酵母菌的高密度发

Fig. 3 Fatty acid profiles(in mg/g cell dry weight(CDW)) as a function of time filled circles = C16:0（十六碳酸）, empty circles = C16:1, filled triangles = C18:0, empty triangles = C18:1（油酸）, and filled squares = C18:2（亚油酸）
When the total biomass was characterised at the end of the fermentation,he cell viability was also measured. The HCD fermentations showed similar viabilities at the end of fermentation, but the REF condition showed a slightly decreased percentage of living cells. This indicates that the long duration of fermentation had a negative influence on the yeast viability but that yeast viability remained at an acceptable level in all fermentations .
The role of oxygen in yeast metabolism during high cell density brewery fermentations
Appl Microbiol Biotechnol

酵母高密度发酵生产S-腺苷-L-蛋氨酸（SAM）技术我们用酵母发酵生产SAM，在5L反应器中SAM产量可达7.5g/L,生物量干重达到110g/L。

本实验室与以上单位所比，具有以下优势：（1）将高密度发酵平台技术（国家863项目）成功应用于SAM的生产,与传统发酵相比，本实验室注重从代谢调控角度进行生产。

（2）可以非常好的达到与谷胱甘肽，麦角固醇联产，工艺比较成熟。

与基因工程菌及其他菌种相比，本实验室保藏的酵母具有稳定性好，基本不退化，维护费用低的特点S-腺苷-L-蛋氨酸又称S-腺苷甲硫氨酸，简称SAM，具有治疗肝病，抑郁症和关节炎的强大疗效。

1，宏观市场前景和微观市场容量药用SAM由德国基诺（Knoll）药厂在上世纪70年代首先用于临床，目前以在意大利，德国，美国，西班牙，俄罗斯，法国和中国等国作为抗抑郁药，关节炎药和肝病药应用于临床。

同时SAM在食品添加剂中也有广泛应用。

根据Health Business Partner统计的美国销售额数据，SAM在2000年特殊营养补充品中的销售额中名列第四。

SAM医药级在美国的售价达2000美元/kg。

我国各类关节炎患者达到1.2亿，抑郁症患者1600万，乙肝病毒携带者1.2亿，加上酒精和药物对肝损害的患者，人群更是巨大。

目前，在国内销售的SAM只有德国基诺药厂生产的‘思美泰’，作为肝病治疗药物，在国内销售价格昂贵，片剂日最大服用单价为117.6元，针粉剂为170元/日。

以2000年为例，思美泰在京，沪，穗三地的销售额分别占护肝剂销售总额的4.2%，10.92%，11.03%，医药用药金额排序紧跟甘利欣和易善力（肝得健）之后。

可见，SAM的多元性的功能特点决定了其无论是在国内市场，还是在国内市场，都有巨大的需求，并有着不断增长的趋势。

2，技术所处的研究阶段即可工业化的程度工业化生产1，发酵单位: 5-6g/L.2，产品收率: 50%3，产品纯度: 98%4，产品成本: 600-700元/公斤3，工业化实施的条件（生产装置建设投入及相关公用工程）年产量20吨计算,发酵罐全容积为20立方米,2个，设备总投资2800万元.每批操作时间为2天（发酵时间44~48h，）,发酵罐装料系数为80％,产SAM 7.5g/L，收率70％。

产蛋白酶K毕赤酵母重组菌株高密度发酵及酶学性质分析姓名：李善军学号：2015304120225院系：华中农业大学生科院摘要蛋白酶 K 具有极高的酶活性和广泛的底物特异性, 在核酸纯化、丝绸、医药、食品和酿造等领域蛋白酶K 都有着重要的应用。

