(白僵菌)解析

白僵菌应用技术之白僵菌防治玉米螟
玉米螟成虫
我们从玉米专业种植户了解到玉米经常发生病虫害其中之一就
是玉米螟，该病主要危害玉米地上部位，下面本人为大家介绍一个防治玉米螟偏方---白僵菌。

白僵菌防治玉米螟技术如下：
白僵菌防治玉米螟是利用白僵菌对玉米螟专性寄生，接触虫体使玉米螟发病死亡的特点，通过田间喷粉、喷雾施用使玉米螟幼虫发病死亡，从而达到控制玉米螟幼虫的目的。

技术要点：
1.白僵菌封垛防治越冬幼虫要点。

(1)封垛时间。

玉米螟化蛹前15天或提前。

(2)使用剂量。

每立方米秸秆垛用白僵菌防治粉100克(每克含活孢子25亿以上)。

1吨防治粉可控制面积1.5万亩。

(3)封垛方法。

在玉米秸秆每立方米垛内捣一个20厘米深的洞，将机动喷粉器喷管插入洞中进行喷粉，待对面(或上面)冒出白烟或垛对面有菌粉飞出即可。

2.白僵菌颗粒剂防治幼虫。

每亩用每克含100亿孢子的白僵菌粉0.35公斤对细河沙5公斤混拌均匀后于玉米心叶末期前撒入心叶中。

该技术措施也是防治玉米螟措施之一。

3.白僵菌喷粉。

每亩用每克含50亿孢子的白僵菌粉1.5公斤于玉米心叶中期用机动或手动喷粉机撒入玉米心叶中。

蔬菜常用农药及科学使用方法—白僵菌杀虫剂蔬菜常用农药及科学使用方法—白僵菌杀虫剂药剂特性白僵菌是一种真菌微生物杀虫剂。

菌落为白色粉状物，产品为白色或灰白色粉状物。

菌体遇到较高的温度自然死亡而失效。

其杀虫有效物质是白僵菌的活孢子。

孢子接触害虫后，在适宜的温度条件下萌发，生长菌丝侵入虫体内，产生大量菌丝和分泌物，使害虫生病，约经4－5天后死亡。

死亡的虫体白色僵硬，体表长满菌丝及白色粉状孢子。

孢子可借风、昆虫等继续扩散，侵染其他害虫。

主要剂型粉剂。

防治对象及使用方法白僵菌杀虫剂用于防治多种作物上的磷翅目害虫，如菜青虫、小菜蛾、棉铃虫、玉米螟等，对松毛虫有特效。

（l）喷菌法。

菌粉用水溶液稀释配成菌液，每毫升菌液含孢子1亿以上。

用菌液在蔬菜上喷雾。

（2）喷粉。

苗粉与2．5%敌百虫粉均匀混合，每克混合粉含活孢子1亿以上，在蔬菜上喷粉。

（3）将病死的僵尸虫收集研磨，配成每毫升含活孢子1亿以上（每100个虫尸加工后，兑水80-100公斤）即可在蔬菜上喷雾。

注意事项（l）家蚕养殖区不能使用。

（2）菌液要随配随用，存放时间不宜超过2小时，以免孢子过早萌发而失去治病的能力。

与化学杀虫剂混用，也应随配随用，以免孢子受药害而失效。

不能与杀菌剂混用。

（3）白僵菌会使部分人皮肤产生过敏，如出现低烧、皮肤刺痒等，使用时应注意保护皮肤。

性能与特点白僵菌是一种真菌性杀虫剂，其孢子接触害虫后产生芽管，通过皮肤侵入其体内长成菌丝，并不断繁殖，使害虫新陈代谢紊乱而死亡。

白僵菌需要有适宜的温湿度（24～28℃，相对湿度90％左右，土壤含水量5％以上）才能使害虫致病。

该制剂对人畜无毒，对果树安全，但对蚕有害。

害虫感染白僵菌死亡的速度缓慢，经4～6天后才死亡。

白僵菌与低剂量化学农药（25％对硫磷微胶囊、48％乐斯本等）混用有明显的增效作用。

剂型粉剂（普通粉剂含100亿个孢子／克、高孢粉含1000亿个孢子／克）。

防治对象和使用方法主要防治桃蛀果蛾、刺蛾、卷叶蛾、天牛等害虫。

白僵菌及其应用张芷若植保检疫2班 201330650225摘要:白僵菌(Beauveria)是一类寄主范围广、致病性与适应性很强的昆虫病原真菌，已广泛应用于农林害虫的生物防治，应用前景很好。

