香椿叶总黄酮对延缓秀丽线虫衰老影响的初步研究
杨文旭 ，王昌禄 ，崔桂友 ，陈勉华 ，王玉荣 ，韩洪杰
（１，扬州大学营养系，扬州２２５００１；２，天津科技大学，天津３００４５７）
摘要：测定秀丽线虫寿命及其产卵量，评价香椿叶总黄酮（Ｔｏｏｎａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ ｌｅａｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ，以下简称
ＴＦ）对线虫寿命和生殖能力的影响。通过考察线虫在压力应激条件下的生存时间，探讨ＴＦ延缓线虫衰老的
作用机理。结果表明，ＴＦ １００ｍｇ／Ｌ能显著延长线虫的平均寿命和最大寿命（Ｐ≤０．００１），对其生殖能力没有
损害。提高线虫的压力应激能力可能是ＴＦ延缓线虫衰老的作用机理。
关键词：秀丽线虫；香椿叶总黄酮；衰老
中图分类号：ＴＳ２０２．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６—２５１３（２０１０）０６—０１４３—０４
Ｓｔｕｄｉｅｓ Ｏｎ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ Ｏｆ ｏｎａ Ｓ『门ｅｎｓ『Ｓ ｌｅａｆ
ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ Ｏｎ ａｎｔｉ—ａｇｉｎｇ ｏｆ Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉ ｅｌｅｇａｎｓ
ＹＡＮＧ Ｗｅｎ．ｘｕ ，ＷＡＮＧ Ｃｈａｎｇ－ｌｕ ，ＣＵＩ Ｇｕｉ－ｙｏｕ ，
ＣＨＥＮ Ｍｉａｎ．ｈｕａ ．ＷＡＮＧ Ｙｕ．ｒｏｎｇ ．Ｈａｎ Ｈｏｎｇ—ｊｉｅ
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，Ｙａｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｚｈｏｕ ２２５００ １；
２．Ｔｉａｎｊｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ ３００４５７）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ｔｈｅ ｌｉｆｅｓｐａｎ ａｎｄ ｅｇｇｓ ｏｆ Ｃａｅｒｔｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｔｏｏｎａ ｓｉｎｅｒ￣ｉｓ ｌｅａｆ
ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｏｎ ｌｉｆｅｓｐａｎ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｃａｐａｃｉｔｙ ｏｆ Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ．Ｔｈｅ ｎｅｍａｔｏｄｅｓ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｔｉｍｅ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｓｔｒｅｓｓ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ
ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ＴＦ ｉｎ ａｎｉｔ——ａｇｉｎｇ ｏｆ Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍｅａｎ ａｎｄ
ｍａｘｉｍｕｍ ｌｉｆｅｓｐａｎ ｏｆ Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ ｅｘｔｅｎｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎ ＴＦ １００ ｍｇ／Ｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ≤０．００１）ｗｉｔｈｏｕｔ ｄａｍａｇｅ ｏｎ ｒｅｐｒｏｄｕｃ—
