微生物纯培养—分离纯化方法汇总

微生物分离纯化方法
微生物分离纯化方法有很多种，以下介绍几种常用的方法：
1. 均质法：将微生物样品加入适量的缓冲液中，然后将样品经过均质器处理，使细胞壁破碎，释放细胞内物质。

通过在不同的培养基中分离培养，可以得到不同的菌落。

2. 筛选法：将微生物样品铺在含有不同成分的培养基上，根据对某种成分的利用能力，筛选出适应该成分的细菌。

3. 纯化法：通过连续传代培养，将一种菌落的单个菌株剔除出去，再进行单独培养，即可得到纯菌株。

4. 浓缩法：从土壤、水体等微生物来源中提取微生物样品，然后利用离心、滤网、浓缩膜等方法将细菌浓缩到一定程度，再用分离纯化方法进行分离。

5. 选择性富集法：根据特定的培养基条件，利用微生物自身的代谢特征在培养基中乘以菌落数量，然后利用纯化方法进行分离。

以上几种方法均可用于微生物的分离纯化，具体方法的选择应根据实际情况和实验目的来进行。

不同类型的细菌的分离
不同类型的细菌的分离方法可能有所不同，以下是几种常见的分离方法：
1.平板划线分离培养法：适用于混有多种细菌的情况，通过划线分离和培养，使原来混杂在一起的细菌沿划线在琼脂平板表面分离，得到分散的单个菌落，以获得纯种。

2.液体培养基分离纯化法：对于一些无法在固体培养基上生长的微生物，例如一些细胞大的细菌、许多原生动物和藻类等，需要使用液体培养基分离法。

常用的方法是稀释法，在同一个稀释度的许多平行试管中，大多数表现为不生长，以获得纯培养。

3.单细胞（孢子）分离法：在自然界中，很多微生物都是混杂在群体中的少数种类。

此时可以通过显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养。

这种方法的难度与细胞或个体的大小成反比，较大的微生物如藻类、原生动物较容易，个体很小的细菌则较难。

请注意，以上方法仅供参考，具体操作请根据实际情况和需求进行选择和调整。

从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。

在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。

1、用固体培养基分离和纯化单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体，称为菌落。

当固体培养基表面众多菌落连成一片时，便成为菌苔。

不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。

大多数细菌、酵母菌、以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落，采用适宜的平板分离法很容易得到纯培养。

所谓平板，即培养平板的简称，它是指固体培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，盛固体培养基的平皿。

这方法包括将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面。

固体培养基用琼脂或其它凝胶物质固化的培养基，每个孤立的活微生物体生长、繁殖形成菌落，形成的菌落便于移植。

最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基平板。

这种由Kock建立的采用平板分离微生物纯培养的技术简便易行，100多年来一直是各种菌种分离的最常用手段。

1.1 稀释倒平板法首先把微生物悬液作一系列的稀释（如1:10、1:100、1:1000、1:10000），然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。

如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。

随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。

1.2 涂布平板法因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。

微生物分离纯化的方法微生物分离纯化的方法是一种将复杂微生物混合物分离为纯化菌株的过程。

这是研究微生物多样性，发现新的微生物物种，以及从微生物中获得新的代谢产物等研究领域的关键步骤之一、以下是几种常见的微生物分离纯化的方法：1.常规分离法：常规分离方法是一种最常用的微生物分离技术。