对6个白僵菌属种的形态特征予以概述，并简要介绍它的致病性。

关键词: 研究进程生物学性状优点致病性应用前景正文:一､白僵菌的研究进程白僵菌属Beauveria Vuill.是全球分布的最常见的土壤虫生真菌Rehner & Buckley 2003,包含有球孢白僵菌 B.bassiana (Bals.-Criv.) Vuill.和布氏白僵菌 B.brongniartii (Sacc.) Petch 等具有重要经济价值的种类｡前者是研制真菌杀虫剂最多的虫生真菌｡据最新的较翔实的统计(Faria & Wraight2007),除我国外,世界上先后有 171 种真菌杀虫剂产品问世,其中以球孢白僵菌和金龟子绿僵菌产品最多,皆达 58 种之多,各占产品种类总数的33.9%｡而根据我国农业部农药检定所统计(ICAMA2008),2008年我国有11种真菌杀虫剂登记,其中6 种是球孢白僵菌产品｡自 MacLeod(1954)将 8个近似种组合进 B.bassiana,4个近似种组合进 B. tenella (Sacc.)Siemaszko ( 1972 年被 de Hoog 组合进B.brongniartii)以来,尽管有人一直怀疑这种广义分种的界限(St. Leger et al. 1992;Shin et al. 1995;Jaronski & Goettel 1997),但直到本世纪开始以后才得到愈来多的分子证据,证明这两个广义种是由形态相似､具有地方性区域谱系的一些隐含种组成的复合种(species complex) (Rehner & Buckley2005; Rehner et al. 2011) ｡然而,在 MacLeod (1954)之后的半个多世纪里,除本世纪以来的一些分类学和系统学研究外,他研究采用的都是广义球孢白僵菌和广义布氏白僵菌的概念｡自上世纪80年代分子生物学方法引进菌物研究以来,尤其是 90 年代初Kosir et al.(1991)对球孢白僵菌限制性片段长度多态性(RFLP)以及Rakotonirainy et al.(1991)对 rRNA 进行测序以来,这种最常见和最重要的虫生真菌的研究进入了分子时代,各领域的研究进展都令人瞩目｡[1]二､白僵菌的生物学性状白僵菌属半知菌亚门( Deteromycotina)､丝孢纲( Hyphomycetes)､丝孢目( Hyphomyce-tales)､丛梗孢科( Moniliaceac)､白僵菌属( Beau-veria) ,是一种虫生真菌, 寄主范围极广,已记载的包括 15目､149 科的700余种昆虫及蜱螨目的6科､10余种螨和蜱｡白僵菌的菌落成绒状,从卷毛状- 粉状,有时呈绳索状,但很少形成束丝梗;白色,稍后或变成淡黄色,偶成淡红色;背面无色,或淡黄 -粉红色｡分生孢子梗多,着生在营养菌丝上 ,粗 1-2 μ m ;产孢细胞( 瓶梗) 常浓密簇生于菌丝､分生孢子梗或膨大的泡囊( 柄细胞)上,球形- 瓶形 ,颈部延长成粗1 μ m､长达 20μ m 的产孢轴,轴上具小齿突,呈膝状( “之”字形弯曲) 的产孢细胞和泡囊常增生,在分生孢子梗或菌丝上聚成球形 - 卵形的相当于密室的孢子头 ,在低倍镜下即可看到｡分生孢子球形或近球形,透明,光滑｡[2]随着白僵菌属内种的分类研究进展,将白僵菌属分为6个种已被公认,这 6 个种在不同发育阶段虽然具有共同的形态特征,但也存在一定的差异｡1.球孢白僵菌[ Beauveria bassiana(Bals. ) Vuill.]菌丝具隔膜, 直径 1.15 - 2.00 μm, 透明无色,菌落平坦,粉状或如新碎笔状,表面白色至淡乳色,在马铃薯冻粉培养基底部无色｡分生孢子梗的分梗或小枝可多次直角分叉, 聚集成团, 分生孢子梗与主枝或侧枝着生部位多成直角｡分生孢子球形,直径 2.00-2.15 μm,着生在产孢细胞延伸而成的之字形结构上, 产孢细胞为瓶状多变化,由腹端向上逐渐变细｡2.布氏白僵菌[Beauveria brongniartii (Saccar-do)]菌落表面为白色､乳色至浅黄色,絮状､茸状或粉状｡菌丝细长透明有隔,产孢细胞形状不定,瓶状或丝状,分生孢子呈椭圆形或亚圆形(纵径 2.0-6.0μm × 横径 1.5-3.0μm),着生在由产孢细胞顶部延伸而成的之字形丝状结构上｡3.多形白僵菌[ Beauveria amorpha ]菌丝无色,光滑,有隔,直径 1.1-1.7 μm,产孢细胞轮生于菌丝或泡囊上, 由多个产孢细胞形成一个轮状结构,每轮产孢细胞最多可达 8 个,其基部球形､近球或椭圆形,直径2.1-3.2μm;基部延伸出18 μm 长的之字形结构产孢轴,其上具明显小齿突,产生较多的分生孢子(图 5)｡分生孢子透明､光滑,多数圆筒形,少数倒卵形,圆筒形孢子偶弯曲,纵径3.5-5.0μm,横径1.5-2.0μm｡