微柱凝胶法血型鉴定操作规程精选版

交叉配血质控品（微柱凝胶法）标准操作程序（SOP）一、用途本试剂盒用于长春博迅生物技术有限责任公司生产的抗人球蛋白检测卡（12卡/盒）交叉配血实验的室内质量控制。

二、准备工作1、将质控品从冰箱取出后平衡至室温。

2、观察检测卡外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡平衡至室温（18－25℃），再用专用离心机离心5分钟。

三、操作步骤1、取1张微柱凝胶检测卡，取四孔分别标记为组合1、组合2、组合3、组合4；2、交叉配血实验按照组合1（样本4+样本1）、组合2（样本4+样本2）、组合3（样本5+样本1）、组合4（样本5+样本3）进行加样，先加红细胞再加血浆，各1滴（50ul）;3、加样完毕后，专用孵育器孵育15min；4、孵育完毕，专用离心机离心后判读结果。

结果判读样本组合检测结果检测作用组合1 样本4+样本1 + 检测IgM类抗原抗体反应组合2 样本4+样本2 0 检测IgM类抗原抗体反应组合3 样本5+样本1 + 检测IgG类抗原抗体反应组合4 样本5+样本3 0 检测IgG类抗原抗体反应“0”代表阴性，“+”代表阳性。

质控品检测结束后，用户可将检测结果与参考值进行比较，阳性质控结果与预期结果比较出现超过1+凝集强度的差异，或阴性质控出现阳性结果时，均视为失控。

失控后要分析查找原因，必要时重复实验，确认失控原因消除后开展正常检测工作。

特异性、抗原强度及效价：AB型RhD（+）红细胞抗原强度：与抗A、抗B、抗D抗体均发生凝集，无溶血及其他不易分辨现象；与抗A抗体凝集强度≥3+，与抗B抗体凝集强度≥3+，与抗D抗体凝集强度≥3+。

O型RhD（+）红细胞：与抗A、抗B不发生凝集，与抗D发生凝集，无溶血及其他不易分辨现象；与抗D抗体凝集强度≥3+。

RhD（-）红细胞：与抗D不发生凝集，无溶血及其他不易分辨现象。

O血清：与A1型红细胞、B型红细胞均发生凝集，间接抗人球蛋白试验阴性，无溶血及其他不易分辨现象；O血清与A1型红细胞反应，效价≥8，与B型红细胞反应，效价≥8。

微柱凝胶卡式ABO和RhD血型鉴定标准操作规程一、目的为规范ABO和RhD血型鉴定（微柱凝胶卡式法）的技术操作，保证鉴定结果准确即临床输血安全有效。

二、适用范围适用于微柱凝胶卡式法进行ABO和RhD血型鉴定。

三、原理红细胞血型抗原—抗体反应体系在微柱凝胶卡微孔上端反应室反应后，如红细胞血型抗原与相应特异性抗体发生凝集反应后，离心后被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或者颗粒间隙之中，不能通过凝胶筛网，而未发生抗原—特异性抗体凝集的红细胞则可以通过凝胶筛网沉降至微柱凝胶底部。

四、步骤和方法1，取微柱凝胶ABO血型鉴定检测卡放入专用离心机，3000r/min离心1min后撕开锡纸膜，正立放置待用。

2，用微量移液器在A、B、D、Ctrl微孔中分别加入50微升受检者1%红细胞悬液，在Ac、Bc微孔中各加入受检者血清（血浆）50微升，再分别加入1%A、B型试剂红细胞悬液50微升。

3，将准备就绪的检测卡静止3分钟使其充分反应后，用专用离心机以1800r/min·2min，2500r/min·1min离心后，取出判断结果。

结果判读：如Ctrl微孔为阴性：A、B、D各微孔阳性表明受检红细胞表达相应抗原，Ac、Bc微孔阳性表明受检者血清（血浆）存在抗-A或者抗-B；若各微孔阴性，则结果相反；结合反应格局判读血型结果。

若Ctrl微孔为阳性，结果不可信，重新试验。

5，Rh血型分型：5.1取Rh血型分型微柱凝胶卡放入专用离心机，3000r/min离心1min后撕开锡纸膜，正立放置待用。

5.2使用微量移液器在C、c、D、E、e、Ctrl微孔中分别加入50微升受检者1%红细胞悬液。

5.3将检测卡静止3分钟使其充分反应后放入专用离心机按上述条件离心后观察结果。

5.4判断规则见上表：结果判定：如Ctrl微孔为阴性，C、c、D、E、e微孔中阳性结果表示受检者红细胞表达相应的血型抗原，反之则不表达相应的血型抗原。

微柱凝胶法
1标本：EDTA-K2 抗凝血2.0ml
2原理：
2.1人红细胞抗原与相应抗体发生特异性免疫反应（其本质为血凝反应）；
2.2检测系统是在微柱中（载体）装有的介质凝胶；
2.3凝胶间隙具有分子筛作用。

