白斑综合症病毒研究的最新进展

草鱼出血症的诊断与防治方法研究进展摘要：草鱼是大型鲤科经济鱼类，为我国四大家鱼之一，也是我国养殖产量最高的鱼类。

然而，由呼肠孤病毒引起的草鱼出血病是危害草鱼最为严重的病毒性疾病，给养殖者造成重大的经济损失。

因此，建立简单、快速的检测技术和有效的预防与治疗措施对于草鱼出血症的疾病控制相当重要。

本文主要从草鱼出血症的诊断及防治方法的研究进展做一综述。

关键词：草鱼出血症；诊断；防治Resent progress about diagnosis and prophylaxis methods of Grass Carp Hemorrhage VirusAbstract:Grass carp as one of four famous fish in our country is a large cyprinidae economic fish, also is the highest fish farming production. However, grass carp reovirus hemorrhagic a serious viral disease caused great economic losses for farmers. Therefore, to establish a simple and rapid detection technology and effective prophylaxis and treatment measures for grass carp out of disease control is quite important. This article mainly outlines the grass carp disease diagnosis and prevention methods.Key words:Grass Carp Hemorrhage Virus;diagnosis;prophylaxis 草鱼因其生长迅速，饲料来源广，是中国淡水养殖的“四大家鱼”之一，其产量约占淡水养殖总产量的20％。

白癜风中医研究论文-中医研究论文-医学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——1关于白癜风的病因病理分析1.1现代医学研究现代医学在白癜风的病理机制方面作了大量的研究。

不过截止到目前为止尚未形成具体的定论。

对于此病的病因病理，现代医学界的主流看法如下：（1）黑素细胞生长因子缺乏学说；（2）神经化学因子学说；（3）自身免疫学说；（4）黑素细胞自身破坏学说；（5）和局部皮肤损伤及长期压迫摩擦有联系；(6)遗传因素；（7）营养失调的影响。

1.2中医药学研究中医学对白癜风治疗有着悠久的历史。

中医理论研究认为，此病的发病原因主要是内外因共同作用形成的结果。

通常内因主要和肝、肾、脾、肾等脏腑出现失调有联系，主要由于七情内伤，导致气机不畅，从而复感风邪，博于肌肤，再引起肝气郁结，肺失宣降，引起气血悖逆，营卫失和而肌肤失养，日久肝气横逆而犯脾，导致脾胃不和，风湿遏于经络；肝肾同源，肝亏肾虚，营卫无畅达之机，气血不能营养肌肤，日久出现肝血虚、肾精亏，进而导致内热郁结体质。

外因主要是风邪与湿邪的影响，侵入肌肤，引起局部气血出现失和，经络不通畅，肌肤得不到温煦[2]。

内外因的综合影响，致使阴阳气血出现失调，皮肤毛发失养，从而出现黑色素脱失，最终生成白斑。

总之，中医观点认为此病和风、热、肺、肾、气、血等相关因素的影响十分紧密。

其次，此病的致病因素还包括燥、湿、心、肝、痰、虚等。

2相关临床症状皮损表现为出现色素脱失斑，这些斑块数目不等，大小不同。

最初有部分为色素减退斑，它们的边缘不清晰，不过会发展成色素脱失斑，通常为乳白色，常见于患者的脸、手背、乳头、颈项等部位。

患者上肢的白斑集中在手背、指背，下肢集中在小腿、足背。

通常，白斑分布对称，不过也会局限在某个部位，或顺着皮节分布。

白斑边界清晰，部分边缘部分色素反而会加重。

处于白斑内的毛发可能变白，其它黏膜部位也有一定影响，常见的包括口唇、、包皮内侧等部位。

卵黄抗体的应用研究进展【摘要】卵黄抗体又称“卵黄免疫球蛋白（IgY）”，具有强大的免疫功能，目前研究最多、应用最广的是鸡源IgY。

卵黄抗体以其化学性质稳定、制备简单、使用方便、成本低廉等优点，近年来逐渐引起学者的注意，在生物技术、医药卫生、食品科学等方面应用越来越广泛。

随着特异性IgY研究的日益深入，在各个领域显示出令人振奋的应用前景。

【关键词】卵黄抗体；诊断；治疗卵黄免疫球蛋白（egg yolk immunoglobulin）简称IgY，是从免疫后的禽蛋卵黄中提取出的针对某种特定抗原的抗体，多数为IgG，具有强大的免疫功能，因此又称之为“卵黄抗体”。

