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·综述·作者单位： 复旦大学附属上海市第五人民医院创伤-急救-危重医学中心，上海 200240。
作者简介： 方阳欣（1993—），女，硕士研究生，主要从事重症肠道感染诊治。
通信作者：唐建国，E-mail ：tangjianguo@ 。
群体感应分子法尼醇与白念珠菌和宿主相互作用机制研究进展方阳欣， 唐建国 关键词： 法尼醇； 白念珠菌； 双相性转换； 生物膜； 宿主免疫中图分类号：R379 文献标识码：A 文章编号：1009-7708 ( 2018 ) 03-0336-05DOI: 10.16718/j.1009-7708.2018.03.020Mechanistic research updates on the role of quorum sensing molecule farnesol in the interaction between Candida albicans and hostFANG Yangxin, TANG Jianguo. （ICU, the Fifth People's Hospital of Shanghai, Fudan University, Shanghai 200240, China ）白念珠菌（Candida albicans ）是人类中定植于消化道、泌尿生殖道和皮肤黏膜上最常见的机会性致病真菌之一[1]。
一旦机体免疫功能减退，白念珠菌会大量繁殖并改变形态结构，侵入机体引起疾病。
白念珠菌的双相性转换，尤其是由酵母相向菌丝相的转换，在其致病性中发挥着关键作用[2]。
除了许多环境因素，如温度、二氧化碳浓度以及酸碱度等可触发白念珠菌的形态转换，白念珠菌自身产生的群体感应分子（quorum sensing molecule ）也可调控菌体的形态 [1，3]。
法尼醇（farnesol ）是第1个在白念珠菌中发现的群体感应分子，其功能有调控白念珠菌的双相性相互转换（morphology ）、影响生物膜（biofilm ）的生成和调节宿主免疫等[4-6]。
白色念珠菌临床株基因分型及耐药性研究【摘要】目的：了解白色念珠菌的基因分型情况以及不同基因型白色念珠菌的药敏试验结果。
方法：应用聚合酶链反应（PCR）扩增白色念珠菌25S核糖体DNA基因内含子区，可转座I型内含子插入片段的数目及大小的不同使得扩增产物不同，根据产物片段大小和数目分型。
采用K-B法对不同基因型进行白色念珠菌药敏分析。
结果：临床分离的121株白色念珠菌经PCR分为三型：A型83株，B 型27株，C型11株。
A型为最常见的基因型，B型、C型白色念珠菌对唑类抗真菌药物的耐药率显著高于A型菌株，对其他抗真菌药物的耐药率差异无显著性。
结论：不同型别的白色念珠菌耐药谱可能与特定基因型有一定相关性。
【关键词】白色念珠菌 PCR 基因分型药敏分析Abstract: Objective: To understand the situation of genotype and the result of drug susceptibility of Candida albicans isolated. Methods: Polymerase chain reaction (PCR) designed to span the region that included the site of the transposable group I intron of 25S rDNA of Candida albicans was carried out. The size of the intron and presence of insertion segments in the 25S rDNA were detected by agarose gelelectrophoresis of PCR product. K-B methods was carried out for antifungal susceptibility testing. Results: A total of 121 strains of Candida albicans were pided into three types: 83 genotype A strains， 27 genotype B strains and 11 genotype C strains. genotype A was the main genotype. The results of the antifungal susceptibility testing showed that strains of genotype B and C were significantly more resistant for azole-drugs than strains of genotype A， no satistically difference was found among other antifungal drugs. Conclusion: different types of resistance spectrum for Candida albicans may have a certain relevance to its specific genotypes.Key words: Candida albicans；PCR；Genotyping；Antifungal susceptibility白色念珠菌广泛分布于自然界，也是人体的一种条件致病菌，正常人体的皮肤、口腔、肠道、肛门、阴道等处均可分离出该菌。
白色念珠菌的生物膜及耐药机制的研究进展摘要：白念珠菌是最常见的与免疫和医学受损患者的生物膜形成有关的真菌，现在已经确定生物膜的形成是念珠菌病期间的一个主要毒力因子。
白念珠菌生物膜的形成是一个高度调控和协调的过程。
白色念珠菌引起的念珠菌病可表现为皮肤、粘膜或深层器官感染，对人体的危害极大。
白色念珠菌的主要治疗药物为唑类，但同时其对唑类药物的耐药性最严重，研究其耐药机制对于白色念珠菌的治疗有很大意义。
关键字：白色念珠菌；致病方式；耐药机制念珠菌属是共栖物种，因此是正常人类菌群的一部分，分布于皮肤、胃肠道和生殖道。
然而，念珠菌也可在易感患者中引起各种感染，包括老年患者、住院患者或免疫抑制患者。
侵袭性念珠菌感染是全球最常见的真菌感染之一。
据报道，念珠菌是导致医疗相关感染的主要原因之一。
在不同的念珠菌属中，白色念珠菌是最常见的临床菌种。
念珠菌病有多种临床表现，从无生命威胁的浅表皮肤粘膜感染到与念珠菌病相关的毁灭性侵袭性疾病[1]。
1.白色念珠菌的生物膜白念珠菌生物膜的发育过程可分为四个主要阶段：粘附、增殖、成熟和扩散。
在早期粘附阶段，酵母细胞附着在材料表面，形成一层基底，将生物膜固定在表面。
随后是增殖阶段，其特征是丝状化的开始，导致菌丝和假菌丝细胞的出现，这些细胞在整个生物膜发育过程中继续伸长，形成一个复杂的网络，有助于生物膜的整体稳定性。
在随后的成熟阶段，菌丝支架被包裹在一层由自产的外聚合物质（EPS）组成的毯子中，这些物质基本上起到粘合剂的作用，将整个生物膜结构固定在一起[2]。
生物膜形成的整个过程在分子水平上受到高度调控。
在过去的十年中，分子研究已经开始揭示白念珠菌生物膜生长模式下的信号传导过程。
早期研究表明，在白色念珠菌生物膜的形成过程中，形态发生转变、粘附相互作用和群体感应起着关键作用。
米切尔小组的开创性工作开始剖析单个基因/蛋白质对生物膜形成和维持的贡献，从而确定了参与生物膜形成的关键转录因子和粘附素。