凝集的红细胞（结合的）被留在微柱上面成带状或凝集颗粒散布凝胶中间。

未凝集的红细胞（即未结合、游离的）通过离心后沉入微柱的底部；
2.4微柱凝胶中所含的特异性单克隆抗A、抗B试剂检测红细胞上相应的血型抗原，从而鉴定红细胞的血型。

3操作：
3.1在A1孔悬空加入50ul标准A1红细胞，在B孔悬空加入50ul标准B红细胞，再在两孔中各加入50ul样品血浆。

3.2在A、B、D、C、E、Ctrl六个孔内分别悬空加入5%病人红细胞悬液10ul
3.3将卡放到戴安娜专用离心机中离心9分钟
3.4离心结束后在白色背景前观察结果
4结果判断：
A孔阳性B孔阴性为A型;A孔阴性B孔阳性为B型;
A孔阴性B孔阴性为O型;A孔阳性B孔阳性为AB型。

5.注意事项
5.1严格按操作规程操作，认真核对标本并作好标记。

5.2应先加红细胞悬液，然后再加血浆。

5.3为了防止冷凝集现象的干扰，一般应在室温下进行试验。

5.4严格控制离心速度和时间，防止假阳性或假阴性结果。

5.5未用的微柱凝胶免疫检测卡应入室温保存，用完后放4℃冰箱保存1周。

5.6判断结果后应仔细核对，记录，避免笔误。

6.方法评价
卡式法定型使用安全，操作简单，结果稳定可靠，灵敏度高，重复性好，但费用昂贵，需要特殊的仪器设备。

微柱凝胶卡式法鉴定ABO正反血型及RhD血型标准操作规程1、目的为规范输血科ABO和RhD血型鉴定的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7条款的要求制定本规程。

2、适用范围本文件适用于本院输血科ABO正反血型和RhD血型鉴定的操作过程的规范化管理。

3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。

4、试验方法及原理4.1试验方法：微柱凝胶免疫测试法4.2原理：本微量定型系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。

当抗原抗体反应，则红细胞发生凝集形成红细胞免疫复合物。

离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。

4.2.1ABO血型基础4.2.2Rh血型Rh血型系统包括的主要血型抗原：C,c,E,e,D Cde=R1 Cde=R2 CcDdee=R1r与抗-D阳性反应的红细胞为Rh阳性。

5、样本采集和处理：受血者血样为EDTA-K2抗凝血。

抽取受血者静脉血1～2ml 于专用管（紫色头管）内，离心分离出血浆。

将细胞配成0.8%的悬液备用。

6、试剂：6.10.9%的生理盐水；6.2长春博迅公司的血型定型试剂卡；6.3长春博迅公司的0.8%的A、B型试剂红细胞悬液；7、仪器：7.1XTL-4.7细胞洗涤离心机；7.2长春博迅公司的FYQ型免疫微柱孵育器；7.3长春博迅公司的TD-3A型血型血清学专用离心机；8、操作程序：8.1工作准备：8.1.1将0.8%A、B型试剂红细胞悬液室温平衡。

准备样本，标记卡。

8.1.2 0.8%样本红细胞制备：将8μl压积红细胞加到1ml生理盐水中充分混匀。

8.1.3 将50μlA1、B标准反定细胞加入血型卡的第5-6管中，将待检者血浆或血清50μl加到血型卡的第5-6管中。

将0.8%样本红细胞分别加入到血型卡的第1-4管中，各50μl。

交叉配血操作规范（微柱凝胶法）【操作人员】经批准人授权的同志【部门主管】【质量控制员】【目的】保证测试结果的准确性。

【适用仪器范围】BYZ型血库血清学多用离心机，2002-2型血库专用离心机,FYQ免疫微柱孵育器。

【该SOP变动程序】该标准操作程序的更改，可由任一使用本程序的操作人员提出并报请专业主管及科主任签字后生效。

【应用范围】交叉配血微柱凝胶法检测的操作。

【原理、方法、用途】本品采用抗人球蛋白微柱凝胶免疫检测技术，用于交叉配血试验。

在微柱凝胶介质中，红细胞抗原与相应的不完全抗体结合后（致敏红细胞），凝胶中抗人球蛋白形成凝集块，离心后仍滞留在胶上或胶中，而未和抗体结合的红细胞则完全沉于凝胶底部。

