白芍总苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用及对GRP78表达的影响

・５５６・　ＣＨＩＮＥＳＥ　ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＩＮＴＥＧＲＡＴＩＶＥ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ　ＯＮ　ＣＡＲＤＩＯ一／ＣＥＲＥＢＲＯＶＡＳＣＵＬＡＲ　ＤＩＳＥＡＳＥ　Ｍａｙ　２０１０　Ｖｏ１．８　Ｎ　５　

基础医学论著　研　

白芍总苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤　

保护作用及对ＧＲＰ７８表达的影响　

郭道华，韦颖梅，王小静，叶云　

摘要：目的研究白芍总苷（ＴＧＰ）对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及对Ｇｒｐ７８蛋白表达的影响。方法　采用传统的在体心　

肌缺血再灌注模型，观察ＴＧＰ对大鼠心功能的影响。方法将４８只大鼠随机分为６纽：假手术纽（ｓｈａｍ纽）、模型纽（Ｉ／Ｒ）、ＴＧＰ低　

（５０　ｍｇ／ｋｇ）组、ＴＧＰ中（１００　ｍｇ／ｋｇ）组、ＴＧＰ高（２００　ｍｇ／ｋｇ）组、葛根素（１００　ｍｇ／ｋｇ）组，分别在术前一周灌胃，假手术组和模型组分　

别给予等量溶媒，葛根素（ＰＵＥ）于再灌注前５　ｒａｉｎ经颈总静脉注射，分别测定缺血前、缺血后３０　ｒａｉｎ、再灌注９０　ｍｉｎ时心率（ＨＲ）、　

左心室压力变化最大速率（±ｄｐ／ｄｔ…）、左心室收缩峰压（ＬＶＳＰ）以评价心脏功能。结果　缺血再灌注模型组在缺血３０　ｍｉｎ及再灌　

注９０　ｒａｉｎ后ＬＶＳＰ和±ｄｐ／ｄｔ…降低，与Ｉ／Ｒ组相比，不同剂量的ＴＧＰ组与ＰＵＥ组相对应时间点ＬＶＳＰ、±ｄｐ／ｄｔｍ　进行性升高。　结论ＴＧＰ对心肌缺血再灌注损伤有保护作用；其机制可能与通过促进ＧＲＰ７８的表达来发挥内源性的保护作用有关。　

关键词：白芍总苷；缺血再灌注损伤；ＧＲＰ７８　

中图分类号：Ｒ５４２．２　Ｒ２８５．５　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７２—１３４９（２０１０）Ｏ５—０５５６—０３　

Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｔｏｔａｌ　Ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ　ｏｆ　Ｐａｅｏｎｙ　ｏｎ　Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　Ｉｓｅｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ａｎｄ　

Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｌｕｃｏｓｅ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　７８　ｉｎ　Ｒａｔｓ　

Ｇｕｏ　Ｄａｏｈｕａ，Ｗｅｉ　Ｙｉｎｇｍｅｉ，Ｗａｎｇ　Ｘｉａｏｊｉｎｇ，ｅｔ　ａｌ／／Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｂｅｎｇｂｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ（Ｂｅｎｇｂｕ　２３３００３）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ　ｏｆ　ｐａｅｏｎｙ（ＴＧＰ）ｏｎ　ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｘ—　

ｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｇｌｕｃｏｓｅ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　７８（ＧＲＰ７８）ｉｎ　ｒａｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｆｏｒｔｙ—ｅｉｇｈｔ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　６　ｇｒｏｕｐｓ：Ｓｈａｍｏｐ—　

ｅｒａｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ，ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ（Ｉ／Ｒ　ｇｒｏｕｐ），ＴＧＰ　５０　ｍｇ／ｋｇ　ｇｒｏｕｐｓ，ＴＧＰ　１００　ｍｇ／ｋｇ　ｇｒｏｕｐ，ＴＧＰ　２００　ｍｇ／ｋｇ　ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ　

ｐｕｅｒａｒｉｎ　ｇｒｏｕｐ．Ｈｅａｒｔ　ｒａｔｅ（ＨＲ），ｌｅｆｔ　ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ　ｓｙｓｔｏｌｉｃ　ｐｅａｋ　ｐｒｅｓｓｕｒｅ（ＬＶＳＰ），ａｎｄ±ｄｐ／ｄｔ…ｏｆ　ｌｅｆｔ　ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ　ｓｙｓｔｏｌｉｃ　ｐｒｅｓｓｕｒｅ　ｗｅｒｅ　ｒｅｃｏｒｄｅｄ　ｂｅｆｏｒｅ　ｔｈｅ　ｉｓｃｈｅｍｉａ　３０　ｍｉｎ　ａｎｄ　ａｔ　ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　９０　ｍｉｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ａｔ　ｉｓｃｈｅｍｉａ　３０　ｍｉｎ　ａｎｄ　ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　９０　ｍｉｎ，ＨＲ，ＬＶＳＰ　