㊃论著㊃白念珠菌对氟康唑耐药机制的研究封小川1,2 元航1 郑莹莹1,3 白江苗1 张欠欠1(1.延安大学医学院,延安716000;2.延安市人民医院,延安716000;3.延安大学附属医院,延安716000)ʌ摘要ɔ 目的 通过研究白念珠菌对氟康唑耐药相关基因E R G 11㊁C D R 1㊁C D R 2和MD R 1的表达水平及其与耐药的关系,旨在对本地区以白念珠菌感染为主的侵袭性念珠菌病的防治提供依据㊂方法 选取延安地区两家三甲医院临床确诊的对氟康唑耐药及敏感的白念珠菌各10株,扩增其靶酶编码基因E R G 11,分析突变位点;使用荧光染料罗丹明6G 分析耐药组与敏感组菌株的外排情况;采用荧光定量P C R 检测白念珠菌外排泵编码基因的表达水平㊂结果 E R G 11扩增测序结果显示,耐药菌株C 3号虽发生了碱基位点突变,但并未引起编码氨基酸的改变,耐药菌株C 7号及敏感菌株C 12号发生了碱基位点的突变,引起编码氨基酸的改变;荧光染料罗丹明6G 检测白念珠菌外排实验结果显示,耐药菌和敏感菌无论加入葡萄糖与否外排均存在显著差异,且耐药组加入葡萄糖较未加入葡萄糖外排量明显增加,差异有统计学意义(P <0.01);R T -P C R 检测外排泵基因结果显示,C D R 1与C D R 2外排泵基因表达水平在耐药菌与敏感菌之间差异有统计学意义(P <0.05)㊂结论 研究基因表达及外排泵功能检测结果均表明,本地区白念珠菌对氟康唑的耐药机制主要与外排泵基因过度表达相关,未发现靶酶编码基因有意义的突变㊂ʌ关键词ɔ 氟康唑;耐药机制;E R G 11;C D R 1;C D R 2ʌ中图分类号ɔ R 379.4 ʌ文献标志码ɔ A ʌ文章编号ɔ 1673-3827(2023)18-0481-06S t u d y on t h e m e c h a n i s m o f f l u c o n a z o l e r e s i s t a n c e i n C a n d i d a a l b i c a n s F E N G X i a o c h u a n 1,2,Y U A N H a n g 1,Z H E N G Y i n g y i n g 1,3,B A I J i a n g m i a o 1,Z HA N G Q i a n qi a n 1(1.M e d i c a l C o l l e g e o f Y a n a n U n i v e r s i t y ,Y a n a n 716000,C h i n a ;2.Y a n a n P e o p l e s H o s p i t a l ,Y a n a n 716000,C h i n a ;3.Y a n a n U n i v e r s i t y A f f i l i a t e d H o s pi t a l ,Y a n a n 716000,C h i n a )ʌA b s t r a c t ɔ O b je c t i v e T o s t u d y t h e e x p r e s s i o n l e v e l s of f l u c o n a z o l e r e s i s t a n tg e n e s E R G 11,C D R 1,C D R 2,a n d MD R 1i n C a n d i d a a l b i c a n s a n d th ei r r e l a t i o n s h i p w i t h d r u g re s i s t a n c e ,a n d t o p r o v i d e a b a s i sf o r t h e p r e v e n t i o n a n d t r e a t m e n t o f i n v a -s i v e c a n d i d i a s i s m a i n l y c a u s e d b y C a n d i d a a l b i c a n s i n f e c t i o n i n t h i s r e gi o n .M e t h o d s T e n f l u c o n a z o l e r e s i s t a n t s t r a i n s a n d 10f l u c o n a z o l e s e n s i t i v e s t r a i n s w e r e s e l e c t e d f r o m e a c h h o s p i t a l i n t w o t e r t i a r y a n d f i r s t -c l a s s h o s p i t a l s i n Y a n 'a n a r e a .A m -p l i f y i n g t h e t a r g e t e n z y m e c o d i n g g e n e E R G 11,a n a l y z i n g t h e m u t a t i o n s i t e s ,f l u o r e s c e n t d y e u s i n g rh o d a m i n e 6G w e r e u s e d t o a n a l y z e t h e e f f l u x o f s t r a i n s f r o m d r u g r e s i s t a n t a n d s e n s i t i v e g r o u p s .T h e n ,f l u o r e s c e n c e qu a n t i t a t i v e P C R w a s u s e d t o d e -t e c t t h e e x p r e s s i o n l e v e l o f t h e g e n e e n c o d i n g t h e e f f l u x p u m p o f C a n d i d a a l b i c a n s .R e s u l t s E R G 11a m p l i f i c a t i o n a n d s e -q u e n c i n g r e s u l t s s h o w e d t h a t a l t h o u g h t h e r e s i s t a n t s t r a i n C 3h a d a b a s e s i t e m u t a t i o n ,i t d i d n o t c a u s e c h a n g e s i n t h e c o d i n ga m i n o a c i d .T h e r e s i s t a n t s t r a i n C 7a n d t h e s e n s i t i v e s t r a i n C 12h a d ab a s e s i t e m u t a t i o n ,c a u s i n g c h a n g e s i n t h e c od i n g am i -n o a c i d ;f l u o r e s c e n t d ye r h o d a m i n e 6G w a s u s e d t o d e t e c t t h e ef f l u x o f C a n d i d a a l b i c a n s .T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e e f f l u x o f r e s i s t a n t i s o l a t e a n d s e n s i t i v e i s o l a t e w e r e s ig n i f i c a n t l y d i f f e r e n t wh e t h e r g l u c o s e w a s