土壤微生物生物量的测定方法

一种土壤微生物量磷的测定方法说实话土壤微生物量磷的测定方法这事，我一开始也是瞎摸索。

我试过好多种方法呢。

最初我按照一些资料上说的，直接就想取土样然后进行各种化学试剂的处理，结果发现得到的数据那真是乱七八糟的。

后来我才明白，土样的采集就有很多讲究。

土样采集的时候啊，你得确保所采的土有代表性。

就好比你从一大锅汤里取样，如果只取表面那一点点，肯定不能代表整锅汤的味道对吧。

对于土壤也是这样，不能只从一个小地方采，而是要多点采样混合。

那测量微生物量磷嘛，首先你得把土壤中的微生物从土壤里分离开来。

这就像是把沙子里的金子淘出来一样难。

我开始用的方法比较粗糙，分离出来的微生物量不准，导致最后磷的含量测定也不准确。

这是我失败的一大教训。

后来我发现得用特定的提取液，这个提取液就像一把钥匙，专门用来打开微生物和土壤紧紧相连的那把锁。

提取微生物之后，就要开始对微生物里面的磷进行测定了。

这时候就要用到化学分析方法了。

我一开始不确定是用钼锑抗比色法好呢，还是别的方法。

我先试了钼锑抗比色法，这个方法就像是给磷量身定制的一个小镜子，通过颜色反应可以来确定磷的含量。

但是操作过程中，浓度的把控非常关键。

我刚开始的时候溶液配制老是掌握不好浓度，比色出来的数据就很离谱。

后来经过多次试验才搞对，溶液要配制得特别精准才行。

还有比色的时候，那个仪器也要小心使用。

我发现仪器的清洁度对测定结果影响超级大。

就像你眼睛里进了沙子看东西就会模糊一样，仪器不干净，测出来的数据也是模棱两可的。

而且为了让结果更准确，测定过程得重复个几次取平均值。

不要怕麻烦，我以前就是图快，结果得出错误的结果。

这多次试验求平均的道理就像是你去市场买东西要多问几个商家一样，这样才能得到最准确的价格嘛。

关于土壤微生物量磷的测定方法我还在不断摸索，说不定以后还能找到更好的呢。

土壤微生物量碳测定方式及应用土壤微生物量碳（Soil microbial biomass）不仅对土壤有机质和养分的循环起着主要作用，同时是一个重要活性养分库，直接调控着土壤养分（如氮、磷和硫等）的维持和释放及其植物有效性。

近40年来，土壤微生物生物量的研究已成为土壤学研究热点之一。

由于土壤微生物的碳含量一般是恒定的，因此采用土壤微生物碳(Microbial biomass carbon, Bc)来表示土壤微生物生物量的大小。

测定土壤微生物碳的主要方式为熏蒸培育法（Fumigation-incubation, FI）和熏蒸提取法（Fumigation-extraction, FE）。

熏蒸提取法（FE法）由于熏蒸培育法测定土壤微生物量碳不仅需要较长的时间而且不适合于强酸性土壤、加入新鲜有机底物的土壤和水田土壤。

Voroney (1983)发现熏蒸土壤用0.5mol·L-1K2SO4提取液提取的碳量与生物微生物量有很好的相关性。

Vance等(1987)成立了熏蒸提取法测定土壤微生物碳的大体方式：该方式用0.5mol·L-1K2SO4提取剂（水土比1：4）直接提取熏蒸和不熏蒸土壤，提取液中有机碳含量用重铬酸钾氧化法测定；以熏蒸与不熏蒸土壤提取的有机碳增加量除以转换系数K EC(取值0.38)来计算土壤微生物碳。

Wu等（1990）通过采用熏蒸培育法和熏蒸提取法比较研究，成立了熏蒸提取——碳自动一路法测定土壤微生物碳。

该方式大幅度提高提取液中有机碳的测定速度和测定结果的准确度。

林启美等（1999）对熏蒸提取-重铬酸钾氧化法中提取液的水土比和氧化剂进行了改良，以提高该方式的测定结果的重复性和准确性。

对于熏蒸提取法测定土壤微生物生物碳的转换系数K EC的取值，有很多研究进行了大量的研究。

测定K EC值的实验方式有：直接法（加入培育微生物、用14C底物标记土壤微生物）和间接法（与熏蒸培育法、显微镜观测法、ATP法及底物诱导呼吸法比较）。

土壤可溶性有机氮、硝态氮、铵态氮、微生物量氮最方便最简单的测定方法1.母液制样：称取新鲜土壤（30.0g）于放置烧杯中，加约等于田间持水量60%水在25℃下培养7~15d。