ｔｉｖｅ ｃａｐａｃｉｔｙ．Ｔｈｅ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ＴＦ ｉｎ ａｎｔｉ—ａｇｉｎｇ ｏｆ Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ ｗａｓ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｐａｃｉｔｙ
ｏｆ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｔｏｏｎａ ｓｉｎｅｎｉｓ ｌｅａｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ；ａｇｉｎｇ
根据联合国界定的人口学标准，我国已经进 入老龄社会，衰老以及由衰老引发的疾病己成为 Ｅｔ趋严重的医学问题和社会难题。阐明衰老机 制、干预衰老进程具有重要的现实意义。香椿为 我国特有的植物资源，是药食兼用的高档保健蔬 菜。香椿叶富含黄酮、多酚和皂苷等化合物，其 中黄酮类化合物含量高于银杏（Ｐ＜０．Ｏ１），多酚 含量与茶叶相当，具有清除体内自由基、抗氧 化、降血糖等功效，因此ＴＦ对于抗衰老保健品
的开发具有一定的研究价值。为评价其抗衰老功
效，本实验引入衰老研究的热点模式生物——秀
丽线虫作为实验动物，利用线虫具有廉价、易饲
养、易同期及寿命短等优点，进行大样本实验，
以抵消个体差异带来的影响，快速评价ＴＦ的抗
衰老作用并探讨其作用机制。
收稿日期：２０１０—０５—２５
基金项目：国家科技部“十一五”科技支撑计划项目（２００６ＢＡＤ２７Ｂ０６—２）；天津市农业科技成果转化与推广项目（０５０２１７０）。
作者简介：杨文旭（１９８４一），女，营养专业硕士研究生。
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Ｃｈｉｎ
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ｌ材料与方法
１．１材料与仪器
Ｅ．ｃｏｌｉ ＯＰ５０、野生型秀丽线虫Ｎ２：北京生命
科学研究所王晓晨实验室惠赠；突变体ＤＡ４６５
（ｅａｔ一２（ａｄ４６５）ＩＩ）：Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ
Ｃｅｎｔｅｒ惠赠；
香椿黄酮：香椿叶采摘自天津科技大学实验
苗圃，香椿黄酮由天津科技大学生物科技术实验
室提取，纯度／＞６０％；
五氟尿嘧啶（ＦＵＤＲ）、胡桃醌：ＳＩＧＭＡ；
ＤＭＳＯ等其他试剂均为国产；
低温生化培养箱：哈尔滨市东联电子；
体式显微镜：ＭＯＴＩＣ。
１．２方法
１．２．１线虫的日常培养
参照Ｂｒｅｎｎｅｒ Ｓ等 ¨的方法，将雌雄同体线虫
饲养于涂布有Ｅ．ｃｏｌｉ ＯＰ５０的线虫标准培养基
（Ｎｅｍａｔｏｄｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｍｅｄｉｕｍ，ＮＧＭ）中，２０℃下培
养。
１．２．２寿命的测定
分为空白组、热量限制（ＣＲ）阳性对照组、
ＴＦ组。参照Ｓｔｉｅｒｎａｇｌｅ Ｔ＿２ 的方法将线虫进行同期
化处理，４８ｈ后挑取一定数量Ｉ４线虫到各组
ＮＧＭ板中，此时计为线虫寿命的第０ｄ。２０ｃｃ培
养，每天探视线虫，记录线虫的存活、死亡和删
失数目。各组培养基中均含有５００￣Ｍ的ＦＵＤＲ
（限制子代幼虫的孵化），其中ＴＦ预先用３０％
ＤＭＳＯ溶解，过滤除菌后加入ＮＧＭ。
１．２．３产卵量的测定
分为空白组和ＴＦ组。同期化处理线虫，将
Ｉ４期单个雌雄同体线虫挑取到两组ＮＧＭ板中，
此时为生殖实验的第１ｄ。每隔２４ｈ将线虫挑出换
到新板中，直至线虫生殖能力丧失。所有产卵板
在２０℃下孵化２ｄ后，虫卵便长成为幼虫，记录
板内幼虫的数量即为产卵量。
１．２．４耐热实验
分为空白组和ＴＦ组。参照Ｋａｍｐｋ６ｔｔｅｒ Ａ
等 的方法，将线虫同期化培养至Ｉ４，挑取一定
数量的线虫到两组实验板中，２０￣Ｃ继续培养，
４８ｈ后将两组实验板转移到３７ｃＩＣ下培养，每隔１ｈ
计数线虫存活、死亡、删失数目。
１．２．５胡桃醌氧化损伤实验
分为空白组和ＴＦ组。参照Ｃａｓｔｒｏ的方法 Ｊ，
将线虫同期化培养至Ｉ４，将一定数量的Ｌ４线虫
挑取到两组实验板（含ＯＰＳ０）中，２０℃继续培
养，７２ｈ后用Ｍ９缓冲液将线虫冲洗下来，分别
放入含有胡桃醌终浓度为２４０ｔｘｍｏＬ的ＮＧＭ（含
ＯＰ５０）中培养，每隔１ｈ计数线虫存活、死亡、
删失数目。
１．２．６统计学方法
实验均重复３次以上。寿命实验取其中一次
进行分析，采用Ｋａｐｌａｎ—Ｍｅｉｅｒ法；其他计量资