a d d e d o r n o t ,a n d t h e e f f l u x o f d r u gr e s i s t a n t i s o l a t e w i t h g l u c o s e w a s s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h a t w i t h o u t g l u c o s e ,a n d t h e d i f f e r e n c e w a s s t a t i s t i c a l l y s i gn i f i -c a n t (P <0.05);t h e R T -P C R d e t e c t i o n o f e f f l u x p u m p g e n e s s h o w e d a s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e i n t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f C D R 1a n d C D R 2e f f l u x p u m p g e n e s b e t w e e n d r u g-r e s i s t a n t a n d s e n s i t i v e i s o l a t e (P <0.05).C o n c l u s i o n T h e r e -s u l t s o f g e n e e x p r e s s i o n a n d e f f l u x p u m p f u n c t i o n t e s t i n g i n t h i s s t u d yi n d i c a t e t h a t t h e r e s i s t a n c e m e c h a n i s m o f C a n d i d a a l -b i c a n s t o f l u c o n a z o l e i n t h i s r e g i o n w a s m a i n l y r e l a t e d t o o v e r e x p r e s s i o n o f e f f l u x p u m p g e n e s ,a n d n o s i g n i f i c a n t m u t a t i o n s w e r e f o u n d i n t h e t a r g e t e n z y m e c o d i n g ge n e s .基金项目:陕西省重点研发计划项目(2021S F -230);榆林市科技项目(C X Y -2020-064);延安大学校产学研项目(C X Y 202121)作者简介:封小川,女(汉族),硕士,主治医师.E -m a i l :x i a o c h u a n 880112@163.c o m 通信作者:张欠欠,E -m a i l :z h a n g q i a n yd @163.c o m ㊃184㊃ 中国真菌学杂志2023年12月第18卷第6期 C h i n J M yc o l ,D e c e m b e r 2023,V o l 18,N o .6ʌK e y w o r d sɔf l u c o n a z o l e;d r u g r e s i s t a n c e m e c h a n i s m s;E R G11;C D R1;C D R2[C h i n J M y c o l,2023,18(6):481-486]近年来,世界范围内以白念珠菌感染为主的侵袭性念珠菌病呈上升趋势,全球S E N T R Y抗真菌监测显示,在欧洲,白念珠菌引起的感染占念珠菌属的52.5%㊁亚太地区为46.0%㊁拉丁美洲为43.9%㊁美国和加拿大为42.7%[1],我国流行病学调查显示[2-3],白念珠菌引起的感染占念珠菌属的65%,个别地区甚至大于70%,在免疫功能低下者和植入医疗设备的健康人中白念珠菌的感染率居首位,感染病死率高达68.9%[4],美国每年也会因置入导管引发的白念珠菌感染造成约10万人死亡[5]㊂美国感染病学会(I D S A)指出氟康唑是既往非粒细胞缺乏念珠菌血症患者初始治疗及I C U中高危患者侵袭性念珠菌感染预防的首选药物[6],在发展中国家,三唑类药物(如氟康唑等)是治疗侵袭性念珠菌感染尤其是白念珠菌感染的主要药物[7]㊂但随着氟康唑在临床上的长期广泛应用,致使白念珠菌对氟康唑的耐药性不断增强,据美国疾控中心(C D C)统计,在感染念珠菌患者的血液样本中,约有7%对氟康唑耐药[8]㊂全球S E N T R Y监测显示[9],白念珠菌对氟康唑的耐药率为11.9%,我国白念珠菌对氟康唑的耐药率小于6%,剂量依赖性敏感(S D D)率为4.35%[10],这势必给临床治疗白念珠菌引发的疾病过程中带来严峻考验㊂文献报道显示[11-13],白念珠菌对氟康唑耐药机制主要是靶酶编码基因E R G11的突变和外排泵编码基因过表达,但由于不同地区白念珠菌的感染及其耐药不同,其耐药机制亦不尽相同,因此,本文通过研究白念珠菌对氟康唑耐药相关基因E R G11㊁C D R1㊁C D R2和MD R1的表达水平及其与耐药的关系,探究延安地区白念珠菌对氟康唑的耐药机制,对管理目前有限的抗真菌药物,以及为患者提供精准治疗服务至关重要㊂1材料和方法1.1材料菌株收集延安市两家三甲医院送检并经鉴定为白念珠菌且对氟康唑耐药和敏感的菌株各10株,耐药菌株编号C1-C10,敏感菌株编号C11-C20㊂标准质控菌株:白念珠菌A T C C90028㊂纳入标准:①经质谱鉴定为白念珠菌;②根据美国临床实验室标准化研究所(C L S I)判断标准[14],敏感(S):M I Cɤ8μg/m L,耐药(R):M I Cȡ64μg/m L,药敏结果复核为白念珠菌对氟康唑耐药及敏感菌株;③所有操作均符合实验室操作标准㊂主要试剂和仪器 Y e a s t O n e p l a t e真菌药敏板试剂盒(赛默飞世尔科技(中国)有限公司)(批号:280543)㊁T a q D N A聚合酶(北京百奥莱博科技有限公司)(批号:J N0015)㊁逆转录试剂盒(广州赛国生物科技有限公司)(批号:70060000)㊁罗丹明6G(西亚化学试剂商店)(批号:20211115)㊁V I T E K M S全自动快速质谱微生物检测系统(法国梅里埃公司)㊁A B I7300型全自动荧光定量P C R 仪(美国A B I公司)㊁C y t o m i c s500流式细胞仪(美国贝克曼库尔特公司)㊁N a n o d r o p O n e超微量分光光度计(赛默飞世尔科技(中国)有限公司)㊁T a n o n3500型凝胶成像分析系统(上海天能有限公司)㊂1.2方法E R G11基因扩增并测序白念珠菌D N A的提取:菌株培养㊁离心后,提取出白念珠菌D N A,与5μL样品混合均匀后进行电泳约55m i n,应用电脑成像系统进行凝胶相片拍摄㊂以G e n B a n k公布的白念珠菌标准菌株E R G11基因序列数据为准, P C R引物设计:E R G11F:5 -A T G G C T A T T-G T T G A A A C T G T C A T T G-3 (第1~25位)㊁E R G11 R:5 -T T A A A A C A T A C A A G T T T C T C T T T T T-T C C-3 (第1560-1587位)㊂罗丹明6G在试验菌株中外排情况的测定①实验菌株经离心㊁预冷,重悬于P B S使葡萄糖耗尽,加入罗丹明6G后将试管放于冰面上,然后在菌液中加入P B