D-半乳糖致衰老模型小鼠皮肤衰老的观察
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西安源森生物试验室: 复方当归提取物对D-半乳糖衰老模型小鼠皮肤抗氧化作用最新调查结果显示, 在含有抗氧化作用化妆品中, 含复方当归提取物产品显著更受女性消费者欢迎, 其原因在于, 当归本身所含有除皱、祛斑和美白功效在传统中医药领域已深受认同。
然而, 复方当归提取物可用作皮肤抗氧化具体原理是什么呢?此次试验, 西安源森生物试验室将针对此疑问, 选择优质含复方当归提取物乳、面膜等多个类型护肤品, 共同作用于D-半乳糖衰老模型小鼠皮肤, 测定其对小鼠皮肤超氧化物和含水量影响。
一、试验目、材料和方法【试验目】: 含复方当归提取物护肤品对皮肤抗氧化作用。
【试验方法】: 测试含复方当归提取物护肤品对D- 半乳糖衰老模型小鼠皮肤羟脯氨酸(Hyp)、超氧化物歧化酶(SOD)以及皮肤含水量影响。
【试验对象】: ICR 3 月龄小鼠30 只。
【试验仪器】: FA/JA型电子天平, DY89-1 型电动玻璃匀浆机, 752N 型紫外分光光度计。
【试验用试剂】: 超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒, 羟脯氨酸(Hyp)试剂盒, 考马斯亮蓝蛋白测试盒, D- 半乳糖。
【受试药品】: 复方当归提取物由西安源森生物制剂中心制备。
DGCC为清洁乳、按摩霜、成型面膜及滋润霜, 由西安源森广州产品研究中心监制。
【试验步骤】:1. 动物分组、造模及给药:将30只小鼠随即分为三组, 每组10只。
正常对照组: 天天小鼠颈背部皮下注射等容量生理盐水;D-半乳糖组: 天天给小鼠颈背部皮下注射12.5% D- 半乳糖(1 000mg/kg);DGCC 组: 天天小鼠颈背部皮下注射12.5% D- 半乳糖(1000mg/kg), 并用剃毛器剃去背部被毛, 暴露大小约2cm×3cm 皮肤, 用DGCC 清洁乳涂抹和清水清洗, 再用DGCC面膜敷贴于暴露部位30min, 然后用DGCC 按摩膏按摩1min, 最终外涂DGCC 滋润霜。
2. 衰老小鼠皮肤SOD 活力和皮肤总羟脯氨酸含量测定:42天后, 将各组小鼠同时处死, 取背部脱毛部位皮肤组织块, 经预冷生理盐水漂洗, 除去皮下脂肪及结缔组织, 用滤纸拭干, 取0.5g置10ml 烧杯, 加预冷生理盐水, 眼科剪剪碎组织块后, 倒入匀浆管中, 加预冷生理盐水至5ml, 用电动玻璃匀浆机制成10%组织匀浆(在冰水中进行), 然后反复冻融3 次, 其完全破碎, 细胞内容物完全游离液相中。
鹿脑小分子活性肽对D-半乳糖所致衰老模型小鼠的保护作用※●陈克成1,4 魏 宇2 丁云录3 陈浩诚4 李庆杰3※※ 刘 爽1※※ (1.吉林金梓源生物科技有限公司 吉林 四平 136000; 2.吉林农业大学中药材学院 吉林 长春 130118; 3.长春中医药大学附属医院 吉林 长春 130021; 4.澳大利亚三叶草健康研究院 澳大利亚 悉尼 NSW 2000)摘要:文章研究了鹿脑小分子活性肽对D-半乳糖所致衰老模型小鼠的保护作用和机制。
试验分为正常对照组、模型对照组、阳性对照药组、鹿脑小分子活性肽设高、中和低3个剂量组,共6组,每组10只小鼠。
通过皮下注射150mg/kg D-半乳糖来构建小鼠衰老的动物模型,同时给予供试药物,试验周期为6周。
以学习记忆行为、脑病理组织观察、脏器指数、脑组织BDNF、NGF含量和BDNF蛋白表达为检测指标,结果发现鹿脑小分子活性肽100mg/kg、50mg/kg和25mg/kg三个剂量组逃避潜伏期显著缩短、穿台次数显著增加,胸腺指数有不同程度增加,脑组织中BDNF含量及蛋白表达明显升高;100mg/kg、50mg/kg两个剂量组小鼠脑组织中NGF含量明显升高,脑、脾脏指数均有不同程度增加,分别与模型对照组比较有显著差异(P<0.01或P<0.05);鹿脑小分子活性肽能明显改善脑组织病理改变。
研究表明鹿脑小分子活性肽具有明显的抗衰老作用,其机制可能与BDNF表达、提高机体免疫能力 有关。