目前研究最多、应用最广的是鸡源性的卵黄免疫球蛋白。

鸡源性特异性IgY的制备先根据需要选定抗原对产蛋母鸡进行免疫，之后在蛋黄内就会产生抵抗该特定抗原的特异性抗体。

IgY抗体的获取无需采血，只需收集免疫蛋鸡产下的鸡蛋即可大量制备质量均一的特异性抗体[1]。

自20世纪50年代，研究学者就发现鸡卵黄中存在大量抗体，含量与鸡血清中的相当甚至更高；之后随着诸如标准IgY商品试剂的生产、IgY特异性纯化试剂盒的面市，开创了卵黄抗体应用的新时代。

1996年，IgY抗体的生产和应用技术被统称为“IgY技术”[2]，现在它已被列为一个国际化的标准应用技术。

另外由于亲缘关系较远以及结构差异，禽类的IgY与哺乳动物免疫球蛋白之间血清学鉴定不会发生交叉反应[3]，这进一步扩展了IgY的应用范围。

近年来卵黄抗体以其化学性质稳定、制备简单、使用方便、成本低廉等优点，逐渐引起人们的注意，在医药卫生、食品科学、生物技术等方面的应用越来越广泛。

1 IgY在医学疾病诊断方面的应用1.1 细菌性疾病的诊断Kim等人用单核李斯特菌的鞭毛蛋白作为抗原免疫蛋鸡，制备抗鞭毛蛋白抗原的特异性IgY，并通过ELISA法以抗鞭毛蛋白的单抗为包被抗体、特异性IgY 为检测抗体进行该菌的检测，结果显示此特异性IgY的敏感度高，特异性强，并且不与其它菌种发生交叉反应[4]。

广　西　农　学　报Journal of Guangxi Agriculture 第38卷　第2期Vol.38，No.2452023年4月April，2023动物科学虾肝肠孢子虫病及其防治手段的研究进展韦秀颖1,2 杜泓明2 覃绍敏1 刘金凤1 吴健敏1*（1.广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室，广西 南宁 530001；2.广西大学动物科学技术学院，广西 南宁 530004）摘要：虾肝肠孢子虫病（Hepatopancreatic microsporidiaosis ，HPM ）是由虾肝肠孢子虫（Enterocytozoon hepatopenaei ， EHP ）感染引起的一种虾类专性细胞内寄生的寄生虫病。

近年来该病在全世界对虾养殖区域内广泛流行，造成对虾生长缓慢综合症（MSGS ），损失堪比白斑综合症病毒病（WSSV ），严重影响对虾养殖业的健康与持续发展，引起了广泛关注。

本文就HPM 的病原、流行情况、传播途径、预防与检测手段及相关药物研究进展进行综述，以期为HPM 防控提供参考。

关键词：对虾；虾肝肠孢子虫；预防与检测；药物研究中图分类号：S851.34+7.34 文献标识号：A 文章编号：1003-4374（2023）02-0045-05Research Progress on Hepatopancreatic Microsporidiaosis and Its Control MethodsWei Xiu-ying 1,2, Du Hong-ming 2, Qin Shao-min 1, Liu Jin-feng 1, Wu Jian-min 1*（1. Guangxi Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Guangxi Veterinary Research Institute, Nanning, Guangxi 530001, China； 2. College of Animal Science and Technology, Guangxi University, Nanning,Guangxi 530004, China）Abstract: Hepatopancreatic microsporidiaosis is an obligate intracellular parasitic disease of penaeidcaused by Enterocytozoon hepatopenaei infection. In recent years, the disease has been widely prevalent inimportant penaeid farming areas around the world, causing Monodon Slow Growth Syndrome （MSGS）, and the loss has been comparable to with White Spot Syndrome Virus （WSSV）, seriously affecting the healthand sustainable development of the penaeid farming industry, which has caused widespread concern. In this paper, the pathogen, epidemic situation, transmission route, prevention and detection methods, and related drug research progress of HPM are reviewed in order to provide a reference for the prevention and control of HPM.Key words: penaeid, enterocytozoon hepatopenaei , prevention and detection, drug research 虾肝肠孢子虫（EHP）是近年来发现的一种对对虾养殖行业危害较大的寄生虫病病原，最早于2003年在泰国生长缓慢的斑节对虾（Penaeus monodon ）中被发现，直至2009 年才被成功分离，并被定义为孢子虫属的一个新物种。

