骨髓间充质干细胞培养
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骨髓间充质干细胞(BMSCs)培养以及成脂、成骨诱导分化一,C57小鼠BMSCs原代培养1,实验前准备好相关手术器械,培养器材及相关试剂PBS 平衡缓冲液、10%FBS,IMDM培养基。
2,脱颈法处死C57小鼠,在75%乙醇中浸泡5min,转移至超净工作台中,无菌条件下分离出小鼠的长骨(股骨和胫骨),浸泡于PBS溶液中。
3,对股骨和胫骨进行深层次解剖,去除附着的肌肉组织,剪掉长骨两端的干骺端,用10%FBS,IMDM培养基反复冲洗骨髓腔,直至骨髓腔发白,收集洗涤液,用移液枪轻轻吹散分离为单个细胞。
4,细胞接种于六孔板中培养,轻微摇匀,使细胞在孔中均匀分布,放置于37℃、5%CO2培养箱中静置培养,培养期间不要移动六孔板,使BMSCs充分贴壁。
5,培养48h后换液,用预热的PBS缓冲液轻轻洗涤细胞2次,添加新鲜培养基,之后每隔48h换液1次。
原代培养6-7d 后细胞铺满80%(图1),可进行传代培养。
图1:BMSCs原代培养6-7d二,BMSCs成脂诱导分化BMSCs铺皿,细胞融合达80%以上后,弃去原培养基,添加成脂诱导培养基(IMDM中加入10%FBS,10μg/ml胰岛素,1μM 地塞米松,0.5mMIBMX,0.1mM吲哚美辛)。
3d换液1次,分化12d。
待脂滴形成后进行油红O染色,PBS缓冲液清洗3次,10%中性甲醛固定20min,再用PBS缓冲液清洗2次,油红O染液浸染30min,PBS缓冲液清洗2次,苏木素染液浸染1min,弃去染液,倒置显微镜下观察拍照。
成脂诱导分化过程中发现在诱导5d时,细胞形态开始变圆并大量脱落,部分细胞中出现细小脂滴(图2)。
图2:BMSCs成脂诱导5d三,BMSCs成骨诱导分化BMSCs铺皿,细胞融合达80%以上后,弃去原培养基,添加成骨诱导培养基(IMDM中加入10%FBS,5μg/ml胰岛素,0.1μM 地塞米松,0.2mM维生素C和10mMβ-甘油磷酸盐)。
骨髓来源间充质干细胞培养上清液减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤许欣婷;董明清;胡美;徐敦全;李志超;吴昌归【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2014(030)002【摘要】目的:观察经尾静脉输注骨髓间充质干细胞培养上清液(MSCs CdM)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤的治疗作用及其机制.方法:采用全骨髓培养法分离纯化骨髓间充质干细胞,传至第3代时观察细胞形态,流式细胞术检测细胞表面标志,并且收集上清液用超滤离心管进行离心.30只BALB/c小鼠随机分为对照组、LPS 模型组和MSCs CdM治疗组.对照组腹腔内注射生理盐水(0.01 mL/g),LPS组和MSCs CdM治疗组腹腔内注射LPS(5 mg/kg,0.01 mL/g)制备急性肺损伤模型.造模1h后经尾静脉输注MSCs CdM(MSCs CdM治疗组)或生理盐水(LPS组或对照组)300 μL.6h后处死小鼠,留取标本检测肺组织病理形态学、肺组织湿干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量、血清及BALF中细胞因子水平和肺组织中髓过氧化物酶(MPO)的活性.结果:与对照组比较,LPS处理后肺组织病理损伤严重,BALF中蛋白、血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)含量、肺组织中MPO活性及肺组织湿干重比均显著升高.与LPS组比较,MSCs CdM治疗组肺组织病理损伤程度减轻,BALF中蛋白、血清TNF-α和IL-6含量、肺组织中MPO活性及肺组织湿干重比均显著降低,而BALF中白细胞介素10 (IL-10)和角质细胞生长因子(KGF)水平显著高于LPS组和对照组.结论:骨髓间充质干细胞培养上清液可有效减轻LPS诱导的急性肺损伤,其作用机制可能与其调节肺部TNF-α、IL-6、IL-10和KGF的水平有关.【总页数】5页(P286-290)【作者】许欣婷;董明清;胡美;徐敦全;李志超;吴昌归【作者单位】第四军医大学西京医院呼吸与危重症医学科,陕西西安710038;第四军医大学病理和病理生理教研室,陕西西安710038;第四军医大学西京医院呼吸与危重症医学科,陕西西安710038;第四军医大学病理和病理生理教研室,陕西西安710038;第四军医大学病理和病理生理教研室,陕西西安710038;第四军医大学西京医院呼吸与危重症医学科,陕西西安710038【正文语种】中文【中图分类】R363.2+2【相关文献】1.移植骨髓间充质干细胞减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤 [J], 孙磊;王小明;斯琴;于晓红;林宇;邱劲;郭恒怡;吴其夏2.骨髓间充质干细胞对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠的早期治疗作用 [J], 邰文琳;董昭兴;张丹丹;王殿华3.金桔精油通过抑制p38MAPK和NF-κB信号通路减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤 [J], 陈昱晓;王娜;徐李玲;赵国强;檀雨钊;蒋伟哲;付书婕4.白藜芦醇减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤 [J], 粟青;李文浩;朱爱萍;曾晓凤;陈磊;刘佳贝;孙国瑛5.基于Nrf2通路探讨阿里红三萜酸减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的作用 [J], 古丽尼歌尔·阿布都米吉提;沙依拜·沙比提;丛媛媛;帕丽达·阿不力孜因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
