大鳞副泥鳅

毒死蜱对大鳞副泥鳅的急性毒性和生理毒性研究摘要：为了估测农药毒死蜱的环境毒性，以大鳞副泥鳅（Paramisgurnus dabryanus）为受试动物，研究毒死蜱对大鳞副泥鳅的急性毒性和生理毒性作用。

研究结果表明，毒死蜱稀释液对大鳞副泥鳅的24、48、96 h的半数致死浓度（LC50）分别为524.76、291.53、193.20 μg/L，安全浓度为26.99 μg/L；对照组肝组织谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）的平均活力分别为24.53 U/g和16.69 U/g；试验组肝组织的GPT和GOT活力最低分别可达到2.65 U/g和2.81 U/g。

毒死蜱对大鳞副泥鳅具有明显的急性毒性和生理毒性效应，并表现出明显的剂量-时间效应。

关键词：毒死蜱；大鳞副泥鳅（Paramisgurnus dabryanus）；急性毒性；谷丙转氨酶；谷草转氨酶鱼类是水生生物链的重要环节，对水质变化尤为敏感，是水质污染的高危种群。

大鳞副泥鳅（Paramisgurnus dabryanus）属鱼纲鲤形目鳅科花鳅亚科副泥鳅属，其肉质鲜美，营养丰富，富含蛋白质和多种维生素，并具有较高的药用价值，是人们所喜爱的水产佳品。

常散养于田间和池塘，因此是检测水体中农药残留的理想水生生物。

毒死蜱（Chlorpyrifos）又名氯吡硫磷，其化学名称为O，O-二乙基-O-（3，5，6-三氯-2-吡啶基）硫代磷酸酯，是一种广谱、高效的有机磷农药。

其具有杀虫范围广、毒性较小等特点，在农业病虫害防治上被广泛使用；但由于农业生产中的不合理使用，雨水冲刷、淋溶及农药厂污水的任意排放等，使毒死蜱进入河流、湖泊、海洋等水生生态系统，对水生生物的生存及人类健康构成潜在威胁，成为常见的农药污染物之一。

近年来，Li等[1]曾报道过毒死蜱对草鱼的毒性效应，侯方浩等[2]报道过毒死蜱对锦鲫性腺的影响及其在鱼组织中的富集。

因此，研究毒死蜱对水生生物的毒性效应，特别是利用生物标志物为指标，评价毒死蜱对水生生态的影响具有重要意义。

泥鳅稻田养殖的新方法夏宝东1常彦民1戴洪全2戴国清3(1、巴彦县水产技术推广站黑龙江巴彦151800)(2、哈尔滨市驿马山戴氏原生态现代农业专业合作社黑龙江巴彦151800)(3、巴彦县少凌鱼种场黑龙江巴彦151800)一、泥鳅简介我国的鳅科鱼类约有100多种,大部分都是小型鱼类,生长缓慢,没有养殖价值。

目前养殖的泥鳅种类主要是泥鳅和大鳞副泥鳅。

泥鳅、北方泥鳅和黑龙江泥鳅组成了泥鳅属的三兄弟,它们共同的特征是有5对须,外形也相似。

它们的区别在于:黑龙江泥鳅仅分布在黑龙江,其吻端到背鳍的距离占体长的62%以上,腹鳍起点与背鳍起点平齐。

另两种泥鳅吻端到背鳍的距离最多占体长的cn. All Rights Reserved.60%,而且背鳍起点在腹鳍起点之前,但北方泥鳅尾柄长是尾柄高的1.9～2.9倍,泥鳅尾柄长是尾柄高的1.3～1.8倍。

北方泥鳅仅分布在内蒙古、黑龙江和辽河上游,而泥鳅除青藏高原外,我国大多数地区的淡水水域均有分布,以长江水域和珠江水域的产量为最大。

这三种泥鳅生活习性相似,个体较大,数量较多,肉质细嫩,有较高的养殖价值。

大鳞副泥鳅是副泥鳅属在我国的唯一种。

其外形与泥鳅相似,有5对口须,但它的鳞大,侧线鳞不到130片。

大鳞副泥鳅生活习性与泥鳅相似,个体稍大,分布比较广泛,但它的天然资源太少了,捕捉很困难。

以上几种有养殖价值的泥鳅,养殖者可以根据自己所在当地的资源条件选择养殖。

在我国大多数地区,还是以养殖泥鳅为主。

而在黑龙江除养殖泥鳅外,还养殖大鳞副泥鳅、黑龙江泥鳅、北方泥鳅。

下面对泥鳅、黑龙江泥鳅、北方泥鳅以及大鳞副泥鳅作简要介绍1、泥鳅(m is gumusa ng uillica uda utus)又名鳅、真泥鳅等,在分类学上属鲤形目、鳅科、泥鳅属。