摘要：禽网状内皮组织增生症（RE ），也被称为极性网状内皮组织细胞癌，是一种重要的家禽免疫抑制疾病。

其病原体禽网状内皮组织组织增生症病毒（REV ）广泛分布于不同鸟类，可引起亚临床感染。

REV 具有免疫抑制作用，REV 整合到其他较大DNA 病毒基因组中的能力使其诊断和预防变得复杂，可能导致其他疫病的疫苗接种失败。

目前还没有有效的治疗方案和预防疫苗，这也使如何限制RE 对家禽养殖的影响变得复杂。

本文综述了RE 已知的知识现状，强调了这一问题的严重性。

关键词：禽网状内皮组织增生症；病毒；共同感染禽网状内皮组织增生症研究进展刘洪勋（博兴县畜牧兽医服务中心山东滨州256500）doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2023.09.057收稿日期：2022-12-02禽网状内皮组织增生症（reticuloendotheliosis ，RE ）是家禽的一种恶性疾病，其病原体禽网状内皮组织组织增生症病毒（reticuloen -dotheliosis virus ，REV ）最早于1958年从患有肿瘤的火鸡内脏中分离而来，于1966年根据肿瘤病变存在的主要细胞成分首次被命名[1]。

我国2008年《一、二、三类动物疫病病种名录》将RE 列为二类动物疫病[1]。

长期以来，REV 一直与鸟类中广泛传播的疟原虫白斑疟原虫有关。

报道最多的是鸡和火鸡，鸭和鹅等水禽也有报道，其他野生鸟类包括鹌鹑、鹧鸪、孔雀、麻雀和鸽子等，成熟鹌鹑和10周龄鸡极易感染[2]。

尚没有证据证明哺乳动物能产生该病，而且REV 不会在任何哺乳动物来源的培养细胞中生长。

美国得克萨斯州濒临灭绝的阿特沃特草原鸡（tympanuchus cupido attwateri ）因为种群中流行的RE 致使种群恢复工作颇受阻碍，保护区内的雉和麻雀血液样本检测的阳性率极高[3]。

从组织病理学的角度来看，RE 导致淋巴组织的急性或慢性肿瘤。

RE 的临床过程类似于其他肿瘤性疾病，如淋巴性白血病（lym -phoid leukosis ）或由J 亚组禽白血病病毒（avian leukosis virus of subgroup J ，ALV-J ）引起的禽白血病等。

doi:10.6043/j.issn.0438-0479.201611008白斑综合症病毒胁迫下复方中草药对凡纳滨对虾免疫功能的影响陈辉辉1, 涂晨凌1, 唐杨1,黄永春1，2*（1. 集美大学水产学院，2. 福建省海洋渔业资源与生态环境重点实验室福建厦门361021）摘要：为研究复方中草药（内含葛根、黄连、金银花、板蓝根、黄芪、甘草、柴胡、当归、山楂、陈皮和茯苓）对凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）经白斑综合症病毒（WSSV）胁迫后的免疫特性，分别以0%（对照组），0.4%，0.8%，1.2%，1.6%和2.0%复方中草药添加到基础饲料中，连续投喂凡纳滨对虾（体质量(0.026±0.007) g）28 d后，测定生长指标并经WSSV感染后测定0，12，24，48及96 h阶段免疫相关因子（T-SOD、AKP、ACP、GOT、GPT）的酶活性和丙二醛含量，以及观察对虾死亡情况。