4.苏格兰白僵菌(Beauveria caledonica)菌落粉状,起初白色,后变为灰奶油色,背面浅棕黄色｡菌丝无色光滑,直径为1.5-2.0 μm,产孢细胞浓密簇生于菌丝､分生孢子梗或膨大的泡囊上,球形至瓶形,产孢细胞大小为2.4-5.7 μm ×1.9-3.3 μm,产孢轴长约14 μm, 轴上具小齿突,呈膝状弯曲｡产孢细胞和泡囊常倍增,在分生孢子梗或菌丝上聚成相当密实的孢子头｡分生孢子无色,光滑,单细胞,多为短圆筒形,少为椭圆形,两端通常钝圆｡分生孢子大小为2.5-6.5μm × 1.3-2.2μm｡5.黏孢白僵菌(Beauveria velata)菌落透明有隔,直径2.0 -4.0 μm,淡黄色至浅褐色,孢子形成后表面粉末状, 背面起初无色以后变黄色｡4-8个产孢细胞成束着生在成熟的菌丝分支上,基部膨大呈球形(直径 2.5 -3.0 μm),顶端延伸出短轴丝｡分生孢子透明偶见表面光滑,但常常被具有突起松散的胶质层包被,孢子球形或椭圆形,直径 3.0-4.0μm｡6.蠕孢白僵菌(Beauveria vermiconia)菌丝透明表面光滑,直径 1.5-3.5μm,常常是二分支｡分生孢子形成器(conidial apparatus)紧密成簇,由一群膨大的细胞(5.0-6.0 μm ×3.0 -4.0μm)进一步分支产生产孢细胞｡产孢细胞有一个椭圆或瓶状大小为 4.0 -5.0μm ×2.0 -2.5μm 的基部,顶部延伸出一个之字形弯形或镰刀形,外侧 2.5μm, 内侧1.0-1.5μm｡[2]三､白僵菌的优点1.高选择性化学农药通常不分敌我地将益虫､害虫尽数毒杀,破坏了生态系统的平衡发展,增加了害虫爆发危害的机率｡不同寄主分离出的白僵菌对此类寄主具有较强的专化性,能主动回避对瓢虫､草蛉和食蚜虻等天敌益虫的侵染攻击,使整体的防治效果更好｡2.安全无残留白僵菌对人和其它生物没有危险, 一般也不伤害昆虫的天敌复合体｡在对残留量要求严格的场合,例如果树､茶叶､蔬菜等,白僵菌更加具有应用优势｡即使施用白僵菌后立刻收获产品也不会造成任何农药残留!同时,可以杜绝使用传统农药导致的田间中毒现象｡3.无抗药性与化学防治相比,害虫对白僵菌产生抗性的可能性很小｡害虫对化学农药的抗性使得其杀虫效果逐年减退｡白僵菌通过在自然条件下与害虫的体壁接触､侵入､感染致死害虫,害虫不会对其产生任何抗性｡连年使用,效果反而越来越高｡4.再生性白僵菌寄主致死后一般能在体外大量产孢,引起扩散,在适宜条件下能形成流行病｡同时可以借助适宜的温度､湿度,更可以在施用地定殖下来,继续繁殖生长,长期持续控制害虫｡5.兼容性白僵菌同各种天敌及很多杀虫剂是相容的,在某些情况下还有增效作用,从而各尽所长,增加对害虫的控制力度｡[3]四､白僵菌的致病性1.致病力及影响因素白僵菌能寄生多种昆虫,但不同菌株对寄主有一定的专化性,致病力也有一定的差异｡白僵菌若长期侵染一种昆虫,就会对该种昆虫产生喜嗜性｡我们可以利用白僵菌这种特性,通过人工定向培养,提高白僵菌对某种害虫的专化性和致病力｡环境条件对白僵菌致病力有一定影响｡在一定的温度范围内,白僵菌的侵染力随温度升高而加强｡就白僵菌侵染来说,孢子萌发与温度关系不大,在平均温度低于最适温度的环境条件下,白僵菌也能杀死越冬昆虫｡相对湿度对白僵菌的侵染很重要,一般认为,只有相对湿度高达90%以上时,白僵菌的孢子才能萌发并侵入虫体｡侵入后,环境相对湿度接近 100% 时,繁殖菌丝才能从虫尸中突破出来,形成分生孢子｡但 Ferron [ 4] 认为,白僵菌可不依赖环境湿度而达到感染大豆象( Acanthoscelides obtectus) 的目的｡昆虫的生理状态与白僵菌的致病力有一定的关系｡昆虫低龄幼虫和老龄幼虫的生理状况不同,对白僵菌的敏感性也不同｡低龄幼虫处于生长时期,抵抗外界不良环境条件的能力较差,极易感染白僵菌而死亡;高龄幼虫器官机能已发育成熟,不易发病,即使感染也不至于死亡,或拖至蛹期､成虫期死亡｡昆虫在越冬前和冬眠滞育期,对外界环境不敏感,感病较少｡此外,在同一发育阶段或同一发育时期,由于环境条件的改变或营养不良,引起昆虫生理状况失常,降低对病菌的抵抗力,容易感染发病｡[4]2,侵染途径和致病机制白僵菌感染的途径因昆虫的种类､虫态､环境条件等不同而有差别,主要通过表皮侵入昆虫,也可通过消化管､气孔､伤口等途径侵入虫体｡松毛虫在高温高湿条件下,主要是体壁感染;而在低温低湿条件下消化道感染的百分率提高｡不同虫态喷同样的白僵菌制剂,库蚊 ( Culex spp. ) 幼虫以呼吸道感染为主,成虫以体壁感染为主｡Fargues等研究了白僵菌对马铃薯甲虫幼虫蜕皮期间的感染模型｡用白僵菌悬液喷雾感染 3 龄中期的幼虫, 分生孢子在外皮表面发芽后, 通过体液, 侵入刚形成的新表皮, 使皮下组织溶解, 导致一些感病幼虫不能完成蜕皮｡