人血清晚期糖基化终末化产物受体的表达与肺癌的关系

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广东医学2013年12月第34卷第23期 Guangdong Medical Journal Dec.2013,Vo1.34,No.23 

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人血清晚期糖基化终末化产物受体的表达与 

肺癌的关系 :l: 

刘健雄,刘志辉,马志明,谢贝,薛宗锡,高健齐,游佩涛,邵峥 

广东省广州市胸科医院外科、广东省广州市肺部疾病研究所、呼吸疾病国家重点实验室结核病研究室 

(广州510095) 

【摘要】 目的探讨人血清晚期糖基化终末化产物受体(RAGE)的表达及与肺癌的相关性。方法 采用 ELISA法检测40例肺癌患者(包括无远处转移的I A~ⅢB期患者18例、有远处转移的Ⅳ期患者22例)和40例 健康对照者的血清RAGE表达水平,比较肺癌患者与健康对照者、I A一ⅢB期患者与Ⅳ期患者间血清RAGE表 

达水平的差异。结果肺癌患者、健康对照者血清RAGE水平[M(P ,P7 )]分别为530(755,2 210)pg/mL和 610(935,3 350)pg/mL(z:一0.856,P=0.392);I A~ⅢB期患者与Ⅳ期患者间血清RAGE水平分别为590 (830,5 400)pg/mL和457(803,2 220)pg/mL,行Wilcoxon秩和检验,两者间血清RAGE表达水平差异无统计学意 

义(Z=一0.394,P=0.693)。结论血清RAGE水平与肺癌关系并不密切,可能不能预示肺癌是否有远处转移。 

【关键词】 晚期糖基化终末化产物受体;肺癌;肿瘤转移 

晚期糖基化终末化产物受体(receptor for advanced 

glycation—end products,RAGE)是一种免疫球蛋白家族 

多配体成员,在肺组织有高度表达,但有研究显示在癌 

性肺组织中表达减少 。也有研究表明RAGE与肿 

瘤的恶化、转移等密切相关 。众所周知,人体体循环 

血液均须由右心房人右心室后通过肺循环完成气体交 

换功能后流回左心房,且肺脏血容量较大,癌性肺组织 

RAGE表达的变化可否反映到血液之中?目前鲜见文献 

报道。我们采用ELISA法对包括无远处转移的I A~ 

ⅢB期患者18例、有远处转移的Ⅳ期患者22例肺癌 

患者和40例健康对照者的血清RAGE水平进行了检 

测和分析,结果报告如下。 

1资料与方法 

1.1 一般资料按配对设计原则从“广州地区结核病 

生物样本库”中采用随机数字表法随机抽取肺癌患者 

血清40例和健康对照血清40例。根据生物样本库样 

国家“十二五”传染病防治重大科技专项(编号:2012ZX10004 903),广东省科技计划项目(编号:2011B080702008) 本供体信息资料显示:40例肺癌患者(男30例、女10 

例)中,无远处转移的I A~ⅢB期患者18例,有远处 

转移的Ⅳ期患者22例,年龄34~80岁,平均(57±11) 

岁;40例健康对照(男28例,女12例)中,年龄30~75 

岁,平均(51±12)岁;样本采集时间为2012年2月至 

2013年4月,根据生物样本库要求均于一80℃低温冰 

箱冻存。 

1.2材料与方法 

1.2.1 试剂和仪器双抗体夹心法RAGE ELISA检 

测试剂购自广州市恒生科技有限公司,ELISA结果检 

测应用RT一6000酶标分析仪进行。 

1.2.2 实验方法 在96孔酶标反应板上设置空白 

孔、7个浓度的标准品(4 500、3 000、2 000、1 000、500、 

250、125 pg/mL)各2孔及每个待检样品各1孑L,严格 

按试剂和仪器使用说明书进行。主要包括:5倍稀释 

待检血清样品;取50 各浓度标准品、血清稀释样品 

加入酶标反应板孔底部(空白孔不加),37℃温育30 

min;弃去孔中液体甩干,重复5次,洗涤干净后,除空 

白孔外每孑L加入酶标试剂50 txL,37qC温育30 min;弃 ]1 1J 1j

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去孔中液体甩干,重复5次,洗涤干净后,每孔先后加 

入显色剂A、B各50 L,轻轻振荡混匀,37cC避光显色 

15 min;每孑L加终止液50 L,终止反应,此时孔中液体 由蓝色转为黄色;在终止反应15 min内以空白孔调 

零,450 nm波长依序测量各反应孔的吸光度(OD值); 

