肝门阻断对大鼠肠道细菌移位和内毒素血症的影响

第３１卷第６期　２０１０年１１月　中山大学学报（医学科学版）　ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＳＵＮ　ＹＡＴ—ＳＥＮ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＭＥＤＩＣＡＬ　ＳＣＩＥＮＣＥＳ）　Ｖ０１．３ｌ　Ｎｏｖ．　Ｎｏ．６　２Ｏｌ０　

肝门阻断对大鼠肠道细菌移位和内毒素血症的影响　

苏永辉，贾英斌，潘海燕，郭兆旺，谢玉研，张百萌　

（中山大学附属第五医院普通外科．广东珠海５１９０００）　

摘要：【目的】探讨大鼠肝门阻断后肠道细菌移位、内毒素血症情况及肝硬化模型肝门阻断后细菌移位特点。【方法】将　

４０只非肝硬化雄性ＳＤ大鼠及４０只肝硬化模型雄性ＳＤ大鼠分别随机分为假手术组（ｎ＝１０）、肝门阻断１０　ｍｉｎ（ｎ＝１０）、　２０　ｍｉｎ（ｎ＝１０）、３０　ｍｉｎ组（／ｚ＝１０），在行肝门阻断手术２４　ｈ后分别取肠系膜淋巴结、肝、肺及门、腔静脉血作细菌培养，并取　

门、腔静脉血作内毒素检测。【结果】非肝硬化大鼠肝门阻断３０　ｍｉｎ组门、腔静脉血内毒素浓度（ＥＵ／ｍＬ　０．１８±０．０５、０．１７±　０．０６）明显高于假手术组（Ｅ　ｍＬ　０．１２±０．０３、０．１１　４－０．０３）。肠系膜淋巴结细菌培养呈阳性。肝硬化大鼠肝门阻断２０　ｍｉｎ组　

门、腔静脉血内毒素浓度（ＥＵ／ｍＬ　０．４２±０．０９、０．３５±０．０７）明显高于假手术组（ＥＵ／ｍＬ　０．１５±０．０４、０．１４±０．０３），并随肝门阻　

断时间延长升高越明显，肠系膜淋巴结、肝及门、腔静脉血细菌培养出现阳性，且随肝门阻断时间延长阳性率升高越明显，培　养出阳性细菌主要为大肠杆菌。在肝门阻断２Ｏ、３０　ｍｉｎ下肝硬化大鼠比非肝硬化大鼠门、腔静脉血内毒素浓度升高更明显　（Ｐ＜０．０１），出现细菌移位阳性率也更高。【结论】大鼠肝门阻断后可导制内毒素血症及肠道细菌移位，这一病理过程在肝硬　化情况下更容易出现，并且随肝门阻断时间延长而更加明显。　

关键词：肝门阻断；细菌移位：内毒素血症：肝硬化　中图分类号：Ｒ６５７－３　文献标志码：Ａ　文章编号：１６７２—３５５４（２０１０）０６—０８６７—０５　

Ｂａｃｔｅｒｉａｌ　Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ　Ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ　Ｐｒｉｎｇｌｅ　Ｍａｎｅｕｖｅｒ　ｉｎ　Ｒａｔｓ　

ｓｕ　Ｙｏｎｇ—ｈｕｉ，ＪＩＡ　Ｙｉｎｇ—ｂｉｎ，ＰＡＮ　Ｈａｉ—ｙａｎ，ＧＵＯ　Ｚｈａｏ—ｗａｎｇ，ＸＩＥ　Ｙｕ—ｙａｎ，ＺＨＡＮＧ　Ｂａｉ—ｍｅｎｇ　

（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｔｈｅ　Ｆｉｆｔｈ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｕｎ　Ｙａｔ—ｓｅｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｕｈａｉ　５１９０００，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：　【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｐｒｉｎｇｌｅ　ｍａｎｅｕｖｅｒ（Ｐｉｎ）ｏｎ　ｓｙｓｔｅｍｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ（ＢＴ），　ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ　ｉｎ　ｎｏｎ—ｃｉｒｒｈｏｔｉｃ　ｒａｔｓ　ａｎｄ　ｃｉｒｈｏｔｉｃ　ｒａｔｓ．【Ｍｅｔｈｏｄｓ】Ａ　ｔｏｔａｌ　ｏｆ　４０　ｍａｌｅ　ＳＤ　ｎｏｎ—ｃｉｒｒｈｏｔｉｃ　ｒａｔｓ　ａｎｄ　４０　ｍａｌｅ　ＳＤ　ｃｉｒｈｏｔｉｃ　

ｒａｔｓ　ｗａｓ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｆｏｕｒ　ｅｑｕａｌ　ｇｒｏｕｐｓ：ｓｈａｍ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ（ｎ＝１０），Ｐｍ　ｏｆ　１０　ｒａｉｎ（ｎ＝１０），Ｐｍ　ｏｆ　２０　ｍｉｎ（　＝１０）　