另一方面, 幼虫在蜕皮时脆弱的新皮发生破裂, 使得菌丝及其他微生物得以进入血淋巴, 引起致命的败血症｡据研究表明,黑尾叶蝉( Nephotettix cincticeps) 感染白僵菌后,死亡前病变多发生在体壁和血液中,而其他组织器官的病变多发生在死亡后｡Broom等报道火蚁( Solenopsis geminata) 被白僵菌感染72h 后, 消化液的 pH 值从7 降低为 5｡白僵菌进入体腔初期,昆虫血细胞形成加速,将白僵菌围住,有吞噬作用;当白僵菌继续发育时,便冲破血细胞障碍,破坏血细胞, 体液变浑浊｡由于白僵菌代谢过程中产生草酸钙结晶,降低血淋巴的酸度,使机体代谢发生紊乱｡白僵菌侵入各组织器官时不仅使被破坏的细胞失去活力,邻近细胞也要受影响,如出现大型液泡､着色力降低,最后导致昆虫的死亡｡Vey 等 [ 14] 报道,白僵菌的附着胞在侵入过程中起着重要作用｡白僵菌的入侵是机械压力和酶共同作用的结果｡目前的研究表明,真菌在入侵体壁的过程中能够分泌蛋白酶､几丁质酶､脂酶､淀粉酶等,其中许多酶与入侵过程中表皮降解､侵染机构形成以及菌株毒力等关系密切｡Gupta等将大蜡螟和粉纹夜蛾 ( T richoplusia ni) 幼虫单个接种 5 株白僵菌测定死亡率,同时将不同株系的白僵菌接种到含这两种昆虫表皮的培养基上,测定其几丁质酶､蛋白酶､酯酶等活性,发现两组数据存在明显的相关性,酶活愈高,死亡率愈大,LT 50 愈低｡白僵菌对昆虫的致死原因, 除了由于失水而使组织破坏等因素外,白僵菌毒素是致死的最重要的因子｡[5] 五､应用前景随着社会经济的发展,人们环保意识增强,对生态环境愈来愈关注｡在农林害虫的防治中,化学防治的负面效应逐步为人们所认识｡我国目前已经撤消了几十种化学农药的登记｡生物农药具有对人畜毒性小､害虫不易产生抗药性､环境兼容性好等特点,因此应用前景会愈来愈好｡白僵菌作为目前研究应用较广的真菌杀虫剂,必将在更多的防治领域发挥其对害虫的杀伤力｡应用白僵菌防治森林害虫､农业害虫､经济作物害虫,害虫不易产生抗药性,不影响非目标昆虫,不杀伤害虫天敌,不污染环境,有利于增强生态系统的自控能力,是一类非常符合综合治理原则的防治措施,市场前景非常广阔｡白僵菌的应用前景主要体现在以下方面:1.防治农业害虫目前,白僵菌在农业害虫防治上的应用被越来越多的人欢迎｡白僵菌对玉米螟､大豆食心虫､蛴螬､甘薯象甲等多种农业害虫具有很高的防治效果｡如蛴螬危害花生､大豆､草坪､蔬菜､苗圃等多种作物,仅以花生为例,我国种植 300 万 hm 2 花生,均受蛴螬危害,按20%面积用白僵菌防治计算,需防治60 万 hm 2 ,需白僵菌制剂 9000t,合高孢粉 400t 左右｡2.防治森林害虫我国具有大面积的森林覆盖,也具有森林害虫 4000- 5000 种;危害最大的松毛虫,每年造成的立木生长量损失估计达 1000 万 m 3 ｡目前,白僵菌在林木害虫防治上主要针对蛀干性害虫､地下越冬害虫及食叶和枝梢害虫｡其对松树害虫( 如松褐天牛､松小蠹等) ､杨树害虫( 如星天牛､云斑天牛､桑天牛等) 等具有较强的杀伤力｡同时对越冬害虫及食叶害虫同样具有高致病率｡白僵菌的使用符合林业可持续发展的战略目标｡近年来白僵菌防治松毛虫面积每年在 60 万hm 2 ｡国内市场白僵菌高孢粉年需求在 2000t 左右｡3.防治经济作物害虫对于经济作物害虫的防治,必须从经济作物的生态效应､环境效应和经济效应的原则出发,全面考虑害虫的防治措施｡一般经济作物的立地条件较好,适宜白僵菌等生物杀虫剂的施用,其经济､环境效益也远比化学农药的效益高｡白僵菌主要可以应用于果园害虫( 如苹果蠹蛾､板栗象甲､桃小食心虫等)､茶园害虫( 茶小绿叶蝉是茶园上的常发害虫, 常年防治面积在 250万 hm 2 左右) 等经济作物害虫的防治｡随着农林产品质量要求的日益提高,杀虫剂市场必然需求大量的高效､低毒､无残留的生物杀虫剂｡4.防治卫生害虫人们生活水平逐步提高,对于健康生活的关注日益提高｡白僵菌素对蚊子幼虫具有毒性,许多试验也表明白僵菌对蝇､蚤､臭虫等卫生害虫具有一定的杀伤效果｡白僵菌也将更加广泛地应用于卫生害虫的防治｡参考文献: [1] 李增智，黄勃，陈名君，王滨，樊美珍分子时代的白僵菌研究，菌物学报834页[2] 高红，张冉，万永继白僵菌的分类研究进展，蚕业科学第4期731页[3]徐四琼，孙倩，曾德亮白僵菌研究与应用的现状及展望，安徽农学通报2005, 11( 7) :71- 72，[4]季香云, 杨长举白僵菌的致病性与应用，中国生物防治2003 年 5 月19(2)82-85[5]陈嘉恒，吴国杰，陈宗发，谢丰振，何麟白僵菌及其在农业生产上的应用，仲恺农业工程学院学报2012年 12 月第 25 卷第 4 期。

