人胃癌裸鼠原位种植转移模型的建立实验具体方法及步骤

裸⿏成瘤实验⽅法肿瘤细胞有良性和恶性之分；癌细胞则是恶性，是会扩散的细胞。

肿瘤细胞包含癌细胞，它们共同特点是从基因⽔平上失控的、能⽆限增殖的细胞。

癌细胞有三个显著的基本特征即：不死性、迁移性和失去接触抑制。

常规较容易成瘤的细胞Hep-G2（肝癌），Hep2（喉癌），NCI-H460(⼤细胞肺癌)， SK-OV-3（卵巢癌），MCF-7（乳腺癌）SKBR3， A375/B16-F10（⼈⿊⾊素瘤细胞），SGC7901 ⼈胃肿瘤细胞，CNE（⿐咽癌），H1299（肺癌）， SPC-A-1（肺腺癌）， HT-29/HCT116（结肠癌），BEL-7402（肝癌），MDA-MB-231 乳腺癌， CT26 （⼩⿏结肠癌细胞），U87 （⼈胶质瘤细胞）， MGC-803（⼈胃癌细胞），PC-3 （⼈前列腺癌细胞）。

裸⿏的选择实验室常⽤的是BALB/c-nu裸⼩⿏ ,随着裸⼩⿏年龄增长或有关因素的影响(如病毒感染),裸⿏体内正常T细胞会增加，故接种肿瘤实验⼀般采⽤4--6周龄的裸⿏。

裸⿏成瘤实验技巧1、细胞的状态是成瘤实验的关键，所以细胞⽣长状态⼀定要好，取处于对数⽣长期的细胞，细胞达80-90%左右密度为宜。

收集细胞前⼀天晚上更换新鲜培养基。

2、胰酶消化细胞后⽤预冷的PBS洗两遍，⽬的为去除细胞中残余的⾎清。

3、⽤PBS或者⽆⾎清培养基吹打细胞沉淀⾄合适的浓度，⼀般⽪下瘤接种的细胞量为1-5×10^6个细胞/⽀，接种体积为0.1-0.2ml，因此细胞悬液的浓度为1-5×10^7个细胞/ml，如若有条件的实验室，也可以加基质胶以加速瘤块的⽣成，基质胶与PBS或⽆⾎清的⽐列为1:1。

4、细胞消化后应尽快接种到裸⿏⽪下，⼀般尽量在半⼩时内完成（如果接种量⼤，可以分批接种），途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢以保持细胞的活性。

5、选择的裸⿏⼀般在4-6周龄，体重16-18g左右，种植部位选择⾎供丰富区域，如腋窝中后部。

肿瘤移植(TT)小鼠模型具体方法及步骤原型物种人来源黑色素瘤B16细胞导致的肿瘤肝转移及肺转移模式动物品系SPF级C57BL/6小鼠，健康，雄性，4~6W，体重为18g~20g。

实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。

实验周期4-6 weeks建模方法恶性黑色素瘤(malignant melanoma MM)的发病率较低, 但恶性度高, 转移早而广泛，且对常规放疗有较强抗性，临床治疗颇为棘手，目前尚无有效的治疗方法，其常规治疗主要有免疫治疗、化疗、生物治疗、近距放射疗法和外束放射疗法等。

近年恶性黑素瘤发病率和死亡率明显上升，肿瘤侵袭及转移是其治疗失败的主要原因，很大一部分肿瘤病人在初治时已有微小的或潜在的转移病灶。

为了能彻底治愈癌症，控制肿瘤侵袭和转移是治疗的关键。

黑色素瘤B16细胞株是生长在C57BL/6小鼠耳根部的自发性肿瘤，C57BL/6小鼠的B16移植瘤和转移瘤模型是肿瘤研究的常用模型之一。

小鼠成瘤实验：取对数生长的细胞，胰酶消化后培养基重悬收集细胞，用无菌磷酸盐缓冲液(PBS)调整细胞密度备用。

选用C57BL/6J 小鼠建立B16 细胞肿瘤转移模型，每组10 只。

试验组小鼠尾静脉注射浓度为5×10 6 /L 的B16 细胞悬液0.1ml，每组于接种细胞次日起腹腔注射药物，10 日后改为隔日注射一次。

于第21天，处死动物，取肝脏及肺组织，解剖镜下计数转移的结节数量，数码相机拍照，并对各组小鼠肺转移结节的数目进行统计学分析。

应用肿瘤转移疾病模型模型评价各组小鼠尾静脉注射接种肿瘤细胞后，生长良好，体重无明显变化，组间无明显差异。

第21 天时处死小鼠，取肝脏及肺组织，解剖镜下观察，可发现肝脏及肺组织有明显转移的结节。

解剖镜下计数转移的结节数量，可见给药组小鼠肝脏及肺结节数目明显低于阴性对照组。

取材：1.实验结束后每组取肝组织、肺组织和肿瘤组织，每个组织从瘤体中央分为2份，一份置于甲醛固定；另一份液氮冷冻置于-80度保存，用于分子生物学和WB检测等等。

青蒿素及其衍生物的抗肿瘤作用研究进度青蒿素是从菊科植物黄花蒿中提取别离出的一种具有过氧基团的倍半萜内酯类化合物。

以往研究发现其是治疗疟疾的有效药物，后续抗血吸虫、抗病毒、抗心律失常等用途也相继被发现。

近年来，据国内外研究报道青蒿素在抗炎、抗孕、抗肿瘤等方面也具有较好效果。

尤其在抗肿瘤方面，青蒿素及其衍生物对多种肿瘤细胞都有显著抑制或杀伤作用，且耐受性好，不良反响少。

1 青蒿素及其衍生物对肝癌的抗肿瘤作用近年来研究发现，青蒿素及其衍生物对肝癌HepG2 细胞、SMMC-7721 细胞、H22 细胞均有明显抑制作用。

黄俊玲等取处于对数生长期的HepG2 细胞进行实验，分别给予不同浓度的青蒿素，采用MTT 法检测青蒿素对HepG2 细胞作用后的增殖抑制率，用流式细胞术检测药物作用HepG2后的细胞周期及细胞凋亡，结果显示青蒿素对HepG2 具有增殖抑制作用，其抑制率呈剂量、时间依赖效应，可使HepG2 细胞周期阻滞于G0 /S 期，并诱导肝癌细胞发生凋亡。