国内广泛分布于除青藏高原外的各地沟渠、水田、池塘、河流、湖泊及水库等水域中。

日本、朝鲜和东南亚诸国也有分布。

目前,泥鳅市场平均售价在20～30元／kg,国际售价更可观,口岸价格最低30元/kg,是出口创汇型经济鱼类之一。

强力型油烟机清洁剂对大鳞副泥鳅的毒性研究摘要:以大鳞副泥鳅为对象,研究了强力型油烟机清洁剂对其急性和生理毒性｡急性毒性试验结果表明,强力型油烟机清洁剂对大鳞副泥鳅的24､48､96 h的半致死浓度(LC50)分别为 6.692､6.190､5.908 mL/L;生理毒性试验结果表明,强力型油烟机清洁剂在一定程度上可抑制大鳞副泥鳅肝脏谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)的活性,随着处理时间的延长和浓度的增加活性逐渐降低｡关键词:强力型油烟机清洁剂;大鳞副泥鳅;急性毒性;生理毒性The Studies on the Acute Toxicity and Physiology Toxicity of Powerful Kitchen Cleaner on Paramisgurnus dabryanusAbstract: The acute toxicity and physiology toxicity of powerful kitchen cleaner on P. dabryanus were studied. Acute toxicity test results indicated that the median lethal concentration(LC50)was 6.692, 6.190 and 5.908mL/L,respectively. Physiology toxicity test results indicated that the powerful kitchen cleaner could inhibited the activity of GPT and GOT, which decreased with time and the concentration increasing.Key words: powerful kitchen cleaner; Paramisgurnus dabryanus; acute toxicity; physiology toxicity近年来,随着科技的发展及人们生活水平的提高,人们对环境的保护意识也不断地加强｡人们越来越关注各种日化用品､农药､重金属等对人类及环境的影响｡已有研究人员对洗发水､洗衣粉和洗涤剂等日化用品的安全性进行了研究[1,2],所选的试验动物一般是水生动物[3],主要是以黄鳝､泥鳅､鲫鱼､蝌蚪､双壳类等为试验动物,结果发现这些化学物质均对水生动物有着不同程度的毒害｡但以大鳞副泥鳅为材料,研究强力型油烟机清洁剂对水生生物安全性的影响,则尚未见报道｡强力型油烟机清洁剂作为现代家庭厨房清洁剂的重要一员,由于使用方便､去污能力强等特点,被广泛使用;同时,它也随之进入水体,进而可能影响或破坏水生生物的生活环境｡因此,评估强力型油烟机清洁剂对周围水环境安全性的影响,具有特别重要的现实意义｡大鳞副泥鳅(Paramisgurus dabryanus)属鲤形目､鲤形亚目､鳅科中副泥鳅属,分布较广,且易于在实验室中饲养,具有抗污能力强等特点,在毒性试验研究中,是理想的水生生物试验材料[4]｡本研究主要包括急性毒性试验及生理毒性试验｡由急性毒性试验计算出强力型油烟机清洁剂对大鳞副泥鳅的半致死浓度,分析其对水生生物的急性毒性;测定染毒后肝脏内谷丙转氨酶(GPT)､谷草转氨酶(GOT)的活力,进而分析强力型油烟机清洁剂对水生生物生理方面的影响｡1材料与方法1.1材料大鳞副泥鳅体重15~20 g,体长8~13 cm, 购于新乡市鸿达市场,在实验室先驯养1周,每天更换一次暴晒24 h的水｡选取大小相近､健康活泼的个体,备用｡“蓝月亮”牌油污克星(广州蓝月亮实业有限公司生产)为试验试剂｡GPT､GOT试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供｡1.2方法1.2.1急性毒性试验首先进行预试验,确定正式试验中油烟机清洁剂的浓度范围,设计各处理组浓度;接着进行正式试验｡在正式试验中,将清洁剂配制成 4.0､4.9､6.0､7.7､9.0 mL/L 5个试验组,另设1个不加清洁剂的对照组(CK)｡每组均投放10尾大鳞副泥鳅(挑取健康活泼､大小相近的个体),每24 h换1次等浓度的油烟机清洁剂｡试验时间持续96 h,试验开始后每6 h观察中毒症状,记录死亡时间､数量,并及时捞出死鱼｡采用改进寇氏法(Karber)[5,6]计算油烟机清洁剂对大鳞副泥鳅的半致死浓度(LC50)及95%置信限范围｡计算公式如下:lgLC50=Xm-i(Σp-0.5)S(lgLC50)=i式中,Xm为最大浓度的对数值;i为相邻两浓度组的对数浓度差值;p为死亡率;S(lgLC50)为标准误差;Σp为各浓度组死亡率总和;q为存活率;n为每组动物数｡