HPLC法同时测定清热解毒软胶囊中绿原酸栀子苷和黄芩苷的含量

解放军药学学报２０１３年６月２０日第２９卷第３期Ｐ　。ｒｍ　Ｊ　ＣｈｉｎＰＬ４，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．３，Ｊｕｎ　２０，２０１３　

ＨＰＬＣ法同时测定清热解毒软胶囊中　

绿原酸栀子苷和黄芩苷的含量　

李　翔，刘皈阳，马建丽，周　亮　

［摘要］　目的建立ＨＰＬＣ法同时测定清热解毒软胶囊中绿原酸、栀子苷和黄芩苷的含量。方法　Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｅｃｌｉｐｓｅ　ＸＤＢ—Ｃ。。色谱柱（４．６　ｆｉｌｍ　ｘ　１５０　ｍｍ，５　ｍ），流动相为甲醇（Ａ）－２％冰醋酸溶液（Ｂ），梯度洗脱；流速１．０　ｍｌ・ｒａｉｎ～，检测波长　２５４　ｎｍ，柱温３０℃。结果绿原酸、栀子苷和黄芩苷的进样量与峰面积分别在０．０１０　９２—０．４３６８　ｇ（ｒ＝０．９９９９），０．０１０　２０～　０．４０８０　Ｉｘｇ（ｒ＝０．９９９９）和０．０４２　５６—１．７０２４　ｇ（ｒ＝０．９９９９）呈良好的线性关系；平均加样回收率分别为９９．９７％，　９９．０２％，９８．７０％，ＲＳＤ为１．５７％，１．４２％，１．５２％。结论本方法操作快速、结果准确，专属性强，可用于清热解毒软胶囊　的质量评价。　［关键词］　清热解毒软胶囊；绿原酸；栀子苷；黄芩苷；ＨＰＬＣ　［中图分类号］　Ｒ９２７．２　［文献标志码］　Ａ　［文章编号］　１００８—９９２６（２０１３）３－０２３９－３　［ＤＯＩ］　１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８－９９２６．２０１３．０３．０１７　

Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ　Ａｃｉｄ　Ｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅ　ａｎｄ　

Ｂａｉｃａｌｉｎ　ｉｎ　Ｑｉｎｇｒｅ　Ｊｉｅｄｕ　Ｓｏｆｔ　Ｃａｐｓｕｌｅ　ｂｙ　ＨＰＬＣ　

ＬＩ　Ｘｉａｎｇ，ＬＩＵ　Ｇｕｉ—ｙａｎｇ，ＭＡ　Ｊｉａｎ－ｌｉ，ＺＨＯＵ　Ｌｉａｎｇ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｆｉｒｓｔ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　ＰＬＡ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００４８，Ｃｈｉｎａ　

［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａｎ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ，ｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅ　ａｎｄ　ｂａｉｃａｌｉｎ　ｉｎ　Ｑｉｎｇｒｅ　Ｊｉｅｄｕ　ｓｏｆｔ　ｃａｐｓｕｌｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｅｃｌｉｐｓｅ　ＸＤＢ—Ｃ　１８　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ　

ｏｆ　ｍｅｔｈａｎｏｌ－２％ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ａ　ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｍａｎｎｅｒ　ａｔ　ａ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｏｆ　１．０　ｍｌ・ｍｉｎ～．Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　ｓｅｔ　

ａｔ　２５４　ｎｍ　ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　ａｔ　３０℃．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ａ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ０．０１０　９２—０．４３６８　ｇ　ｆｏｒ　ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ（ｒ＝０．９９９９），０．０１０　２０—０．４０８０　Ｉｘｇ　ｆｏｒ　ｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅ（ｒ＝　

０．９９９９）ａｎｄ　０．０４２　５６—１．７０２４　ｇ　ｆ０ｒ　ｂａｉｃａｌｉｎ（ｒ＝０．９９９９）．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　９９．９７％ｗｉｔｈ　ａｎ　ＲＳＤ　ｏｆ　１．５７％ｆｏｒ　ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ，９９．０２％ｗｉｔｈ　ａｎ　ＲＳＤ　ｏｆ　１．４２％ｆｏｒ　ｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅ，ａｎｄ　９８．７０％ｗｉｔｈ　ａｎ　ＲＳＤ　ｏｆ　１．５２％ｆｏｒ　ｂａｉｃａｌｉｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｑｕｉｃｋ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ，ｗｈｉｃｈ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｅｖａｌｕａ—　

ｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｑｉｎｇｒｅ　Ｊｉｅｄｕ　ｓｏｆｔ　ｃａｐｓｕｌｅｓ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］　Ｑｉｎｇｒｅ　Ｊｉｅｄｕ　ｓｏｆｔ　ｃａｐｓｕｌｅ；ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ；ｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅ；ｂａｉｃａｌｉｎ；ＨＰＬＣ　