S混合均匀㊁离心,用流式细胞仪进行分析记录,此时菌株的荧光强度设为外排前的起始荧光强度;②洗3次预冷P B S,将多余的罗丹明6G去除后分为两管,一管50μL菌液加入1m L P B S,另一管50μL菌液加入1m L P B S,离心加入P B S混合均匀,运用流式细胞仪分析,将未用罗丹明6G处理的菌株细胞的荧光强度作为自身荧光对照;③将摄取罗丹明6G之后的细胞荧光强度作为基底,分别减去加与不加葡萄糖外排之后的细胞㊃284㊃中国真菌学杂志2023年12月第18卷第6期 C h i n J M y c o l,D e c e m b e r2023,V o l18,N o.6荧光强度,进行数据分析㊂白念珠菌外排泵基因表达的检测 白念珠菌外排泵基因引物序列见表1㊂表1 白念珠菌外排泵基因引物T a b .1 G e n e p r i m e r s o f C a n d i d a a l b i c a n s e f f l u x p u m p 序列名称片段片段大小18S r R N AF :5'-T CG G G G G T A T C A G T A -T T C A G T T G T C -3'83b pR :5'-T C C T T G G T A A A T G C T T T -C G C A G T A G -3'C D R 1F :5'-TG A C T C C T G C T A C C G T G T -T G -3'194b pR :5'-A C C T G G A C C A C T T G G A A -C A T -3'C D R 2F :5'-C C TG G A A G C A C A G T T G T C -C A -3'161b pR :5'-T C C C C C T T T T G C A T A G C A -C C -3'MD R 1F :5'-G G G T G C T G T T T G T G G T C C -T A -3'196b pR :5'-A C C G G T G A T G G C T C T C A A -T C -3'A C T 1F :5'-TG G A C G G T G A A G A A G T T G -C T -3'184b pR :5'-T T G G A T T G G G C T T C A T C A -C C A -3'P MA 1F :5'-A C CG T T G C C G A A T T T G C T T -C -3'194b pR :5'-G C A A T A C C A A C G G C A T C A -C C -3'白念珠菌总R N A 的提取 采用T r i z o l 法提取白念珠菌总R N A ,R T -P C R 扩增外排泵基因严格按照试剂盒说明书进行操作㊂P C R 反应条件:94ħ预变性3m i n ,94ħ变性10s ,55ħ退火20s ,72ħ延伸30s ,40个循环㊂收集荧光阈值(c yc l e t h r e s h o ld ,C t ),将核糖体基因18S r R N A 设定为内参基因,用相对定量әC t 表示(әC t =C t 目的基因-C t 18S )并进行分析,其中әC t 值越小,相对基因表达量越高,反之则越低,见图1及图2㊂1.3 统计学分析采用S P S S 25.0统计软件分析,计量资料均用 x ʃs 表示,采用t 检验,检验水准α=0.05,P <0.05为差异有统计学意义㊂2 结 果2.1 E R G 11基因的检测结果实验菌株E R G 11基因P C R扩增的产物经纯图1 实验菌株R T -P C R 溶解曲线 图2 实验菌株R T -P C R 扩增曲线F i g.1 R T -P C R d i s s o l u t i o n c u r v e o f e x p e r i m e n t a l s t r a i n F i g.2 R T -P C R a m p l i f i c a t i o n c u r v e o f e x p e r i m e n t a l s t r a i n s 化并测序,测序结果与G e n B a n k 中的标准序列X 13296进行比对分析,发现氟康唑耐药的C 3号菌株第414位碱基发生了突变GңA ,但并未引起第118位氨基酸甘氨酸(G l y )密码子的改变;氟康唑耐药的C 7号菌株及对氟康唑敏感的C 12号菌株的第518位碱基发生了突变CңG ,引起第173位氨基酸密码子改变,致脯氨酸(P r o )变为精氨酸(A r g),见图3~6及表2㊂表2 白念珠菌E R G 11基因突变及对应氨基酸改变T a b .2 M u t a t i o n o f E R G 11g e n e a n d c o r r e s p o n d i n g am i n o a c i d c h a n ge s i n C a n d i d a a l b i c a n s 菌株编号碱基突变位点氨基酸变化C 3G 414A G 118G C 7C 518G P 173R C 12C 518GP 173R注:C 12为敏感菌株,C 3和C 7为耐药菌株㊂2.2 罗丹明6G 的外排情况结果显示,敏感株在摄取罗丹明6G 后,未加葡萄糖几乎不发生外排,加葡萄糖后略有外排,但二者比较差异无统计学意义(P >0.05);耐药株在摄取罗丹明6G 后,无论加葡萄糖与否均发生外㊃384㊃ 中国真菌学杂志2023年12月第18卷第6期 C h i n J M yc o l ,D e c e m b e r 2023,V o l 18,N o .6图3白念珠菌E R G11基因扩增D N A凝胶电泳图图4耐药组白念珠菌C3碱基峰值图图5耐药组白念珠菌C7碱基峰值图图6敏感组白念珠菌C12碱基峰值图F i g.3 A m p l i f i e d D N A g e l e l e c t r o p h o r e s i s o f C a n d i d a a l b i c a n s E R G11g e n e F i g.4 C3b a s e p e a k o f C a n d i d a a l b i c a n s i n d r u g r e s i s t a n c e g r o u p F i g.5 C7b a s e p e a k o f C a n d i d a a l b i c a n s i n d r u g r e s i s t a n c e g r o u p F i g.6 C12b a s e p e a k o f C a n d i d a a l b i c a n s i n s e n s i t i v e g r o u p排,加葡萄糖较未加葡萄糖的外排量增加,二者比较差异具有统计学意义(P<0.01);将耐药组株对罗丹明6G的外排与敏感组菌株对罗丹明6G的外排量进行分析,耐药组罗丹明6G的外排量明显高于敏感组,差异具有统计学意义(P<0.01),见表3和图7㊂表3白念珠菌耐药组与敏感组罗丹明6G外排实验结果比较T a b.3 C o m p a r i s o n o f r h o d a m i n e6G e f f l u x t e s t r e s u l t s b e t w e e nd r u g-re s i s t a n t g r o u p a n d s e n s i t i v e g r o u p of C a n d i d a a l b i c a n s分组耐药组(n=10)敏感组(n=10)t P未加葡萄糖外排能力5.47ʃ0.530.45ʃ0.2327.621<0.01加入葡萄糖后外排能力7.77ʃ0.80.44ʃ0.2527.526<0.01 t-11.6020.44P<0.01>0.052.3 