实验9细胞凝集反应及细胞吞噬

《细胞生物学实验》教学大纲课程名称：细胞生物学实验课程编号：12030037课程类别：专业基础课/必修课学时/学分： 24/0.75开设学期：第四学期说明一、课程性质细胞生物学实验是生物科学和生物工程专业一门重要的必修基础课程，在生命学科的本科教学中有着十分重要的地位。

通过实验，不仅使学生加深对细胞生物学理论知识的理解和认证，同时通过对细胞生命现象的观察和亲手操作，使学生获得有关细胞生命活动的感性知识，有效地提高理论课的教学效果，并使学生掌握细胞生物学实验的基本原理、方法和技能，培养和提高学生实验设计和应用各种实验技术的能力，培养和训练学生的创新意识和创新能力，培养严谨的科学态度和实事求是的作风，提高发现问题、分析问题和解决问题的能力，为今后独立从事教学或科学研究打下坚实的基础。

二、教学目标通过细胞生物学实验，使学生们更加牢固地掌握细胞生物学基本知识和基本理论，对细胞的结构和功能有全面、真实的认识，使学生们掌握细胞生物学的基本实验方法和技能。

三、学时分配表序号实验项目实验时数实验类型内容与要求小计实验1细胞膜的渗透性及细胞凝集反应4设计性了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度，掌握细胞凝集反应的实验方法及细胞凝集的原理实验2叶绿体的分离与荧光观察3验证性掌握荧光显微镜的原理和使用方法；观察叶绿体的自发荧光与次生荧光；通过对植物叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法实验3植物细胞骨架的观察4验证性掌握光学显微镜观察植物细胞骨架的原理和方法实验4鸡血细胞的体外融合6综合性了解PEG诱导细胞融合的基本原理，通过PEG诱导鸡红细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合技术实验5巨噬细胞吞噬现象的观察7综合性通过对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞的活动观察，加深理解细胞吞噬作用的过程和意义；掌握小白鼠腹腔注射给药方法和颈椎脱臼处死法合计24四、实验方法与要求建议本课程采用传统的实验教学方法，2人一组操作，结合多媒体、小组讨论与集体讨论、实验设计、教学录像、细胞生物学小知识和小技巧介绍等多种教学手段，帮助学生通过本课程的学习全面地掌握细胞生物学的基本实验方法与技能以及实验设计的思路，以提高学生从事教学和科学研究的综合素质。

一、实验目的1. 掌握凝集实验的基本原理和方法，了解其应用领域。

2. 学习吞噬实验的操作步骤，观察吞噬细胞的功能。

二、实验原理1. 凝集实验：凝集实验是利用抗原与抗体特异性结合，形成大分子复合物，从而引起颗粒性抗原聚集的现象。

凝集反应分为直接凝集反应和间接凝集反应。

直接凝集反应是指颗粒性抗原与相应抗体直接结合而出现的凝集现象；间接凝集反应是指将可溶性抗原预先吸附于一种与免疫无关的颗粒性载体表面，然后与相应的抗体结合，出现凝集现象。

2. 吞噬实验：吞噬实验是研究吞噬细胞吞噬作用的一种方法。

吞噬细胞受抗原刺激后活化，可使吞噬功能明显增强。

实验中，通过观察吞噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，可以判断吞噬细胞的杀伤能力，间接测定机体的非特异性免疫水平。