料采用ｔ检验分析，以 －４－ｓ表示。由ＳＰＳＳ １３．０
芒１Ｉｊ竞。：ｌ：Ｐ≤０．０５，：ｌ：：｝：Ｐ≤０．０１，丰：ｌ：：ｌ：Ｐ≤
０．００１具有统计学意义。
２结果与讨论
２．１寿命实验
从图１可知，ＣＲ组和ＴＦ １００ｍｇ／Ｌ均能使线
虫生存曲线右移，显著延长线虫的平均寿命、最
大寿命以及中位生存时间（见表１）。
ｄａｙ
图１ ＴＦ及ＣＲ对线虫生存曲线的影响
Ｆｉｇｕｒｅ １ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ＴＦ ａｎｄ ＣＲ ｏｎ
ｓｕｒｖｉｖａｌ ｃｕｒｖｅ ｏｆ Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ
大量实验结果表明采取限制性饮食（ＣＲ）模
型动物，无论是线虫、果蝇、鼠，甚至灵长类，
不仅可以活得更久而且活得更加健康 。突变
体ｅａｔ一２咽部肌肉存在缺陷，吞咽节律较野生型
线虫低，导致食物摄人不足，在寿命实验中常被
作为ＣＲ模型使用 …。寿命实验表明，ＴＦ
１００ｍｇ／Ｌ能显著提高线虫的平均寿命和最大寿
命，效果不及ＣＲ。但因香椿本身具有古老的中
医理论基础和实践基础，加之黄酮类化合物以卓
越的清除自由基效果而著称，因此ＴＦ对于天然
抗衰老药物的开发仍具有独特的研究价值。
表１ ＴＦ及ＣＲ对线虫寿命的影响
Ｔａｂｌｅ １ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ＴＦ ａｎｄ ＣＲ ｏｎ ｌｉｆｅｓｐａｎ ｏｆ Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ
２．２产卵量的测定
如图２所示，ＴＦ组雌雄同体线虫在产卵期内 平均每天的产卵量与正常组没有统计学差异。 ４ ５ ｄａｙ 图２ ＴＦ对线虫产卵量的影响 Ｆｉｇｕｒｅ ２ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ＴＦ ｏｎ ｐｒｏｇｅｒｙ ｏｆ Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ 在众多的衰老理论中，长寿与生殖的关系备 受争议。科学家通过对多种模型生物的研究发现 寿命与生殖能力之间存在着一个叫做“ｔｒａｄｅｏｆｆ” （折中）的机制，即寿命的延长通常是以降低或 丧失生殖能力为代价的。产卵量测定意在评价ＴＦ 在延缓线虫衰老的同时对生殖能力有无损害，以 检测ＴＦ作用是否通过“折中”机制而起到延寿 作用，更为重要的是从开发抗衰老天然药物的角 度而言，药物本身应该以满足不损害机体生殖能 力为前提。本实验表明，ＴＦ对线虫生殖能力没有 损害。 ２．３压力应激能力测试 由图３、４可知，ＴＦ能使线虫生存曲线明显 右移。线虫经ＴＦ预处理４８ｈ后耐热能力有明显 提高，３７℃下的平均生存时间较空白对照组有所 提高。线虫经ＴＦ预处理７２ｈ后，对抗胡桃醌损
伤能力有显著提高，ＴＦ明显降低了线虫对胡桃醌
的敏感性（见表２）。
０ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １Ｏ １１ ｌ２
ｈｏｕｒ
图３ ３７℃下ＴＦ对线虫生存曲线的影响
Ｆｉｇｕｒｅ ３ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ＴＦ ｏｎ ｓｕｒｖｉｖａｌ
ｃｕｒｖｅ ｏｆ Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ ｕｎｄｅｒ ３７℃
０ ｌ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８
ｈｏｕｒ
图４ ＴＦ对胡桃醌氧化损伤型线虫生存曲线影响
Ｆｉｇｕｒｅ ４ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＴＦ ｏｎ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｃｕｒｖｅ ｏｆ
Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ ａｔ ｊｕｇｌｏｎｅ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ
１ ８ ６ ４ ２ Ｏ
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