该方法基于微生物菌落形态和特性的观察和比较，通过选取和分离菌落来获取纯化的微生物。

常见的常规分离方法包括移植法、罐培养法和环扩散法等。

2.筛选培养基：筛选培养基是通过优化微生物的培养条件，选择能够选择性生长其中一特定微生物的培养基。

这种方法常用于分离特定类型的微生物，例如革兰氏阳性菌、细菌等。

常见的筛选培养基包括含有特定抗生素、特定营养物质或特定pH值的培养基。

3.稀释分离法：稀释分离法是一种通过连续稀释样品来使微生物单个分离的方法。

首先，将样品连续稀释，然后在培养基上接种稀释液，并进行培养。

稀释分离法适用于稀释样品中含有少量微生物的情况，可以帮助分离纯化微生物。

4.毛细管扩散法：这是一种通过毛细管将微生物分离到培养基上的方法。

首先，将培养基注入玻璃毛细管中，并将其将培养基表面用火焰加热，使其与空气接触。

然后，将毛细管插入样品中，微生物通过毛细管扩散到培养基中。

这种方法使用较少的培养基和试剂，能够直接从样品中获得纯化的微生物。

5.细胞分离技术：细胞分离技术是通过分离微生物细胞来纯化微生物的方法。

这种方法包括细胞离心、滤膜分离和凝胶过滤等。

通过这些方法，可以将微生物细胞从细胞混合物中分离出来，从而获得纯化的微生物。

以上是几种常见的微生物分离纯化的方法。

根据具体的实验目的和样品特点，可以选择合适的方法进行微生物的分离纯化。

这些方法在微生物研究和应用中起着至关重要的作用，有助于深入了解微生物的多样性和功能。

微生物的纯培养、分离纯化和平板菌落计数法姓名摘要：纯培养技术是进行微生物学研究的基础。

从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。

平板菌落计数法是一种应用广泛的测定微生物生长繁殖的方法，其特点是能测出微生物样品中的活细胞数。

本实验通过稀释涂布平板法和平板划线分离法分离纯化微生物以获得纯培养并进行平板菌落计数，旨在了解微生物的纯培养含义和意义、熟练掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术、了解利用平板菌落计数法测定微生物样品中活细胞的原理、学习平板菌落计数的操作步骤与方法。

实验结果表明，本实验达到了预期的目的。

关键词：微生物的纯培养、微生物的分离与纯化、平板菌落计数法1.引言自然界中各种微生物混杂生活在一起，即使取很少量的样品也是许多微生物共存的群体。

人们要研究某种微生物的特性，首先须使该微生物处于纯培养状态。

也就是说培养物中所有细胞只是微生物的某一个种或株，它们有着共同的来源，是同一细胞的后代。

只有纯培养物才能提供可以重复的有意义的结果，纯培养技术是进行微生物学研究的基础。

形状稳定的纯培养（菌种）是微生物学工作最重要的基本要求，否则生产或科研都无法正常进行。

从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。

使用显微操作器单细胞挑取法可以直接得到纯培养。

稀释涂布平板法、稀释混合平板法或平板划线法是分离和纯化微生物的常规方法。

后几种方法不需要特殊的仪器设备，一般情况下都能顺利进行，达到好的效果。

常用的方法有：（1）简易单细胞挑取法：它需要特制的显微操纵器或其他显微技术，因而其使用受到限制。

简易单孢子分离法是一种不需显微单孢操作器，直接在普通显微镜下利用低倍镜分离单孢子的方法。

它采用很细的毛细管吸取较稀的萌发的孢子悬浮液滴在培养皿盖的内壁上，在低倍镜下逐个检查微滴。

将只含有一个萌发孢子的微滴放一小块营养琼脂片，使其发育成微菌落。

一、微生物的分离和纯培养•混合培养物：含有两种以上微生物的培养物。

•纯培养技术：把特定微生物从自然界混杂存在的状态中分离、纯化出来的技术。

•纯培养（pure culture）：微生物学中把从一个细胞或一群相同的细胞经过培养繁殖而得到的后代,称纯培养。

1.平板划线分离法（Streak Plate）将纯菌或含菌材料用微生物接种针在固体培养基表面进行划线，使微生物的单个细胞能分散在平板上。

2.倾注平板分离法（pour plate）将待分离的材料用无菌生理盐水进行一系列稀释,然后取不同稀释液少许(一般是1ml)分别置于无菌平皿中，而后倾入熔化并冷却到50℃左右的琼脂培养基，均匀混匀，冷凝后进行培养.3.涂布平板分离法（spread plate）先用固体培养基制成无菌平板,然后将一定稀释度的少量样品(一般是0.2-0.5ml)加到平板上,并用无菌玻璃涂棒将菌液均匀涂布到整个平板表面,经过培养后挑取单个菌落。

4.液体稀释法待分离材料→接种于培养液中→培养→测定或估计单位容积中的含菌数目→稀至两、三滴液体中只含有一个微生物个体→每次取一滴至另一盛有新鲜培养基的试管中→摇匀，培养→观察→大多数试管无微生物生长，少数管底有一菌落，可能由一个细胞繁殖而来。

5.选择性培养分离法为了从混杂的微生物群体中分离出某种微生物，可以根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等，采用选择培养的方法进行分离。