关键词:鹿脑小分子活性肽;D-半乳糖;抗衰老;保护机制衰老伴随着记忆力下降、免疫力低下、细胞凋亡、氧化物水平升高以及脑、胸腺、脾脏、肝、肾等组织器官的退化及病变。
衰老是不可避免的,但减慢衰老的速度是可行的,因此找到具有确切效果且作用机制明确的抗衰老药物是非常重要的。
梅花鹿作为重要的药用动物资源已经被广泛研发和应用,药用及保健价值巨大,但鹿脑除了古人应用并记载其具有补骨髓、补虚劳、益脑等作用外,尚未在现代医药行业中见到对其研究和应用,为更好地利用鹿脑,本文对鹿脑小分子活性多肽进行了初步研究。
参七汤对D-半乳糖致衰老大鼠模型作用的实验研究参七汤对D-半乳糖致衰老大鼠模型作用的实验研究摘要:近年来,衰老成为全球关注的焦点之一。
D-半乳糖作为一种常见的含糖成分,与衰老密切相关。
本研究旨在探究参七汤在D-半乳糖致衰老大鼠模型中的作用,以期提供参七汤在抗衰老领域的临床应用指导。
方法:本实验使用40只雄性SD大鼠,将其随机分为4组:正常对照组(A组)、模型组(B组)、低剂量参七汤处理组(C组)和高剂量参七汤处理组(D组)。
除对照组外,其余3组饮用30% D-半乳糖溶液喂养。
C组和D组分别在D-半乳糖喂养的同时口服低剂量和高剂量的参七汤提取物,实验持续8周。
采用各项生理指标、组织病理学和电镜观察方法来评估参七汤对D-半乳糖诱导的衰老模型的干预效果。
结果:与B组相比,C组和D组大鼠的体质量、皮肤弹性和毛发质量均得到明显改善。
经过血清生化分析,发现参七汤能显著提高血液中超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,并降低丙二醛(MDA)和氢过氧化物(H2O2)的水平。
此外,C组和D组大鼠的心脏、肝脏和肾脏组织病理学改变较少,细胞色素C氧化酶活性也得到增强。
结论:本研究结果表明,在D-半乳糖致衰老大鼠模型中,参七汤可显著改善衰老鼠的生理指标,提高抗氧化酶活性,并抑制氧化应激,从而减轻衰老进程。
这为参七汤在抗衰老领域的临床应用提供了初步实验证据。
然而,进一步研究仍然需进行,以明确其具体的分子机制和剂量效应综上所述,本研究结果表明,在D-半乳糖诱导的衰老大鼠模型中,口服参七汤能有效改善生理指标,提高抗氧化酶活性,并抑制氧化应激反应,从而减轻衰老进程。
这些发现为参七汤在抗衰老领域的临床应用提供了初步实验证据。
然而,进一步研究仍需进行,以明确其具体的分子机制和剂量效应。
2024年注射D―半乳糖致大鼠衰老效应的评价D-半乳糖是一种广泛应用于动物衰老研究的试剂,通过注射D-半乳糖可以诱导实验动物产生类似自然衰老的生理和生化变化。
在本研究中,我们采用了连续注射D-半乳糖的方法,以制造大鼠衰老模型。
具体方法如下:首先,选择健康成年大鼠作为实验对象,并将其随机分为实验组和对照组。
实验组大鼠每天接受一定量的D-半乳糖溶液注射,而对照组则注射等量的生理盐水。
注射时间持续数周至数月不等,以便充分诱导衰老效应。
在注射过程中,我们严格控制了注射剂量和频率,以确保实验结果的可靠性和可重复性。
同时,我们还密切观察了大鼠的生长状况、体重变化以及行为表现,以便及时发现并处理可能出现的异常情况。
二、大鼠衰老指标评估为了评估D-半乳糖注射对大鼠衰老的影响,我们选取了一系列衰老指标进行测定。
这些指标包括体重、毛发状况、皮肤弹性、肌肉力量、运动能力、记忆力和学习能力等。
通过定期测量大鼠的体重,我们发现实验组大鼠的体重增长速度明显减缓,甚至出现了体重下降的情况。
此外,实验组大鼠的毛发变得稀疏、干燥且失去光泽,皮肤弹性也显著下降。
这些外观上的变化表明D-半乳糖注射对大鼠的衰老产生了明显的影响。
在评估肌肉力量和运动能力方面,我们采用了抓握力测试和跑步机测试等方法。
结果显示,实验组大鼠的抓握力和运动能力均较对照组明显降低,表明其肌肉力量和运动能力受到了损害。
在记忆力和学习能力方面,我们使用了迷宫测试和条件性反射等方法进行测定。
实验组大鼠在迷宫测试中的表现较差,需要更长的时间才能完成任务;而在条件性反射测试中,实验组大鼠的反应速度和准确性也低于对照组。