结果表明，经WSSV胁迫后，凡纳滨对虾总超氧化物歧化酶（T-SOD）、碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）、谷草转氨酶（GOT）在0~96 h期间的酶活性表现为先升后降，其中24~48 h达到高峰期。

除1.6%添加组对虾的谷丙转氨酶（GPT）在24和48 h酶活力较高外，整个实验过程中，0.8%和1.2%添加组对虾的免疫相关酶活力处于较高水平且较其余组稳定，而丙二醛（MDA）含量较低，与其余各组差异显著（p<0.05）。

感染192 h时，0.8%添加组对虾存活率最高（33.33%）、50%死亡时间最迟((150.50±48.88) h)，1.2%添加组次之（存活率为21.33%，50%死亡时间为(127.09±28.10) h），1.6%添加组和2.0%添加组第三，对照收稿日期：2016-11-01 录用日期：2017-03-10基金项目：福建省科技厅产学研项目（2017N51010004）；厦门市海洋经济创新发展区域示范项目（13PZY001SF25）*通信作者：ychuang@组和0.4%添加组则全部死亡，并且50%死亡时间最早，死亡速率也快。

南美白对虾早期死亡综合症南美白对虾早期死亡综合症EarlyMortality Syndrome（EMS）在泰国被定义为Acute Hepatopancreatic Necrosis Syndrome（APHNS），暂时翻译为“急性肝胰腺坏死综合症”。

长期位居世界南美白产量最高的亚太地区，持续受到大规模死亡疾病困扰。

无论是大型水产公司，还是小型私人养殖户，都遭受到了不同程度的经济损失。

纵观过去十几年的对虾养殖病害历史，发光弧菌、白斑、黄头、桃拉等疾病对该区域的养殖造成了灾难性的损失。

从某些方面上说，这些无可治愈的疾病摧毁了斑节对虾养殖产业，南美白对虾养殖业的兴起应运而生。

而在近期，一种新的对虾疾病正在亚太地区蔓延。

它就是所谓的“早期死亡综合征（EMS）”，也被定义为“急性肝胰腺坏死综合症（APHNS）”。

该疾病早在2009年，在中国大陆地区被发现，随后越南（2010）和马来西亚（2011）相继报道了此疾病。

2012年初，泰国的部分养殖场也发现了此疾病（Flegel, 2012）。

Lightner D.V.等对早期死亡综合征的症状、病理和病因进行了精确的描述：这种突如其来的疾病造成斑节对虾（P. monodon）和南美白对虾（Litop. Vannamei）的大规模死亡（死亡率可高达100%）。

一般在投苗20至30天后，疾病迅速扩散，死亡率显著上升。

该疾病的表型症状包括：昏睡、厌食、生长缓慢、颜色苍白、软壳等等。

将病虾解剖后发现，肝胰腺出现不同程度的缩小、褪色和坏死（Ligntner D.V., 2012）。

造成该疾病的传染型病原尚未确定，然而，在病虾的解剖中发现了大量弧菌、少量线虫和微孢子虫（NACA-FAO, 2011）。

在组织学检查中发现，该疾病似乎仅仅影响了肝胰腺（Ligntner D.V., 2012）。

肝胰腺功能型障碍的病理可以概括为：1）肝胰腺E细胞的有丝分裂活力下降；2）中央肝胰腺B、F、R细胞功能障碍；3）肝胰腺小管上皮细胞大量脱落，细胞核增大；4）大量血细胞聚集，并伴随着继发性细菌感染（如弧菌）。