5.单细胞（单孢子）分离法采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养的方法。

该方法要在显微镜下进行。

毛细管法：用毛细管提取微生物个体，适合于较大微生物。

显微操作仪：用显微针、钩、环等挑取单个细胞或孢子以获得纯培养。

小液滴法：将经过适当稀释后的样品制成小液滴，在显微镜下选取只含一个细胞的液滴来进行纯培养物的分离。

微生物分离的方法微生物分离是指将微生物从复杂的微生物群体中分离出来，单独培养和研究的过程。

微生物分离的方法有很多种，根据不同的目的、微生物类型和样本来源，可以选择不同的分离方法。

1. 纯培养法纯培养法是最常用的微生物分离方法，常用于培养细菌、真菌和酵母等微生物。

首先，需要从样本中制备适量的稀释液，然后取适量的稀释液分别均匀涂布在不同的培养基上。

在合适的培养条件下（如温度、pH值等），通过单菌落的形成，筛选出单个微生物菌株，并进行进一步的纯化和鉴定。

2. 过筛法过筛法是利用不同的筛孔大小来筛选微生物的方法。

主要可以分为通过粗糙的筛网和细孔的纱布进行筛选。

首先将样品溶于适当的溶剂，然后通过筛网或纱布过滤。

微生物细胞会被截留在筛网或纱布上，而溶液则通过筛孔流出。

将筛得的微生物脱落至培养基上，进行纯化和鉴定。

3. 稀释落数法稀释落数法是将样品稀释成一系列不同浓度的稀释液，然后取适量的稀释液均匀涂布在培养基上。

采用这种方法不仅可以分离出单个微生物菌落，还可以计算微生物的含量，如细菌菌落数量。

通过在不同浓度上形成不同的菌落形态，可以用于鉴定微生物的生长特性和生理功能。

4. 筛选富营养培养基法筛选富营养培养基法是通过调整培养基的成分，选择特定条件下生长特定微生物的方法。

例如，根据微生物对碳源、氮源、矿物质、酸碱度等因素的要求，选择不同类型的培养基，使特定菌株优先生长。

这种方法可以筛选特定的微生物群体，有助于深入研究微生物群落结构和微生物的代谢特性。

5. 抗生素抑制法抗生素抑制法是利用抗生素的选择性杀菌作用，从样品中分离出特定微生物的方法。

根据不同微生物菌株对抗生素的抗性差异，可以选择适当抗生素制备培养基，将样品接种于含有抗生素的培养基上。

抗生素会抑制非目标微生物的生长，而目标微生物则能够原样分离出来。

6. 过滤法过滤法是将样品通过微孔滤膜过滤，将微生物分离出来的方法。

根据滤膜的孔径大小，可以选择性地分离出不同大小的微生物。

一、固体培养基分离1、稀释倒平板特点：菌落分离较为均匀，进行微生物计数结果相对准确。

但操作相对麻烦，热敏感菌有时易被烫死，而严格好氧菌也可能因被固定在培养基中生长受到影响。

2、涂布平板法特点：操作相对简单，是较常使用的常规方法。

但有时会因涂布不均匀使某些部位的菌落不能分开，进行微生物计数时需对稀释和涂布过程的操作特别注意，否则不易得到准确的结果。

3、平板划线法特点：操作简单，多用于对已有纯培养的确认和再次分离。

应用：这三种方法可用于所有能在固体培养基表面形成菌落的微生物的纯培养分离。

并且，通过选用适当的选择平板及培养条件，可直接分离各种具有特定生理特征的微生物。

和厌氧罐或厌氧手套箱技术结合，这3种方法也可用于获得各种厌氧菌的纯培养。

4、稀释摇管法特点：稀释倒平板法的一种变通形式，但由于菌落形成在琼脂柱的中间，观察和挑取都相对困难。

应用：在缺乏专业的厌氧操作设备的情况下对严格厌氧菌进行分离和观察。

二、液体培养基分离1、稀释法特点：工作量大，是否获得纯培养需依靠统计学的推测。

应用：不能或不易在固体培养基上生长的微生物进行纯培养分离或数量统计。

2、富集培养特点：一般不能直接获得微生物的纯培养，在通过富集培养使原本在自然环境中占少数的微生物的数量大大提高后，需再通过平板法进行相应微生物纯培养的分离和检测。

