四、抑菌试验
1．Optochin敏感试验
(1)原理：Optochin(奥普托欣)是盐酸乙基氢化羟基奎宁的商品名。对肺炎链球菌有特异抑制作用，其作用机制可能是干扰叶酸生物合成作用，而对其它链球菌则无此作用。
(2)方法：用棉拭子将待检菌的肉汤培养物均匀涂布于血琼脂平板上，贴上一张含5μg奥普托欣纸片，置烛缸或二氧化碳孵箱，35℃孵育18~24h，观察结果。
(3)结果：抑菌圈直径大于14mm为敏感，小于或等于14mm为阴性。
(4)应用：主要用于肺炎链球菌（敏感）与其它链球菌（耐药）的鉴别。
2．杆菌肽敏感试验
(1)原理：A群链球菌对杆菌肽几乎是100%敏感，而其它群链球菌对杆菌肽通常耐药。故此试验可对链球菌进行鉴别。
(2)方法：用棉拭子将待检菌的肉汤培养物均匀涂布于血琼脂平板上，稍干后贴一张含0.04U 的杆菌肽纸片，置35℃孵育18~24h，观察结果。
(3) 结果：抑菌圈直径大于10mm为敏感，小于10mm为耐药。
(4)应用：主要用于A群与非A群链球菌的鉴别。从临床分离的菌株中有5%~15%非A群链球菌也对杆菌肽敏感，如6%的B群链球菌、7.5%的C群链球菌和G群链球菌等。3．O/129试验
(1)原理：O/129（2，4二氨基-6，7-二异丙基喋啶）能抑制弧菌属、发光杆菌属和邻单胞菌属细菌生长，而气单胞菌属和假单胞菌属细菌则耐药。
(2)方法：用棉拭子将待检菌菌悬液均匀涂布于碱性琼脂平板上，将10μg/片及150μg/片的O/129诊断纸片贴于平板上，置35℃孵育18~24h，观察结果。
(3)结果：出现抑菌圈者表示敏感，无抑菌圈者为耐药。
(4)应用：主要用于弧菌属、邻单胞菌属与气单胞菌属的鉴别，弧菌属和邻单胞菌属菌为敏感，气单胞菌属菌为耐药。其它菌属有发光杆菌属为敏感，假单胞菌属为耐药。
细菌药敏试验
2010-12-09 15:40:52| 分类：专业文章 | 标签：高校公共卫生 |字号订阅
各种病原菌对抗菌药物的敏感性不同，同种细菌的不同菌株对同一药物的敏感性有差异，检测细菌对抗菌药物的敏感性，可筛选最有疗效的药物，用于临床，对控制细菌性传染病的流行至关重要。此外，通过药物敏感试验可为新抗菌药物的筛选提供依据。药敏试验的方法很多，普遍使用的有圆纸片扩散试验；最低抑菌浓度试验(MIC)和最低杀菌浓度试验(MBC)等。目的要求
(1)熟悉和掌握圆纸片扩散法检测细菌对抗菌药物敏感性的操作程序和结果判定方法。
(2)了解最低抑菌浓度试验的原理和方法。
(3)了解药敏试验在实际生产中的重要意义。
实验材料
菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌。
药敏试纸：青霉素、链霉素、庆大霉素、氯霉素、磺胺嘧啶等，分装于灭菌平皿中。95％酒精缸、小镊子、普通琼脂平板。
实验内容
1．圆纸片扩散试验
操作方法：取一菌种，用灭菌接种环致密划线于琼脂平板表面(可重复来回划线)，或用“十”字形划线法。用无菌镊子将各种抗菌药物圆纸片，分别贴于培养基表面，各片距离要相等(图8—1)o 3713培养24h观察结果。
结果判定：根据药物纸片周围有无抑菌圈及其直径大小，来判断该菌对各种药物的敏感程度，分为高度敏感、中度敏感、低度敏感和不敏感四种。
细菌对磺胺药物敏感度的标准，按Hawking所定，若磺胺药物浓度在每毫升10μg即能抑制细菌生长者，则该菌对磺胺药很敏感；如需每毫升50pg才能抑制生长，为敏感；每毫升1000μg 始能抑制，为中度敏感；每毫升超过1000μg仍不能抑菌者，则该菌系耐药性菌株。
表1 抗生素敏感度的标准
2.最低抑菌浓度试验
原理：将抗菌药物作倍比稀释，在不同浓度的稀释管内接种被检细菌，定量测定抗菌药物的最低浓度。本结论可作为其他药物敏感性试验的标准方法。
实验材料：
菌种：金黄色葡萄球菌肉汤培养物
培养基：普通肉汤每管1mL
抗菌药物：含青霉素64工U／mi的普通肉汤各一管，每管2mL
其他材料：麦氏比浊管，灭菌lmL刻度吸管，橡皮胶头。
操作程序：以葡萄球菌对青霉素的敏感性为例。将装有lmL肉汤的试管排成一列，编上1—9的管号，在第重管内加入含641U／ml青霉素肉汤lmL，混匀后吸取lmL到第2管，混匀，再取lml-至第3管，依次类推到第8管。第9管不含青霉素的肉汤作对照管，然后每管加人0．1mL含菌量相当于麦氏比浊管第1管1,2的金黄色葡萄球菌(相当于1．5亿／mL)，操作术式如表8-2。
表2 MIC术式表
结果判定：以能抑制细菌生长的抗生素的最高稀释度作为抗生素的最低抑菌浓度。
思考题
1.圆纸片药敏试验操作时应注意什么事项?
2．试述药敏试验的意义。
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实验原理：纸片法药敏试验是将抗菌药物吸收到特定的纸片中，然后置于已接种待测定菌的固体培养基上，抗菌药物通过向培养基内的扩散，抑制敏感细菌的生长，从而出现抑菌环（带）。由于药物扩散的距离越远，达到该距离的药物浓度越低，故可以根据抑菌环的大小，判断细菌对药物的敏感度。