ａｎｄ土ｄｐ／ｄｔ…ｉｎ　Ｉ／Ｒ　ｇｒｏｕｐ　Ｗｅｒｅ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ．ＨＲ，ＬＶＳＰ，ａｎｄ±ｄｐ／ｄｔ…ｉｎ　ｓｈａｍｏｐｅｒａｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ，ＴＧＰ　ｇｒｏｕｐｓ　ａｎｄ　ｐｕｅｒａｒｉｎ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　

ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｉ／Ｒ　ｇｒｏｕｐ．ＧＲＰ７８　ｗａｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ａｔ　ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　９０　ｍｉｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　ＴＧＰ　ｃｏｕｌｄ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｍｙｏ—　

ｃａｒｄｉａｌ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｔｔｅｎｕａｔｅ　ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｉｎｊｕｒｙ，ａｎｄ　ｉｔｓ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｍｉｇｈｔ　ｂｅ　ｂｙ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＧＲＰ７８．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｔｏｔａｌ　ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ　ｏｆ　ｐａｅｏｎｙ；ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｉｎｊｕｒｙ；ｇｌｕｃｏｓｅ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　７８　

缺血性心肌病是危害人类健康的最常见疾病之一，随着急　

诊溶栓和冠状动脉旁路移植术等再灌注治疗的开展，心肌缺血　

再灌注（ｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ，Ｉ／Ｒ）损伤的治疗成为临床上疗效　

不佳的一个重要原因，再灌注时产生的氧自由基和细胞内钙超　

载可能是心肌缺血再灌注损伤重要的发病环节，有研究证明内　

质网应激参与了缺血再灌注性损伤　］，葡萄糖调控蛋白（ｇｌｕ—　

ｃｏｓｅ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ７８，ＧＲＰ７８）是内质网应激的伴侣分子，　具有减轻内质网负担、保护内质网的功能。白芍总苷（ｔｏｔａｌ　ｇｌｕ—　

ｃｏｓｉｄｅｓ　ｏｆ　ｐａｅｏｎｙ，ＴＧＰ）是从传统中药白芍中提取的有效成分，　主要含有芍药苷、芍药新苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷等成分。　

现代药理证明，ＴＧＰ具有抗炎、免疫调节、镇静、镇痛、耐缺氧、　

抗氧化和抗心肌缺血等作用［２　］，临床上常用于免疫、风湿疾病　

的治疗。本实验通过观察白芍总苷作用下心肌缺血再灌注损伤　

大鼠心功能及ＧＲＰ７８表达的变化，来探讨白芍总苷对大鼠　肌　

缺血再灌注损伤的保护作用及对ＧＲＰ７８的表达影响。　

１材料与方法　

１．１动物及试剂　４８只成年ＳＤ大鼠，雌性，体重２５０　ｇ～２８０　

ｇ，由蚌埠医学院动物实验中心提供；白芍总苷粉剂和羧甲基纤　

维素钠由安徽医科大学临床药理研究所惠赠；葛根素（三东瑞阳　制药有限公司，批号：０３０２０００１）；Ｐｏｗｅｒｌａｂ／１６ｓｐ数据采集和分　

析多导系统：ＡＤ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ　Ａｕｓｔｒａｌｉａ产品；ＤＨ一１４０Ｂ动物人　

工呼吸机：浙江医科大学医学仪器实验厂产品，ＧＲＰ７８多克隆　

抗体：（Ｓａｎｔａｃｒｕｚ）公司　

１．２心肌缺血再灌注损伤的模型建立　取ＳＤ大鼠称重，术前　

１２　ｈ禁食，腹腔注射２Ｏ　乌拉坦（５　ｍＬ／ｋｇ）麻醉，针状电极插入　

左前肢、右前肢、左后肢皮下，连续监测Ⅱ导联心电图。颈正中　

切开，于３～４气管软骨环间切开并行插管接动物呼吸机正压控　

制呼吸，结扎右颈总动脉远心端。监测心功能参数。以心电图　

显示ＳＴ段抬高、ＱＲＳ波变高变宽和心肌变为青紫色为结扎成　

功的标志。　

１．３实验分组将大鼠随机分为６组，每组８只。假手术组　

（ｓｈａｍ组）：ＬＡＤ穿线但不结扎，旷置９０　ｍｉｎ，术前１周用０．５％　

的羧甲基纤维素钠灌胃。模型组（Ｉ／Ｒ）：缺血３０　ｍｉｎ再灌注９Ｏ　

ｍｉｎ，术前１周用０．５　的羧甲基纤维素钠灌胃。ＴＧＰ组：５０　

ｍｇ／ｋｇ、１００　ｍｇ／ｋｇ、２００　ｍｇ／ｋｇ　ＴＧＰ分别灌胃一周；葛根素　

（ＰＵＥ组）：１００　ｍｇ／ｋｇ　ＰＵＥ于再灌注前５　ｒａｉｎ经右颈总推注。　

１．４观察指标　观测缺血前、缺血３０　ｍｉｎ、再灌９０　ｍｉｎ时心　

率（ＨＲ）、

左心室收缩峰压（ＬＶＳＰ）、左心室压力变化最大速率　中西医结合心脑血管病杂志２０１０年５月第８卷第５期　・　５５７　・　

（±ｄｐ／ｄｔ…）。　１．５　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ法　根据整个实验模型的特点及统计学分　