R T-P C R测定外排泵基因表达水平统计学分析显示,耐药组和敏感组肌动蛋白相关基因A C T1和质膜H+-A T P酶编码基因P MA1的表达水平相比较,差异无统计学意义(P >0.05);耐药组C D R1和C D R2外排泵基因表达量较敏感组显著增高,差异有统计学意义(P<0.01),图7敏感和耐药白念珠菌罗丹明6G外排实验结果F i g.7 R e s u l t s o f r h o d a m i n e6G e f f l u x t e s t o f s e n s i t i v e a n d d r u g-r e s i s t a n t C a n d i d a a l b i c a n s见表4和图8㊂表4白念珠菌主动外排泵基因在敏感组与耐药组相对表达水平的比较(әC t值)T a b.4 C o m p a r i s o n o f r e l a t i v e e x p r e s s i o n l e v e l s o f a c t i v e e f f l u x p u m p g e n e o f C a n d i d a a l b i c a n s b e t w e e n s e n s i t i v e g r o u p a n d d r u g r e s i s t a n t g r o u p外排基因耐药组(n=10)敏感组(n=10)t PC D R16.42ʃ0.905.00ʃ0.863.589<0.01 C D R27.75ʃ1.116.30ʃ1.033.040<0.01 MD R19.74ʃ0.719.05ʃ1.141.616>0.05 A C T18.15ʃ0.318.16ʃ0.42-0.030>0.05 P MA18.04ʃ0.118.07ʃ0.14-0.612>0.05㊃484㊃中国真菌学杂志2023年12月第18卷第6期 C h i n J M y c o l,D e c e m b e r2023,V o l18,N o.6图8敏感和耐药白念珠菌外排泵基因的表达量F i g.8 E x p r e s s i o n o f e f f l u x p u m p g e n e i n s e n s i t i v e a n d d r u g-r e s i s t-a n t C a n d i d a a l b i c a n s3讨论全世界每年由念珠菌引起的深部器官感染病例40万以上,病死率超过45%[15],尤其白念珠菌的发病率㊁致死率明显上升㊂唑类药物中的氟康唑是临床早期经验治疗白念珠菌感染尤其作为高危人群预防白念珠菌感染的首选药物,使其在人体内长期处于亚治疗水平,引起耐药性增加[16],白念珠菌耐药是目前临床治疗其感染失败的一个重要原因,研究报道,E R G11基因错义突变可使氟康唑抗真菌的作用靶点去甲基化酶C Y P51的血红素表面结合位点发生变化,从而使氟康唑无法与白念珠菌有效结合而致耐药[17],而且白念珠菌细胞膜上的外排泵活力增强也是白念珠菌对氟康唑耐药的主要机制之一[18]㊂本研究中靶酶编码基因E R G11的目的基因扩增测序中虽然引起氨基酸的改变,即耐氟康唑的C7号菌株及对氟康唑敏感的C12号菌株的第518位碱基发生了突变,引起第173位氨基酸密码子改变,致P r o变为A r g,但耐药及敏感菌株中均存在,虽为错义突变,但该突变没有发生在E R G11点突变的105-165㊁266-287㊁405-488氨基酸之间的3个 热点 区域[19],也不是既往文献报道的Y123F㊁K143R㊁F449V和G464S等多个与白念珠菌对氟康唑耐药有关的突变位点[20],推测这个位点的突变在白念珠菌对氟康唑耐药机制中为无意义突变,但此也不能表明该机制在本地区白念珠菌耐药性的产生中无作用,可能与样本量较少有关,尚需扩大样本量进行进一步研究㊂罗丹明6G作为白念珠菌细胞膜上活性流出系统的底物,具有无毒㊁易检测㊁易吸收入射光的能量等优点,准确测量白念珠菌中罗丹明6G的积累浓度值有利于选择抗性菌株中C D R1㊁C D R2㊁MD R1等基因的过度表达㊂研究结果显示,加入荧光染料罗丹明6G后,耐药组罗丹明6G的外排量明显高于敏感组,说明白念珠菌对氟康唑耐药为主动外排系统所致㊂为排除实验环境(如菌株的生长环境和R N A的抽提等)对外排泵基因的检测结果的影响,耐药组和敏感组加入肌动蛋白相关基因A C T1和质膜H+-A T P酶编码基因P MA1,比较其表达水平,差异无统计学意义(P>0.05),说明实验环境对外排泵基因的检测结果没有影响㊂耐药组C D R1和C D R2外排泵基因表达量较敏感组显著增高,差异有统计学意义(P<0.01),由此可知影响本地区白念珠菌对氟康唑耐药机制中最为重要的是其药物外排泵基因C D R1㊁C D R2过度表达,并且耐药组耐药基因C D R1㊁C D R2相对表达量均显著高于敏感株组,与文献报道结果相似[21-22]㊂分析原因主要是,C D R1的表达受顺式作用调控元件的控制,包括一个B E E(基础表达元件)㊁一个D R E(药物敏感元件)㊁两个S R E(甾醇调控元件)和一个N R E(负调控元件),而C D R2的表达仅受D R E的控制,在这些不同的元件中,只有D R E参与必需的C D R1和C D R2的高表达和对氟康唑外排的上调相反,MD R1基因不具有D R E元件,并且MD R1启动子也不直接与氟康唑反应[21]㊂综上所述,本地区白念珠菌的耐药机制主要与外排泵基因过度表达相关,未发现靶酶编码基因有意义的突变,由于白念珠菌对氟康唑耐药现象的产生并非由于单一机制的调控,且临床很多患者存在滥用抗真菌药物的现象,导致白念珠菌对氟康唑的耐药性不断提高,而新型抗真菌药开发缓慢,改善白念珠菌对氟康唑的耐药问题迫在眉睫,因此,我们急需进一步探索白念珠菌致病机制和耐药机制,寻找新的药物治疗靶点,探索新的治疗体系,提高患者的生存率㊂参考文献[1]P F A L L E R M A,D I E K E MA D J,T U R N I D G E J D,e t a l.T w e n t y y e a r s o f t h e S E N T R Y a n t i f u n g a l s u r v e i l l a n c e p r o-g r a m:R e s u l t s f o r C a n d i d a s p e c i e s f r o m1997-2016[J].O p e n F o r u m I n f e c t D i s,2019,6(S u p p l1):S79-S94. 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白念珠菌唑类耐药和生物膜相关基因的表达胡绿荫;宰淑蓓;金鑫;蔡金凤;曹宇硕;胡香南;杜昕;李天铭;李敏【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2014(000)006【摘要】目的：研究白念珠菌临床分离株唑类耐药和生物膜形成相关基因的表达。
方法收集上海市公共卫生临床中心2006至2011年92例感染性疾病患者[病毒性肝炎、结核、获得性免疫缺陷综合征（AIDS）]血液、无菌部位和黏膜分离鉴定的白念珠菌104株，选用ATB FUNGUS3检测抗菌药物（氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑）的最低抑菌浓度（MIC），采用半定量逆转录聚合酶链反应（PCR）分析唑类敏感、浓度依赖性敏感（S-DD）和耐药菌株之间药物外排泵基因CDR1、CDR2、MDR1和药物靶酶基因ERG11表达的差异，同时通过甲基四氮盐（XTT）代谢试验筛选强生物膜形成能力菌株（HBFs），研究其与弱生物膜形成能力菌株（LBFs）相关基因ALS3和HWP1表达的差异。
