最优考马斯亮蓝染色Protocol
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考马斯亮蓝染色
推荐选用前三种染色方法,另有传统考马斯亮蓝染色法和网上经验,染色效果不好,不推荐使用,仅供参考。(见后页比对照片)
操作步骤:
1、取出SDS-PAGE凝胶,经超纯水漂洗;(以下每步操作皆在摇床上进行。)
2、固定:将凝胶放入相应的固定液中,固定1小时;
3、染色:取出凝胶,放入相应的染色液中,过夜染色;(也可依实际情况缩短时间)
4、脱色(胶体法&改良法):凝胶放入纯水中洗脱,换液数次;
脱色(Neuhoff法):取出凝胶,用M Tris-H3PO4缓冲液()漂洗2分钟。再用25%乙醇淋洗<1 min。然后再用10%乙酸中在室温脱色2小时即可。
试剂的配制:
1、胶体考马斯亮蓝染色法(colloidal Coomassie brilliant blue,cCBB):
固定液:40%甲醇、10%乙酸
染色液:%磷酸、8%硫酸铵、% CBB-G250、20%乙醇
脱色液:H2O
2、改良考马斯亮蓝染色法(modified Coomassie brilliant blue,mCBB):
固定液:40%甲醇、10%乙酸
染色液:10%磷酸、10%硫酸铵、% CBBG250、20%乙醇(着色1小时即可)。
脱色液:H2O
3、Neuhoff染色法:
固定液:12%三氯醋酸
染色液:2%磷酸、10%硫酸铵、% CBB-G250、使用前振摇。染色时,取一定体积的染色液,加入1/4体积的甲醇。
脱色所需:M Tris-磷酸缓冲液()、25%乙醇、10%醋酸
4、传统考马斯亮蓝染色法:
固定液:%甲醇、%乙酸
染色液:%甲醇、%乙酸、% CBB-G250
脱色液:5%甲醇、%乙酸
5、网上方法:
固定液:40%甲醇、10%乙酸
染色液:30%甲醇、10%乙酸、% CBB-G250
脱色液:30%甲醇,10%乙酸
比对照片:每块胶左道是Marker(质量原因,未跑开( ˇˇ ))上样量5μl,右道是BSA(分子量68kDa),上样量为3μg.
Neuhoff法
传统法胶体法改良法网上法