最优考马斯亮蓝染色Protocol

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考马斯亮蓝染色

推荐选用前三种染色方法,另有传统考马斯亮蓝染色法和网上经验,染色效果不好,不推荐使用,仅供参考。(见后页比对照片)

操作步骤:

1、取出SDS-PAGE凝胶,经超纯水漂洗;(以下每步操作皆在摇床上进行。)

2、固定:将凝胶放入相应的固定液中,固定1小时;

3、染色:取出凝胶,放入相应的染色液中,过夜染色;(也可依实际情况缩短时间)

4、脱色(胶体法&改良法):凝胶放入纯水中洗脱,换液数次;

脱色(Neuhoff法):取出凝胶,用M Tris-H3PO4缓冲液()漂洗2分钟。再用25%乙醇淋洗<1 min。然后再用10%乙酸中在室温脱色2小时即可。

试剂的配制:

1、胶体考马斯亮蓝染色法(colloidal Coomassie brilliant blue,cCBB):

固定液:40%甲醇、10%乙酸

染色液:%磷酸、8%硫酸铵、% CBB-G250、20%乙醇

脱色液:H2O

2、改良考马斯亮蓝染色法(modified Coomassie brilliant blue,mCBB):

固定液:40%甲醇、10%乙酸

染色液:10%磷酸、10%硫酸铵、% CBBG250、20%乙醇(着色1小时即可)。

脱色液:H2O

3、Neuhoff染色法:

固定液:12%三氯醋酸

染色液:2%磷酸、10%硫酸铵、% CBB-G250、使用前振摇。染色时,取一定体积的染色液,加入1/4体积的甲醇。

脱色所需:M Tris-磷酸缓冲液()、25%乙醇、10%醋酸

4、传统考马斯亮蓝染色法:

固定液:%甲醇、%乙酸

染色液:%甲醇、%乙酸、% CBB-G250

脱色液:5%甲醇、%乙酸

5、网上方法:

固定液:40%甲醇、10%乙酸

染色液:30%甲醇、10%乙酸、% CBB-G250

脱色液:30%甲醇,10%乙酸

比对照片:每块胶左道是Marker(质量原因,未跑开( ˇˇ ))上样量5μl,右道是BSA(分子量68kDa),上样量为3μg.

Neuhoff法

传统法胶体法改良法网上法