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高效液相色谱法

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高效液相色谱法

高效液相色谱法

2．高效液相色谱法与气相色谱法的比较
（l）气相色谱法：分析对象仅占有机物总数的20％。 高效液相色谱法：分离和分析占有机物总数近80％的那些 高沸点、热稳定性差、离子型化合物及摩尔质量大的物质。
（2）气相色谱：流动相与组分不产生相互作用力，仅起运 载作用。 高效液相色谱法：流动相对组分可产生一定亲和力，并参与 固定相对组分作用的剧烈竞争，流动相对分离起很大作用， 相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数；
高压输液泵应符合下列要求：密封性好，输出 流量恒定，压力平稳，可调范围宽，便于迅速 更换溶剂及耐腐蚀。
高压输液泵
常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两种。 恒流泵特点是在一定操作条件下，输出流量保持恒定而与色谱 柱引起阻力变化无关； 恒压泵是指能保持输出压力恒定，但其流量则随色谱系统阻力 而变化，故保留时间的重视性差。 目前主要使用恒流泵，又称机械泵，它又分机械注射泵和机械 往复泵两种，应用最多的是机械往复泵。
（四）检测系统
两种基本类型的检测器： 溶质型检测器：它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应， 属于这类检测器的有紫外、荧光、安培检测器等。 总体检测器：它对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应， 属于这类检测器的有示差折光，电导检测器等。 （l）紫外检测器 （2）荧光检测器 （3）示差折光率检测器 （4）电化学检测器
高效液相色谱法
High Performance Liquid Chromatography，HPLC
§1
概 述
Introduction
一、高效液相色谱法概述
高效液相色谱法（HPLC）吸取了气相色谱与经典液相色谱优 点，并用现代化手段加以改进。
引入了气相色谱的理论;
在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器; 具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点;

高效液相色谱法

高效液相色谱法

高效液相色谱法高效液相色谱法(《中国药典》2010年版二部附录V D)系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。

注入的供试品，由流动相带人柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

1 对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪，由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成，仪器应按现行国家技术监督局"液相色谱仪检定规程"定期检定并符合有关规定。

1.1 色谱柱最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。

反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶(如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷等〉也有使用。

正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。

离子交换色谱系统使用离子交换填充剂；分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。

填充剂的性能(如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等)以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。

孔径在15nm(lnm= lOA)以下的填料适于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。

除另有规定外，分析柱的填充剂粒径一般在3～10µm之间。

粒径更小(约2µm)的填充剂常用于填装微径柱(内径约2mm)。

使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。

当对其测定结果产生争议时，应以品种正文规定的色谱条件的测定结果为准。

以硅胶为载体的键合固定相的使用温度通常不超过40°C，为改善分离效果可适当提高色谱柱的使用温度，但不宜超过60°C。

流动相的pH值应控制在2～8之间。

当pH值大于8时，可使载体硅胶溶解；当pH值小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。

高效液相色谱法

高效液相色谱法

（2）化学键合固定相 ） B. 极性键合相 极性键合相指键合有机分子 中含某些极性基团，与空白硅胶相比， 中含某些极性基团，与空白硅胶相比，其极性 键合相表面能量分布均匀，是一种改性的硅胶， 键合相表面能量分布均匀，是一种改性的硅胶， 常用的极性键合相有氨基、氰基等。 常用的极性键合相有氨基、氰基等。氨基键合 相是分离糖类最常用的固定相，常用乙腈-水 相是分离糖类最常用的固定相，常用乙腈 水
二、液相色谱的流动相
1. 流动相特性
（mobile phases of LC） ）
（2）化学键合固定相 ）
化学键合固定相是应用最广的色谱法。 化学键合固定相是应用最广的色谱法。将固定液的官能团键
合在载体上形成的固定相称为化学键合相，其特点是不流失， 合在载体上形成的固定相称为化学键合相，其特点是不流失， 一般认为有分配与吸附两种功能。 一般认为有分配与吸附两种功能。 a. 硅氧碳键型： 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 硅氧硅碳键型： 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂， c. 硅碳键型： 硅碳键型： d. 硅氮键型： 硅氮键型： ≡Si—C ≡Si—N
4.6
高效液相色谱法
高效液相色谱法(high pressure Liquid 高效液相色谱法 chromatography，HPLC)是利用物质在两 ， 是利用物质在两 相之间吸附或分配的微小差异达到分离的目的。 相之间吸附或分配的微小差异达到分离的目的。 当两相作相对移动时， 当两相作相对移动时，被测物质在两相之间做 反复多次的分配， 反复多次的分配，这样使原来微小的差异产生 了很大的分离效果，达到分离、 了很大的分离效果，达到分离、分析和测定一 些理化常数的目的。 些理化常数的目的。