白僵菌液体深层培养的研究的开题报告一、研究背景白僵菌（Verticillium albo-atrum）是一种寄生性真菌，主要侵染菜豆、马铃薯、葡萄等作物，造成严重的病害。

传统的控制方法主要是使用化学药品，但随着越来越多的人关注环境保护和食品安全问题，对化学药品的使用受到了严格的限制。

因此，寻找新的、可持续的控制方法成为了当今植物病害防治研究的重要课题之一。

近年来，微生物制剂逐渐受到人们的关注和重视，作为一种具有生物特异性和环境友好型的病害控制方法，已经在很多领域得到了广泛的应用。

在微生物制剂中，有一类深层培养的液体菌剂，因其种类多，活菌量高，不含化学农药等优点，成为了目前研究的焦点之一。

因此，本研究将着重探究白僵菌液体深层培养的制备及其防治效果。

二、研究内容1. 研究深层培养白僵菌的生理生化特性，探究最适生长条件和最佳培养方案。

2. 采用稀释法制备白僵菌液体深层培养菌剂，研究白僵菌液体深层培养菌剂的生物学指标。

3. 在不同环境下，对白僵菌液体深层培养菌剂进行对比研究，并评估其防治效果。

三、研究意义1. 本研究将为深入探究白僵菌的生物学特性提供实验基础。

2. 探究白僵菌液体深层培养制备的适宜条件，有利于提高其生产效率和质量。

3. 评估白僵菌液体深层培养菌剂的防治能力，为绿色、环保、高效的植物病害防治提供了新的思路和方法。

四、研究方法1. 对白僵菌的菌株进行筛选并鉴定。

2. 设计不同培养条件的培养试验，如不同温度、光照、媒介等，建立菌体生长模型，并筛选出合适的深层培养条件。

3. 借助稀释法制备白僵菌液体深层培养菌剂，调整至适宜的pH值和生长温度。

4. 测定白僵菌液体深层培养菌剂的生物学指标，如菌落形态、活菌量、生长速率等。

5. 对白僵菌液体深层培养菌剂及其防治效果进行评估，对比研究不同环境下的差异性。

五、研究进展和计划目前，已构建白僵菌液体深层培养系统，并通过实验对不同培养条件进行了研究。

接下来，将进一步完善白僵菌液体深层培养菌剂的制备方法，并评估其防治效果，探究其在植物病害防治领域中的应用价值。

白僵菌在农林害虫防治上的研究进展作者：黄莉来源：《科学与财富》2013年第11期摘要：白僵茵是一种具有潜力的微生物杀虫剂，其杀虫作用受到环境因子、菌株和害虫自身因素等的影响。

