一、实验目的
1. 掌握植物组织培养技术的基本操作流程。
2. 熟悉愈伤组织的诱导方法及再分化过程。
3. 学习植物激素在愈伤组织形成与再分化中的作用。
4. 了解植物细胞的全能性及组织培养技术在植物育种中的应用。
二、实验原理
植物组织培养技术是将植物器官、组织或细胞在人工条件下进行无菌培养，使其在适宜的培养环境中生长、分化，最终形成完整植株的过程。愈伤组织是植物组织培养过程中的一个重要阶段，它是由已经分化的细胞脱分化形成的无定形细胞团。通过诱导愈伤组织，可以进一步分化为根、茎、叶等器官，实现植物繁殖和育种。
三、实验材料与试剂
1. 实验材料：水稻叶片、玉米叶片、胡萝卜根段。
2. 试剂：无菌水、无菌滤纸、70%乙醇、5%次氯酸钠、琼脂、蔗糖、硝酸钙、硝酸钾、硝酸铵、磷酸二氢钾、生长素、细胞分裂素、琼脂酶、滤纸等。
四、实验步骤
1. 材料预处理
（1）将水稻叶片、玉米叶片、胡萝卜根段分别用70%乙醇消毒30秒，再用5%次氯酸钠消毒5分钟，最后用无菌水清洗3次。
（2）将消毒后的材料用无菌滤纸吸干水分。
2. 愈伤组织诱导
（1）将预处理后的材料切成约1cm×1cm的小块，放入含有不同浓度生长素和细胞分裂素的MS培养基中。
（2）将培养皿放入培养箱中，在适宜的温度和光照条件下培养。
3. 愈伤组织再分化
（1）将愈伤组织转移到含有不同浓度生长素和细胞分裂素的MS培养基中。 （2）在适宜的温度和光照条件下培养，观察愈伤组织分化为根、茎、叶等器官的情况。
4. 数据记录与分析
（1）观察并记录愈伤组织的生长情况，包括生长速度、愈伤组织颜色、形态等。
（2）观察并记录愈伤组织再分化为根、茎、叶等器官的情况，包括器官形态、生长速度等。
（3）分析不同植物激素浓度对愈伤组织形成与再分化的影响。
五、实验结果与分析
1. 愈伤组织诱导
实验结果表明，水稻叶片、玉米叶片、胡萝卜根段在含有不同浓度生长素和细胞分裂素的MS培养基中均能诱导出愈伤组织。其中，生长素和细胞分裂素浓度分别为1mg/L和0.5mg/L时，愈伤组织诱导效果最佳。
胡萝卜愈伤组织的培养
一、实验目的
1、理解胡萝卜愈伤组织培养的培养方法及条件。
2、了解培养基的成分及掌握培养基的配制方法。
3、会对外植体胡萝卜进行预处理和正确消毒。
4、能严格按照操作规程进行无菌操作。
二、实验原理
在离体根培养中，首先解决外植体消毒问题，因为在自然条件下，根生长在土壤中，要进行彻底灭菌、消毒。为了消灭这种污染源，在把植物组织接种到培养基上之前必须要进行彻底的表面消毒；内部已受到真菌或细菌侵染的组织在组织培养研究中一般都淘汰不用。
胡萝卜的肉质根，其硬度较大，容易操作，可直接用灭菌剂进行处理。
无菌操作技术室用于防止微生物进入实验室区内的操作技术。
要求：①在进行无菌操作之前将界面上的细菌和病毒等微生物杀灭；
②操作过程中是界面与外界隔离，避免微生物的侵入。
目前，多数实验室都使用各种类型的超净工作台进行无菌操作。
三、实验材料与用具
1、器具：培养瓶、电磁炉、玻璃棒、酒精灯、解剖刀、镊子、酒精棉球（浓度为75%）、烧杯、废液缸、滤纸、玻璃棒、移液管、PH试纸
2、材料：新鲜健康的胡萝卜肉质直根
3、试剂、2.4-D、6-BA、大量元素母液、微量元素母液、铁盐母液、有机物母液、蔗糖、琼脂、钙盐母液、无菌水、蒸馏水
四、实验方法与步骤
1、配制培养基 （1）、确定配方和配制量：根据实验需要，确定配制培养基的配方。
（2）、计算各种母液和药品用量：a、确定培养基配制量 b、查看MS培养基母液的扩大倍数、植物生长调节剂母液浓度 c、由母液用量=培养基配方浓度/培养基母液浓度*培养基配制量 植物生长调节剂母液用量=培养基配方浓度/植物生长调节剂母液浓度*培养基配制量
d、计算时注意单位一致并将结果填入表1
培养基母液 母液扩大倍数 配制1L需要量
大量元素母液 20 50ml
微量元素母液 100 10ml
铁盐母液 100 10ml
有机物母液 100 10ml
《植物的组织培养技术》
1．植物组织培养的理论基础：细胞全能型。
2．植物组织培养的流程：离体的植物组织或细胞→愈伤组织→根或芽等器官
3．愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。