高效液相色谱法

高效液相色谱法

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三、分离系统 色谱柱是液相色谱的心脏部件，它包括柱管 与固定相两部分。柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、 铜及内衬光滑的聚合材料的其他金属。金属管用 得较多。一般色谱柱长5～30cm，内径为4～ 5mm，
使用色谱柱注意事项： 1 溶剂和样品应过滤， 防止堵塞。 2 加前置柱。 3 用完后要清洗
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四、检测系统
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五、数据记录处理和计算机控制系统 数据处理系统又称色谱工作站：它可对分析全过 程（分析条件、仪器状态、分析状态）进行在线 显示，自动采集、处理和储存分析数据。
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第2节 基本理论
高效液相色谱法的塔板理论与气相色谱法完全相同， 速率理论略有差异。 一、柱内展宽
H A B / u (C m C sm C s )u
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由于空间位阻效应，不可能将较大的有机官能团 键合到全部硅醇基上，使得部分硅醇基未反应。 残余的硅醇基对键合相的性能有很大影响， 它可以减小键合相表面的疏水性，对极性溶质产 生次级化学吸附，从而使保留机制复杂化，降低 了键合相填料的稳定性，使组分的峰形拖尾。为 尽量减少残余硅醇基，一般在键合反应后，要用 小分子三甲基氯硅烷等进行钝化处理，称封尾。
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（三）示差折光检测器 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的 折光指数差值。差值与浓度成正比。 通用型检测器， 但灵敏度低， 对温度敏感， 不能用于梯度 洗脱
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（四）蒸发光散射检测器 在一定的条件下，光散射强度正比于溶质粒子的 大小和数量。散射光强度与样品微粒质量的关系为 I = k mb 式中，m为微粒质量，k、b为实验条件（如温度、流 动相性质）决定的常数。因此可根据散射光强度对 样品进行定量分析。 这种检测器可用于挥发性低于流动相的任何样 品组分的检测，但对于有紫外吸收的组分的检测灵 敏度较低，主要用于糖类、高分子化合物、高级脂 肪酸及甾体等几十类化合物。

简述高效液相色谱法和气相色谱法的主要异同点。

简述高效液相色谱法和气相色谱法的主要异同点。

简述高效液相色谱法和气相色谱法的主要异同点。

高效液相色谱法和气相色谱法是两种常用的分离分析技术，它们的主要异同点如下：
相同点：
1.都是基于化学物质在不同的移动相中具有不同的亲和性来实现分离的。

2.都是一种高效、灵敏、快速和准确的分离分析方法。

3.都可以被用于分离分析各种类型的化合物，如有机物、无机物、生物分子等。

4.都会产生检测数据，检测标准基于化合物的比较。

不同点：
1.高效液相色谱法的分离是在液相中进行的，而气相色谱法的分离是在气相中进行的。

2.高效液相色谱法主要适用于那些不太易于挥发的化学物质，而气相色谱法主要适用于具有足够蒸发性和揮發性的样品。

3.两种方法所需的设备和技术协议不同，高效液相色谱法需要一个柱和高压泵，而气相色谱法需要一个装有固定相的管道和可变压力气瓶。

4.两种方法在较高和较低的分子量范围内的分离效率和样品分析速度可能也略有不同。

综上所述，高效液相色谱法和气相色谱法有相似之处，但是它们都有其自己的适用场景和技术妥协方案，包括用于分离、检测物质的属性、分析仪器和条件的型号和适用范围，以及液-气和气-液之间模式的差别。