本文从白僵茵的筛选与发酵工艺，蛋白酶、几丁质酶、脂肪酶、淀粉酶等在杀虫过程中的作用，致病力等3个方面阐述了国内外白僵茵研究的现状，并总结出白僵菌生产与应用中存在的主要问题。

关键词：白僵菌；生物防治；生产工艺白僵菌（Beauveria bassiana）是当前世界上研究和应用最广泛的一种虫生真菌，在昆虫的僵病中由白僵菌引起的约占21%，寄主约10余目700余种昆虫和螨类。

同时，白僵菌符合主要生物制剂对微生物提出的一些基本要求，即对温血动物和植物无害、易培养、致病性足以使害虫数量减少至许可水平之下等。

真菌杀虫剂是一种最有希望替代化学杀虫剂的微生物制剂。

可是，纵观一个多世纪以来的情况，这些微生物杀虫剂只获得片面的成功，这是因为有两个主要因素：（1）必须筛选和保存对某一特定害虫高毒的菌株，（2）至为重要的是有引起动物流行病的微环境。

在防治叶面害虫中真菌取得了偶尔的成功，目前的研究发现，在适宜的土壤环境中使用它们还是有前途的。

因此研究地下害虫的微生物防治更应为人们所关注。

白僵菌菌株的筛选主要采用分离方法和遗传育种。

但无论是自然筛选的或是诱变处理得到的白僵菌优良菌株，转管一定代数后常常退化。

其原因一般认为主要是由菌株本身的遗传物质所决定，如异核现象、异质现象、准性循环和核基因突变，但也与培养基成分及培养条件有关。

相应的控制策略有：（1）保持良好的培养条件，定期进行虫体复壮；（2）人工强制形成异核体；（3）筛选稳定的高毒力单孢株；（4）最有效的调控措施是采取生物工程技术，培育出稳定的高毒力菌株。

目前白僵菌的工艺主要有液体发酵、固体发酵和液固双相发酵。

不过从国内外白僵菌工业生产的发酵工艺现状看，主要存在的问题是：（1）规模化大量生产与纯培养之间的矛盾；（2）固态培养过程条件控制粗放，且通常为半敞开式培养，使得染菌及对环境的粉尘污染问题始终难以彻底解决。

涡旋法提取白僵菌孢子DNA技术研究白僵菌（Beauveria）是一类具有重要生防价值的应用真菌，目前已被认定的有8个种，其中7个种为虫生真菌[1-2]，对多种害虫均有很好的生防效果[3-5]。

但是白僵菌种间形态差异很小，难于根据形态特征进行区分[6]，基于DNA序列对白僵菌进行种间区分可克服形态分类上的一些困难[7]。

关于白僵菌DNA的提取方法，过去文献上介绍的多是从菌丝上提取，一般采用液氮加碱裂解法[8-13]。

由于白僵菌在培养过程中，容易产生大量孢子，菌落上孢子比菌丝要多，利用白僵菌孢子提取DNA，从取材上更为方便。

利用液氮加碱裂解法从白僵菌中提取DNA时，在液氮研磨过程中很容易使孢子粉飞散，DNA提取效果不佳。

为克服这一问题，选用涡旋来促进白僵菌孢子细胞裂解，并通过正交优化，探索出从白僵菌孢子中提取DNA的较好方法，现总结如下。

1材料与方法1.1试验材料供试白僵菌菌株为河南科技大学林学院真菌实验室保存的白僵菌BB01。

供试裂解液配制方法：裂解液1，EDTA 13.399 2 g，NaOH 1.44 g，Tris 1.211 g，浓HCl 0.42 mL，加去离子水定容至100 mL；裂解液2，SDS 2 g加入80 mL去离子水中65 ℃水浴溶解，定容至100 mL。

