剂盒BC0750/BC0755 乙醛脱氢酶（ALDH）活性检测试剂盒
※基础研究 食品科学 ２００８，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．０３ ８７
脂肪氧合酶催化亚油酸氧化与大豆蛋白相互作
用过程中自由基迁移的电子顺磁共振研究（Ｉ＇）
自由基的检测
黄友如１，华欲飞２，
（１．常熟理工学院生物与食品工程系，江苏常熟 顾建华１，王雪峰１，陈义勇１
２１５５００；２．江南大学食品学院，江苏无锡 ２１４０３６）
摘要：应用电子顺磁共振（ＥＰＲ）波谱研究了模拟体系中导致大豆蛋白聚集体形成的自由基由氧化亚油酸到大豆蛋
白的迁移。经脂肪氧合酶催化亚油酸的诱导，在大豆蛋白ＥＰＲ波谱中检测到一个很强的源于肽链骨架 一碳原子或
其侧链其它碳原子的自由基信号，其ｇ值范围在２．００４１～２．００５４之间。此外，在碳自由基中场信号的低场区尚有
一个额外的肩峰，它是硫自由基信号，其ｇ值范围在２．０１９～２．０２８之间。在大豆蛋白与脂肪氧合酶和亚油酸混合
反应前，添加天然抗氧化剂如ＶＣ和 一生育酚或人工合成的抗氧化剂２，６一二叔丁基对甲酚（ＢＨＴ）均能抑制自由基信
号和荧光的发展，可使中场碳自由基信号降低３５％～６５％。
关键词：大豆蛋白；脂肪氧合酶；亚油酸；自由基；电子顺磁共振
Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｐａｒａｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ（ＥＰＲ）Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃａｌ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎ Ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ
Ｉ－Ｂ—Ｃａｔａｌｙｚｉｎｇ Ｌｉｎｏｌｅｉｃ Ａｃｉｄ—ｓｏｙｂｅａｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ（Ｉ）Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃａｌｓ
ＨＵＡＮＧ Ｙｏｕ・ｒｕ ，ＨＵＡ Ｙｕ—ｆｅｉ ，ＧＵ Ｊｉａｎ—ｈｕａ ，ＷＡＮＧ Ｘｕｅ—ｆｅｎｇ ，ＣＨＥＮ Ｙｉ—ｙｏｎｇ
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｆｏｏｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃｈａｎｇｓｈｕ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｎｇｓｈｕ ２１５５００，Ｃｈｉｎａ；
临床内科杂志２００７年８月第２４卷第８期Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ，Ａｕｇｕｓｔ ２００７，Ｖｏｌ，２４—，—Ｎｏ
５一脂氧合酶与食管癌
李建生陈霞 ［中图分类号］Ｒ７３５．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１－９０５７（２００７）０８－０５０９－０４ ［关键词］食管癌； ５一脂氧合酶 食管癌是严重威胁我国人们生命健康的恶性肿 瘤，深入了解食管浸润、转移的机制，寻求更新、更好的 治疗靶点具有重要意义。越来越多的研究显示，以不 饱和脂肪酸氧化代谢为标靶探求抗癌的干预措施在临 床前期的研究中具有广阔的前景。肿瘤发生学的研究 表明，不饱和脂肪酸必须经历氧化代谢来促进肿瘤生 成。５．脂氧合酶（５－ＬＯＸ）和环氧合酶－２（ＣＯＸ一２）分别 是花生四烯酸脂氧合酶、环氧合酶两条代谢途径中重 要的限速酶。ＣＯＸ－２参与调节肿瘤细胞的增生与凋 亡、肿瘤微血管的生成、癌细胞的侵袭与转移以及宿主 免疫系统的抑制等多个病理生理过程。食管癌组织中 有ＣＯＸ－２的高表达，并与预后密切相关¨．２ Ｊ。人们已 经在探索ＣＯＸ一２的抑制剂在肿瘤防治中的作用。随 着研究的深入，参与花生四烯酸代谢的另一关键酶 类一脂氧合酶受到了越来越多的关注，有学者发现 ＮＳＡＩＤｓ可通过花生四烯酸代谢的另一主要途径一脂 氧合酶途径而触发凋亡 Ｊ。不断增多的数据表明，脂 氧合酶代谢途径有望成为一个新的抗肿瘤靶点。 脂氧合酶概述 花生四烯酸（ＡＡ）是人体内一种必需的多价不饱 和脂肪酸，广泛分布于哺乳动物的中性脂肪中，为细胞 膜磷脂的重要组成部分。除作为主要的结构脂类外， 在一定条件下花生四烯酸可经磷脂酶Ａ 水解生成游 离的花生四烯酸。多种激动剂可促进花生四烯酸的释 放，如生长因子、细胞因子和激素等。一经释放，花生 四烯酸主要通过环氧合酶、脂氧合酶和细胞色素Ｐ４５０ 环氧化物酶等途径分别产生前列腺素类（ＰＧｓ）、血拴 素Ａ：（ＴＸＡ ）、羟二十碳四烯酸（ＨＥＴＥｓ）和白细胞三 烯（ＬＴｓ）以及环氧化二十碳三烯酸（ＥＥＴｓ）等代谢产 物，通过各种廿酸类物质间的平衡来调节人体内的脂 质代谢过程，并对人体几乎所有的组织产生相应的影 响。多项研究表明，ＡＡ及其各种廿酸类代谢产物在 肿瘤发生中具有重要作用。 作者单位：４５０００３郑州大学第一附属医院消化科（李建生）；华中科 技大学同济医学院附属协和医院消化科（陈霞） ・５０９・