华南师范大学学报(自然科学版)Joarnal cf Soath China Normal University (Natural Scieoce Edition)2020,52(6)：52-56doi ： 57.2054/j2Luup.2024064LvCTL7与WSSV 复制的相互关系研究邱炜7,陈义烘2**收稿日期：2924-03-24 《华南师范大学学报(自然科学版)》网址:：/—：//7npai-n.1cna.30a.cu基金项目：国家自然科学基金项目(3162206 e8772395);贵州省自然科学基金项目(J-2222] 1Y334)* 通信作者：陈义烘，教授,Email : 291312/@ .(1.贵州医科大学生物与工程学院，贵阳550225； 0.华南师范大学生命科学学院，广州510631)摘要:C 型凝集素(CTL )是一类重要的先天性免疫因子，在对虾机体的免疫防御中具有重要的作用.该研究利用相对定量PCR 实验检测基因表达量、绝对定量PCR 实验检测病毒拷贝数、组织切片分析实验检测感染病毒细胞数. 实验数据显示：WSSV 感染能显著上调LvCTL7的表达;WSSV 感染的LvCTL7敲降的凡纳滨对虾中，膜囊蛋白VP28表达量、病毒拷贝数和胃上皮细胞中的感染细胞数都显著高于注射dsEGFP 对照组.研究结果表明：WSSV 感染后，机体通过上调LvCTL7表达来抑制WSSV 复制.关键词:C 型凝集素；白斑综合症病毒；凡纳滨对虾中图分类号:TN27 文献标志码:A 文章编号：1000-5463( 2020) 06-0052-05The Relationshin betweer LvCTL 1 and WSSV ReglicationQIO Wei 7, CHEN Yidouy 5*(L School cf BV —cu and EngineerVo, Guizhou Medical Unive —iy , Guiyang 550225, China ；0. School cf Life Scieoces , Soath China Normal Univepity'Guangzhou 512608 , China )AbstracO : C 一iype —ctin (CTL ) is an impoPant innate immune Oicter that p —ys an impoPant p — in the immune defense of prawns. The yene /p —ssVa was detected with relative qnoi-to5a PCR , the vi —s number was detectedwith absolute quantitative PCR, and the number of infected cel — was detected with hisW —gy analysis. The datashowed that the /p —ssVa of LvCTL1 was sigiiiPcyii-y iipppiP —/ with WSSV chai —oge ; the /p —ssVa of WSSV eove —pe protein VP25, vi —s —abs and the number of infected cells of stomach epithelium in LvCTL1 nnochdownprawns upon WSSV infection w/a significyn —y higher than those under the dsEGFP controd These results indicated that LvCTL1 /p —ssVa was sipniCcant — activated with WSSV cha —eoge and p —yed a p — in WSSV rep/cation in-hiPi-on.Keywords ： C-type lectin ; WSSV ; Litopenaeus vannarmi对虾是最重要的水产养殖经济动物之一，为世界粮食安全和经济增长做出了重大贡献[],对虾在我国水产经济品种养殖中占有重要的地位.对虾养殖品种有凡纳滨对虾(Ltopeuaeu vamamei )、日本 囊对虾(Penaeus japopicus)及斑节对虾(PemessmopoPop)等，其中L. vannamet 是最主要的养殖品种.随着对虾养殖产业的快速发展,尤其是高密度 养殖模式带来的养殖环境恶化，导致对虾病害发生频繁,严重制约了对虾养殖产业的可持续发展.