使用时根据用量取等量裂解液1和裂解液2混匀。

供试3 moL/L NaAc配制方法：NaAc 40.8 g溶解于100 mL去离子水，冰醋酸调pH值至5.2。

供试TE缓冲液：Tris-HCl 10 mmoL/L，pH值8.0；EDTA 1 mmoL/L，pH值8.0。

1.2试验方法1.2.1白僵菌DNA提取。

称取适量白僵菌孢子放入5 mL容量离心管中，加入适量石英砂和SDS提取缓冲液，放在旋涡混匀器上涡旋混匀若干分钟，每隔1 min用力上下晃动1次离心管；65 ℃水浴10 min，3 min颠倒混匀1次；加入适量NaAc，轻匀，冰浴5 min；12 000 r/min离心5 min；取700 μL 上清液于1.5 mL 容量离心管中，加入1/2倍体积异丙醇，轻匀，冰浴5 min；12 000 r/min离心5 min，弃上清液；用500 μL 70%冰乙醇洗涤DNA；12 000 r/min离心5 min，弃上清液；风干20 min，溶于100 μL TE，-20 ℃保存。

M ycosystema菌 物 学 报15 November 2011, 30(6): 823-835jwxt@ISSN1672-6472 CN11-5180Q©2011 Institute of Microbiology, CAS, all rights reserved.分子时代的白僵菌研究李增智1,2* 黄勃2 陈名君2 王滨2 樊美珍21泛亚生命研究院 上海 2004332安徽农业大学微生物防治省重点实验室 合肥 230036摘 要：白僵菌属是全球分布的最常见的虫生真菌。

自上世纪90年代以来，有关白僵菌的研究进入分子时代，各方面的研究都有快速甚至是突破性的进展。

作为复合种的球孢白僵菌和布氏白僵菌已被分割，而且还有其他新种被陆续命名，有多种有性型被发现；在查明一些致病基因及其作用机制后，通过转基因改良菌株工作取得突破性进展；分子生态学的研究解决了与白僵菌在农林生态系中的流行有关的一些难题。

文中就白僵菌的分类学与系统演化、生物学、分子致病机制与基因工程，以及生态学与流行病学等方面的研究进展进行了综述。

关键词：白僵菌，分子系统学，线粒体DNA，分子致病机制，基因工程，分子生态学，流行病学Studies on the genus Beauveria in molecular eraLI Zeng-Zhi1, 2* HUANG Bo2CHEN Ming-Jun2 WANG Bin2 FAN Mei-Zhen21BioAsia Life Science Academy, Shanghai 200433, China2Provincial Key Laboratory of Microbial Control, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, ChinaAbstract: Beauveria spp. are the most common cosmopolitan entomogenous fungi. All aspects of the studies on Beauveria have been achieving rapidly and substantially since the research of entomogenous fungi entered a molecular era in the early 1990’s. Beauveria bassiana and B. brongniartii as species complex were divided and segregated into several new species as some teleomorphs discovered. Based on the revealed pathogenic genes and their function mechanism, strain improvement obtained breakthroughs by gene transformation. Tough problems related to prevalence of B. bassiana in different crop and forest ecosystems have been solved through molecular ecological approaches. In the present paper, taxonomy, phylogenetics, biology and molecular pathogenesis, as well as ecology and epizootiology of Beauveria spp. are reviewed.Key words:Beauveria, molecular systematics, mtDNA, molecular pathogenesis, gene engineering, molecular ecology, epizootiology基金项目：国家自然科学基金（No. 30972368）*Corresponding author. E-mail: zzli@收稿日期: 2011-08-30, 接受日期: 2011-09-10824 Mycosystema/jwxtcn白僵菌属Beauveria Vuill.是全球分布的最常见的土壤虫生真菌（Rehner & Buckley 2003），包含有球孢白僵菌B . bassiana (Bals.-Criv.) Vuill.和布氏白僵菌B . brongniartii (Sacc.) Petch 这两种具有重要经济价值的种类。

球孢白僵菌球孢白僵菌（B. bassiana）在分类上属于半知菌亚门（Deuteromycotina），丝孢纲（Hyphomycetes），丛梗孢目（Moniliales），丛梗孢科（Moniliaceae），白僵菌属（Beauveria）。

球孢白僵菌（B. bassiana）是国内外广泛用于害虫生物防治的杀虫真菌之一，被认为是最具开发潜力的一种昆虫病原真菌。

【产品功效】球孢白僵菌,属于链孢霉科。

可寄生于60多种昆虫体上 .国内外研究人员利用球孢白僵菌防治玉米螟（Lewis, et al., 1996）、松毛虫（Alves, et al., 2002）、小蔗螟（Alves, et al., 2002）、盲椿（Leland, et al., 2006）、谷象（Vassilakos, et al., 2006）、柑桔红蜘蛛（Shi et al., 2006）和蚜虫（Ye, et al., 2005）等农林害虫。

特别是对玉米螟和松毛虫的生物防治，在国内已作为常规手段连年使用。

由于球孢白僵菌能有效地控制虫口数量，同时不伤害其他天敌昆虫和有益生物，完全符合有害生物综合治理的宗旨，同时由于其容易大量生产，防治成本较有竞争力，因而其具有广泛的应用前景。