4．离体的（高度分化的）植物组织或细胞形成愈伤组织的过程，称为脱分化（去分化）。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养形成根或芽等器官的过程叫做再分化。再分化形成的试管苗，移栽到地里，可以发育成完整的植物体。
5．生物个体发育过程中细胞在形态、结构和生理功能上出现稳定性差异的过程叫细胞分化。
6．细胞分化本质：基因选择性表达。
7．植物组织培养技术的应用有：实现优良品种的快速繁殖；培育脱毒作物；制作人工种子；培育作物新品种以及细胞产物的工厂化生产等。
8．菊花组织培养一般选择未开花植物的茎上部新萌生的侧枝（生长旺盛嫩枝）作材料。
9．植物的组织培养的培养基：MS培养基。
10．MS培养基营养的（一般情况下只有①～⑤）成分：①大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg，②微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co，③植物激素，④蔗糖，⑤琼脂，⑥有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素等。（大量元素和微量元素提供植物细胞所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，维持细胞渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。）
11．植物激素主要是生长素和细胞分裂素，是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素。在培养基中添加生长素和细胞分裂素，其浓度、使用的先后顺序、用量的比例不同影响结果不用。
使用顺序 实验结果 生长素／ 细胞分裂素比值与结果
先生长素，后细胞分裂素 有利于分裂但不分化 比值高时 促根分化，抑芽形成
先细胞分裂素，后生长素 细胞既分裂也分化 比值低时 促芽分化，抑根形成
同时使用 分化频率提高 比值适中 促进愈伤组织生长
12．植物组织培养的影响因素：PH、温度、光等。
, .
;. . 植物组织培养基的配制与植物愈伤组织诱导
一、 实验目的；
通过植物组织培养基和植物愈伤组织诱导实验的学习和训练，使学生了解植物组织培养的基本原理和操作技术，初步掌握MS固体培养基制备方法、外植体的常规灭菌技术以及愈伤组织诱导方法。
二、 实验原理：
根据植物细胞全能性原理，培养植物材料。即在无菌条件下，将植物的器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）放在人工培养基上进行培养，通过细胞分裂，形成一团薄壁细胞，即愈伤组织。愈伤组织可以在适宜的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下进行再分化，重新产生出植物的各种器官和组织，进而发育成完整的植株。
三、实验内容 实验包括以下3部分内容：
实验1-1、植物组织培养基母液的配制和保存
实验1-2、MS培养基的配制与灭菌
实验1-3、胡萝卜愈伤组织的诱导
实验1-1 植物组织培养基母液的配制和保存
1、目的要求 学习植物组织培养基母液的配制方法，为培养基的配制做准备。
2、基本原理 , .
;. . 植物培养基是植物离体培养的组织或细胞赖以生存的营养基质，是为离体培养材料提供近似活体生存的营养环境，主要包括水、大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、糖、凝固剂和植物生长调节等物质。
在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将培养基成分首先配制成比实际培养基浓度大若干倍的母液，然后在配制培养基时，再根据所需浓度，按比例稀释。本实验以MS培养基为例，学习培养基母液的配制。
MS培养基母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。另外，还要配制生长激素母液，在不同类型的培养基中使用。
3、实验仪器设备和试剂
3.1仪器、用具
分析天平、酸度计（或pH试纸）、冰箱、药匙、玻棒、称量纸、滴管、洗瓶、记号笔、烧杯（50ml、100ml、200ml）、容量瓶（100ml、500ml、1000ml）、磨口试剂瓶（100mL、200mL、500ml、1000ml）、量杯、量筒、移液抢、微波炉等。