应用：（1）根据某种微生物的特殊生长要求，按照意愿从自然界中对这种微生物进行有针对性的有效分离；（2）分离培养出由科学家设计的特定环境中能生长的微生物，尽管我们并不知道什么微生物能在这种特定的环境中生长。

三、显微操作单细胞（孢子）挑取特点：分离过程直观，可靠，但对仪器和操作技术要求较高，多限于高度专业化的科学研究。

而挑取的微生物单细胞或孢子需经固体或液体培养基培养后才能获得其纯培养物。

应用：从样品中直接分离所需的微生物细胞或孢子，获得其纯培养。

在微生物学中，在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物(culture)，而只有一种微生物的培养物称为纯培养物(pure culture)。

由于在通常情况下纯培养物能较好地被研究、利用和重复结果，因此把特定的微生物从自然界混杂存在的状态中分离、纯化出来的纯培养技术是进行微生物学研究的基础。

一、无菌技术微生物通常是肉眼看不到的微小生物，而且无处不在。

因此，在微生物的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。

在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术被称为无菌技术(aseptic technique)，它是保证微生物学研究正常进行的关键。

1、微生物培养的常用器具及其灭菌试管、玻璃烧瓶、平皿(culture dish，petri dish)等是最为常用的培养微生物的器具，在使用前必须先行灭菌，使容器中不合任何生物。

培养微生物的营养物质[称为培养基(culture medium)]可以加到器皿中后一起灭菌，也可在单独灭菌后加到无菌的器具中。

最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。

有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。

为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。

而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。

2、接种操作用接种环或接种针分离微生物，或在无菌条件下把微生物由一个培养器皿转接到另一个培养容器进行培养，是微生物学研究中最常用的基本操作。

由于打开器皿就可能引起器皿内部被环境中的其他微生物污染，因此微生物实验的所有操作均应在无菌条件下进行，其要点是在火焰附近进行熟练的无菌操作，或在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行操作。

微生物纯化培养的四种方法
1. 饱和缓冲培养法：使用浓缩的缓冲液饱和环境，部分细菌群
生长可以被偏好，对致病菌、耐毒菌、异常菌和慢繁菌特别有效，它
是培养特定微生物株的技术，但也使得挑选出特定的一种微生物困难。

2. 离体培养法：使用于采集的样本，其中的细菌生长已死亡，
尽量取出新鲜的细菌，以获得独特的细菌株。

这种培养方法限制了培
养过程的成果，得到的结果可能会因样本而异。

3. 离子调节法：主要通过影响微生物细胞的吸收了离子体来纯化，将不同的细菌用高低相应的离子浓度，再用适度表面活性剂之类
去调节来实现纯化。

4. 隔离液法：使用与生理特性相匹配的隔离液，应用于不同细
菌群，可以影响不同细菌在生理上的生长，例如，扩散液、存储液、
溶血液等，从而实现微生物纯化。

可编辑修改精选全文完整版微生物纯培养的方法一、固体培养基分离1、稀释倒平板特点：菌落分离较为均匀，进行微生物计数结果相对准确。

但操作相对麻烦，热敏感菌有时易被烫死，而严格好氧菌也可能因被固定在培养基中生长受到影响。

2、涂布平板法特点：操作相对简单，是较常使用的常规方法。

但有时会因涂布不均匀使某些部位的菌落不能分开，进行微生物计数时需对稀释和涂布过程的操作特别注意，否则不易得到准确的结果。

3、平板划线法特点：操作简单，多用于对已有纯培养的确认和再次分离。

应用：这三种方法可用于所有能在固体培养基表面形成菌落的微生物的纯培养分离。

并且，通过选用适当的选择平板及培养条件，可直接分离各种具有特定生理特征的微生物。

和厌氧罐或厌氧手套箱技术结合，这3种方法也可用于获得各种厌氧菌的纯培养。

4、稀释摇管法特点：稀释倒平板法的一种变通形式，但由于菌落形成在琼脂柱的中间，观察和挑取都相对困难。

应用：在缺乏专业的厌氧操作设备的情况下对严格厌氧菌进行分离和观察。

二、液体培养基分离1、稀释法特点：工作量大，是否获得纯培养需依靠统计学的推测。

应用：不能或不易在固体培养基上生长的微生物进行纯培养分离或数量统计。

2、富集培养特点：一般不能直接获得微生物的纯培养，在通过富集培养使原本在自然环境中占少数的微生物的数量大大提高后，需再通过平板法进行相应微生物纯培养的分离和检测。