三、实验材料1. 实验仪器：显微镜、载玻片、滴管、离心机等。

2. 实验试剂：鸡红细胞、鸡血清、抗体、生理盐水、0.85%NaCl溶液、玻片凝集试剂等。

四、实验方法1. 凝集实验：（1）将鸡红细胞用生理盐水洗涤三次，去除杂质。

（2）将洗涤后的鸡红细胞加入抗体中，充分混合。

（3）观察鸡红细胞是否出现凝集现象。

2. 吞噬实验：（1）实验前3小时，小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。

（2）实验时，每只小鼠注射鸡红细胞1ml，轻柔腹部，使其在腹腔中分布均匀，利于吞噬。

（3）30分钟后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管。

（4）用载玻片轻擦腹腔，使腹腔液均匀涂于载玻片上。

（5）滴一滴0.03%冷亚甲蓝溶液，盖上盖玻片。

（6）高倍镜下进行观察，计数吞噬红细胞的百分数，及观察吞噬细胞内鸡红细胞的数目。

五、实验结果与分析1. 凝集实验结果：鸡红细胞与抗体结合后，出现明显的凝集现象。

2. 吞噬实验结果：（1）在显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象。

（2）计算吞噬红细胞的百分数和吞噬指数。

（3）分析吞噬细胞的功能及其与机体非特异性免疫水平的关系。

六、实验结论1. 凝集实验结果表明，鸡红细胞与抗体结合后，出现明显的凝集现象，验证了凝集实验的基本原理。

《医学免疫学与病原生物学》实验报告
一、免疫学部分
实验一
三、血清中Ig的测定
1.原理
2.结果
四、中性粒细胞的吞噬作用（画图）淋巴细胞转化试验
五、双向琼脂扩散试验
1.原理
2.结果与分析（画图）
六、酶联免疫吸附试验
1.原理
2.结果与分析
七、豚鼠过敏性休克试验
1.原理
2.结果与分析
八、常用生物制品的种类
1.死疫苗
2.活疫苗
3.血清制品
4.其它
二、微生物学部分
一、革兰染色结果
混合菌液（1000X）
葡萄球菌：革兰染色性
大肠杆菌：革兰染色性
二、观察细菌的基本形态
葡萄球菌链球菌
1000X 1000X
痢疾杆菌霍乱弧菌
1000X 1000X
三、观察细菌的特殊结构
1000X 1000X
伤寒杆菌的鞭毛
1000X。

免疫学实验整理一、凝集试验、吞噬试验（一）凝集试验1、直接凝集反应（ABO血型鉴定）2、间接凝集反应（类风湿因子测定）3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验（二）吞噬试验（示教）1、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬）2、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬）名解：1.免疫学检测技术：利用免疫学原理来检测抗原、免疫分子（抗体、补体、细胞因子和粘附分子等）及免疫细胞等免疫学研究对象的实验过程。

如凝集反应可用于检测抗原抗体，吞噬十堰可用于检测免疫细胞等。

2.凝集反应（agglutination reaction）:在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。

3.直接凝集反应（direct agglutination reaction）:细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。

4.间接凝集反应（indirect agglutination reaction）：将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。

5.协同凝集实验（coagglutination）：利用金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）能与人和多种哺乳动物IgG的Fc段结合而不影响其Fab段功能的特性，将已知的特异性抗体吸附于金黄色葡萄球菌上，与相应的抗原发生的凝集反应即为协同凝集试验。

6.滴度（titer）、效价：The maximum dilution that gives obviously visible agglutination (++) is called the titer.实验及注意点：1、检测抗原抗体的基本原则：根据抗原抗体结合反应的高度特异性，用已知抗体（抗原）检测未知抗原（抗体），有现象则说明有相应抗原，无现象则无相应抗原。

2、直接凝集反应（ABO血型鉴定）：若加A抗体出现凝集说明血清中有A抗原，为A型血。

实验一细胞凝集反应实验目的：1.了解细胞膜表面结构。

2.掌握凝集素促使细胞凝集的原理。

3.学习研究细胞凝集反应的方法。

实验原理：凝集素是一类含糖、并能与糖专一结合的蛋白质，被认为与糖的运输、储存物质的积累、细胞间的互作以及细胞分裂的调控有关。

凝集素使细胞凝集是因为它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞发生凝集。

大多数凝集素存在于储藏器官中，作为一种氮源；对某些植物而言，受到危害时，凝集素作为一种防御蛋白发挥作用。

凝集素与糖结合的活性及专一性决定其功能。

实验材料及试剂：1.马铃薯块茎2.显微镜、粗天平、载玻片、滴管2支、离心管2支3.PBS缓冲液4.2%的红细胞液实验步骤：1.制备鸡血悬液：取1ml鸡血于离心管中，加食盐水至5ml，用滴管吹打均匀，平衡后放入离心机中，2000r/min来离心5min。

离心完毕后，将上清液倾倒再加食盐水至5ml，2000r/min，离心5分钟。

连续重复5次，最后得到的鸡血细胞再加入食盐水至5ml，即为2%的红细胞悬液。

2.取两个玻片，分别向两玻片上滴加一滴鸡血。

向其中一个鸡血玻片上再滴加一滴土豆凝集素，另一玻片不加，作为对照。

然后同时向两玻片滴加一滴PBS缓冲液，静置5min，观察血细胞的凝集反应。

注意事项：1.注意控制加入双凹片孔中的液体的量，以免双凹片的2个孔中液体混合。

2.样品加到孔中后，摇一下双凹片，并进行计时。

实验二叶绿体的分离与荧光现象实验目的:1.通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法。

2.观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟悉荧光显微镜的使用方法。

实验原理：将组织匀浆悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞的常用方法。

由于沉降系数和所受到的离心力的不同以及自身性质的不同，可用不同的转速来分离出不同的细胞器。

荧光显微技术是利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行观测的一种技术。

某些物质在一定短波长的光的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时就能在极端的时间内射出比照射光波长更长的光，这种光称为荧光。