LC50的95%置信限=lg-1[lgLC50±1.96S(lgLC50)]按Turabell公式[7,8]求出安全浓度(Sc)=48 h LC50×0.3/(24 hLC50/48 hLC50)21.2.2生理毒性试验参考急性毒性试验结果,进行预试验,进而设计正式试验｡在正式试验中,将油烟机清洁剂配制成0.5､1.5､2.5､3.5 mL/L的4个试验组,另设1个不加油烟机清洁剂的对照组(CK),每组均设置3个重复｡挑选健康活泼的个体,每组投放5尾大鳞副泥鳅｡每24 h换1次等浓度的油烟机清洁剂溶液｡分别于48､96､144 h取材,迅速将其肝脏制成肝脏匀浆液,按1∶9的比例加入生理盐水稀释,严格按照试剂盒说明书进行GPT､GOT活性的测定｡GPT和GOT活力定义为:每毫克蛋白质,每分钟扣除非酶反应的作用,使反应体系中GPT或GOT降低 1 μmol/L 为1个酶活力单位｡1.2.3数据统计分析所有数据均采用SPSS 16.0软件进行单因素方差分析(One-Way ANOV A),用最小显著差数法(LSD)进行多重比较,同时还利用了Excel 2003进行分析作图,数据结果以平均值±标准差表示｡显著性差异以P值表示,P<0.05表示差异显著,P<0.01表示差异极显著｡2结果与分析2.1急性毒性试验油烟机清洁剂对大鳞副泥鳅的急性毒性试验结果如表1､图1所示｡由表1可知,油烟机清洁剂对大鳞副泥鳅24､48､96h的半致死浓度(LC50)分别为6.692､6.190､5.908 mL/L,安全浓度(Sc)为1.589 mL/L｡在处理24h时,7.7､9.0 mL/L浓度组的死亡率已分别达到90%､100%;处理48 h时,6.0 mL/L浓度组的死亡率达到80%｡结合图1,可以看出,在同一处理浓度时,随着处理时间的延长,大鳞副泥鳅的死亡率随之增加,具有时间效应;在同一处理时间段内,随着处理浓度的增加,大鳞副泥鳅的死亡率也随之增加,具有浓度效应｡观察大鳞副泥鳅的行为特征,发现其在处理过程中,行为异常(尤其是高浓度组),如开始表现为兴奋不安地游动,但数分钟至数小时后游动逐渐缓慢,反应迟钝,身体逐渐失去平衡,出现翻肚,甚至死亡现象｡这些均反映出油烟机清洁剂具有明显的毒性作用｡2.2生理毒性试验经处理48､96､144 h,大鳞副泥鳅肝脏内GPT､GOT活性变化的结果如表2所示｡由表2可知,各试验组与各自对照组比较,GPT活性除处理48 h的0.5､1.5､2.5 mL/L 浓度组,处理96 h的0.5､1.5 mL/L浓度组,处理144 h的0.5 mL/L浓度组均呈显著差异(P<0.05)外,其余均有极显著差异(P<0.01);GOT活性处理48 h的0.5 mL/L浓度组,处理144 h的0.5､1.5 mL/L浓度组均无显著差异(P﹥0.05),处理48 h的1.5､2.5 mL/L浓度组,处理96 h的0.5 mL/L浓度组,处理144 h的2.5 mL/L浓度组均有显著差异(P<0.05),其余均有极显著差异(P<0.01)｡这可能与各组个体的个体差异有关｡总体上分析,在同一处理时间内,随处理浓度的增加,大鳞副泥鳅肝脏内GPT ､GOT活性均呈减少趋势,表现出浓度效应;在同一处理浓度时,随着处理时间的延长,大鳞副泥鳅肝脏GPT､GOT活性也均呈减少趋势,表现出时间效应｡可见,油烟机清洁剂对大鳞副泥鳅肝脏GPT､GOT活性具有抑制作用,表现出对其的生理毒性｡3讨论研究以大鳞副泥鳅为试验材料,探究强力型油烟机清洁剂对其急性毒性及生理毒性的影响｡结果表明,强力型油烟机清洁剂对大鳞副泥鳅的24､48､96 h的半致死浓度(LC50)分别为6.692､6.190､5.908 mL/L;强力型油烟机清洁剂能影响大鳞副泥鳅肝脏的生理作用,对肝脏中的GPT､GOT活性均有一定的抑制作用,且均有时p 已有资料表明,清洁剂的基本成分之一为阴离子表面活性剂,阴离子表面活性剂最常见的主要成分直链烷基苯磺酸钠纯品对草鱼鱼苗的96 h LC50值为 5.9 mg/L[14]｡这与本研究急性毒性试验中得到的对大鳞副泥鳅的96 h LC50值(5.908 mL/L)基本一致｡足见此类油烟机清洁剂的使用,对鱼类等水生生物的影响较大,应引起重视｡GPT､GOT是广泛存在于动物线粒体中的重要氨基酸转氨酶,在机体蛋白质代谢中起重要作用,其活性变化亦是反映肝细胞受损伤的主要敏感指标[15],可以借以评价强力型油烟机清洁剂对大鳞副泥鳅存在的生理毒性作用｡在正常情况下,动物组织细胞内的转氨酶只有少量被释放到血浆中,主要存在于肝脏细胞的胞浆中｡当肝脏组织中毒发生病变或者细胞受到外来物质的损伤时,细胞膜的通透性改变,大量GPT､GOT渗入血液,肝的GPT､GOT活性明显下降｡而强力型油烟机清洁剂中的成分具有能改变细胞膜的通透性的作用,这可能是强力型油烟机清洁剂影响肝脏组织中GPT､GOT活性的原因之一｡