人骨髓间充质干细胞提取方法
人骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)的提取方法主要有以下几种:
1. 离心沉积法:通过采集骨髓样本后,使用离心机进行离心,将骨髓中的红白细胞分离,并将沉积在离心管底部的间充质干细胞收集。
2. 粘附法:将骨髓样本放入培养皿中,使细胞在培养皿内粘附并扩增,再通过培养基的更换来去除非粘附的细胞,最终收集纯化的间充质干细胞。
3. 感应细胞培养法:将骨髓样本中的间充质细胞进行体外培养,通过特定的培养基和生长因子的添加,促使间充质细胞分化为间充质干细胞。
4. 密度梯度离心法:通过将骨髓样本在密度梯度离心离心离心,将不同密度的细胞分离,并收集到含有骨髓间充质干细胞的层。
这些方法都可以用于提取人骨髓间充质干细胞,具体选择哪种方法取决于具体实验需求和实验室条件。
2024年间充质干细胞无血清培养基市场调研报告1. 引言间充质干细胞(MSCs)是一类起源于骨髓、脂肪组织和多种成体组织的多能干细胞,具有自我更新和多向分化能力。
近年来,MSCs在再生医学领域的应用日益受到关注。
传统的M SCs无血清培养基在维持MSCs生长和扩增方面具有一定限制,因而间充质干细胞无血清培养基应运而生。
本报告旨在对间充质干细胞无血清培养基市场进行调研,分析其发展趋势和市场前景。
2. 市场概述2.1 市场定义间充质干细胞无血清培养基是指用于维持和扩增MSCs的培养基,不含任何血清成分。
2.2 市场规模近年来,随着MSCs的广泛应用,间充质干细胞无血清培养基市场规模不断扩大。
据市场调研数据显示,2019年全球间充质干细胞无血清培养基市场规模达到xx亿美元,并预计未来几年将保持较快增长。
3. 市场动态3.1 驱动因素- MSCs在再生医学领域的广泛应用推动了无血清培养基市场的快速发展。
- 间充质干细胞无血清培养基相比传统培养基优势明显,进一步推动了市场需求。
- 政府在再生医学领域的支持和投资,也为市场提供了发展机遇。
3.2 市场挑战- 研发无血清培养基的技术难度较大,不同供应商之间的制备方法存在差异,影响了市场竞争力。
- 无血清培养基的成本相对较高,制约了其在一些实际应用中的推广。
- 市场上存在一些低质量产品和仿冒产品,给市场竞争环境带来不确定性。
4. 市场分析4.1 产品类型根据不同成分,间充质干细胞无血清培养基可分为动物蛋白源和无动物蛋白源两大类。
无动物蛋白源培养基由于避免了动物蛋白可能引起的感染和免疫反应,逐渐受到更多用户的关注。
4.2 地区分布目前,间充质干细胞无血清培养基市场主要集中在北美、欧洲和亚太地区。
其中,北美地区市场规模最大,主要得益于该地区在再生医学领域的先进研究和广泛应用。
5. 竞争格局5.1 主要厂商目前,全球范围内,间充质干细胞无血清培养基市场的竞争较为激烈。
骨髓间充质干细胞(BMSCs)培养以及成脂、成骨诱导分化一,C57小鼠BMSCs原代培养1,实验前准备好相关手术器械,培养器材及相关试剂PBS 平衡缓冲液、10%FBS,IMDM培养基。
2,脱颈法处死C57小鼠,在75%乙醇中浸泡5min,转移至超净工作台中,无菌条件下分离出小鼠的长骨(股骨和胫骨),浸泡于PBS溶液中。
3,对股骨和胫骨进行深层次解剖,去除附着的肌肉组织,剪掉长骨两端的干骺端,用10%FBS,IMDM培养基反复冲洗骨髓腔,直至骨髓腔发白,收集洗涤液,用移液枪轻轻吹散分离为单个细胞。
4,细胞接种于六孔板中培养,轻微摇匀,使细胞在孔中均匀分布,放置于37℃、5%CO2培养箱中静置培养,培养期间不要移动六孔板,使BMSCs充分贴壁。
5,培养48h后换液,用预热的PBS缓冲液轻轻洗涤细胞2次,添加新鲜培养基,之后每隔48h换液1次。
原代培养6-7d 后细胞铺满80%(图1),可进行传代培养。
图1:BMSCs原代培养6-7d二,BMSCs成脂诱导分化BMSCs铺皿,细胞融合达80%以上后,弃去原培养基,添加成脂诱导培养基(IMDM中加入10%FBS,10μg/ml胰岛素,1μM 地塞米松,0.5mMIBMX,0.1mM吲哚美辛)。
3d换液1次,分化12d。
待脂滴形成后进行油红O染色,PBS缓冲液清洗3次,10%中性甲醛固定20min,再用PBS缓冲液清洗2次,油红O染液浸染30min,PBS缓冲液清洗2次,苏木素染液浸染1min,弃去染液,倒置显微镜下观察拍照。
成脂诱导分化过程中发现在诱导5d时,细胞形态开始变圆并大量脱落,部分细胞中出现细小脂滴(图2)。
图2:BMSCs成脂诱导5d三,BMSCs成骨诱导分化BMSCs铺皿,细胞融合达80%以上后,弃去原培养基,添加成骨诱导培养基(IMDM中加入10%FBS,5μg/ml胰岛素,0.1μM 地塞米松,0.2mM维生素C和10mMβ-甘油磷酸盐)。