杀菌及抑菌试验

体外抑菌实验方案一、实验目的1.探究不同抑菌剂对特定细菌的抑制效果。

2.优化抑菌剂的配方，提高抑菌效率。

3.为临床应用提供理论依据。

二、实验材料1.实验菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等。

2.抑菌剂：酒精、碘伏、过氧化氢等。

3.实验器材：培养皿、移液器、酒精灯、生物安全柜等。

三、实验方法1.菌株活化：将实验菌株从冻存管中取出，接种至斜面培养基，37℃培养24小时。

2.制备菌液：将活化后的菌株用无菌生理盐水洗涤，调整菌液浓度为10^6CFU/mL。

3.抑菌剂配制：按照实验设计，配制不同浓度和配比的抑菌剂。

4.抑菌实验：在生物安全柜中，将菌液均匀涂布于培养皿，加入不同抑菌剂，置于37℃培养箱培养24小时。

5.观察结果：观察各培养皿中细菌生长情况，记录抑菌效果。

6.数据处理：统计分析各抑菌剂的抑菌效果，计算抑菌率。

四、实验步骤1.活化菌株：从冰箱取出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等菌株，接种至斜面培养基，放入37℃培养箱培养24小时。

2.制备菌液：将活化后的菌株用无菌生理盐水洗涤，调整菌液浓度为10^6CFU/mL。

3.配制抑菌剂：按照实验设计，配制酒精、碘伏、过氧化氢等抑菌剂的不同浓度和配比。

4.抑菌实验：在生物安全柜中，将菌液均匀涂布于培养皿，加入不同抑菌剂，放入37℃培养箱培养24小时。

5.观察结果：观察各培养皿中细菌生长情况，记录抑菌效果。

6.数据处理：统计分析各抑菌剂的抑菌效果，计算抑菌率。

五、实验结果1.不同抑菌剂对金黄色葡萄球菌的抑制效果：酒精浓度为75%时，抑菌效果最佳，抑菌率为99.99%；碘伏浓度为5%时，抑菌率为99.95%。

2.不同抑菌剂对大肠杆菌的抑制效果：过氧化氢浓度为3%时，抑菌效果最佳，抑菌率为99.99%；酒精浓度为75%时，抑菌率为99.90%。

3.不同抑菌剂对白色念珠菌的抑制效果：碘伏浓度为5%时，抑菌效果最佳，抑菌率为99.99%；过氧化氢浓度为3%时，抑菌率为99.95%。

抑菌试验1 定义抑菌试验，用于测定抗菌药物体外抑制细菌生长效力的试验称为抑菌试验抑菌活性的研究实验方案。

实验方法1. 纸片法（抑菌圈法）将测定菌株接种到培养基中，置37度条件下培养6-24小时，取出备用。

再用无菌吸管吸取上述培养液0.1ml，再用三角刮刀将菌液涂匀。

待培养基表面稍干后，用无菌小镊子分别取出所需的药敏纸片均匀地贴在培养基的表面，轻轻压平，各纸片间应有一定距离，并分别做上标记。

将培养皿置37度恒温箱内培养18-24小时后，测量各种药敏纸片抑菌圈直径的大小。

2. 挖孔法（1）在平板上打孔，然后将药液滴入孔内，用经酒精灯灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。

具体方式：用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2，依次划线，自至细菌均匀密布于平皿（将测定菌株接种到培养皿中，置37度条件下培养18-24小时，用灭菌的棉拭子将带将细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。

要求涂布均匀）。

（2）以无菌操作将灭菌的不锈钢小管，（外径4mm，孔径与孔距均为3mm，管的两端要光滑，也可用玻璃管和瓷管），放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合（3）加样时，按不同药液加样，用无菌滴管将样品加至满而不溢为止。

3. 牛津杯法（1）双碟的制备方法：将灭菌培养基溶化后取15ml倒入灭菌平皿内。

吸取待测菌株的菌液1-5ml与100ml冷至45度的培养基混匀，然后分别每一平皿加入5ml。

并均匀摊布在具有底层培养基的平皿内。

（2）待培养基凝固后，在每碟中均匀立放小钢管（及牛津杯）4个，用陶瓦盖覆盖。

（3）将下列实验药液分别加入小钢管中，置37度培养18-24小时，量取抑菌圈大小，判定抗菌药物抑菌作用的强弱。

乳酸菌的抑菌实验1产抑菌活性物质乳酸菌的初筛采用纸片法。

将培养好的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌培养液 OD 600分别调整到 0.17、0.19、0.10，各取 100μL 接种于 LB 固体培养基，涂布均匀，固定1h。