结果104株白念珠菌中共检测出16株至少对1种唑类药物耐药，6株至少对1种唑类药物S-DD。
药物靶酶基因ERG11在耐药株、S-DD株和敏感菌之间比较，差异有统计学意义（P＝0．0078），且耐药株、S-DD株分别与敏感菌比较，差异有统计学意义（P＜0．05），然而CDR1、CDR2和MDR1表达量在3种菌株间无明显差异。
生物膜形成能力试验显示16株菌生物膜形成能力增强，其HWP1表达量与LBFs比较差异有统计学意义（P＝0．0079），ALS3表达量差异无统计学意义。
结论ERG11基因的过度表达为白念珠菌唑类耐药的重要机制。
菌丝细胞壁蛋白HWP1基因的高表达与白念珠菌生物膜形成增强相关。
【总页数】6页(P597-602)【作者】胡绿荫;宰淑蓓;金鑫;蔡金凤;曹宇硕;胡香南;杜昕;李天铭;李敏【作者单位】上海市复旦大学附属公共卫生临床中心医学检验科，上海201508;上海市复旦大学附属公共卫生临床中心医学检验科，上海201508;上海市复旦大学附属公共卫生临床中心医学检验科，上海201508;上海市复旦大学附属公共卫生临床中心医学检验科，上海201508;上海市复旦大学附属公共卫生临床中心医学检验科，上海201508;上海市复旦大学附属公共卫生临床中心医学检验科，上海201508;复旦大学附属华山医院检验科，上海200040;复旦大学附属华山医院检验科，上海200040;上海交通大学医学院附属仁济医院检验科，上海200127【正文语种】中文【中图分类】R446.5【相关文献】1.多位点序列分析法在白念珠菌性阴道炎唑类耐药菌株分子流行病学研究中的运用[J], 徐炜新;孙杰2.白念珠菌对唑类药物耐药机制中生物膜作用的研究进展 [J], 史册;刘锦燕;魏冰;项明洁3.抗白念珠菌唑类耐药体外实验研究进展 [J], 贾淑琳;范瑞强;谢婷4.白念珠菌对唑类抗真菌药物分子耐药机制的研究进展 [J], 王惠平5.白念珠菌生物膜相关基因对耐药性的影响 [J], 郭晓宇;李小静因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
164上海交通大学学报（医学版）2020, 40 (2)药。
唑类药物的抑菌机制是其可作用于白念珠菌细胞膜麦角固醇合成中的关键酶，使白念珠菌细胞膜甾醇合成通路受阻、细胞膜完整性破坏及菌体内有毒的甲基化固醇类物质累积而达到抗真菌作用[5]。
然而，在临床频繁的预防经验用药中，耐药性的产生给该类药物的应用带来很大困难[5-6]。
甾醇合成通路改变主要是由△5, 6- 去饱和酶的失活引起，该酶由ERG3（Ergosterol 3）基因编码[7]。
唑类药物通过抑制14α- 去甲基化酶（14α-demethylase ，14-DM ）发挥抑菌作用，当ERG3发生突变或缺失后就不能编码有活性的△5, 6- 去饱和酶，致使中间积聚的产物变成14α- 甲基法尼醇，它可以代替部分麦角固醇的功能，使细胞继续生长继而导致耐药产生。
本研究在Noble 等[8]提出的构建白念珠菌基因敲除株策略基础上稍作改进，高效获得白念珠菌ERG3基因敲除株，并就ERG3敲除对白念珠菌唑类药物耐药性及其常见耐药基因的表达进行分析，以期为深入研究白念珠菌的耐药机制奠定基础。
1 对象与方法1.1 研究对象、引物及试剂1.1.1 菌株和质粒 药敏标准白念珠菌ATCC90028由本实验室保存，DH5α大肠埃希菌化学感受态细胞购自南京诺唯赞生物科技有限公司。
实验中涉及的其他白念珠菌菌株和质粒信息见表1。
其中，质粒pSN40含有亮氨酸（leucine 2，LEU2）筛选标记，质粒pSN52含有组氨酸（histidine 1，HIS1）筛选标记。
表1 白念珠菌菌株和质粒Tab 1 Candida albicansstrains and plasmidsSN152 strain ARG4Δ/ARG4ΔLEU2Δ/LEU2ΔHIS1Δ/HIS1ΔURA3/URA3Δ::IMM434IRO1/IRO1Δ::IMM434Noble [8], given from Department of Pharmacology, the Second Military Medical University pSN40 plasmid Derived from C.m with LEU2 screening marker Given from Department of Pharmacology, the Second Military Medical University pSN52 plasmidDerived from C.d with HIS1 screening marker Given from Department of Pharmacology, the Second Military Medical University ERG3+/- strain SN152* ERG3Δ::C.mLEU2This study ERG3-/- strainSN152* ERG3Δ::C.mLEU2/ ERG3Δ::C.dHIS1This studyNote: *SN152 background; C.m —Candida maltose ; C.d —Candida dublinensis .1.1.2 引物 引物由生工生物工程（上海）有限公司合成，引物序列及合成片段见表2～4。
#综述#白念珠菌毒力因子的研究进展陈雪蓉¹(综述) 肖敦振º(审校)华中科技大学同济医学院计划生育研究所(湖北 武汉) 430030中国图书分类号 R51913 文献标识码 A 文章编号 1001-4411(2007)32-4631-03¹在读硕士研究生º通讯作者白念珠菌是一种重要的条件致病性真菌,它寄居在人体不同的解剖部位,包括皮肤、口腔、胃肠道、阴道等。
白念珠菌是如何从共生菌转变为致病菌现在还不很清楚。
目前,对白念珠菌毒力因子的研究深入而广泛,其毒力因子主要包括粘附、利于侵入的酶、菌丝形成、表型转换等。
笔者对白念珠菌毒力因子的研究进展进行综述。
1 粘附(adhes i on)粘附素家族能促进白念珠菌粘附于宿主细胞。
目前研究较多的白念珠菌粘附素多肽包括凝集素样序列1(agg l u tini n -li ke sequence ,A l s1)、凝集素样粘附素1(agg l uti n i n-li ke ad -hesi on 1,A l a1)、菌丝细胞壁蛋白1(hypha l wa ll pro te i n 1,Hw p1)、整合素基因1(i ntegr i n 1,Int1p)、甘露糖基转移酶基因(m annosy ltransferase ,M nt1p)和Pm t1p ,后两者是甘露糖基转移酶并可能通过它们在甘露聚糖合成中的作用促进粘附。
A ls 家族基因广泛存在于各种白念珠菌中,而且它们具有相同的结构特征。
从结构分析,A ls 家族编码的都是细胞壁表面的蛋白质。
A ls 家族有分泌型蛋白的典型特征并且有疏水的羧基末端,这提示了它是糖磷酯酰肌醇制动器。
H oyer 的实验室分离出第一个A ls 基因,并陆续鉴定了这一家族的其它蛋白112。
已经证明SC5314的A ls1p 能增强酿酒酵母粘附于上皮细胞的能力,它们的表达有利于白念珠菌粘附于宿主122。
药品中白色念珠菌检验方法的研究近年来，白色念珠菌在药品行业非常普遍，它可以在药品中发现，并影响药品的质量。
这里，本文以药品中白色念珠菌检验方法为研究对象，全面分析了白色念珠菌的检验方法，以推动药品质量的安全和稳定。
白色念珠菌是一种微生物，常见于农作物种植和动物屠宰的地方，很容易通过空气和水运送而进入到药品中。
而且，它可以在药品中发酵形成毒素，危害人类健康。
因此，如何检测白色念珠菌，及时发现和控制它，对确保药品质量安全具有重要意义。