高效液相色谱法

高效液相色谱法

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特点： 特点： 氰基键合相选择性与硅胶类似 键合相选择性与硅胶类似， ① 氰基键合相选择性与硅胶类似， 但极性更小。相同流动相， 但极性更小。相同流动相，组分保留 时间小于硅胶。 时间小于硅胶。 氨基键合相 主要用于糖类分析， ② 氨基键合相 主要用于糖类分析， 糖类分析专用柱 分析专用柱。 是糖类分析敏度： 紫外、荧光、电化学、 紫外、荧光、电化学、质谱等高灵敏 度检测器使用。 度检测器使用。 最小检测量： 最小检测量： 10-9 ~10-11 g 4. 高度自动化： 高度自动化： 采用色谱专家系统为核心的色谱智 能化和仿真优化技术， 能化和仿真优化技术，使 HPLC不仅能 不仅能 自动处理数据，绘图和打印分析结果， 自动处理数据，绘图和打印分析结果， 而且还可以自动控制色谱条件。 而且还可以自动控制色谱条件。
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2. 流动相极性与容量因子的关系 流动相极性大，洗脱能力增加， 流动相极性大，洗脱能力增加， k 减小，tR 减小；反之， k 与 tR 均 减小， 减小；反之， 增加。 增加。 极性小的组分先出柱
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四、正、反相色谱法 正相HPLC（normal phase HPLC） （ 正相 ） 固定相： 固定相：极性 常用：改性硅胶 硅胶、 常用：改性硅胶、氰基柱 流动相: 非极性（或弱极性） 流动相 非极性（或弱极性） 常用： 正己烷 常用： 流动相极性小于固定相极性
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第二节 分离机制 一、液-固吸附色谱法 固吸附色谱法
(Liquid-Solid Chromatography)
（一）吸附机理 根据吸附剂对样品中各组分的吸 根据吸附剂对样品中各组分的吸 附能力差异而分离 而分离。 附能力差异而分离。 吸附过程是被分离组分的分子 与流动相分子争夺吸附剂表面活性 中心(active center)的结果。 的结果。 中心 的结果

高效液相色谱法HPLC

高效液相色谱法HPLC

VS
报告结果
整理分析数据，撰写分析报告，提供各组 分的浓度、纯度等相关信息，为科研或生 产提供决策依据。
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实验操作步骤
流动相的准备与平衡
根据实验要求配制流动相，通过泵以适宜的流速 通过色谱柱进行平衡。
洗脱与检测
流动相带着样品经过色谱柱洗脱，各个组分依次 流出并进入检测器进行检测。
ABCD
进样
将样品注入进样器，通过压力将样品送入色谱柱 进行分离。
数据处理与结果分析
对检测器输出的信号进行处理，得到各组分的峰 形和峰面积，进行定性和定量分析。
01
02
03
04
进样
将样品注入色谱柱。
分离
在流动相的带动下，样品中的 组分在色谱柱中进行分离。
检测
检测器对分离后的组分进行检 测，并记录信号。
数据处理
对采集到的数据进行处理、分 析和存储。
高效液相色谱仪的维护和保养
定期清洗色谱柱
使用适当的溶剂清洗色谱柱， 以去除残留物和杂质。
维护和检查检测器
定期检查检测器的性能和准确 性，确保其正常运行。
数据处理系统
用于采集、处理、分析和存储色谱数据，通常采用色谱工 作站。
高效液相色谱仪的操作流程
01
02
03
样品准备
将样品进行适当处理，以 便注入色谱柱。
流动相制备
根据实验要求，选择合适 的流动相，并进行过滤和 脱气处理。
系统平衡
在进样之前，确保色谱系 统达到平衡状态，以提高 分离效果。
高效液相色谱仪的操作流程
样品的预处理
分离
对于复杂样品，需要进行分离操 作以去除杂质或提取目标成分。 常用的分离方法包括离心、过滤、

高效液相色谱法 原理

高效液相色谱法 原理

高效液相色谱法原理
高效液相色谱法（HPLC）是一种广泛应用于化学、生物化学
和制药等领域的分离和分析技术。

它基于样品在固定态填料上与移动相（溶液）之间存在的不同亲和力以实现分离。

HPLC的基本原理是将待分离的混合物溶解在移动相中，然后
通过高压泵将其推向色谱柱。

色谱柱是由填料构成的管状结构，填料种类多样，如疏水性、亲水性、离子交换性等。

移动相在填料中的传播速度取决于样品分子与填料的相互作用力。

相互作用力较强的样品分子会在填料中停留时间较长，相互作用力较弱的样品分子会以较快的速度通过填料。

为了获得更准确的分离结果，可以通过控制移动相的成分和流速来调节分离效果。

常用的移动相包括水、有机溶剂和缓冲溶液，通过改变它们的比例和浓度可以影响样品的保留时间和分离程度。

此外，还可以添加其他化合物作为添加剂，以提高分离选择性。

在样品通过色谱柱后，通过检测器检测各组分的浓度，并生成相应的信号。

检测器常用的有紫外（UV）检测器、荧光检测器、电化学检测器等。

这些信号可以被记录并转换为色谱图，进而进行数据分析和定量计算。

HPLC是一种精密、高灵敏度和高选择性的分析方法，广泛应
用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。