杀菌和抑菌试验操作规范一、总则适用范围：本方法适用于医疗、卫生、食品等行业的杀菌和抑菌试验。

引用标准：消毒技术规范2002二、术语消毒 disinfection杀灭或清除传播媒介上病原微生物,使其达到无害化的处理。

灭菌 sterilization杀灭或清除传播媒介上一切微生物的处理。

消毒剂 disinfectant用于杀灭传播媒介上的微生物使其达消毒或灭菌要求的制剂。

灭菌剂 sterilant可杀灭一切微生物(包括细菌芽孢)使其达到灭菌要求的制剂。

杀灭时间 killing time, KT用于生物指示物抗力鉴定时, 指受试指示物样本，经杀菌因子作用不同时间后, 培养后的全部样本均无菌生长的最短作用时间 (min)杀灭率 killing rate, KR在微生物杀灭试验中，用百分率表示微生物数量减少的值，以其表达杀灭效果。

灭对数值 killing log value微生物数量以对数表示时，消毒后与消毒前比较, 以其减少的对数值来表达杀灭效果。

三、菌悬液与菌片的制备(一) 试验前应选择合适的细菌，在下述规定中表中‘+’为必做试验的微生物，根据消毒剂特定用途或试验特殊需要，还可增选其他菌株。

(二) 试验器械A. 无菌蒸馏水B. 细菌培养基：胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA），胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB）和营养肉汤培养基等C. 刻度吸管（1.0ml、5.0ml、10.0ml），毛细吸管。

D. 数字可调移液器（10μl~200μl）及配套用一次性塑料吸头。

E. 浊度计F. 游标卡尺(三) 细菌繁殖体悬液的制备1 取冻干菌种管，在无菌操作下打开，以毛细吸管加入适量营养肉汤，轻柔吹吸数次，使菌种融化分散。

取含 5.0 ml～10.0ml 营养肉汤培养基试管，滴入少许菌种悬液，置 37 ℃培养18h～24h。

用接种环取第 1 代培养的菌悬液，划线接种于营养琼脂培养基平板上，于 37℃培养 18h～24h。

挑取上述第2 代培养物中典型菌落，接种于营养琼脂斜面，于 37℃培养 18h～24h，即为第3 代培养物。

抑菌试验方法总结用于测定抗菌药物体外抑制细菌生长效力的试验称为抑菌试验。

通过抑菌实验，可以测定一个药物的最低抑菌浓度，用以评价该药物的抑菌性能，这是抗菌药物的最基本的药效学数据。

主要方法有进行定性测定的扩散法（如抑菌斑试验）和进行定量测定的稀释法（如最低抑菌浓度实验）。

1、定性测定（1）纸片扩散法(disk diffusion test)，K-B法：WHO推荐的全球统一的标准方法。

原理：含有定量抗菌货物的纸睡帖在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。

在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。

抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。

质控：标准菌株的抑菌圈直径应落在预期范围内，如果超出该范围，应视为失控而予以纠正。

影响因素：培养基的质量、药敏纸片的质量、接种菌量、试验操作质量、孵育条件、抑菌圈测量工具的精度和质控菌株本身的药敏特性等均能影响试验结果的准确性。

操作方法：按每1000 ml蒸馏水称取Muller-hinton Agar 38 g配备M—H琼脂，按每个平皿(直径9 mm)25 ml进行分装。

将孵育16—24 h的菌种分别接种生理盐水试管中，校正浓度至0.5麦氏标准(相当于1.0×108 CFU／m1)。

用无菌棉签拭蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液后在M—H琼脂表面，均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1周。