病毒、真菌、细菌、寄生虫等都能导致对虾发病,其中白 斑综合症病毒(White Spot Syndrome Virus, WSSV )引起的白斑综合症(White Spot Syndrome, WSS )危 害大、致死率高,是目前威胁对虾养殖产业的最主要 病害*5].因此对WSSV 复制机理的研究，能够为对虾WSS 的防治提供理论基础.凝集素(Lec —V )是一类特异性识别糖基并与 之非共价、可逆地结合的蛋白质，其广泛存在于动 物和植物⑷.在研究凝集素的历史中，人们对凝集素的研究主要集中在高等植物，而对甲壳动物凝集 素的研究较少.甲壳动物缺乏免疫球蛋白，不具有特异性免疫反应，但却以独特的方式抵抗病原体的 侵袭.凝集素在甲壳动物非特异性免疫中发挥重第6期邱炜等：LvCTL1与WSSV复制的相互关系研究53要功能，其一般存在于血淋巴细胞中，具有类似于免疫球蛋白的作用动物凝集素可分为多类，主要包括：C型凝集素（C-Type Lectin,CTL）、F型凝集素、、型凝集素和P型凝集素等⑷.目前已知，凡纳滨对虾CTL1（LvCTL1）重组蛋白对WSSV表现出特异的亲和力，并且具有抑制WSSV复制功能卩为了进一步了解L v CTL1与WSSV复制的关系，本文主要研究了体内条件下WSSV感染对LvCTL1表达的影响及LvCTL1表达对WSSV复制的影响,研究结果能为L.vannamei的WSS防控提供了更多理论知识.1实验部分12双链RNA的制备使用T7RiboMAX™Exyress RNA3System（Pra-mepa公司，美国）试剂盒体外合成双链RNA （d s RNA）[9]•合成dsRNA所用引物序列见表1.表1所用引物序列Tab—1The p/mor sequences用途引物序列(5‘w3,)dsRNA的合成LvCTL1-F(T7)TAATACGACTCACTATAGGATGAAGTTCCTAGCGCCG LvCTL1-R(T7)TAATACGACTCACTATAGGTCAATATTTCTTGAGGCAAATG LvCTL1-F ATGAAGTTCCTAGCGCCGLvCTLl-R TCAATATTTCTTGAGGCAAATGEGFP-F(T7)TAATACGACTCACTATAGGTGCTTCAGCCGCTACCCEGFP-R(T7)TAATACGACTCACTATAGGCGCTTCTCGTTGGGGTCEGFP-F TGCTTCAGCCGCTACCCEGFP-R CGCTTCTCGTTGGGGTCRT-PCR实验LvCTL1-F GGACGCTTATGTCACCTGCLvCTLl-R TGTGTGACATCCTTGCTCTTGLvEF-1a-F GTATTGGAACAGTGCCCGTGLvEF-1a-R ACCAGGGACAGCCTCAGTAAGVP28-F AACACCTCCTCCTTCACCCVP28-R GGTCTCAGTGCCAGAGTAGGTWSSV37779-F TGTTTTCTGTATGTAATGCGTGTAGGTWSSV32753-R CCCACTCCATGGCCTTCATayMan pvbc-WSSV32746CAAGTACCCAGGCCCAGTGTCATACGTT12WSSV的制备将WSSV感染的L.vanname肌肉（9.1y）切碎,然后在1mL1XPBS缓冲液（137mmo—L NaCt, 2.5mmo—C KCt,19mmol/C N-2HPO4、2mmo—C KH2PO4）中匀浆,4C条件下2002y离心19min 后,将上清液通过2.45^m膜过滤后获得病毒原液.使用绝对定量PCR定量病毒拷贝数（操作方法见1.4）.12RNA干扰（RNAi）与WSSV感染按1^/（的质量分数分别肌肉注射合成的dsRNA.dsRNA用PBS稀释，注射量为52r L尾. dsRNA注射后24、72、129、168/分别采集不同实验组7尾虾的鳃组织.另外采集相同来源的未经任何处理的9条虾鳃组织作为2h的样品.每3条虾鳃组织混合在一起存于RNAlater®（Ambios公司，美国），作为一个样本•用相对定量PCR法检测基因表达结果（操作方法见1.4）.对虾注射dsRNA后45h再注射WSSV （105拷贝数/尾）.dsRNA和WSSV用PBS稀释，注射量为52^L/尾.在注射WSSV后24、48、72、127h,分别采集不同实验组0尾虾的鳃和肌肉组织.另外采集相同来源的未经任何处理的9尾虾作为2h样品.每3尾虾混合在一起作为一个样本.鳃组织存于RNAlater®中，室温下放置1h或4C过夜后转移至-82C保存.