该方法使试验更简单，更规范，结果更易判定。

本品系由聚丙烯塑料透明卡片的六支微柱型管中充满葡聚糖凝胶和抗人球蛋白，制成抗人球蛋白微柱凝胶试剂卡。

【标本采集和处理】1．由临床科室采用真空负压EDTA K2抗凝管采集3ml-5ml，作好标记，立即送检。

备血使用的受血者标本必须是输血前2天之内的血样。

采血时要防止溶血及多量组织液混入（多发生在静脉穿刺不顺利勉强抽血时），在病人输液时采集标本，必须从未输液的一侧肢体抽取，绝不允许在输液管接头处采集。

2．非急症病人输血前，应事先采取血标本作血型鉴定，填写申请单配血单上，以便核对。

急症抢救输血，未能事先采血检测血型，则要求由专人核对、贴标签、采取血标本送检。

3. 检验人员认真核对患者姓名、性别、床号、检验目的以及标本是否与申请单一致。

确认无误后用专用记号笔在试管与申请单上编写对应数字序号。

并按日期索引进行登记。

4. 将标本置于2002-2型血库专用离心机内，放置保证平衡，以1500转/min 离心10分钟。

保证血浆于血球有效分离。

溶血标本应重采取、乳糜血及标本量不足应加以登记，溶血性疾病应注明。

【试剂】抗人球蛋白微柱凝胶试剂卡。

【操作步骤】1．取出抗人球蛋白微柱凝胶试剂卡，应注明病人姓名、科室和床号。

ABO、Rh-D血型鉴定操作规程1.目的：规范ABO、Rh-D检测的操作过程2. 标本采集：静脉采血2ml抗凝血,避免溶血试剂3. 试剂：长春博讯生物技术有限责任公司4.方法原理【原理】:标准血清中的完全抗体(lgM)抗A、抗B、和抗D能和红细胞表面相应的抗原在盐水介质中发生特异性的凝集反应。

根据红细胞凝聚类型可鉴别出A、B、O、AB四型和RHD阴性或阳性。

5. 操作:一、玻片法(一般只能做正定型)【正定型】:1、取一张玻片,用蜡笔或记号笔将其分为三等份,从左到右每一等份左上角标明A、B、D,2、对应加入抗A和抗B抗D标准血清一滴;3、分别加PC(患者10—15%红细胞悬液);4、用洁净竹签将试剂和红细胞充分混匀,混合物约2cm2大小;5、轻轻地连续倾斜转动玻片2—5分钟,观察并记录; 【解释】:A端凝集为A型血;B端凝集为B型血;A、B 端均凝集则为AB型;A、B端均不凝集则为O型;D端凝集则为RH阳性者,无凝集则为RH阴性。

备注:玻片法可作为ABO血型初筛或复检;不适用于抗体鉴定和交叉配血;不适合检测ABO亚型。

二、试管法(盐水介质)【原理】:标准的A型和B型红细胞能和受检者血清(血浆)中相应的抗体发生特异性结合,形成肉眼可见的凝集反应,从而可推断出受检者的血型。

【材料】:1、标准A型和B型红细胞悬液(浓度4%,商品有售,亦可自行新鲜配制);2、受试者血清或血清;3、洁净康氏试管。

【正定型】:1、取二支洁净试管分别记上抗A和抗B;2、对应加入抗A和抗B血清1滴;3、分别加入病人红细胞悬液1滴(浓度为2%-5%);4、混匀,室温放置5分钟,1000rpm离心1分钟,取出观察结果【解释】:轻摇试管,检查是否凝集,抗A、抗B管均凝集,受试者为AB型血;抗A、抗B管均不凝集,则为O 型血;抗A管凝集则为A型血;抗B管凝集则为B型血。

【反定型】:1、取二支试管分别记上AC和BC;2、分别加入病人血清;3、对应加入A和B型试剂红细胞;4、混匀室温放置5分钟,1000rpm离心1分钟,取出观察结果;【解释】:首先检查上清液有无溶血,然后轻摇试管,检查是否凝集,A、B管均凝集受试者为O型血;A、B管均不凝集则为AB型血;A管凝集则为B型血;B管凝集则为A型血。

血型鉴定操作规程一．玻片法（仅适用于正定型）1 .原理：1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A型、B型、AB型和O型。

根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型。

1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD阳性。

2 .标本采集：用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。

紧急情况下可以使用抗凝动脉血。

婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，如不进行反定型试验可采集末梢血。

3. 标本运送与储存：采集好的标本与申请单同期尽快（一般2小时内）送往输血科。

标本采集后和检测后，应置于2~8℃环境下。

检测后的标本应至少保存7天，以备结果查对。

4 .仪器与材料：抗-A/B血型定型试剂（单克隆抗体）、RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）、载玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。

5. 操作步骤：5.1用标记笔在载玻片上划分成A、B、D三个区域；5.2在标记好的玻片上分别加1滴抗-A、抗-B和抗-D血型定型试剂；5.3再各加1滴10%患者红细胞悬液（该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞）；5.4用干净的搅拌棒将红细胞悬液和试剂充分混合，并把混合物均匀涂开，使其覆盖大约直径20mm的面积；5.5缓慢连倾斜摇动玻片1-2min，观察结果并记录。