它的优势在于样品制备简单、分离效果好、操作方便快捷。

简述高效液相色谱法用于杂质检测的几种方法及适用条件

简述高效液相色谱法用于杂质检测的几种方法及适用条件

简述高效液相色谱法用于杂质检测的几种方法及适用
条件
高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，可用于检测各种杂质。

以下是几种常见的HPLC检测杂质的方法及适用条件：
1. 离子对色谱法：适用于离子和极性化合物的检测，包括无机离子、有机酸、有机碱等。

通常使用离子对柱，并加入离子对试剂作为流动相添加剂，以提高分离度和灵敏度。

2. 反相色谱法：适用于极性和非极性化合物的检测，包括许多药品和农药等。

使用非极性反相柱，并使用有机溶剂作为流动相添加剂，以提高分离度和灵敏度。

3. 大孔毛细管色谱法（GPC）：适用于分离高分子化合物的杂质，如聚合物和蛋白质。

使用大孔柱，并在流动相中加入钙离子等添加剂，以提高分离度和灵敏度。

4. 气化柱组合技术（GC）：适用于检测挥发性和半挥发性化合物的杂质，如有机溶剂和挥发性芳香化合物。

使用毛细管柱与气相质谱仪（GC/MS）组合，可提高分离度和灵敏度。

以上几种方法在HPLC中广泛应用，适用条件包括样品的物化性质、温度、压力、流动相种类和浓度等。

选取合适的HPLC方法和条件可以有效地分离和检测各种
杂质。

高效液相色谱法

高效液相色谱法

高效液相色谱法《中国药典》2015年版高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。

注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。

色谱柱内径一般为3.9～4.6mm，填充剂粒径为3～10μm。

超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。

（1）色谱柱反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。

常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。

正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。

常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。

氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。

离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。

有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。

手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。

色谱柱的内径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。

温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。

为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。

残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在2～8之间。

残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH值小于2或大于8的流动相。

（2）检测器最常用的检测器为紫外-可见分光检测器，包括二极管阵列检测器，其他常见的检测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。

高效液相色谱法

高效液相色谱法

液相色谱法固定相
(三) 离子交换色谱法固定相
1. 薄膜型离子交换树脂: 即以薄壳玻璃珠为担体， 在它的表面涂约 1% 的离子交换树脂而成。
2. 离子交换键合固定相: 用化学反应将离子交换基 团键合在惰性担体表面。
液相色谱法固定相

（四） 亲和色谱固定相

亲和色谱是一种基于分离物与配体间特异
的生物亲合作用来分离生物大分子的技术，它
五 高效液相色谱分离类型的选择
要正确地选择色谱分离方法，首先必须尽可能多的 了解样品
的有关性质，其次必须熟悉各种色谱方法的主要特点及其应
用范围。选择色谱分离方法的主要根据 是样品的相对分子质 量的大小，在水中和有机溶剂中的溶解度，极性和稳定程度
以及化学结构等物理、化学性质。
1、相对分子质量 对于相对分子质量较低（一般在200以下），挥发性比
的作用越来越大，主要应用如下：
多环芳烃、农药、酚类、真菌毒素、异腈酸酯等
等。 特别是有机农药方面的检测。
1. 有机氯农药残留量分析
固定相：薄壳型硅胶(37 ～50m)
流动相：正己烷
流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50cm2.5mm(内径)
检测器：差示折光检测器
可对水果、蔬菜中的农药残 留量进行分析。


极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱
适于分离极性组分
反相色谱——固定液极性 < 流动相极性（RLLC）

极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱 适于分离非极性组分
载体又称担体
(1) 全多孔型担体：
a.
HPLC早期使用的担体与GC类似，是颗粒均匀的多孔球 体，如有氧化铝、氧化硅、硅藻土等制成的 Φ 100μ m全多孔型担体。