以标准品浓度(取2孔均值)为横座标、OD值为纵座 

标,应用CurveExpe ̄1.3绘制标准曲线和导出RAGE 

浓度与OD值关系方程式;根据待测样品OD值在标准 

曲线上查出或由关系方程式计算出相应的浓度,再乘 

以稀释倍数即为待测样品的实际RAGE浓度。 

1.3统计学方法应用SPSS 19.0统计软件,分别以 

肺癌患者与健康对照者、I A~ⅢB期患者与Ⅳ期患者 

血清RAGE水平为两独立样本计量资料,然后对分组 

资料进行两样本的方差齐性F检验,总体方差相等者 

对两样本均数行t检验、不相等者行完全随机化设计 

两独立样本的秩和检验(Wilcoxon秩和检验)。 

2结果 

2.1 RAGE浓度与OD值关系4 500、3 000、2 000、 

l 000、500、250、125 pg/mL RAGE标准品检测的OD值 

分别为3.500 0、2.793 0、2.056 5、1.187 0、0.537 0、 

0.277 5、0.296 0,RAGE浓度(用Y表示)与OD值(用 

表示)关系方程式为Y=0.029 9+0.001 2x一(9× 

10 ) ,由于(9×10 ) 项对计算影响极小,可近似 为Y=0.001 2x+0.029 9的一条直线,从标准曲线图 

也可以观察到这一点,见图1。 

毫 

鑫 蓄 塞 

图1 RAGE浓度标准曲线图 O.O 

2.2 肺癌患者与健康对照者的血清RAGE水平比较 

40例肺癌患者的血清RAGE水平为140~11 785 pg/ 

mL,中位数(四分位数范围)[ (P P )]为530 

(755,2 210)pg/mL;40例健康对照者的血清RAGE浓 

度为175~8 735 pg/mL,M(P 5,P7 )为610(935,3 350) 

pg/mL。两者比较差异无统计学意义(Z=一0.856, 

P=0.392)。 2.3 I A~ⅢB期肺癌患者与Ⅳ期肺癌患者血清 

RAGE水平比较l8例无远处转移的I A~ⅢB期肺 

癌患者的RAGE水平为260~8 735 pg/mL,M(P… 

P, )为590(830,5 400)pg/mL;22例有远处转移的Ⅳ 

期肺癌患者的血清RAGE水平为140~5 800 pg/mL。 

M(P: ,P )为457(803,2 220)pg/mL。两者比较差异 

无统计学意义(z=一0.394,P=0.693)。 3讨论 

RAGE参与多种肿瘤细胞的增殖、浸润和转移已为 

许多研究所证实 ,而我们的研究结果则显示:两样本 

中位数比较差异无统计学意义,即血清RAGE水平与 

肺癌或是否发生转移的相关性不大。结论看似相悖, 

但仔细分析我们则不难看出,目前RAGE参与多种肿 

瘤细胞的增殖、浸润和转移的研究证据大多来自免疫 

组化的检测分析,目前对于血清RAGE水平与肿瘤的 相关性研究还远未深入。当然,研究样本含量较小、配 

对设计原则下的样本匹配尚欠严谨也值得我们注意, 

但从目前相关研究进展和本文分析结果综合来看应该 

不会是问题的主要方面。 

目前人们已经清楚:RAGE由404个氨基酸组成, 

其完整的结构包括胞外域、跨膜区和胞内域3部分,是 

一种具有多配体的跨膜信号转导受体,属细胞表面分 

子中免疫球蛋白超家族成员之一 。作为横跨细胞膜 

的RAGE分子整体,一般无法自由脱离细胞,除非组织 

细胞死亡或凋亡而进入血液或相关体液。这当是我们 

的分析报告与免疫组化研究结论相左的根本原因。继 

之而来的问题是我们检测到的血清RAGE从何而来, 

概因血液循环系统中可正常表达RAGE的中性粒细 

胞、单核一巨噬细胞、血管内皮细胞等新陈代谢的结 

果。因此,我们可以认为血清RAGE与肺癌不具密切 

相关性。值得一提的是目前有研究显示血清可溶性 

RAGE形式可能成为一种新的肺癌生物标志物 ,它 

提示RAGE在体内具有多种存在形式和作用方式而与 

肺癌的发生发展密切联系,值得人们深入探讨,我们正 

在进行相关工作。 

参考文献 

一一~ 一~ 一一一一一一~ 一1 2