ａｎｄ　Ｐｍ　ｏｆ　３０　ｍｉｎ（ｎ＝１０），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｉｓｓｕｅ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃ　ｌｙｍｐｈ　ｎｏｄｅｓ（ＭＬＮｓ），ｌｉｖｅｒ，ｌｕｎｇｓ，ｐｏｒｔａｌ　ａｎｄ　ｖｅｎａ　ｃａｖａ　ｂｌｏｏｄ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｏｒ　ｃｕｌｔｕｒｅｓ　ａｆｔｅｒ　２４　ｈ　ｏｆ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ．Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ　ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｉｎ　ｐｏｒｔａｌ　ａｎｄ　ｖｅｎａ　ｃａｖａ　ｂｌｏｏｄ　ａｆｔｅｒ　２４　ｈ　ｏｆ　

ｏｐｅｒａｔｉｏｎ．【Ｒｅｓｕｌｔｓ】Ｐｏｒｔａｌ　ａｎｄ　ｖｅｎａ　ｃａｖａ　ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｉｎ　Ｐｍ　ｏｆ　３０　ｍｉｎ　ｇｒｏｕｐ（ＥＵ／ｍＬ　０．１８±０．０５，０．１７±Ｏ．０６）ｗｅｒｅ　

ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｉｎ　ｓｈａｍ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ（ＥＵ／ｍＬ　０．１２±０．０３，０．１１±０．０３）ｉｎ　ｎｏｎ—ｃｉｒｒｈｏｔｉｃ　ｒａｔｓ，ａｎｄ　ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ａｌｓｏ　ａ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｉｎ　ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄ　ＭＬＮｓ．Ｗｈｉｌｅ　ｐｏｒｔａｌ　ａｎｄ　ｖｅｎａ　ｃａｖａ　ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｉｎ　Ｐｍ　ｏｆ　２０　ｍｉｎ　ｇｒｏｕｐ（ＥＵ／ｍＬ　０．４２±　Ｏ．０９，０．３５±０．０７）ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｉｎ　ｓｈａｍ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ（ＥＵ／ｍＬ　０．１５±０．０４，０．１４±０．０３）ｉｎ　ｃｉｒｈｏｔｉｃ　ｒａｔｓ，　ａｎｄ　ａ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｉｎ　ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄ　ＭＬＮｓ，ｌｉｖｅｒ，ｐｏｒｔａｌ　ａｎｄ　ｖｅｎａ　ｃａｖａ　ｂｌｏｏｄ　ｗａｓ　ｎｏｔｅｄ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ　ａｎｄ　

ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ　ｏｆ　ｇｕｔ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ　ｔｕｒｎｅｄ　ｈｉｇｈｅｒ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｔｉｍｅ　ｏｆ　Ｐｍ．Ｅ．ｃｏｌｉ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｃｏｍｍｏｎ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｉｎ　ｔｈｅ　ｇｒｏｕｐ　ｏｆ　Ｐｍ　ｏｆ　２０　ｍｉｎ　ａｎｄ　Ｐｍ　ｏｆ　３０　ｍｉｎ，ｔｈｅｒｅ　ｗｅｒｅ　ａ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｈｉｇｈｅｒ　ｏｆ　ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｐｏｒｔａｌ　ａｎｄ　ｖｅｎａ　ｃａｖａ（Ｐ＜０．０１）ａｎｄ　ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ　ｏｆ　ｇｕｔ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｃｉｒｒｈｏｔｉｃ　ｒａｔｓ　ｔｈａｎ　ｉｎ　ｎｏｎ—ｃｉｒｈｏｔｉｃ　ｒａｔｓ．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ】Ｔｈｅｒｅ　ｉｓ　ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ　ａｎｄ　ｇｕｔ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ　ａｆｔｅｒ　ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｅｐａｔｏｄｕｏｄｅｎａｌ　ｌｉｇａｍｅｎｔ　ｉｎ　ｒａｔｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ　ｉｎ　ｃｉｒｒｈｏｔｉｃ　ｒａｔｓ．Ｔｈｅ　

ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ　ａｎｄ　ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ　ｏｆ　ｇｕｔ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ　ｔｕｒｎ　ｈｉｇｈｅｒ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｔｉｍｅ　Ｏｆ　Ｐｍ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｐｒｉｎｇｌｅ　ｍａｎｅｕｖｅｒ；ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ；ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ；ｃｉｒｈｏｔｉｃ　

［Ｊ　ＳＵＮ　Ｙａｔ—ｓｅｎ　Ｕｎｉｖ（Ｍｅｄ　Ｓｃｉ），２０１０，３１（６）：８６７—８７１］　

收稿日期：２０１０—０７—１６　基金项目：珠海市科技局医药卫生重大项目（ＰＢ２００８１００２）　作者简介：苏永辉，博士，主治医师；　通信作者：张百萌，教授，博士生导师，Ｅ—ｍａｉｌ：ｂａｉｍｅｎｇｚ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｎ

　８６８　中山大学学报（医学科学版）　第３１卷　

临床上，肝切除和肝移植等外科手术通常需　

要阻断第一肝门，肝门阻断可导致肠道淤血。有研　

究报道肠道淤血比肠道缺血更容易引起肠组织的　

损伤［　。术后感染是肝移植和肝脏切除手术常见　

并发症之一。Ｓｉｎｇｈ［２３报道肝移植术后早期并发症　

以感染为主．感染的发生率达３６％一８０％，是术后　

死亡的首要原因。Ｇａｒｗｏｏｄ等［　］报道肝切除术后并　

发术后感染的发生率在４％至２０％之间，约占肝切　

除术后并发症的一半．且因为术后感染所导至患　者死亡占术后死亡４０％，最常见的感染菌为肠杆　

菌和肠球菌属。肝脏手术后感染并发症可能与肝　

门阻断肠粘膜损害引起的细菌、内毒素移位有关。　

本实验旨在研究大鼠肝门阻断后肠道细菌移位及　

内毒素血症情况，并比较在肝硬化模型下肝门阻　

断后细菌移位特点。　

１材料和方法　

１．１　实验动物及模型的制作　

ＳＤ雄性大鼠。体质量２００～２５０　ｇ（中山大学　

实验动物中心提供），自由进食水。肝硬化模型制　

作：大鼠饮含１００　ｍＬ／Ｌ乙醇水溶液，经大鼠腹部　

皮下注射６０％四氯化碳矿物油溶液，头４次及最后　

４次剂量为０．５　ｍＬ／１００　ｇ，第５—１１次注射剂量为　

０．３　ｍＬ／１００　ｇ。每４　ｄ　１次．头４次后隔１０　ｄ注射　

第５次，之后每４　ｄ注射１次共１５次，每次注射　

时均严格测量体质量。　

１．２主要仪器和试剂　

美国ＲＢ公司Ｒａｔ　ＥＴ　Ｅｌｉｓａ　Ｋｉｔ，美国Ｂｉｏｔｅｋ公　

司ＥＬＹ　８００酶标仪．美国ＢＤ公司Ｂａｅｔｅｃ　９１２０血　

培养箱，德国Ｈｅｒａｅｕｓ公司Ｈｅｒａ　ｃｅｌｌ　ＣＯ２培养箱，　

法国生物梅里埃公司生化鉴定条。　

１－３　实验动物分组及实验方法　

１．３．１　动物分组４０只非肝硬化ＳＤ雄性大鼠随　

机分为４组：假手术组（ｎ＝１０）、肝门阻断１０　ｍｉｎ　

组（ｎ＝１０）、２０　ｍｉｎ组（ｎ＝１０）、３０　ｍｉｎ组（／Ｚ＝　

１０）：再取４Ｏ只肝硬化模型大鼠随机分为４组：假　

手术组（／７，＝１０）、肝门阻断１０　ｍｉｎ组（ｎ＝１０）、　

２０　ｍｉｎ组（凡＝１０）、３０　ｍｉｎ组（凡＝１０）。　

１．３．２实验方法实验动物术前禁食１２　ｈ，但予　

以饮水。乙醚麻醉，安尔碘消毒后腹部正中纵行切　

口进腹，解剖游离肝十二指肠韧带，分离出第一肝　

门。假手术组：开腹后不进行肝门阻断。肝门阻断　１０、２０、３０　ｍｉｎ组分别予无损伤血管钳肝门阻断　

１０、２０、３０　ｍｉｎ，术毕分层缝合腹壁肌层和皮肤，　

所有大鼠手术后２４　ｈ取标本检测。　

１．４观察指标及检测方法　

１．４．１　肝硬化评估肝硬化组大鼠均取部分肝脏　

组织以４０　ｇ／Ｌ多聚甲醛溶液固定后制作组织学　

切片．进行病理学检查，并按照肝纤维化程度进行　

评分。　

１．４．２细菌培养及鉴定各组大鼠按实验设计在　

无菌条件下分别取肠系膜淋巴结、肝脏、肺组织各　

约２　ｇ，加入２　ｍＬ生理盐水制成匀浆，各取１００　Ｌ　

接种于普通血琼脂平板及ＭｃＣｏｎｋｅｙ　Ｓ平板。在　

３５℃培养箱中培养１８—２４　ｈ，做需氧菌培养。再　

各取１００　ＩｘＬ接种于厌氧菌平板并立即置人厌氧　

袋做厌氧菌培养。同时各大鼠分别抽取门静脉及　

腔静脉血各１　ｍＬ置入血培养瓶行细菌培养。阳性　

细菌培养结果均采用生化鉴定方法行细菌种类鉴　

定，培养出肠道来源细菌即为细菌移位。　

１．４．３　血清内毒素的测定各组大鼠按实验设计　

分别取门静脉及腔静脉血各１　ｍＬ，室温放置２　ｈ后　

离心取血清，置于ＥＰ管内，一２０℃冰箱保存，集中