2011微生物与寄生虫检验知识辅导：细菌在普通光学显微镜下的检查

细菌形态与结构检查法-公卫执业医师辅导一、显微镜放大法细菌形体微小，肉眼不能直接看到，必须藉助显微镜放大后才能看到。

普通光学显微镜普通光学显微镜（lightmicroscope）以可见光（日光或灯光）为光源，波长0.4～0.7μm，平均约0.5μm.其分辨率为光波波长的一半，即0.25μm.0.25μm的微粒经油镜放大1000倍后成0.25mm，人的眼睛便能看清。

一般细菌都大于0.25μm，故可用普通光学显微镜予以观察。

电子显微镜电子显微镜（electronmicroscope）是利用电子流代替可见光波，以电磁圈代替放大透镜。

电子波长极短，约为0.005nm，其放大倍数可达数十万倍，能分辨1nm的微粒。

不仅能看清细菌的外形，内部超微结构也可一览无遗。

电子显微镜显示的形象，可投射到荧光屏上，也可照像拍摄。

当前使用的电子显微镜有两类，即透射电子显微镜（transmissionelectronmicroscope，TEM）和扫描电子显微镜（scanningelectronmicroscope，SEM）。

SEM的分辨率一般较TEM 低，但可清楚地显露观察物体的三维立体图像医学|教育网整理。

配合电子显微镜观察使用的标本制备方法有用磷钨酸或钼酸铵作负染色、投影法（shadowing）、超薄切片（ultrathinsection）、冰冻蚀刻法（freezeetching）等。

电子显微镜标本须在真空干燥的状态下检查，故不能观察活的微生物。

此外，尚有暗视野显微镜（darkfieldmicroscope）、相差显微镜（phasecontrastmicroscope）、荧光显微镜（fluorescencemicroscope）和同焦点显微镜（cofocalmicroscope）等，适用于观察不同情况下的细菌形态和（或）结构。

二、染色法细菌体小半透明，经染色后才能观察较清楚。

染色法是染色剂与细菌细胞质的结合。

最常用的染色剂是盐类。

实验三-普通光学显微镜的使用方法及细菌的革兰氏染色法实验三普通光学显微镜的使用及细菌的简单染色、革兰氏染色法生科15.2 周罡201500181104【实验目的】1.复习光学显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。

2.学习并掌握油镜的原理和使用方法。

3.掌握利用显微镜观察不同微生物的基本技能，了解球菌、杆菌、放线菌、酵母、真菌在光学显微镜下的基本形态特征。

4.学习并掌握微生物的制片及简单染色的基本要求。

5.学习并掌握革兰氏染色法。

6.了解革兰氏染色原理。

7.巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。

【实验原理】（一）普通显微镜的基本原理1.基本原理现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来昂达成像，故又称为复式显微镜。

它们包括机械部分和光学部分两部分。

机械部分包括镜座、镜臂、镜筒、载物台、物镜转换器、粗调节螺旋、细调节螺旋、标本夹等。

光学部分包括接目镜、接物镜、反光镜、光圈（虹采）、聚光镜（集光器）等。

显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。

所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。

要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。

显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。

2.油镜微生物学使用的显微镜的物镜通常有低倍镜（10×）、高倍镜（40×）和油镜（100×），油镜是三者中放大倍数最大的，油镜的焦距和工作距离最短，油镜与其他物镜不同的是载玻片与物镜之间隔的不是一层空气（干燥系），而是一层油脂，称为“油浸系”。

谢谢！
36、自己的鞋子，自己知道紧在哪里。——西班牙
37、我们唯一不会改正的缺点是软弱。——拉罗什福科
xiexie! 38、我这个人走得很慢，但是我从不后退。——亚伯拉罕·林肯
39、勿问成功的秘诀为何，且尽全力做你应该做的事吧。——美华纳
40、学而不思则罔，思而不学则பைடு நூலகம்。——孔子
实验一、普通光学显微镜的使用及细 菌形态的观察知识分享
16、自己选择的路、跪着也要把它走 完。 17、一般情况下)不想三年以后的事， 只想现 在的事 。现在 有成就 ，以后 才能更 辉煌。
18、敢于向黑暗宣战的人，心里必须 充满光 明。 19、学习的关键--重复。
20、懦弱的人只会裹足不前，莽撞的 人只能 引为烧 身，只 有真正 勇敢的 人才能 所向披 靡。

细菌的形态学检查常用的方法
细菌的形态学检查是指通过观察细菌的形态、结构和大小来进
行分类和鉴定的方法。

常用的方法包括：
1. 显微镜观察，使用光学显微镜或电子显微镜观察细菌的形态
和结构。

通过放大细菌的形态特征，如形状、大小、细胞壁结构等
来进行分类和鉴定。

2. 染色法，常用的染色方法包括革兰氏染色、折射率染色、吉
姆萨染色等，这些染色方法可以使细菌在显微镜下更清晰地显示出
形态特征，有助于鉴定。

3. 形态培养特性，利用不同的培养基和培养条件，观察细菌在
不同环境下的生长特性和形态变化，如菌落形态、生长速度等。

4. 生化反应，通过观察细菌对不同生化试剂的反应，如碘试验、氧化酶试验等，来鉴定细菌的形态学特征。

5. 分子生物学方法，包括PCR、序列分析等技术，通过对细菌
的基因组进行分析，可以更准确地鉴定细菌的形态学特征。

综上所述，细菌的形态学检查常用的方法包括显微镜观察、染色法、形态培养特性、生化反应和分子生物学方法，这些方法可以从不同角度全面地观察和鉴定细菌的形态学特征。