这些结果表明D-半乳糖注射对大鼠的神经系统功能产生了负面影响。
三、组织病理学检查为了更深入地了解D-半乳糖注射对大鼠衰老的影响,我们进行了组织病理学检查。
通过采集大鼠的肝脏、肾脏、心脏和脑组织等样本,我们观察了这些器官的组织结构和细胞形态变化。
结果显示,实验组大鼠的肝脏和肾脏出现了明显的病理变化,如肝细胞脂肪变性、肾小球硬化等。
第6期刘克明,等.D一半乳糖模型鼠与自然衰老鼠的比较研究6872结果2.1细胞免疫功能迟发型变态反应(足趾增厚法)显示,虽然自然衰老组[(O.504±o.04)ram]和D.半乳糖模型组[(0.502±o.06)ram]小鼠攻击前后足趾厚度差值与其对照组[(O.544±o.08)衄]相比有所降低,但差异无显著性(P>0.05)。
2.2体液免疫功能2.2.1小鼠半数溶血值(HC。
)结果由表1可见,自然衰老组小鼠半数溶血值(HC。
)低于正常对照组(P<O.05),D_半乳糖模型组与正常对照组相比差异无显著性。
2.2.2小鼠抗体生成细胞试验结果由表1可见,虽然自然衰老小鼠和D一半乳糖模型小鼠抗体生成细胞数低于正常对照组,但经统计学分析各组间差异均无显著性(P>o.05)。
表1不同衰老小鼠半数溶血值(HCse)和抗体生成细胞结果TaMe1Theresultsofhalfhemolysisconcentrationandplaqueformingcelltestinthreemouseagingmodels(n=10。
王±s)注:与正常对照组比较(1)P<0.052.3不同衰老小鼠NK细胞活性结果自然衰老组和D-半乳糖模型组NK细胞活性[分别为(23.1±4.1)%和(26.2±3.9)%]与正常对照组[(25.9±3.9)%]相比,差异无显著性(P>0.05)。
免疫试验结果显示,自然衰老组体液免疫功能HC。
低于正常对照组(P<0.05)。
D一半乳糖模型组小鼠体液免疫功能较正常对照组降低不明显,提示由年轻鼠给予D一半乳糖造成的衰老模型免疫功能方面与自然衰老可能存在差异。
2.4小鼠肝组织SOD活性和MDA含量由表2可见,自然衰老组和D一半乳糖模型组SOD活性均低于对照组(P<0.01)。
自然衰老组和D一半乳糖模型组MDA含量均高于其对照组(P<0.05)。
天王补心丹延缓衰老作用的实验研究(一)【摘要】目的:验证天王补心丹是否具有延缓衰老的作用。
方法:本实验采取建立D-半乳糖导致小鼠衰老模型,观察天王补心丹对衰老小鼠记忆力,血清超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA),肝组织SOD、MDA的影响。
结果:天王补心丹可以改善衰老小鼠记忆力;提高SOD活性,降低MDA含量。
结论:天王补心丹3个剂量组均可延缓衰老,以中剂量组效果较佳。
【关键词】天王补心丹;延缓衰老;小鼠;实验研究天王补心丹出自于《校注妇人良方》,方由人参、茯苓、玄参、丹参、桔梗等13味药组成,具有滋阴清热,养血安神的作用。
为了探索天王补心丹是否具有延缓衰老作用,本文进行了相关性的实验研究。
1材料与方法1.1动物ICR小白鼠,雌雄各半,体重(20±2)g,由吉林大学实验动物中心提供。
1.2药品和试剂天王补心丹购自于正规药店,并经过严格鉴定,水煎后浓缩,制成0.5g.ml药液,放入4℃冰箱保存备用;维生素E-C颗粒,由无锡嘉菱医药有限公司生产,批号:060302,使用前用蒸馏水振荡配成5%的混悬液;D-半乳糖,由国药集团化学试剂有限公司提供;SOD试剂盒、MDA试剂盒,均购自于南京建成生物研究中心。
1.3仪器水浴恒温振荡器(江苏金坛市实验仪器厂)、低速离心机(北京医用离心机厂)、电动搅拌机(杭州仪表电机厂)、LD型电子秤(沈阳龙腾电子有限公司)、GF-D800型半自动生化分析仪(山东高密彩虹分析仪器有限公司)。
1.4给药与造模〔1-2〕将小鼠随机分为6组,每组10只。
分别为空白组、模型组、维生素E-C组、天王补心丹高、中、低剂量组。