清热解毒软胶囊是由石膏、金银花、玄参、地黄、　连翘、栀子、甜地丁、黄芩、龙胆等多味中药组成，用　

于热毒壅盛所致发热面赤，烦躁口渴，咽喉肿痛；流　

感、上呼吸道感染见上述症状者。方中金银花具有　清热解毒，疏散风热的功能，其中绿原酸为其主要有　

效成分，被证明具有抗菌、抗病毒等多种作用¨　；栀　

子具有泻火除烦，清热利湿，凉血解毒的功能，其主　要活性成分为栀子苷，具有保肝利胆、镇痛抗炎等作　用　；黄芩具有清热燥湿，泻火解毒的功效，其中黄　芩苷被发现具有抗菌、抗病毒等多种作用　Ｊ。清热　

解毒软胶囊收载于《卫生部版药品标准》新药转正　标准中药第４４册’，其中对黄芩苷进行含量测定，对　

绿原酸和栀子苷只进行鉴别检查，难以全面评价药　品制剂的质量。目前，已有文献开展该制剂中栀子　

苷和黄芩苷的测定研究，尚未发现对其中药效作用　成分绿原酸的含量测定报道＿４　Ｊ。本试验采用ＨＰＬＣ　法同时测定清热解毒软解囊中绿原酸、栀子苷和黄　

芩苷的含量，可以为有效控制和评价该制剂的质量　

提供依据。　作者简介：李翔，博士，主管药师。研究方向：药物分析。Ｅ—ｍａｉｌ：　ｌｘｂｊ＠ｈ。ｔ　ａｉｌ一　１仪器和试药　

：　北京，解放军总医院第一附属医院药剂药理科　Ａｇｉｌｅｎｔ　１２００型高效液相色谱仪（在线脱气机、　通讯作者：刘皈阳，Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｉｕｇｕｉｙ＠ｇｍａｉｌ．ｔｏｍ　………一……　～’　……．’

　解放军药学学报２０１３年６月２０日第２９卷第３期　ｎ　Ｊ　Ｃｈｉｎ　ＰＬＡ，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．３，Ｊｕｎ　２０，２０１３　