白色念珠菌检验方法主要包括细菌数的测定（total viable counts）、微生物培养（microbiology culturing）和遗传检测（genetic detection）。
1.菌数的测定：细菌数的测定是一种快速可靠的检测方法，可以在较短的时间内获得准确的结果。
它主要包括接种、报告细菌总数及菌落形态等步骤，但是此方法装置费用较高，且不能识别不同物种，无法检测毒素物质。
2.生物培养：培养是对细菌的一种常用检测方法，具有识别和携带毒素物质的菌落等优点。
但是此方法所需时间较长，费用较高，并且结果容易受到干扰和影响。
3.传检测：遗传检测是以药品中非细菌物质（如核酸）为检测对象的一种检测方法，可以在较短时间内准确地识别微生物的物种，且方法成本较低。
此外，另外一种实用的白色念珠菌检验方法是通过生物传感器来检测白色念珠菌，这是一种利用生物技术进行敏感、灵敏、快速检测的方法。
可以有效避免药品污染的发生，提高检验效率，提高药品质量。
针对白色念珠菌检测中出现的一些问题，有几种技术，可以有效地检测其存在，以保证药品质量。
例如，可以采用高精度的测温装置控制检验环境的温度，以降低药品中白色念珠菌的存在。
此外，可以采用有毒的药物进行消毒和除菌，以减少白色念珠菌的产生。
综上所述，检测白色念珠菌的技术有很多种，可以选择合适的方法，提高药品中白色念珠菌的检验效率。
只有控制好药品中的白色念珠菌，才能确保药品质量的安全和稳定，确保人们健康安全。
㊃综述㊃环境及遗传调控机制对白念珠菌菌丝形成过程调控的研究进展李波杨静(山西医科大学第二医院皮肤性病科,太原030000)ʌ关键词ɔ白念珠菌;菌丝;形态转换;调控机制;环境信号ʌ中图分类号ɔ R379.4ʌ文献标志码ɔ A ʌ文章编号ɔ1673-3827(2023)18-0188-05白念珠菌(C a n d i d a a l b i c a n s)是最常见的真菌病原体,可定植于口腔㊁泌尿生殖道以及健康人的皮肤表面,在大多人群中,白念珠菌是正常微生物菌群中的一部分[1]㊂由于微生物菌群变化㊁免疫功能障碍和皮肤屏障破坏,白念珠菌可能会从共生转变为致病性[2],这种转变导致白念珠菌在不同组织和器官中引起浅部感染(如皮肤感染),以及甚至危及生命的深部真菌感染[3]㊂在临床环境中,40%的念珠菌血症是由白念珠菌引起的,是严重的医院获得性感染之一[4]㊂形态转变㊁表型转换㊁生物膜形成㊁水解酶分泌㊁黏附素表达和宿主细胞表面入侵等几种毒力因素与白念珠菌的致病性有关[3]㊂形态转变是白念珠菌的一个重要特征,可以分为酵母㊁假菌丝和菌丝三种形态[5]㊂其中,假菌丝和菌丝被称为丝状形态,是感染阶段的重要形态[6],由酵母形式可逆产生[7-8]㊂酵母到菌丝的转变在白念珠菌的毒力中起主要作用,可以帮助真菌免疫逃逸,逃避巨噬细胞的吞噬,从而增加侵入宿主组织的可能性[9]㊂因此,研究白念珠菌从酵母到菌丝转化的机制受到了许多研究人员的高度重视,本文将重点介绍白念珠菌的形态及转变,以及各种环境因素是如何通过转录因子调控菌丝的生长过程的㊂1白念珠菌的形态类型白念珠菌在宿主不断变化的环境中生长并形作者简介:李波,女(汉族),硕士研究生在读.E-m a i l:547556763@ q q.c o m通信作者:杨静,E-m a i l:y a n g_j i n g@s x m u.e d u.c n 成菌丝体,适应各种微生物环境㊂酵母㊁菌丝和假菌丝的细胞形态㊁功能和生长条件各不相同[10-12]㊂白念珠菌在体外条件下的默认细胞形态大多是酵母形态,呈圆形或椭圆形,具有单细胞形态,可参与生物膜的形成,酵母形态下的白念珠菌在血液中具有毒力或保持共生,而在口腔㊁皮肤和阴道常保持共生[13-15]㊂假菌丝细胞具有长椭圆多细胞形式,可在p H6.0㊁35ħ㊁固体限氮培养基上诱导,并参与生物膜的形成[16]㊂在假菌丝细胞中,芽蕾和母细胞的颈部有收缩,甚至在随后的一个间隔连接处也有收缩[17],这种母细胞和子细胞之间的连接很容易被外力中断㊂这种形态类型在白念珠菌生命周期中的相关性仍有待研究㊂菌丝细胞具有管状多细胞形式,由未发芽的酵母细胞发育而来,在母细胞的颈部没有收缩,整个长度上有平行的边[16]㊂菌丝形态发生受到数种转录因子(T F)的严格控制,如:A c e2㊁B r g1㊁C p h1㊁E f g1㊁F l o8㊁G p r1㊁Hm s1㊁N g s1㊁R i m101㊁R o n1㊁Um e6等,这些转录因子有助于激活或抑制菌丝转录程序,这些调节性T F的活性受多种环境信号控制,包括:p H㊁N-乙酰氨基葡萄糖(G l c N A c)㊁温度㊁血清㊁缺氧等[18],以上外界环境因素通过不同的信号转导途径,调节细胞内转录因子的活性来控制基因的表达,从而实现对细胞形态的转换㊂2菌丝形态改变在白念珠菌毒力中的作用在念珠菌感染的患者组织样本中,白念珠菌主要以菌丝形式存在,这一观察结果表明,酵母-菌丝㊃881㊃中国真菌学杂志2023年4月第18卷第2期 C h i n J M y c o l,A p r i l2023,V o l18,N o.2Copyright©博看网. All Rights Reserved.的形态转变在白念珠菌感染入侵组织的过程中发挥了作用[19]㊂菌丝形态穿透黏膜和下层组织并进入血液的能力增强也有助于发生念珠菌血症[20]㊂此外,巨噬细胞吞噬体内的白念珠菌菌丝形成有助于白念珠菌逃避吞噬作用,并杀死巨噬细胞[21-23]㊂最后,在合成基质上形成生物膜的能力与菌株形成菌丝的能力高度相关,生物膜的形成使白念珠菌能够在各种导管上定植并导致医源性念珠菌感染[24]㊂动物模型的成功建立为酵母到菌丝的转变在发病机制中的作用提供了实验室支持㊂在系统性感染的小鼠模型中,白念珠菌突变体导致细胞不能从酵母形式转换为菌丝形式,说明其毒力显著降低[25],对能够在体内进行酵母-菌丝转换的菌株的研究表明,进入血液后菌丝形态的转变对毒力至关重要[25-26],而在感染早期抑制菌丝形态的发生可显著提高宿主的存活率[27]㊂近年来的一项全球分析显示在177个小鼠毒力测试突变株中,毒力减弱与菌丝形态形成减少显著相关[28],虽然用于确定小鼠菌丝生长和/或毒力决定因素的基因组筛查仅显示部分重合[29],但是再次确认了菌丝形态发生和毒力之间的联系㊂大多数研究和观察似乎都支持菌丝形态发生和白念珠菌致病性之间的紧密联系[30]㊂黏膜感染包括口腔念珠菌病和外阴阴道念珠菌病,而食管念珠菌病常发生在慢性病患者中,这些类型的念珠菌病比系统性念珠菌病更为普遍,尽管通常比侵袭性念珠菌病危害稍小,但依然会给患者带来巨大负担,这些浅部感染似乎也涉及酵母到菌丝的转变[19]㊂3信号转导通路目前关于白念珠菌形态转换的信号分子通路研究较多的包括环磷酸腺苷/蛋白激酶A(c y c l i c a-d e n o s i n e m o n o p h o s p h a t e/p r o t e i n k i n a s e A, c AM P/P K A)信号通路㊁丝裂原激活蛋白激酶(m i-t o g e n-a c t i v a t e d p r o t e i n k i n a s e,MA P K)信号通路㊁R i m101介导的p H信号通路[31]㊂3.1c AM P/P K A信号通路保守的c AM P/P K A信号通路是控制白念珠菌环境感知的主要调节通路,此外,该途径还控制白念珠菌的细胞生长㊁毒力㊁应激反应和细胞死亡[32]㊂该途径的主要成分包括R a s G T P酶(R a s1和R a s2)㊁腺苷酸环化酶(C y r1)㊁环核苷酸磷酸二酯酶(P d e1和P d e2)以及由调节和催化亚基组成的P K A[32]㊂其中R a s G T P酶是分子开关,响应周围环境刺激,将非活性G D P转变为活性G T P结合形式,随后激活C y r1产生第二信使c AM P,这就导致胞内c AM P水平升高,c AM P结合P K