平板在室温下干燥3—5 min后用无菌镊子将药物纸片紧贴于琼脂表面．置35℃孵育16 18 h。

记录抑菌圈的直径，实验。

重复10次。

主要用于比较不同抗菌物质，或者通过不同方法提取的同一种物质的效果。

（2）打孔法药敏实验：待M—H平板干后，用无菌棉签蘸取菌液(相当于1.0×108CFU／m1)，在培养基平板上密集划线接种。

抑菌试验方法一、引言抑菌试验是一种常用的实验方法，用于评估不同物质对微生物生长的影响。

该试验可用于评估抗菌剂的效果、食品、药品和化妆品的微生物安全性，以及环境中抗菌材料的性能等。

本文将介绍抑菌试验的一般步骤和常用方法。

二、试验步骤1. 试验前准备在进行抑菌试验前，首先要准备好所需的试验材料和设备。

包括培养基、试验物质、细菌菌株、培养皿、试管、移液器等。

同时，要保持实验环境的清洁和无菌。

2. 菌种培养选择合适的细菌菌株，将其接种到含有适当培养基的试管中，并在37℃恒温培养箱中培养过夜，使其达到指定的细菌浓度。

3. 制备菌液将过夜培养的菌株转移到新的培养基中，通过菌液稀释法，制备出所需的菌液浓度。

菌液的浓度应根据试验要求进行调整。

4. 试验组装将试验物质分别添加到培养基或培养皿中，使其与菌液充分接触。

同时，设置对照组，用无抑菌物质的培养基或培养皿进行对照。

5. 培养条件将试验组和对照组置于适当的培养条件下，如温度、湿度等。

根据不同的试验要求，可选择不同的培养时间和培养条件。

6. 菌落计数在培养结束后，使用显微镜或肉眼观察试验组和对照组的菌落情况，并进行菌落计数。

菌落计数可通过平板计数法或滴定法进行。

7. 数据分析根据菌落计数结果，对试验组的抑菌效果进行评估。

常用的评估指标包括菌落形成率、抑菌率、最小抑菌浓度等。

三、常用方法1. 纸片扩散法该方法常用于评估固体试样的抑菌效果。

将试验物质涂布于纸片上，然后将纸片放置在含菌液的培养基表面上，通过观察菌落的生长情况来评估抑菌效果。

2. 悬浮液法该方法常用于评估液体试样的抑菌效果。

将试验物质与菌液混合，通过培养一定时间后，观察菌液的浑浊度或使用菌落计数法来评估抑菌效果。

3. 筛选法该方法常用于筛选具有抑菌活性的试验物质。

将试验物质与菌液混合后，通过培养一定时间后，观察菌落情况，筛选出对菌株有明显抑制作用的试验物质。

4. 斑点法该方法常用于评估试验物质对特定细菌菌株的抑菌效果。

抑菌试验测定方法(总1页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1
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纸片法、牛津杯法等，但原理都是一样的，纸片法做起来比较简单，不用特殊的材料，可能比较适合你：
1.把实验室用的普通滤纸用打孔器打成0.5cm直径的圆片，装在试管中密封灭菌（121度，20分钟）。

2.将已经培养好的菌制成一定浓度的悬浮液，取1ml该菌悬液至灭过菌的（121度，20分钟）培养皿中，倒入适量（约4毫米厚吧）已灭菌的培养基（温度约45度，用手摸瓶壁不感觉烫手即可），轻轻转动培养皿，使培养基与菌液混匀，静置凝成平板。

3.将用于试验的农药配制成几个所需的浓度，用无菌镊子夹起一片滤纸放入药液中浸透，夹出时在容器边缘停靠片刻，滤掉多余的药液，把滤纸片放在平板中凝好的培养基的中心，用镊子稍用力按一下，使之与培养基充分紧贴。

4.按上述方法，每个浓度做3个重复，以灭菌水浸湿的滤纸片做空白对照。

5.在适当温度下培养一定时间后观察，用直尺或游标卡尺测量抑菌圈的大小，计算抑菌率就OK了！
希望能对你有帮助，有什么问题可以短消息我：）
2。

一、实验目的本研究旨在通过设计并实施一系列实验，验证不同化学消毒剂对特定试验菌的杀菌或抑菌效果，并探讨其作用机制。

实验选取了两种常见的消毒剂：含氯消毒剂和乙醇，针对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌两种试验菌进行实验。

二、实验材料1. 实验菌种：金黄色葡萄球菌和大肠杆菌2. 消毒剂：含氯消毒剂、75%乙醇3. 培养基：LB液体培养基、营养琼脂平板4. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、移液器、无菌操作台等三、实验方法1. 试验菌种的活化：将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分别接种于LB液体培养基中，37℃培养18小时，活化试验菌种。

2. 消毒剂处理：将活化后的试验菌种用无菌移液器分别转移至含氯消毒剂和75%乙醇的溶液中，使菌液达到一定的浓度。

3. 实验分组：将处理后的菌液分为四组，分别对应以下处理：（1）含氯消毒剂处理组（2）75%乙醇处理组（3）生理盐水对照组（4）LB液体培养基对照组4. 定量杀菌实验：将四组菌液分别接种于营养琼脂平板上，37℃培养24小时，观察菌落生长情况。

5. 抑菌实验：将无菌滤纸片浸入含氯消毒剂和75%乙醇的溶液中，取出晾干后，分别放置于四组菌液的培养基上，37℃培养24小时，观察滤纸片周围的抑菌圈情况。

四、实验结果与分析1. 定量杀菌实验结果：（1）含氯消毒剂处理组：金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均被完全杀灭。

（2）75%乙醇处理组：金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均被完全杀灭。

（3）生理盐水对照组：金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均生长良好。

（4）LB液体培养基对照组：金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均生长良好。

2. 抑菌实验结果：（1）含氯消毒剂处理组：金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均未形成抑菌圈。

（2）75%乙醇处理组：金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均形成明显的抑菌圈。

（3）生理盐水对照组：金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均未形成抑菌圈。

（4）LB液体培养基对照组：金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均未形成抑菌圈。

五、结论1. 含氯消毒剂和75%乙醇均具有杀菌作用，对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有较好的杀灭效果。