高效液相色谱法(HPLC)简介

高效液相色谱法(HPLC)简介

高效液相色谱法分离过程
主要在于固定相的性质、形状及粒度，其次 差别： 是检测手段和输液设备。
经典液相色谱 固定相： 粒度：60~600μｍ（多孔） 柱长：10~200cm（d=10~50mm） n 约为 2~50/m
流动相：靠重力输送
经典液相色谱无在线检测器
缺点：
①粒度范围宽、不规则，不易填充均匀，扩散和传质阻 力大。 ②无检测设备，分析速度慢、效率低。 只能作为分离手段
（3）不能完全替代气相色谱
（4）不适于分析受压分解、变性的具有生物活性的
Hale Waihona Puke 生化样品。高效液相色谱法与其他分析方法一样，
不是尽善尽美的。
第二节 高效液相色谱法的基本理论
一、高效液相色谱参数 1.定性参数 tR 、 t 0 、 t’ R t’R= tR- t0 2.柱效参数 σ、 W1/2 、W W=4 σ 或 w=1.699W1/2 n=（ tR / σ）2 H=L/n
四、高效液相色谱法的应用范围和局限性
1.应用范围 高效液相色谱法适于分析高沸点、受热不稳定易 分解、分子量大、不同极性的有机化合物；生物活性 物质和多种天然产物；合成和天然高分子化合物。 涉及石油化工产品、食品、药品、生物化工产品 及环境污染物。约占全部有机物的80%。 2.方法的局限性
（1）使用多种溶剂为流动相，成本高，污染环境 （2）缺少通用检测器
美国药典委员会（USPC）成立于1820年，至今近200 年。出版发行了25版药典。 75年（19版）将HPLC载入药典 20版-62项；21版-363项；22版-871项；23版-1188项； 24版-含量测定法：1386项 鉴别：519项 杂质检查：206项
如今：在评价世界各国药典水平时，HPLC法成为 反映各国药典先进性的重要指标之一。
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《现代分离科学》课堂讨论
1. 简介
高效液相色谱法 （HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速 液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高 效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用 高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合 溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成 分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。 该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领 域中重要的分离分析技术。HPLC在国内和国外的药物分析领域 的应用范围很广，发展速度也很快，尤其在我国，近十几年来 HPLC方法越来越受到重视。尤其在药物分析应用方面，高效液 相色谱法有着不可替代的作用，它对于药物的鉴别、分离、定 量测定都有着较高的准确度，本文对高效液相色谱法在药物分 析的各方面进行了简单的综述。
兽药饲料.2016(502):169-171.
《现代分离科学》课堂讨论
3.2 临床治疗药物的监测
HPLC法不需要对样品进行高温汽化，一般不必进行
衍生化处理；并且其固定相种类较多，流动相通过改变
其组成成分及比例，可以对绝大多数有机化合物药物进
行分离测定。因此，HPLC法是一种比较成熟的，临床药
物监测方法。
效学。同时随着药物分析技术的不断进步和发展，可对人体和
动物体内（体液、组织和血中）药物及其代谢物的浓度进行定 量分析，它对药品的评价、指导临床合理用药和药代动力学研 究均具有重要的意义和现实需要。
《现代分离科学》课堂讨论
冯素香等建立芦荟大黄素在大鼠血浆中的固相萃取-高效液相 色谱分析方法,研究大鼠体内的药代动力学过程。SD大鼠,按50和 20mg.kg-1剂量灌胃给药,不同时间点尾静脉取血,以SPE处理血浆样 品,用HPLC内标法测定血药浓度,甲醇-0.1%磷酸水(70∶30)为流动 相,柱温为30℃,检测波长254 nm,以DAS2.0软件计算药代动力学参 数。结果:血浆中芦荟大黄素在0.016～19.53μ g.mL-1(r=0.998 1) 范围内线性关系良好,提取回收率为88.7%～94.6%,最低检测限为 0.008μ g.mL-1,定量限为0.016μ g.mL-1,日内和日间精密度RSD均 <6%.建立的测定大鼠体内芦荟大黄素含量的方法具有良好的准确 度、精密度以及专属性,适用于芦荟大黄素在大鼠体内的药代动力 学研究。