免疫学实验指导生命科学与工程学院生物工程、生物技术、动物医学专业用冯玉萍[分组]：4人/组，实验用动物、器材以每组需要量设计[班级] 2006生物工程、生物技术[学生人数]：65人/58人。

分16组/15组[时间] 2008年3月—2008年7月两周一次4学时。

目录实验一、免疫学实验动物的一般操作实验二、实验动物免疫器官、免疫细胞观察实验三、实验动物的采血方法、动物血清及红细胞的制备方法实验四、淋巴细胞别离与E玫瑰花环形成试验实验五、IgG的别离和纯化实验六、玻片凝集试验(ABO血型鉴定)实验七、环状沉淀试验实验八、琼脂扩散试验〔单向〕实验九、巨噬细胞吞噬功能试验实验十、白细胞吞噬试验实验一、免疫学实验动物的一般操作[实验原理]实验动物的基本操作是免疫学实验的基础,抗原对动物机体的免疫效果，通过实验动物进行验证，因此必须掌握实验动物的一般操作技术。

[目的要求]1、实验材料的准备〔棉球、注射器的准备与消毒〕〔演示〕2、了解免疫学实验常用动物的生物学特性、用途及其健康要求。

[自学]3、学习实验动物的编号、抓取、固定和几种不同的注射途径方法。

4、练习对小白鼠给药的几种不同途径的注射方法。

5、练习小白鼠的取血方法。

6、学习血涂片的制作及染色；观察动物血液中有形成分的形态结构特点。

[实验动物]小白鼠，2只/组，共需18 ~ 20只。

[试剂]⑴3%来苏儿或3%石炭酸100~150 ml/组；⑵无菌生理盐水100~150ml/组；磷酸盐缓冲液20~50ml/组〔带滴管、染色用〕。

⑶3 ~ 5% 苦味酸20~50ml/组〔带滴管,编号用〕；⑷5%品红20ml~50ml/组〔带滴管，编号用〕；⑸瑞特氏〔wright‘s〕染色液50ml/组〔带滴管，染色用〕；*抗凝剂一支[器材]⑴1ml注射器及针头2支/组；⑵碘酒棉球、酒精棉球、无菌干棉球各适量；⑶手术剪刀2把/组；镊子2把/组；载玻片、盖玻片各6片/组；⑷毛细吸管2支、50—100ml烧杯1个/组⑸显微镜6台/组[6] 鼠笼1个/组[操作步骤]1、练习小白鼠抓取、编号、皮下注射、皮内注射、腹腔注射的方法。

凝集反应名词解释凝集反应是指一种生物学现象，当两个或更多细胞或颗粒结合在一起形成团块或集群的过程。

这种反应通常发生在生物体的发育和免疫系统中，起着维持细胞结构和功能，以及保护机体免受外部侵害的重要作用。

在细胞发育过程中，凝集反应在胚胎形成、器官建立和组织分化等方面起着至关重要的作用。

在胚胎发育早期，细胞在形成不同器官和组织的过程中会产生凝集反应。

这些反应有助于细胞定位和分化，并且在细胞极化、胞外基质形成和组织分化中发挥重要作用。

在免疫系统中，凝集反应是指当抗原与抗体结合时，形成的复合物会引起免疫细胞的聚集。

这些复合物能够激活细胞介导的免疫应答，如吞噬细胞和细胞毒性T细胞的活化。

这种凝集反应有助于机体识别和清除外来病原体，并激活免疫应答以保护机体免受感染。

凝集反应的产生通常是通过黏附分子在细胞表面或颗粒之间的相互作用来实现的。

这些黏附分子可以是细胞膜上的特定受体，也可以是细胞外基质分子。

黏附分子之间的结合力通过一些力的作用来实现，如范德华力、电荷相互作用力和亲和力等。

当这些相互作用力超过分离力时，细胞或颗粒之间就会发生凝集反应，形成团块或集群。

凝集反应的研究对于理解生物体的发育、免疫和疾病等方面具有重要意义。

通过深入研究凝集反应的机制和调节作用，可以揭示生物体内细胞之间相互作用的分子基础，以及细胞集群形成和分化的调控机制。

此外，可以利用凝集反应来开发新型的治疗策略和诊断方法，如抗体药物和凝集试剂盒等。

总之，凝集反应是指细胞或颗粒结合在一起形成团块或集群的生物学现象。

它在胚胎发育和免疫系统中起着重要作用，有助于维持细胞结构和功能，并保护机体免受外部侵害。

研究凝集反应对于理解生物体的发育、免疫和疾病等方面具有重要意义，可以为新型治疗策略和诊断方法的开发提供参考。