体外受精胚胎移植技术演示课件

(2）从活体卵巢中采集卵母细胞
卵巢卵母细胞的活体采集主要用于非屠宰大中型动物重复进 行卵母细胞的采集。 可采用手术法也可以在超声波图像或腹腔镜引导下进行卵巢 卵母细胞活体采集。
Ⅰ.卵巢卵母细胞的活体采集
手术活体采集 暴露动物卵巢，用含有采卵液的注射器抽吸卵泡的卵泡液。 超声波图像引导下的卵巢卵母细胞活体采集 优点：穿刺孔小。 缺点：不如腹腔镜直观，且回收率低 腹腔镜引导下的卵巢卵母细胞活体采集 非手术法，对母体无伤害。
抽吸法 注射器吸取采卵液，轻刺入卵泡中，吸取卵母细胞。 切割法 切割卵巢，回收液体，实体显微镜下捡出卵母细胞。 剥离法
剥取完整的圆形卵泡，切开卵泡，收集卵母细胞。麻烦，损 伤小 腔前卵泡-无腔卵泡的收集 剪碎卵巢，胶原酶消化(或组织切碎机)，过网筛，收集卵母 细胞。
20世纪60年代以后，体外受精研究迅速发展，在家兔、小鼠、 大鼠、人、牛、猪、狒狒、猕猴、绵羊、山羊和老虎等10多 种动物获得了试管后代。
1978年7月25日，第一例试管婴儿Louise Brown在英国诞生， 这是体外受精技术走向全面应用的标志性事件，是医学和生 物学上的一次伟大的革命。
1988年，中国大陆首例试管婴儿郑萌珠诞生。由北京医科大 学的张丽珠等人完成。
体外受精-胚胎移植技术（IVF-ET）
1.体外受精
1.1定义：体外受精(In Vitro Fertilization)是指哺乳动 物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技 术，英文简称为IVF。
In vitro fertilization or fertilisation (IVF) is a process by which an egg isfertilised by sperm outside the body: in vitro ("in glass"). The process involves monitoring and stimulating a woman's ovulatory process, removing an ovum or ova (egg or eggs) from the woman's ovaries and letting sperm fertilise them in a liquid in a laboratory. The fertilised egg (zygote) is cultured for 2–6 days in a growth medium and is then implanted in the same or another woman's uterus, with the intention of establishing a successful pregnancy.
（1)控制性超数排卵
由于自然月经周期的长短因人而异，同一患者不同周期也存 在差异，所以不易安排取卵时间，而且自然周期中只有一个 优势卵泡发育，受精后只能形成一个胚胎，而移植一个胚胎 的妊娠率是很低的。所以需要采用控制性超排卵来增强与改 善卵巢功能，以达到不受自然周期的限制、获得多个健康卵 子的目的，提供多个胚胎移植，并尽可能使黄体发育与子宫 内膜功能同步。控制性超排卵一般是先用GnRHa使体内FSH和 LH降调，再施与HMG或FSH排卵药物，刺激卵巢中的卵泡成长， 依据患者对药物的反应性调整药物使用剂量，患者的年龄及 药物的使用剂量不同，所获得的卵子数亦不同。
“试管婴儿之父”、英国科学家罗伯特-爱德华兹，2010年 获得诺贝尔生理学或医学奖。(帕特里克·斯特普托)
1.3体外受精的发展阶段
第一代：1978年英国专家ห้องสมุดไป่ตู้teptoe和Edowrds定制了世界上第 一个试管婴儿，被称为人类医学史上的奇迹。它是将精子和 卵子置于体外利用各种技术使卵子受精，培养几天后移入子 宫，使女性受孕生子。 第二代：1992年由比利时Palermo医师首次在人体成功应用 卵浆内单精子注射（ICSI），使试管婴儿技术的成功率得到 很大的提高。 第三代：随着分子生物学的发展，近年来，在人工助孕与显 微操作的基础上，胚胎着床前遗传病诊断（PGD）开始发展 并用于临床，使不孕不育夫妇不仅能喜得贵子，而且能优生 优育。
ICSI, intracytoplasmic sperm injection,
assisted hatching
Preimplantation genetic diagnosis (PGD)
Polar body PGD
Blastomere PGD
1.4体外受精过程
1.4.1卵母细胞的采集
卵母细胞的采集方法通常有三种： (1)超数排卵。 (2)从活体卵巢中采集卵母细胞。 (3)从屠宰后母畜卵巢上采集卵母细胞。
(3)从屠宰后母畜卵巢上采集卵母细胞
离体卵巢卵母细胞的采集一般用于从屠宰的大中型动物卵巢 上采集卵母细胞或收集腔前卵泡卵母细胞。 采卵前准备卵巢保存液、采卵液、采集卵巢器械及采卵器械。
Ⅰ.离体卵巢卵母细胞的采集
屠宰家畜，30分钟内取出卵巢； 0.9%温生理盐水冲洗； 11h内送回实验室采卵。 25℃, 超净工作台内，去除韧带和输卵管，冲洗血污； 有腔卵泡采用抽吸法、切割法或剥离法收集卵母细胞。 特点：快速、无菌
1.2体外受精的发展历史
1878年，德国科学家Schenk就开始进行哺乳动物卵子体外受 精的尝试。 1945年，美籍华人张明觉成功的进行了兔体外受精，但在此 后的5年里没有能再重复出这一结果。这个时期的体外受精 工作主要建立在经验基础上。 1951年，张明觉和澳大利亚的Austin几乎同时发现只有在雌 性生殖道内停留一段时间的精子才能成功的与卵结合，进行 体外受精。精子获能现象的发现是体外受精史上的一个里程 碑。 1959年，张明觉利用体内获能处理的精子进行体外受精实验， 获得世界上首例“试管动物”—试管兔，为哺乳动物体外受 精工程奠定了基础。从此结束了生殖生物学界几十年来对哺 乳类卵子体外受精能否成功的争论。