和左旋体，但往往只能获得右旋体和左旋体的混合物。手性药物
往往呈现一种对映体具有强的生物活性和药效，而另一种却无效， 有时甚至有毒害作用。目前，各种手性分析技术中，高效液相色 谱法对于定量分析和制备分离都是应用最为广泛的一种技术。
《现代分离科学》课堂讨论
翟明翚； 苏立强等建立了以羧甲基-β-环糊精（CM-β -CD）作 为手性流动相添加剂,高效液相色谱拆分美索巴莫对映体的方法。
《现代分离科学》课堂讨论
高效液相色谱法在药物分析中的 研究进展
汇报人：李巧荣 2016.12.19
《现代分离科学》课堂讨论
主要内容
1.简介
2.高效液相色谱法在药物分析中的应用
3.高效液相色谱法在药物监测中的应用
4.高效液相色谱法在药代动力学中的研究
5.高效液相色谱法未来的发展方向 6. 参考文献 7.本综述讨论提纲
《现代分离科学》课堂讨论
[9]吕丹,刘冠男,等.高效液相色谱法在药物分析中的研究进展[J].企业导 报.2014.3：145，167. [10] 卫莉玲,简艳婷,等.高效液相色谱法在药物分析中的应用[J].理论实 践.2016.04.222. [11] 洪得荣.超高效液相色谱法在药物分析中的应用[J].应用科 技.2016.25.291. [12] 翟明翚；苏立强等. HPLC手性流动相添加剂法拆分美索巴莫对映体 [J]. 新技术与应用.2016.28(3):416-419. [13]秦红英. 高效液相色谱法在中草药酚类化合物分析中的应用研究[J]. 西南大学硕士学位论文.2015.4. [14] 陈彩云等.高效液相色谱法同时测定复方中药制剂中的芍药苷、甘草 酸和丹参酮ⅡA的含量[J].食品分析与检测.2016.7(10):4203-4209. [15]印成霞.超高效液相色谱法在药物分析中的应用研究[J].卫生论 坛.2013.23(8):230-231. [16]郝乘仪等.RP-HPLC法同时测定小儿肺热咳喘颗粒中两种主要活性成分 的含量[M].2017.38(1):18-20. [17]王星等.超高效液相色谱-串联质谱法定性和高效液相色谱法定量分析 天南星中氨基酸成分[J].研究论文.2014.32(12):1326-1332.
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2.2 在复方制剂分析方面的应用
复方制剂、杂质或辅料干扰因素多的品种多采用高效液相 色谱法。重要复方制剂和化学复合制剂通常含有多种有效成分， 各有效成分的含量决定了药物的治疗效果。高效液相色谱法适 合分子量大、难气化、对热敏感等物质的分离分析，因此在中 药复方制剂和化学复合制剂的分析中得到了广泛的应用。 泻痢固肠片是由甘草、陈皮、肉豆蔻、白芍、党参、茯苓 等9味中药材制成的治疗腹胀腹泻的中药复方制剂，方中陈皮、 白芍具有理气燥湿、益气健脾之功效，并以甘草调和诸药，共 奏健脾温肾，涩肠止泻之功效。齐老师等建立固相萃取-高效 液相色谱法同时测定泻痢固肠片芍药苷、甘草苷、陈皮苷的含 量，该法快速、简便、准确性高，为泻痢固肠片的质量控制提 供重要科):105-111.
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4.高效液相色谱法在药代动力学中的研究
HPLC能同时进行分离和定量测定的优点在治疗药物检测和 药物代谢动力学中体现地尤为突出。为了达到药品应用的安全、 有效、可靠，这就需要了解和研究药物及其制剂在体内的过程 （吸收、分布、代谢、排泄），以便研究药物的作用机制及药
在C18色谱柱上,系统考察了手性添加剂的种类及浓度、有机修饰剂
的种类及含量、流动相pH值和流速等因素对拆分的影响,确定了最 佳色谱分离条件:流动相为甲醇-乙腈-水（体积比为25∶63∶12） ,CM-β -CD浓度为0.6 g·L-1,pH=4.16（用三乙胺-冰乙酸调节）, 流速为0.4m L·min-1,检测波长为220 nm。该方法拆分美索巴莫
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3.高效液相色谱法在药物监测中的应用
3.1 中药材指纹的建立
随着中药的普及，中药材急需国际化、标准化。而中药材的 指纹图谱研究是其标准化的必经之路。中药指纹图谱的建立，应 以系统的化学成分研究和药理学研究为依托，体现系统性、特征
性和稳定性三个基本原则。为此，才能保证指纹图谱的标准化、