毕赤酵母是近十几年来发展起来的真核表达体系，将蛋白酶 K在毕赤酵母中重组表达将是突破其高效表达的一个重要步骤。

本实验利用产蛋白酶K的毕赤酵母基因工程菌进行高密度的液体发酵，掌握毕赤酵母菌全自动液体发酵工艺，同时对的到产物酶酶学性质进行分析。

经实验结果得知，毕赤酵母基因工程菌发酵最高密度达到湿重283.97g/L，得到的蛋白酶K最大酶活为29000U，蛋白酶K的分子质量为31ku,最适温度为65度，最适PH为8，Na+、K+、Ca+和Mg+对蛋白酶K酶活有促进作用，而Ni+和Zn+对酶活反应则是抑制作用。

关键词：蛋白酶K、毕赤酵母菌、高密度发酵、酶学分析本实验的蛋白酶 K 属丝氨酸蛋白酶类，它是林伯氏白色念球产生的一类主要蛋白酶。

因能合成该种蛋白酶的微生物能在以角蛋白为唯一碳氮源的环境中生长，故将其称作蛋白酶 K。

蛋白酶 K 具有极高的酶活性和广泛的底物特异性，能优先分与疏水性氨基酸、含硫氨基酸、芳香族氨基酸 C 末端邻接的酯键和肽键，常被用于降解蛋白生产短肽。

利用其这个特性，在核酸纯化、丝绸、医药、食品和酿造等领域蛋白酶K 都有着重要的应用。

由于林伯氏白色念球菌生长缓慢难以达到高密度培养的目标，而且菌体在产生蛋白酶 K 的同时还会分泌表达其他蛋白酶，加之对林伯氏白色念球菌的基因操作比大肠杆菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌等常用基因工程菌困难许多，这些都给蛋白酶K的高效大规模生产带来困难。

毕赤酵母是近十年来发展起来的真核表达体系,它的生长环境除了包括十分环保而廉价的无机盐，微量元素和必须的碳氮源外，还要添加生物素，甲醇能够作为它的唯一碳源保证其生长。

将蛋白酶 K在毕赤酵母中重组表达将是突破其高效表达的一个重要步骤。

课程设计说明书课程名称：发酵工程设计题目：酵母菌的高密度发酵院系：生物与食品工程学院学生姓名：吴亚非学号：201006040051专业班级：10 生物技术指导教师：马瑞霞2013年5月26日课程设计任务书设计题目酵母菌的高密度发酵学生姓名吴亚非所在院系生物与食品工程学院专业、年级、班10级生物技术设计要求：1、设计题目选择要求紧扣发酵工程相关教学内容和生产实际。

2、要充分查阅相关背景资料，了解相关内容的前沿进展及存在问题。

3、设计说明书应字迹清楚文字通顺，并附有各项设计成果表，摘引其他书籍或杂志的材料必须注明出处。

4、实验方案要切合实际，严密合理6、设计结束后，以个人为单位提交设计说明书一份（后附流程图）。

学生应完成的工作：1、在老师的指导下确定设计题目。

2、学生查阅相关文献和资料制定实验路线，并有指导老师检查实验路线的合理性和可操作性。

3、学生在实验室完成既定方案。

4、完成课程设计说明书的初稿，经过指导老师的帮助修改，最后定稿。

参考文献阅读：[1]李寅等著，高细胞密度发酵技术[M]，化学工业出版社，2006-10-01，230-280[2]陈思如，萧熙佩酵母生物化学[M]，济南：山东科学技术出版社，1990年[ 3 ] ( 日) 山根恒夫( 周斌译) , 生化反应工程( 第二版)[M] , 西安: 西安大学出版社, 1992: 243[4]Craig. T.B. and Trotter S G Intern. Symp. SCP. A lgiers A lgoria, O ct, 1983:17-20[5]陈洪章，李佐虎，酵母菌的高密度发酵[J]，工业微生物，1998-28-1工作计划：2013.5.11分组并确认指导老师，在老师指导下查阅文献，确定题目。

2013.5.12----2013.5.13 进行理论试讲阶段，确定实验路线，然后确定实验方案。

2013.5.14----2013.5.17 进行实验操作和书写设计说明书。