A复合体的调节亚基B c y1,引起构象变化,使其与催化亚基解离,从而激活了P K A的催化亚基磷酸化,并激活下游相应的转录因子,调控白念珠菌的菌丝生长[32-33]㊂研究发现,单纯敲除白念珠菌r a s1基因的菌株菌丝发育缺陷㊁毒力显著降低[34];敲除野生型菌株r a s2基因未发现明显菌丝发育缺陷,而继续敲除r a s1基因缺失株中r a s2基因会加剧菌丝发育缺陷,表明两种R a s蛋白共同调控下游信号传导通路[35]㊂P K A的下游目标包括转录调节剂和其他控制细胞反应的效应器㊂白念珠菌中P K A的主要潜在靶点包括转录因子E f g1㊁F l o8和W o r1,它们是菌丝形成的关键调节因子[36-38]㊂另外,C y r1的不同结构域充当具有不同性质的多种刺激的传感器,例如:温度㊁C O2㊁葡萄糖等[39]㊂3.2 MA P K信号通路丝裂原活化蛋白激酶(MA P K)信号转导通路由三部分组成:MA P K激酶的激酶(MA P K K K)㊁MA P K激酶(MA P K K)和MA P K[40]㊂当上游信号(通过各种信号机制)激活MA P K K K时,MA P-K K K会被磷酸化并触发MA P K K的磷酸化,进而使MA P K磷酸化,接下来MA P K通常会将信号传递给产生特定适应性反应的下游转录因子[41]㊂目前研究表明白念珠菌中MA P K信号通路主要由C e k1㊁C e k2㊁M k c1和H o g1介导,分别构成了4条重要的MA P K信号转导通路,其中,C e k1㊁C e k2和H o g1途径主要在白念珠菌菌丝形态转换过程中具有重要作用,M k c1途径主要在细胞壁形成中发挥作用[41]㊂阻断MA P K信号通路时,明显影响白念珠菌菌丝生长,但其影响仍不如阻断c AM P/ P K A信号通路强㊂特别是在血清和G l c N A c等菌丝诱导因子作用下,MA P K信号通路相关突变株仍能进行菌丝生长[42]㊂3.3 R i m101通路白念珠菌R i m101是一种D N A结合蛋白,通过结合于碱性应答基因上游序列,促进基因表达,其激活态时调控p H感应基因PH R1和PH R2表达,从而调控白念珠菌在不同p H环境中的菌丝生长[43]㊂尽管敲除R i m101不影响白念珠菌在不同㊃981㊃中国真菌学杂志2023年4月第18卷第2期 C h i n J M y c o l,A p r i l2023,V o l18,N o.2Copyright©博看网. All Rights Reserved.p H环境中的生长,但会影响菌株在某些培养环境下的菌丝生长能力[44]㊂4调节菌丝形态生长的环境信号4.1p H值环境的p H值对白念珠菌从酵母到菌丝形态的转化有很大影响[20]㊂在中性至碱性p H水平(ȡ6.5)下,会诱导菌丝形态发生,而在酸性p H水平(<6.5)下菌丝形态发生被抑制[45]㊂p H感应通过D f g16和R i m21等跨膜蛋白实现[46],在碱性环境中,信号通路导致R i m101转录因子激活,该转录因子依赖于R i m8㊁R i m3㊁R i m20等因子的激活[47]㊂激活态的R i m101进入细胞核并介导p H 依赖性反应[48]㊂值得注意的是,白念珠菌不仅能够感知和适应环境p H,还可以通过碱化周围环境和自动诱导菌丝形成来调节细胞外p H[49]㊂此外,碱化已被证明可以对抗吞噬过程中的巨噬细胞酸化,促进其在巨噬细胞中的存活[50]㊂4.2氧气缺氧是炎症的一个临床特征,代表着强烈的免疫活动范围[51-52]㊂白念珠菌可以调节缺氧和缺氧下的宿主反应,以逃避免疫反应[51]㊂作为一种共生菌,白念珠菌通过抑制丝状生长E f g1的转录因子来适应缺氧条件[40]㊂有趣的是,E f g1在菌丝形态发生中具有双重作用㊂在ɤ35ħ的缺氧条件下,它起抑制作用,而在常氧(正常氧气水平)下,E f g1是菌丝形成的强诱导剂[53]㊂相比之下,A c e2在缺氧条件下对菌丝形态发生至关重要,而在常氧条件下可有可无[54]㊂E f g1和A c e2功能重叠,染色质免疫沉淀(C h I P)分析表明,缺氧抑制因子(E f g1和B c r1)和缺氧激活因子(A c e2和B r g1)在缺氧条件下控制菌丝形态发生的调节回路中相连[52]㊂此外,在ɤ35ħ的缺氧条件下,E f g1与C e k1介导的通路有关;低E f g1磷酸化水平抑制C e k1和C p h1,防止菌丝形态发生,低E f g1磷酸化水平还通过c AM P-P K A途径抑制菌丝形态发生[40]㊂4.3 N-乙酰氨基葡萄糖N-乙酰氨基葡萄糖(G l c N A c)通常是胃肠黏膜㊁细菌细胞壁肽聚糖和真菌细胞壁几丁质的结构成分[54]㊂鉴于G l c N A c在宿主生态位和微生物细胞中无处不在,它可能作为一种关键的信号分子来调节白念珠菌的共生性和致病性之间的转换[55]㊂当G l c N A c以高浓度存在时,它可以通过扩散进入细胞,它诱导的菌丝生长的主要信号转导途径最初被认为是c AM P-P K A途径,最近发现参与G l c-N A c分解代谢的转录因子N g s1和R e p1可以刺激尚未阐明的完全独立于c AM P-P K A途径的方式刺激菌丝生长;参与G l c N A c信号转导的另一种途径是p H感应R i m101途径,在G l c N A c分解代谢过程中产生过量的氨会导致细胞外p H值升高(> 5),从而通过R i m101途径间接刺激白念珠菌的菌丝诱导[40]㊂4.4血清血清是白念珠菌菌丝生长的有效诱导剂,血清糖蛋白分解产生的G l c N A c和脯氨酸能够独立的诱导菌丝生长,这可能是血清诱导菌丝形成能力的核心[18]㊂血清通过各种转录因子调节菌丝形成,包括E f g1㊁Um e6㊁B r g1㊁N g s1㊁R o n1,并通过包括c AM P-P K A通路在内的信号通路调节[18,56-57]㊂4.5温度白念珠菌对温度很敏感,高温(37~39ħ)通常会诱导菌丝形成,菌丝形态发生的温度依赖性调节主要由H s p90p(热休克蛋白90)介导,其通过c AM P-P K A信号通路依赖和独立的机制在非诱导条件下抑制丝状化[57-59]㊂随着温度升高,H s p90p 介导的R a s1p抑制得到缓解,导致R a s1G T P a s e 活性增加,然后R a s1p通过C y r1p刺激c AM P的产生,最终激活c AM P-P K A途径进行菌丝诱导[18,59]㊂5总结与展望白念珠菌形态转换是其重要的生物学特征,在适应宿主环境变化及感染致病过程中起重要作用㊂在驱动酵母-菌丝转换的过程中涉及到的相关转录调控以及不同环境信号对菌丝的诱导或抑制的研究,对进一步了解其发病机制和制定新型治疗策略非常重要㊂近年来,对白念珠菌酵母-菌丝形态转换的研究取得了很多重要的成果,尤其是在菌丝形态转换的环境信号方面进展迅速,但是该领域还是有一些尚未阐明的机制和问题存在㊂比如,识别与白念珠菌形态转换有关的新型宿主特异性环境信号,这代表了未来研究的重要领域㊂了解其他特异性的环境信号如何调节形态变化应该会对控制白念珠菌共生性与致病性产生有价值的新见解㊂参考文献[1]T A L A P K O J,J U Z B AŠI C'M,MA T I J E V I C'T,e t a l.C a n-㊃091㊃中国真菌学杂志2023年4月第18卷第2期 C h i n J M y c o l,A p r i l2023,V o l18,N o.2Copyright©博看网. 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C h i n J M y c o l,A p r i l2023,V o l18,N o.2Copyright©博看网. 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