【活性成分】白僵菌为真菌类杀虫制剂。

白僵菌分球孢白僵菌(B．bassiana)。

白僵菌分生孢子在寄主表皮或气孔、消化道上，遇适宜条件开始萌发，出生芽管。

同时产生脂肪酶、蛋白酶、几丁质酶溶解昆虫的表皮，由芽管入侵虫体，在虫体内生长繁殖，消耗寄主体内养分，形成大量菌丝和孢子，布满虫体全身。

同时产生各种毒素，如白僵素(Beauvericin)，卵孢白僵菌素(Tenellin)和卵孢子素(Oosporein)等。

白僵素为含N-甲基氨基酸的环状肘。

【性状】白僵素为针状无色晶体，加醋酸铅于水溶液中可产生絮状白色沉淀，对茚三酮显正反应。

【毒性】用50亿／g活孢子制剂大白鼠腹腔注射和灌胃LD50分别为0.6±0.1g ／kg及10.0g／kg，而用纯孢子腹腔注射大白鼠LD50为128士12mg／kg，为低毒类微生物农药，对人、畜无致病作用，属弱的变态反应源，无“三致”问题。

白僵菌杀虫机理
侵染途径
球孢白僵菌对寄主的侵染途径同其它虫生真菌一样，一般经历10个阶段：
分生孢子附着→萌发→穿透表皮→菌丝在血腔内生长→产生毒素→寄主死亡→菌丝入侵所有器官→菌丝穿出表皮→产生分生孢子→分生孢子扩散
其中只要经历前4-5个阶段就可使寄主致病。

酶在杀虫过程中的作用
白僵菌在代谢过程中能分泌一系列胞外水解酶，如蛋白酶、几丁质酶、脂肪酶和淀粉酶等，它们在白僵菌入侵害虫时起到溶解表皮，以利于白僵菌菌丝的侵染作用。

与杀虫有关的毒素
到目前为止，已报道白僵菌属的有毒代谢产物有3类：
蛋白质：如10kDa、TF-1、TF-2毒素等
环肽类：如白僵菌素、白僵菌素A、白僵菌素B等
非肽类：如卵孢霉素、布氏白僵菌素、球孢白僵菌素等。

白僵菌僵蚕专用僵蚕白僵菌纯孢子粉纯孢子粉白僵菌200gBetter Life!生物农药批发中心最专业最齐全的生物农药供应商！专业安全环保无添加僵蚕专用僵蚕白僵菌纯孢子粉白僵菌1g菌粉制作100g僵蚕，菌粉：蚕为：1：100菌粉和水稀释比例为：1：100水最好是纯净水或者是凉开水控温控湿，温度25～28度，湿度：80～90%白僵菌(Beauveria Vuillemin)属于丝孢纲、丛梗孢目、丛梗孢科、白僵菌属，是一种广谱性的昆虫病原真菌，对多种有害昆虫具有寄生性,致病性强、适应性强。

能快速、有效地控制虫口。

BM僵蚕专用白僵菌是经过多重筛选、诱变、复合优化而成的绿色杀虫剂。

【主要成分】白僵菌(Beauveria Vuillemin sp.)活孢子及培养辅料【含量指标】有效活孢子数大于100亿∕克【产品剂型】白色粉末（白僵菌孢子）和辅料颗粒。

【使用对象】用于生产中药僵蚕。

【产品特点】（1）绿色环保，安全可靠：本品为真菌生物杀虫剂，白僵菌对人、畜均无口服毒性问题。

（2）杀虫机理独特，不产生抗药性：接触蚕体后，分泌多种昆虫表皮降解酶，穿透害虫体壁进入体腔，在虫体内迅速繁殖；同时分泌大量白僵菌毒素，破坏害虫的机体组织，最终使害虫因不能维持正常的生命活动而死亡。

白僵菌通过在自然条件下可与家蚕的体壁接触感染致死，不会对其产生抗性。

连年使用，效果反而越来越好。

【用法与用量】（1）成蚕饲养。

饲养和加工药用僵蚕，全年都可以进行。

所喂的饲料，除少量桑叶外，可多种些月见草、剑蚕草、白三叶、串叶松香草等替代桑叶，以补充桑叶的不足，降低饲养成本。

对成蚕的饲养管理技术，与常规养蚕相同，需一直养至四眠。

（2）喷洒接种。

在成天四眠脱皮苏醒后，用喷壶将过滤稀释后的液体菌种均匀地喷洒到蚕的身上，以皮肤见湿为度。

若菌株活力差，则应在制成液体菌种后1小时内必须接种。

（3）加强管理。

在接种菌种15分钟～20分钟后，开始喂草，每5小时～6小时喂1次。