应用：（1）根据某种微生物的特殊生长要求，按照意愿从自然界中对这种微生物进行有针对性的有效分离；（2）分离培养出由科学家设计的特定环境中能生长的微生物，尽管我们并不知道什么微生物能在这种特定的环境中生长。

三、显微操作单细胞（孢子）挑取特点：分离过程直观，可靠，但对仪器和操作技术要求较高，多限于高度专业化的科学研究。

而挑取的微生物单细胞或孢子需经固体或液体培养基培养后才能获得其纯培养物。

应用：从样品中直接分离所需的微生物细胞或孢子，获得其纯培养。

(一) 常用的微生物分离纯化方法菌种分离纯化的方法有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法、平板划线分离法、稀释摇管法、液体培养基分离法、单细胞分离法、选择培养分离法等。

其中前三种方法最为常用,不需要特殊的仪器设备, 分离纯化效果好, 现分别简述如下1. 稀释混合倒平板法平板是指经熔化的固体培养基倒入无菌培养皿中, 冷却凝固而成的盛有固体培养基的平皿。

该法是先将待分离的含菌样品, 用无菌生理盐水作一系列的稀释(常用十倍稀释法, 稀释倍数要适当), 然后分别取不同稀释液少许(0.5-1.0ml)于无菌培养皿中, 倾入已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基, 迅速旋摇, 充分混匀。

待琼脂凝固后, 即成为可能含菌的琼脂平板。

于恒温箱中倒置培养一定时间后, 在琼脂平板表面或培养基中即可出现分散的单个菌落。

每个菌落可能是由一个细胞繁殖形成的。

挑取单一个菌落, 一般再重复该法1-2次, 结合显微镜检测个体形态特征,便可得到真正的纯培养物。

若样品稀释时能充分混匀,取样量和稀释倍数准确,则该法还可用于活菌数测定。

图 4 混合倒平板操作法示意图图 5 涂布平板操作法示意图2. 稀释涂布平板法采用上述稀释混合倒平板法有两个缺点，一是会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间,缺乏溶氧而生长受影响,形成的菌落微小难于挑取；一是在倾入熔化琼脂培养基时，若温度控制过高,易烫死某些热敏感菌，过低则会引起琼脂太快凝固, 不能充分混匀。

在微生物学研究中, 更常用的纯种分离方法是稀释涂布平板法。

该法是将已熔化并冷却至约50℃(减少冷凝水)的琼脂培养基, 先倒入无菌培养皿中, 制成无菌平板。

待充分冷却凝固后,将一定量(约0.1 ml)的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面, 再用三角形无菌玻璃涂棒涂布,使菌液均匀分散在整个平板表面, 倒置温箱培养后挑取单个菌落。

另一种简单快速有效的涂布平板法, 可省去含菌样品悬液的稀释, 直接吸取经振荡分散的样品悬浮液l滴加入1号琼脂平板上, 用一支三角形无菌玻璃涂棒均匀涂布, 用此涂棒再连续涂布2号、3号、4号平板(连续涂布起逐渐稀释作用，涂布平板数视样品浓度而定), 翻转此涂棒再涂布5号、6号平板, 经适温倒置培养后挑取单个菌落。

微生物的分离纯化技术
微生物的分离纯化技术是指将混合微生物分离出单一种类，然后纯化该种类的技术。

以下是一些微生物的分离纯化技术：
1. 筛选法：通过选用某种特定培养基或特定条件（如pH、温度等），筛选出具有特定特性的微生物。

2. 稀释法：通过依次将样品进行稀释操作，使微生物的种类逐步减少，最终得到单种微生物。

3. 分离培养法：将混合样品分别涂布于不同的培养基表面，使微生物在不同培养基上生长和形态表现不同，最终分离出单一微生物。

4. 过滤法：通过将混合液体经过细孔过滤器，将细菌和病毒分离出来。

5. 凝胶电泳法：将提取出来的DNA通过凝胶电泳分析，识别出目标微生物并进行纯化。

6. 酶标记技术：利用特定抗体或酶标记系统与目标微生物进行特异性结合，分离出单一微生物。

总的来说，微生物的分离纯化技术需要根据不同的样品和目的选择不同的方法，
并结合多种技术手段才能最终得到纯种微生物。