四元泵，ＶＷＤ检测器，自动进样器，ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎ化　

学工作站，美国安捷伦公司）；Ｍｅｔｔｌｅｒ　ＡＥ２４０电子天　平（瑞士梅特勒）；ＫＱ３２００ＤＢ型数控超声波清洗器　

（昆山市超声仪器有限公司）。对照品绿原酸（批　

号：０７５３．２００１１１）、栀子苷（批号：０７４９－９６０６）、黄芩　苷（批号：７１５．２００１１１）（购自中国药品生物制品检　

定所）；清热解毒软胶囊（规格：每粒１．２　ｇ，石药集　团欧意药业有限公司，批号：０９２１０１０３２、０９２１　１　１０３９、　

０９２１０６０１１）；甲醇、冰醋酸为分析纯；水为超纯水　

（实验室自制）。　

２方法与结果　

２．１色谱条件及系统适用性试验色谱柱：Ａｇｉｌｅｎｔ　

Ｅｃｌｉｐｓｅ　ＸＤＢ－Ｃ１８（４．６　ｍｍ×１５０　ｍｍ，５　ｍ）；流动相：　甲醇（Ａ）－２％冰醋酸溶液（Ｂ），梯度洗脱，见表１；　

流速：１．０　ｍｌ・ｍｉｎ～；检测波长：２５４　ｎｍ；柱温：　

３０℃。在上述色谱条件下，绿原酸、栀子苷和黄芩　苷色谱峰对称因子均在０．９５～１．０５，与相邻色谱　

峰的分离度均大于１．５，理论塔板数均大于４０００，　

色谱图见图１。　表１梯度洗脱程序　

２．２溶液制备（１）对照品溶液精密称取绿原　

酸对照品适量，用甲醇溶解，制成质量浓度为０．２１８４　

ｍｇ・ｍｌ　的对照品贮备溶液。精密称取栀子苷对照　

品适量，用甲醇溶解，制成质量浓度为１．０２０　ｍｇ・ｍ１　的对照品贮备溶液。精密称取在６０℃减　

压干燥４　ｈ的黄芩苷对照品适量，用甲醇溶解，制成　

质量浓度为１．０６４　ｍｇ・ｍｌ　的对照品贮备溶液。分　别精密量取绿原酸对照品贮备溶液０．５　ｍｌ，栀子苷　

对照品贮备溶液０．１　ｍｌ，黄芩苷对照品贮备溶液　０．４　ｍｌ，置１０　ｍｌ量瓶中，用甲醇定容，即得含１０．９２　

ｇ・ｍｌ　绿原酸、１０．２０　ｇ・ｍ１：　栀子苷、４２．５６　

ｇ・ｍｌ　黄芩苷的混合对照品溶液。（２）供试品溶　

液取本品装量差异项下的内容物，用滤纸拭干，置　

研钵中混匀，取约０．１　ｇ，精密称定，置５０　ｍｌ棕色量　

瓶中，加甲醇４５　ｍｌ溶解，超声处理（功率１５０　Ｗ，频　

率４０　ｋＨｚ）３０　ｍｉｎ，放冷至室温，加甲醇稀释到刻度，　摇匀，０．４５　ｍ滤膜滤过，取续滤液，即得。　山　一～　，７＼　

７．５　１Ｏ．Ｉ厂—Ｉ　＿５　１５．０　１７．５　２０．０　２２．５　ｔ／ｍｉｎ　Ａ：对照品；Ｂ：供试品；Ｃ：缺金银花Ｉ羽性样品；Ｄ：缺桅子Ｉ　性样品；　Ｅ：缺黄芩阴性样品；１：绿原酸；２：栀子苷；３：黄芩苷　图１绿原酸栀子苷和黄芩苷的ＨＰＬＣ图　

２．３线性关系考察精密吸取混合对照品溶液１、　

２、５、１０、２Ｏ、４０　１，注入液相色谱仪。以对照品进样　量（　，　ｇ）为横坐标，峰面积（１，）为纵坐标绘制标　

准曲线绿原酸、栀子苷、黄芩苷回归方程分别为　

Ｙ＝１４５３．８　Ｘ一２．１８４３．ｒ＝０．９９９９　

Ｙ＝９４５．５７　Ｘ一０．４８０９．ｒ＝０．９９９９　

：１４３９．１　Ｘ＋０．９４６１．ｒ＝０．９９９９　线性范围分别为０．０１０　９２—０．４３６８　Ｉ．ｚｇ，　０．０１０　２０—０．４０８０　Ｉｘｇ和０．０４２　５６～１．７０２４　Ｉｘｇ。结　果表明，绿原酸、栀子苷和黄芩苷在各自范围内与峰　

面积线性关系良好。　２．４精密度试验精密吸取对照品混合溶液５　ｌ，　

连续进样６次。结果绿原酸、栀子苷和黄芩苷峰面　积的ＲＳＤ分别为０．３４％、０．６２％和０．１９％，表明方　

法的精密度良好。　

２．５　稳定性试验　取同一供试品溶液（批号：　

０９２１０１０３２），分别在０、２、４、８、１２、２４　ｈ进样５　ｌ。　

结果绿原酸、栀子苷和黄芩苷峰面积的ＲＳＤ分别为　

１．１３％、０．９６％和１．２６％，表明供试品溶液在２４　ｈ　内稳定。　２．６　重复性试验　取同一样品（批号：　

０９２１０１０３２），按２．２项下方法分别制备供试品溶液　

６份，各取５　ｌ进样测定绿原酸、栀子苷和黄芩苷含　一一

　解放军药学学报２０１３年６月２０日第２９卷第３期　ｎ　Ｊ　Ｃｈｉｎ　Ｐ　，％ｚ．２９，Ｎｏ．３，Ｊｕｎ　２０，２０１３　

量。结果绿原酸、栀子苷和黄芩苷平均含量分别为　

１２．９７、１２．１１和４１．２３　ｍｇ・ｇ～，ＲＳＤ分别为１．９５％、　２．２６％和２．０３％，表明方法的重复性良好。　

２．７加样回收率试验精密称取绿原酸、栀子苷和　

黄芩苷已知含量分别为１２．９７、１２．１１、４１．２３　ｍｇ・ｇ　的样品（批号：０９２１０１０３２）６份，分别精密加　

入０．２１８４　ｍｇ・ｍｌ　绿原酸对照品贮备溶液３　ｍｌ；　

１．０２０　ｍｇ・ｍｌ　栀子苷对照品贮备溶液０．６　ｍｌ；　１．０６４ｍｇ・ｍｌ　黄芩苷对照品贮备溶液２　ｍｌ。按２．２　

项下方法制备供试品溶液，５　ｌ进样，测定绿原酸、　

栀子苷和黄芩苷含量，计算回收率，结果见表２。　

壅　道垫竖童　壁垂垫挂回蝗奎　堕　成分取　／样品ｍｇ量／加入ｍｇ量／测得ｍｇ量／回　率／　Ｒ％ＳＤ　ｍｇ　％　％　

２．８样品含量测定取３批清热解毒软胶囊，按　２．２项下方法制备供试品溶液，测定样品中绿原酸、　

栀子苷和黄芩苷的含量，结果见表３。　

表３清热解毒软胶囊样品含量测定（ｍｇ・ｇ～，ｎ＝３）