生理毒性试验表明了强力型油烟机清洁剂对大鳞副泥鳅肝细胞中GPT､GOT的活性有显著的影响｡另外,为使试验结论更具有说服力,可以进一步增加对血清中GPT､GOT的活性以及多个组织中其他酶(如抗氧化酶等)活性的测定,这些都有待进一步的研究｡当今社会人们的生活质量在不断提高,对各种日化用品的需求量在加速增长｡其中洗涤､清洁用品就是一个重要领域,有着广阔的市场发展前景｡有资料显示,近10余年来仅我国清洁剂的使用每年就以8%的速度递增｡这些日化用品的广泛使用,无不给环境,特别是水环境造成很大的压力｡本研究探讨的强力型油烟机清洁剂的使用,实际上在日常生活中的使用量要超过试验用量,所以,在日常生活中使用这类油烟机清洁剂时一定要注意对周围水环境安全性的影响｡参考文献:[1] 张云美,潘永全,韩志刚,等. 家用洗涤剂对红剑鱼､孔雀鱼和食蚊鱼的急性毒性实验观察[J]. 四川动物,2005,24(2):213-215.[2] SIRISATTHA S, MOMOSE Y, KITAGAWA E, et al. Toxicity of anionic detergents determined by Saccharomyces cerevisiae microarray analysis[J]. Water Res,2004,38(1):61-70.[3] 吴国樵,徐立红. 家用洗涤剂对鱼的急性毒性[J]. 水生生物学报,2000,24(4):396-398.[4] 范立民,马晓艳,胡庚东,等. 除草剂丁草胺对两种鱼的急性毒性研究[J]. 浙江海洋学院学报(自然科学版),2005,24(4):377-379.[5] 惠秀娟. 环境毒理学[M]. 北京:化学工业出版社,2003.270-271.[6] 张毓琪,陈叙龙. 环境生物毒理学[M].天津:天津大学出版社,1993.257-258.[7] 湖南医学院卫生教研组.卫生毒理实验方法[M].北京:人民卫生出版社,1979.174-176.[8] 黎祖福,王洪涛.鱼苗对几种鱼病用药的毒性反应[J].水产科学,1989,8(2):18-21.[9] ROSETY M, ORDONEZ F J, ROSETY R M, et al. Acute toxicity of anionic surfactants sodium dodecyl sulphate (SDS) and linear alkylbenzene sulphonate (LAS) on the fertilizing capability of gilthead (Sparus aurata L.) sperm[J]. Hist Histopathol, 2001,16(3): 839-843.[10] KOBUKE Y. Environmental risk evaluation for anionic surfactants based on the characteristics of appearance of high concentration in rivers [J]. Water Sci Technol,2002,46 (11-12):263-268.[11] WU J F, YU Z M, SONG X X,et al. Comparative researches on effects of sodium dodecylbenzene sulfonate and sodium dodecyl sulfate upon Lateolabrax japonicus biomarker system [J]. Environ Toxicol Pharmacol, 2005, 20(3):465-470.[12 ] MELO S L, NIPPER M. Sediment toxicity tests using the burrowing amphipod Tiburonella viscana (Amphipoda: Platyischnopidae)[J]. Ecotoxicol Environ Safety, 2007, 66 (3): 412-420.[13] 徐立红, 陈加平. 用水毒理学方法评价家用洗涤剂的潜在危害[J]. 中国环境科学,2000,20(5):396-399.[14] 徐立红,张甬元, 王德铭. 用环境毒物对草鱼组织ATPase的影响作为生态毒理学指标的初步研究[J]. 水生生物学报,1987,11(3):193-202.[15] PEREZ S, GUILLAMON M, BARCELO D. Quantitative analysis of polycyclic aromatic hydrocarbons in sewage sludge from wastewater treatment plants[J]. Journal of Chromatography A,2001,938(1-2):57-65.。