潘雷等将人肝癌细胞株SMMC-7721 接种于小鼠腰部皮下，制成小鼠荷瘤动物模型，给予青蒿素对荷瘤小鼠进行干预，观察小鼠肿瘤的体积变化，并用TUNEL 法检查肿瘤细胞的凋亡。

结果显示，青蒿素对SMMC-7721 具有明显肿瘤抑制作用和促进肿瘤细胞凋亡的作用。

盛庆寿等研究不同剂量双氢青蒿素含药血清对SMMC-7721 细胞的作用，结果显示双氢青蒿素含药血清浓度在30 mg /kg 以上时具有明显抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡作用。

邓小荣等取生长状态良好的小鼠肝癌H22 细胞为实验对象，采用台盼蓝染液染色细胞计数法检测不同浓度青蒿素对H22 的细胞活力和生长曲线的影响，并利用MTT 比色法对处于对数生长期的H22 细胞进行细胞生长抑制实验，结果说明青蒿素能有效抑制H22 的细胞活力、细胞增殖，并能影响其生长曲线。

青蒿素抗肝癌细胞的作用机制与Fe2 + 浓度有关。

动物体内抑瘤实验具体步骤及方法活体生物发光成像技术的原理：在小型哺乳动物体内利用报告基因（荧光素酶基因）表达所产生的荧光素酶蛋白与其小分子底物荧光素在氧、Mg2+存在的条件下消耗ATP 发生氧化还原反应，将部分化学能转化为可见光能释放。

因此只有在活细胞内才会发生发光现象。

并且光的强度与标记细胞的数目线性相关。

一、材料准备1. 动物：裸鼠9 只，6～8周龄，雄性；C57小鼠24 只，6～8 周龄，雄性；动物均为自由饮水采食。

2. 细胞：MDA-MB-231人乳腺癌细胞系，使用荧光素酶基因标记。

方法：用荧光素酶报告基因标记的质粒转染人乳腺癌细胞，共转染的还有选择性标记基因，从而保证转染细胞的稳定性，形成表达荧光素酶的肿瘤细胞株；B16 黑色素瘤细胞。

二、实验步骤1. 紫杉醇混合胶束的制备（1）将适量紫杉醇溶解在少量无水乙醇和丙二醇的混合溶剂中.（2）加入适当比例的磷脂和表面活性剂A 进行充分混合，制得稳定的紫杉醇混合胶束前体制剂，载药浓度为6 g/L。

（3）临用时按剂量加入生理盐水中稀释、摇匀后即可使用。

制剂体系的粒径大小与分布特征采用动态激光光散射粒度仪检测。

2. MDA-MB-231人乳腺癌细胞荷瘤鼠模型的建立（1）培养荧光素酶基因标记的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系，使用DMEM 培养基（添加10%胎牛血清），37 ℃、5% CO2 培养箱中培养，每3天传代1次。

（2）待细胞密度为80%～90%、细胞总量达到实验所需要求时，使用胰酶消化，收集于PBS溶液重悬。

（3）如有需要，在细胞培养一定时间后，应使用抗生素Zeocin进行抗性筛选，保证荧光素酶基因的表达量足够。

（4）收集细胞，使用PBS稀释至细胞数1.5×108/mL，接种于裸鼠腋下，每只裸鼠的接种量为0.1 mL 。

3. 动物活体成像检测（1）接种后将裸鼠随机分为3组，分别为生理盐水组、紫杉醇注射液组、紫杉醇混合胶束制剂组，每组3只。

肿瘤种植的治疗
肿瘤种植治疗是一种针对恶性肿瘤的治疗方法，其基本原理是将恶性肿瘤患者的肿瘤细胞或组织移植到实验动物体内，通过观察肿瘤的生长发展过程，进而研究肿瘤的发生机制、分子信号通路、药物敏感性等。

肿瘤种植治疗的具体步骤包括：
1. 选择适当的实验动物：常用的实验动物包括小鼠、大鼠等，需要根据具体研究目的和肿瘤类型选择合适的动物模型。

2. 采集肿瘤组织：从患者的恶性肿瘤中采集肿瘤组织，通常为手术切除的肿瘤组织。

采集后需要立即进行处理，以保证细胞的活力。

3. 移植肿瘤组织：将采集的肿瘤组织移植到实验动物体内，常见的方法包括皮下移植、脾脏移植、肺移植等。

移植过程中需要注意保护组织的完整性和活性。

4. 观察肿瘤生长发展：移植后，观察肿瘤的生长发展情况，可以通过体积测量、组织病理学检查、分子生物学技术等方法进行评估。

5. 进一步研究和治疗：根据观察结果，进行进一步的研究和治疗，如筛选有效的抗肿瘤药物、评估肿瘤的耐药性等。

肿瘤种植治疗可以为临床治疗提供重要的预测指标和新的治疗靶点，有助于个体化的肿瘤治疗。

同时，也有助于研究肿瘤的发生机制和肿瘤微环境等方面的科学问题。

（以上内容仅供参考，具体治疗方法还需要根据具体情况而定，建议在医生指导下进行）。