析的要求采用每组４个标本，具体方法：匀浆大鼠Ｍ／Ｉ处心肌　

组织，提取蛋白，用ＢＣＡ法蛋白定量，取２　０　Ｌ样品，　

ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳分离蛋白，湿转移法将蛋白条带转移至ＰＶＤＦ　

膜上（Ｍｉｌｌ￣ｐｏｒｅ—Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ），５０　ｇ／Ｌ脱脂奶粉封闭后依次加　

入一抗（ＧＲＰ７８抗体体积比１：３００）、二抗（碱磷酶标记的山羊　

抗兔体积比１：６　０００）　１．６统计学处理实验数据以均数±标准差（　±　）表示，组间　

比较采用单因素方差分析，样本均数两两比较采用ＳＮＫ—ｑ检　验，应用ＳＰＳＳ　１６．０统计软件对实验结果进行处理。　

２　结　果　２．１　ＴＧＰ和ＰＵＥ对大鼠心肌缺血再灌注损伤血流动力学的　

影响　模型．组在缺血３　０ｍｉｎ后以及再灌注９　０ｍｉｎ后，ＬＶＳＰ　和±ｄｐ／ｄｔ，￣　均明显下降，ＬＶＥＤＰ明显上升（Ｐ＜Ｏ．０５），说明心脏的　

舒缩功能明显受损。与Ｉ／Ｒ组相比，不同剂量的ＴＧＰ组与葛根　

素组相对应时间点的ＬＶＳＰ和±ｄｐ／ｄｔ…均能不同程度的提　

高、ＬＶＥＤＰ不同程度的降低（Ｐ＜０．０５），提示ＴＧＰ可使缺血再　

灌注损伤所致的心脏舒缩功能障碍明显减轻。详见表１～表４。　

表１　白芍总苷对Ｉ／Ｒ大鼠心率的影响（ｉ±ｓ）　／ｍｉｎ　

表２　白芍总苷对Ｉ／Ｒ大鼠＋ｄｐ／ｄｔｎ珀　的影响ｆ　±Ｓ）　

ｍｍＨｇ／ｓＸ　１０一。　Ｇｒｐ７８　

与Ｓｈａｍ组比较，１）Ｐ＜０．０５；与Ｉ／Ｒ组比较，２）Ｐ＜Ｏ．０５　

Ｓｈａｍ组　８　３．１６±０．２３　３．０５±０．１５　１／Ｒ组　一　８　３．１３±０．２６　１．９７±０．３７１　ＴＧＰ组　５０　ｒａｇ／ｋｇ　８　３．０８±０．３４　２．２７±０．２４　’　１００　ｎａｇ／ｋｇ　８　３．Ｏ６±０．２３　２．４１±０．２０　２００　ｍｇ／ｋｇ　８　３．１】士０．５４　２．７４±０．４３　）　ＰＵＥ组　１Ｏ０　ｍｇ／ｋｇ　８　３．０４±０．３３　２．６７±０．３５　’　２．９６±０．１５　２．０８±０．３３１　２．４４土０．１７　２　２．６５±０．１８　２　２．８９±０．４９　２　２．９３±０．３８　２　与Ｓｈａｍ组比较，１）Ｐ＜Ｏ．０５；与Ｉ／Ｒ组比较，２）Ｐ＜Ｏ．０５　

Ｓｈａｍ组　一　８　１　２７．４±４．２　１２６．８±３．８　Ｉ／Ｒ组　８　ｌ　２８．７±４．７　９】．５±２．２１）　ＴＧＰ组　５０　ｍｇ／ｋｇ　８　１　２７．８±３．８　９９．４±２．６　）　１００　ｍｇ／ｋｇ　８　１３２．３±４．１　１Ｏ４．４士３．１　２）　２００　ｒａｇ／ｋｇ　８　ｌ２７．９±３．０　１１５．４±２．６２）　ＰＵＥ组　１００　ｍｇ／ｋｇ　８　１３１．３±４．２　ｌ１８．１±３．１　２　１　２３．６±６．５　９７．１±２．７１）　１０８．８±２．５　２）　１１０．３±３．４２　１　２１．１士３．７２）　１２５．９±２．７２）　与Ｓｈａｍ组比较，１）Ｐ＜０．０５；与Ｉ／Ｒ组比较，２）Ｐ＜Ｏ．０５　

２．２白芍总苷对Ｉ／Ｒ大鼠ＧＲＰ７８表达的影响（见图１）　２　３　４　５　６　

注：１为假手术组；２为模型组３为白芍总苷５０　ｍｇ／ｋｇ组；４为白芍　总苷１００　ｍｇ／ｋｇ组；５为白芍总苷２００　ｍｇ／ｋｇ组；６为ＰＵＥ组。