大鳞副泥鳅遗传多样性研究本研究以安徽池州、广德、怀远、舒城和河南范县5个地区的大鳞副泥鳅群体为研究对象，利用微卫星DNA分子标记和线粒体细胞色素b（Cytb）序列分析方法，从核基因和线粒体基因两方面，对大鳞副泥鳅5个群体的遗传多样性、遗传距离、遗传分化、系统发育等进行了研究，研究结果如下：1.选取16个微卫星引物对每个群体40尾样本进行扩增，共获得57个等位基因，每个位点获得2～7个等位基因，平均3.6个，基因片段大小在75bp～304bp，平均观测等位基因数为2.2～3.6，而平均有效等位基因数为1.6632～1.9303，平均观测杂合度为0.0200～0.9900，平均期望杂合度为0.0469～0.7061，PIC均值为0.2666～0.3523。

大鳞副泥鳅5个群体的平均观测杂合度为0.3656～0.4094，平均期望杂合度为0.3227～0.4127，PIC值为0.2666～0.3523，遗传多样性水平不高。

Hardy-Weinberg平衡检验显示，大鳞副泥鳅5个群体在大多数位点显著偏离了Hardy-Weinberg平衡状态。

大鳞副泥鳅5个群体间的遗传距离在0.0045～0.0334之间，其中池州群体与范县群体间的遗传距离最小（0.0045），广德群体与池州群体间的遗传距离最大（0.0334）。

UPGMA聚类图显示：池州群体和范县群体聚在一起，怀远群体和舒城群体聚在一起，四者聚为一支后再与广德群体相聚。

2.对大鳞副泥鳅5个群体52尾样本的线粒体Cytb基因1140bp全序列进行分析，在所有序列中，A、T、C和G碱基的平均含量分别为27.4、30.8、26.5和15.3，（A+T）&gt;（G+C），表现出明显的反G偏倚和碱基组成偏好性；所有52个样本中共检测到103个变异位点，单一可变位点28个，简约信息位点75个，未发现碱基的插入和缺失，获得转换与颠换的平均比值为16.633。

在所有103个变异位点中，碱基突变主要发生在密码子的第3位(占总变异的85.18%)，第1、2位均较少（各占总变异的7.41%）。