6. 结果判定：6.1凝集或发生溶血为阳性结果；6.2细胞混匀2min后仍呈悬液状态的为阴性结果；6.3对结果有怀疑，应用试管法或微柱凝胶法重复实验。

二、纸板法1 .原理：1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A型、B型、AB型和O型。

根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型正定型。

A1细胞上含有A和A1抗原，B细胞上含有B抗原。

用已知的A、B细胞检测被检者血清中有无相应的抗-A或抗-B抗体，即反定型。

综合正反定型结果确定受检标本ABO血型。

输血科微柱凝胶法交叉配血试验标准操作规程1目的建立微柱凝胶抗人球蛋白检测卡交叉配血试验标准操作规程,确保微柱凝胶抗人球蛋白检测卡交叉配血试验操作的准确性和规范性。

2原理微柱凝胶卡采用分子排阻层析原理在微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗人球蛋白试剂，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，而未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。

3适用范围适用于建立微柱凝胶抗人球蛋白检测卡交叉配血试验4操作程序4.1试剂：4.1.10.9%生理盐水；4.1.2微柱凝胶抗人球蛋白交叉配血试验检测卡4.2器材：4.2.1LDZ4-1.2台式普通离心机4.2.2微柱凝胶法专用孵育箱：FYQ型免疫微柱孵育器4.2.3微柱凝胶法专用离心分离机：TD-3A型血型血清学离心机4.2.4IOU1、50Ul的微量移液器。

4.2.5玻璃或塑料试管（IOXI2mm或12X15mm）4.2.6一次性枪头4.3样本要求：抗凝全血3ml,本实验室为EDTA-K2抗凝。

4.4方法4.4.1选择微柱凝胶抗人球蛋白交叉配血试验检测卡，观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，然后将卡平行至室温（15°C-28℃）,平衡后用TD-3A型血型血清学离心机离心2-3min o做好标记：填写病人姓名、血型和配血日期，去除卡中微柱凝胶管上的密封铝膜。

4.4.2制备红细胞悬液：分别将受血者及供血者的抗凝血标本使用LDZ4-1.2台式普通离心机IoOOXg60SeC（3479转/分离心60SeC）,将红细胞吸出后，用0.9%生理盐水稀释成1%的溶液【10UI红细胞沉淀溶于InIIO.9%生理盐水中工取50Ul1%受血者或供血者红细胞悬液加于相应的微管。

4.4.3将已达室温的待检的全血标本使用LDZ4-1.2台式普通离心机离心IOOOXg2-3min（3479转/分离心2-3min）,确保加入反应体系中的血浆不含有任何颗粒性成分，取50UI受血者及供血者血浆加于相应的微管。

微柱凝胶卡式法交叉配血试验标准操作规程1、目的为规范输血科交叉配血试验的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7条款的要求制定本规程。

2、适用范围本文件适用于本院输血科进行交叉配血的操作技术的规范化管理。

3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。

4、试验方法及原理4.1试验方法：凝胶测试法4.2原理：本微量定型系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。

当抗原抗体反应，抗人球试验时，血细胞发生凝集。

离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。

5、样本采集和处理受血者血样为EDTA-K2抗凝血。

抽取受血者静脉血3~4ml于专用管（紫色头管）内，分离出血浆。

红细胞配成0.8%的悬液，供血者血样以同样方法分离血浆，并配制0.8%红细胞悬液。

配血所用受血者血样必需是输血前3天内的。

6、试剂：6.1 0.9%的生理盐水；6.2戴安娜合血卡；7、仪器：7.1XTL-4.7细胞洗涤离心机；7.2DiaMed-ID Incubator 37 SⅠ温育器；7.3DiaMed-ID Centrifuge 12 SⅡ8、操作程序：8.1工作准备：8.1.1生理盐水室温平衡。

准备样本。

标记合血卡。

8.1.2 0.8%-1%样本红细胞制备：加25μl样本压积红细胞悬浮液于2ml戴安娜2号稀释液中。

8.1.3于1号管中（主侧）加入50μl献血者红细胞（0.8%）。

25μl受血者血浆或血清。

8.1.4 2号管中（次侧）加入50μl受血者红细胞（0.8%）。

25μl献血者血浆或血清。

8.1.5 37℃孵育15分钟。

8.1.6 离心10分钟。

判断结果，并作好记录。

9、结果判断：1+至4+为抗人球配血不相容；—（0）为配血相容，可以输注。

10、医学解释：ABO交叉配血试验是检查供、受血者血液中是否含有不相合的抗原和抗体成分的试验。