肌肉组织直接放入-82C保存.12绝对和相对定量PCR检测采用Tapman探针法检测L.vanname肌肉病毒拷贝数⑹.WSV060引物和Ta-Man荧光探针序列见表1.以含有来自WSSV基因WSV940片段pMD19-T质粒作为内参.使用基因组DNA提取试54华南师范大学学报（自然科学版）第52卷剂盒V/.3.2（TaKaRv公司，日本）从肌肉中提取基因组DNA.提取的DNA模板和内参质粒进行绝对qPCR,其程序为90°C8mid,然后90°C10s、66°C 25o和77C1s条件循环44次.每个样本进行3次绝对qPCR重复实验.相对qPCR实验用于检测基因相对表达量. RNeosy Mini Kit（Qiayeo公司，德国）提取虾鳃的总RNA后，使用PPmeOcPpt™1st Strand cDNA Syuthe-sis Kit（TaKaRv公司，中国）将其反转录成cDNA.按照SYBR©Premia Ea TapTM II（Tli RNaseH Plus, TaKaRv,日本）说明书进行相对qPCR实验,其程序为90C34s,然后90C0s、56C34o和78C1s 条件循环44次.每个样本进行3次重复相对qPCR 实验•使用5倍稀释法获得标准曲线，进而计算引物扩增效率.LvCTL1、VP28和LvEF-l a扩增效率分别是1.902、1.986和1.959.实验用相对标准曲线法计算基因表达的差异[0].所用引物序列如表1所示．12组织病理学分析注射dsRNA后4h再注射WSSV（1拷贝数/尾/ WSSV注射48、72、124h后取虾的头胸部用AFA溶液固定，固定24h后转入77%乙醇长久保存.制作石蜡切片,用苏木精-伊红染色[I0-1].每个组每个时间点分别选择3尾虾制作成9张切片，计数随机选择的3张切片（每尾虾1张）的总细胞数和感染细胞数,计算感染细胞数所占比例.12统计方法计算3个样本的平均值和标准差（SD）.实验结果以均值土标准差（X土SD）的形式表示.使用student's0检验比较2个平均值之间的差异，P< 0.05表示差异有统计学意义,P<0.01表示差异有显著统计学意义.2结果与讨论22注射dsLvCTL1能显著抑制LvCTLi表达相对qPCR检测结果显示，注射dsLvCTL1后24~128h,LvCTL1的表达显著下调（P<0.05）（图1A）6虽然在24h检测点基因表达已经有明显的下调，然而蛋白水平的下调在mRNA下调之后，所以选择注射dsRNA后45h再注射WSSV.WSSV感染后，对L.-uamamet鳃中LvCTL1的表达进行了检测（图1B）.与6h相比丄VCTL1的表达在所有检测点都显著上调（PV0.01），提示LvCTL1可能在WSSV 复制中具有重要功能.感染后，注射UL v CTL1也能显著抑制LvCTL1的表达（图1B），表明在WSSV刺激显著上调情况下注射UL v CTL1也能有效发挥其抑制作用6□dsLvCTL1s dsEGFP进.1.61.41.21.00.80.60.40.2024*********的聚廿x異泾-nHOAJt/h（A）注射dsLvCTL1后LvCTL1表达水平的检测（B）WSS V感染后注射dsLvCTL1虾的LvCTL1表达水平的检测图7虾鳃组织中LvCTL7表达水平的检测Figure7The detec—ou of—c expressVu levels of LvCTL7i-gill of prawu注:以LvEF-l a为内参；2a的表达量设为1；显著性差异用短线上标记表示，*代表P<2.25,**代表P<2.21,g与b表示差异有统计学意义,P<2.21.22LvCTLi在WSSV复制中的功能膜囊蛋白VP23是对虾的主要致病蛋白之一,在WSSV感染过程中起决定性作用[12-5].结果显示：在所有检测时间点中dsLvCTL1+WSSV组的VP28表达量（图2A）和WSSV拷贝数（图2B）都高于dsEGFP+W SSV对照组，表明活体内LvCTL1起到抑制WSSV复制的功能.为了进一步确认LvCTLl在WSSV复制中的作用，做了组织病理学分析.在每个组每个时间点，来源于3尾虾的3张胃上皮细胞切片图被分析（由于这3张切片结果是相似的，所以图3仅显示了1张第6期邱 炜等：LvCTL1与WSSV 复制的相互关系研究55切片图）.结果显示:ds/vCTL1与ds/GFP 对照组在WSSV 感染后48、72、120 h 的感染细胞比分别是44.5%与 36.5%、56.2%与 48.8%和 80.0%与 56.3%, 该结果进一步确定活体内L v CTL1起到抑制WSSV复制的功能.CLT 是一种重要的先天性免疫因子，在抗感染中能识别病原体，其在对虾机体的免疫防御中具有重要的作用。