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2. 高效液相色谱法在药物分析中的应用
2.1 在中药分析方面的应用
中药历史悠久，源远流长。它不仅是我国医药体系中独具 特色的重要组成部分，也是西方医药，特别是植物药、天然药 物的有机组成部分。
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陈静娴，张敏敏等建立分散固相萃取-高效液相色谱(DSPEHPLC)联用技术应用于金银花及其相关中成药连花清瘟胶囊(LQC) 中环烯醚萜苷类成分(马钱酸、莫诺苷、马钱苷、当药苷、断氧 化马钱子苷、开联番木鳖苷二甲基乙缩醛)的快速提取、净化和 测定的方法。方法是分别采用超声提取法对金银花及相关中成 药LQC进行提取,采用不同净化材料进行快速净化,采用HPLC法测 定环烯醚萜苷类成分。结果采用硅藻土作为净化剂,金银花提取 物净化效果较好;采用硅藻土-活性炭(80∶20)的复合净化剂 时,LQC提取物净化效果较好;且该提取方法操作简单、快速、样 品用量少、净化效率高,结合HPLC技术实现了金银花及相关中成 药LQC中环烯醚萜苷类成分的快速提取、净化和测定。结论是拓 展了DSPE技术在复杂基质中药材及中成药中活性成分提取、净 化中的应用,为复杂基质中药材及中成药中活性成分的提取净化 及分析研究提供了方法和数据支持。
中国新药杂志，2012.21(8):908-911.
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5.高效液相色谱法未来的发展方向
高效液相色谱法在现在分离中发挥着重要的作用，已广泛应用 于各个领域，在今后的研究中，高效液相色谱仍然会在药物分析中
扮演非常重要的角色，高效液相色谱法今后在以下三个方面着重发
展。 缩短分析时间,提高分离效率 进一步向自动化、智能化及联用技术上发展 高效液相色谱在中药分析中的发展
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6. 参考文献
[1]王静，魏娜，等.HPLC、UPLC测定芪参益气滴丸中5个丹参活性成分含量 的比较研究[J].药物分析杂志2011.31(9):1678-1682. [2]杨水艳,谢笑天,叶青松，等.铂类抗癌配合物的高效液相色谱法研究进 展. 贵金属，2011.32(3):90-95. [3]冯素香,徐会平,等.大鼠血浆中芦荟大黄素浓度的固相萃取-高效液相色 谱法测定及其药代动力学研究[J].中国新药杂志，2012.21(8):908-911. [4] 齐广才,吴江瑞,等.固相萃取-高效液相色谱法测定泻痢固肠片中芍药 苷、甘草苷、橙皮苷的含量[J].中南药学，2016.04：418-421. [5]齐广才,等.HPLC法同时测定复方消痔栓中3种成分的含[J].西北药学杂 志，2016.27(15):2138-2140. [6]肖凤艳等.乌腺金丝桃HPLC指纹图谱初步研究[J].兽药饲 料.2016(502):169-171. [7] 邵林，郭庆梅，等.山东不同栽培品种金银花HPLC指纹图谱的比较[J]. 中国实验方剂学杂志，2011.17(19):117-121. [8] 王转,尹东东,等.高效液相色谱法在手性药物分析中的研究进展[J].药 物分析杂志.2015.31(7):1127-1133.
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庄奕筠； 张吟等建立超高效液相色谱法测定人血清中卡马 西平(CBZ)、苯妥英钠(PHT)、苯巴比妥(PB)、奥卡西平(OXC)活 性代谢产物利卡西平(MHD)的浓度。方法于2014年1月2015年6月 收集血清样品经甲醇沉淀蛋白后直接进样测定,采用Shim-pack XR-ODSⅢ柱(1.6μ m,75 L×2.0)。流动相为甲醇-水,采用梯度 洗脱程序;扫描波长200～360 nm,检测波长为210 nm,流速:0.4 m L/min,柱温:35℃,进样体积:10μ L。结果 CBZ、PHT、PB、MHD均 能达到良好分离,与相邻峰的分离度(R)均>1.5;线性范围分别为 (1.00～ 32.00)μ g/mL(r=0.9997)、(2.55～81.60)μ g/mL(r=0.9997)、(2.35～75.20)μ g/mL(r=0.9999)、(2.50～ 80.00)μ g/m L(r=0.9998);方法回收率>97%;日内和日间精密度 的相对标准偏差(RSD)均<1.6%。结论超高效液相色谱法(UPLC) 快速、简便、准确,适用于临床治疗药物监测。