鸡肌肉组织实时荧光定量PCR及Western杂交内参基因的筛选
- 格式：pdf
- 大小：2.35 MB
- 文档页数：7
畜牧兽医学报 2015，46（7）：1107-1113ActaVeterinariaetZootechnicaSinicadoi：10.11843/j.issn.0366-6964.2015.07.005鸡肌肉组织实时荧光定量PCR及Western杂交内参基因的筛选王红杨，刘冉冉，赵桂苹，郑麦青，李庆贺，李 鹏，刘 丽，文 杰*（中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，动物营养学国家重点实验室，北京100193）摘 要：本研究对5种常用“持家基因”作为鸡肌肉组织发育早期基因和蛋白检测内参基因的有效性进行了评价，为鸡肌肉发育相关分子检测中内参基因的选择提供科学依据。应用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Westernblot技术，分别检测了鸡12胚龄、17胚龄、1日龄和14日龄胸肌中β肌动蛋白（ACTB）、β微管蛋白（TUBB）、TA-TA结合蛋白（TBP）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）和热休克蛋白70（HSP70）的mRNA和蛋白表达水平。结果表明，在鸡发育早期胸肌组织中，仅HSP70mRNA和蛋白在各阶段间表达水平差异不显著，GAPDH、TUBB、TBP和ACTB的mRNA和蛋白表达水平在检测的各个时间点间均差异显著或极显著（P＜0.05或P＜0.01）。HSP70更适合作为鸡肌肉发育早期基因和蛋白检测的内参基因。本结果为研究发育期鸡肌肉组织相关功能基因和蛋白提供了必要的方法学基础，对其他物种的相关研究也有重要借鉴意义。关键词：鸡；肌肉组织；早期发育阶段；实时荧光定量PCR；Western杂交；内参基因中图分类号：S831.2 文献标志码：A 文章编号：0366-6964（2015）07-1107-07
收稿日期：2014-10-10基金项目：国家自然基金青年基金项目（31201797）；国家“863”项目（2011AA100301）；中国农业科学院科技创新工程（ASTIP-IAS04）作者简介：王红杨（1991-），女，河南人，硕士，主要从事单胃动物营养与饲料科学研究，E-mail：wanghy0112@163.com*通信作者：文 杰，E-mail：wenjie@caas.cnIdentificationofReferenceGenesbyReal-TimeQuantitativePCRandWesternBlotinChickenMuscleTissuesWANGHong-yang，LIURan-ran，ZHAOGui-ping，ZHENGMai-qing，LIQing-he，LIPeng，LIULi，WENJie*（StateKeyLaboratoryofAnimalNutrition，InstituteofAnimalScience，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing100193，China）Abstract：Thisresearchevaluatedtheavailabilityof5“housekeepinggenes”asreferencegenesforgeneexpressiondetectionindifferentearlydevelopmentalstagesofmuscletissuesinchicken，whichwouldprovidescientificevidencesforselectingreferencegenesinthemoleculesdetectionrelatedtomuscledevelopmentofchicken.Real-TimequantitativePCR（RT-qPCR）andWesternblotwereusedtotestthemRNAandproteinlevelsofβ-actin（ACTB），β-tubulin（TUBB），TA-TA-binding-protein（TBP），Glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase（GAPDH）andHeatshock70kDaprotein（HSP70）inbreastmuscleofchickenatembryonicday12and17，day1andday14post-hatch，respectively.Theresultsshowedthat，onlymRNAandproteinlevelsofHSP70didn'tsignificantlychangeintheearlydevelopmentalstagesofbreastmuscleinchicken，whilethatofothergenessignificantlyaltered（P＜0.05orP＜0.01）.HSP70wasmoresuitablyusedasreferencegeneforgeneorproteinexpressiondetectionintheearlydevelopmentalstagesofmuscletissuesinchicken.Thisstudyprovidesmethodologicalbasisforfunctionalgenesandproteinsstudiesofmuscledevelopmentinchicken.Italsocouldplayareferentialroleinotherspecies.
