第9章 凝集反应

凝集反应实验原理和方法（直接凝集反应和间接凝集反应）(1)凝集反应是指细菌、红细胞等颗粒性抗原或表面覆盖抗原的颗粒状物质与相应抗体特异结合，在适量电解质存在的条件下，形成肉眼可见的凝集现象。

一、直接凝集反应颗粒性抗原（如细菌、红细胞等）直接与相应特异性抗体结合，在适量电解质存在条件下，出现肉眼可见的凝集现象，称直接凝集反应。

参加凝集反应的抗原称为凝集原，而抗体则称为凝集素。

直接凝集反应有玻片法和试管法两类。

（一）玻片凝集反应在玻片上进行的直接凝集反应,主要用于抗原的定性分析,数分钟之内便可观察结果,快速、简便。

常用于细菌的分型鉴定,也用于ABO血型的测定。

【实验材料】（ 1）抗原：受检菌液或受检者的血细胞盐水悬液。

（ 2）抗体：用于细菌鉴定的1：20稀释诊断血清。

血型检测的A及B诊断血清。

（ 3）生理盐水、玻片、吸管、接种环。

【实验方法】（ 1）于洁净玻片的一端加诊断血清1滴，另一端加生理盐水1滴作阴性对照。

（ 2）用接种环取待检菌液或血细胞悬液分别涂于诊断血清和生理盐水，混匀。

（ 3）轻摇玻片，静置数分钟，观察结果。

【结果分析】玻片上抗原凝集成肉眼可见的小团块状或絮状凝集物，其周围液体澄清，为阳性反应。

阴性反应和生理盐水对照均不发生凝集，为均匀混浊的乳状液。

【注意事项】细菌鉴定时，特别是肠道菌种的沙门菌属或志贺菌属，原则上先用多价诊断血清检测，如为阳性，再用单价诊断血清进行分群或定型。

血型测定时，室温需保持在 20oC左右，若低于10oC，易出现冷凝集现象而造成假阳性的错误诊断。

（二）试管凝集反应是用定量的颗粒性抗原悬液与一系列倍比稀释的待检血清在试管中进行的凝集反应，根据试验结果判定待检血清中有无相应抗体及其效价，对血清中抗体进行半定量分析。

此法目前仍常用于某些病原微生物感染的免疫学诊断，例如，诊断伤寒和副伤寒的肥达氏（ Widal test）反应，诊断斑疹伤寒的外—裴氏反应（weil-felix test）。

2. 方法：对倍稀释法
0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml
0.5ml
不加血清 弃去
1 1:40
2 1:80
3
4
5
6 1:1280
7 control
1:160 1:320 1:640
标记
加NS
加血清 倍比稀释
加菌液 从第7管起
混匀
反应18－24h
0.5ml
0.5ml 1:10血清
Blood type antigen antibody
A
B
O
AB
A anti-B
B anti-A
－ anti-A, anti-B
A,B －
－ 效价：出现50％凝集（部分凝集:++)血清 最高稀释度为效价。
抗体 O H PA PB 1:40 ++++ ++++ 1:80 +++ +++ 1:160 ++ ++ 1:320 + ++ 效价
• 结果解释
– 正常参考值:
• H • O、PA、PB <1:160 <1:80
– 动态观察:在病程中逐周复查,若效价递增或 恢复期效价比初次高4倍以上说明有诊断意 义。
0.5ml
3. 操作注意点
1). 倍比稀释 2). 吸头勿混, 注意吹打 3). 加菌液从第7管加起 4). 所有抗原完成后方摇匀 5). 观察结果勿振摇。
4. 结果观察
1. 观察勿振摇。 2. 从对照管观察起，后观察试验管。 3. 效价判定

1：20 1：40 1：80 1：160 1：320
每组分为两小组，第二组……


1、取洁净试管6支，依次标明号码。 2、于1—6管内加生理盐水0.5毫升。 3、再用吸管取1：160伤寒杆菌免疫血清0.5毫升加入第一管， 充分混合均匀后（吸上吸下三次），吸出0.5毫升血清（1：10） 移入第二管，然后依次稀释至第五管，最后弃去0.5毫升，血 清稀释度依次为1：320、1：640、1：1280、1：2560及1： 5120。第六管为抗原对照（不加血清）。 弃去
例如： 管号 1 2 最后稀释度 1：40 1：80 凝集程度 ++++ ++++ 效价为1：320。
3 1：160 +++
4 5 6 1：320 1：640 ++ +
-
一定条件下
细胞凝集
间接凝集抑制试验
此次试验内容

试管凝集反应（肥达反应）
实验材料

伤寒杆菌菌液 伤寒杆菌免疫血清 生理盐水，吸管，试管等
操作方法（每组分为两小组，第一组……）

1、取洁净试管6支，依次标明号码。 2、第一管加入生理盐水 0.9毫升， 于2—6管内加生理盐水0.5毫升。
试管凝集实验（动物采血）
实验内容：
1. 动物取血 2. 试管凝集反应（Agglutination）
实验原理 凝集反应(agglutination)
颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体 结合 →肉眼可见的凝集物 * 方法 直接凝集、间接凝集、间接凝集抑制试验
直接凝集试验－
原理：细胞(组织细胞、细菌）＋相应抗体

凝集反应规律
凝集反应是一种特殊的反应类型，其中颗粒或分子在互相吸引的力作用下聚合成较大的聚集体。

凝集反应的规律受到多种因素的影响，包括颗粒大小、浓度、电荷、分子结构和温度等。

此外，凝集反应还受到化学反应的影响，这些反应可以促进或抑制凝集过程。

在生物学中，凝集反应在免疫学、细胞生物学和病理学等领域中具有重要的应用价值。

我们需要进一步研究凝集反应的规律，以便更好地理解其在自然界和生物学领域中的作用。

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