取15.0g土于烧杯，置于真空干燥器中，同时内放一装有用100ml精制氯仿的小烧杯，密封真空干燥器，密封好的真空干燥器连到真空泵上，抽真空至氯仿沸腾5分钟，静置5分钟，再抽滤5分钟，同样操作三次。

干燥器放入25℃培养箱中24小时后，抽真空15-30分钟以除尽土壤吸附的氯仿。

按照土：0.5M K2SO4=1:4(烘干土算，一般就是湿土：0.5M K2SO4=1：2)，加入0.5M K2SO4溶液（未熏蒸为空白直接称取15.0g土，加同样比例0.5M K2SO4溶液）震荡30分钟，过滤。

其中熏蒸后的土壤过滤液为A母液，未熏蒸的土壤过滤液为B母液。

母液要是不及时测定，需立即在-15℃以下保存2.测定可溶性有机氮=可溶性全氮-（铵态氮+硝态氮）要是有流动分析仪器还有TOC的话可以利用A母液测得碳氮减去B母液的碳氮含量根据公式计算得出微生物碳氮，可以用B母液测的铵态氮、硝态氮和可溶性全氮，是很方便的。

以下的是用传统的方法测定以上指标，经过852个土壤样品试验结果还是很好的。

土壤可溶性全氮测定氧化剂:将6g NaOH 和30g K2S2O8溶于蒸馏水中并定容至1L(K2S2O8 比较难溶，在低于60℃得瑟水浴中溶解，高于60℃配置的溶液至其氧化性失效，NaOH制成溶液，致其温度达到常温后与K2S2O8溶液混合定容至1L)测定：移取A母液10ml至消化试管，加入10ml氧化剂，水浴中加热，温度升高到120℃后保持90min，使用紫外分光光度计测定A220和A275，空白需加入1ml氧化剂并同时作水浴处理。

（Tips：农化上母液与氧化剂各取25ml，此处取其比例为1:1。

）标准曲线：0.7218g硝酸钾溶于水中，转入1000ml容量瓶中定容摇匀，制得浓度为100mg/L的氮标准贮存液。

氯仿熏蒸浸提法测定土壤微生物碳氮
采用氯仿熏蒸0.5 mol/L K2SO4浸提法测定土壤微生物量碳、氮。

首先将土样在25℃下密封培养7d 左右，然后称取预处理土样6 份放入烧杯中，将 3 份其置于底部有少量Na OH、200 m L 水和去乙醇氯仿的真空干燥器中，抽真空后保持氯仿沸腾3～5 min，然后，将干燥器移置在黑暗条件下25℃熏蒸土壤24 h，再次抽真空完全去除土壤中的氯仿。

将熏蒸好的土壤转移到200 m L 提取瓶中，加入0.5 mol/L K2SO4浸提液（水∶土质量比为4∶1）。

另外3 份做未熏蒸空白试验，每份重复3 次，分别测定浸提液中的有机碳和全氮含量。

其中浸提液中的可溶性有机碳采用总有机碳分析仪（Phoenix 8000，美国）测定，由熏蒸与未熏蒸土样有机碳的差值除以转换系数，计算得到微生物量碳。

浸提液中土壤可溶性全氮采用碱性过硫酸钾氧化法测定，浸提液中无机氮采用流动分析仪测定，土壤可溶性有机氮是可溶性全氮和无机氮的差值。

熏蒸与未熏蒸土样的全氮的差值除以转换系数，计算得到微生物量氮。

微生物量碳、氮的转换系数为0.45。

土壤的有机质、全氮、全磷、有效磷、速效钾、NO3--N、NH4+-N、pH 值采用常规的土壤农化分析方法测定。