空白组:皮下注射生理盐水0.1ml.10g,造模第11d起灌胃蒸馏水0.1ml.10g;模型组:皮下注射D-半乳糖0.1ml.10g,造模第11d起灌胃蒸馏水0.1ml.10g;维生素E-C组:皮下注射D-半乳糖0.1ml.10g,造模第11d起灌胃维生素E-C颗粒0.1ml.10g;天王补心丹高、中、低剂量组:皮下注射D-半乳糖0.1ml.10g,造模第11d起按不同浓度配比灌胃天王补心丹每天0.1ml.10g。
食品研究与开发F ood Research And Development圆园20年5月第41卷第9期DOI :10.12161/j.issn.1005-6521.2020.09.001基础研究基金项目:国家自然科学基金项目(81603525);广西中医药大学青年创新研究团队项目(2015QT002);广西一流学科建设项目重点课题(2018XK030)作者简介:刘思彤(1991—),女(汉),硕士研究生在读,研究方向:中药药理学。
*通信作者:李宇清(1980—),女(汉),讲师,硕士,研究方向:中药新药开发与管理。
刺梨预防D-半乳糖诱发小鼠皮肤衰老的作用研究刘思彤1,尹日凤1,韦玥吟1,夏星1,李宇清2,*(1.广西中医药大学广西高校中药药理重点实验室,广西南宁530200;2.广西中医药大学公共卫生与管理学院,广西南宁530200)摘要:考察刺梨对D-半乳糖引起的皮肤衰老模型小鼠的保护作用。
实验测定服用刺梨期间动物皮肤水含量,服用结束后皮肤超氧化物歧化酶(superoxide dismutase ,SOD )、丙二醛(malondialdehyde ,MDA )、羟脯氨酸(hydroxyproline ,HYP )及透明质酸(hyaluronic acid ,HA )水平,同时对血清中抗氧化指标进行检测,并以苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining ,HE )观察皮肤组织结构。
结果表明:在慢性注射D-半乳糖诱发皮肤衰老的小鼠模型中,刺梨能显著增加皮肤水含量,增强皮肤中SOD 活力,减少脂质过氧化产物MDA 的积累,增加HYP 和HA 水平,改善衰老皮肤的组织结构。
可见,刺梨能显著减轻D-半乳糖引起的小鼠皮肤衰老。
关键词:刺梨;皮肤衰老;D-半乳糖;抗氧化;小鼠Study on the Effect of Rosa roxburghii Tratt on Preventing Skin Aging Induced by D-galactose in Mice LIU Si-tong 1,YIN Ri-feng 1,WEI Yue-yin 1,XIA Xing 1,LI Yu-qing 2,*(1.Key Laboratory of TCM Pharmacology of Guangxi Education Department ,Guangxi University of ChineseMedicine ,Nanning 530200,Guangxi ,China ;2.School of Public Health and Management ,GuangxiUniversity of Chinese Medicine ,Nanning 530200,Guangxi ,China )Abstract :The protective effect of Rosa roxburghii Tratt on mice skin aging induced by d -galactose was investigated.The moisture content of skin during treatment was observed weekly during experiment.After treatment ,the levels activity of skin superoxide dismutase (SOD ),malondialdehyde (MDA ),hydroxyproline(HYP )and hyaluronic acid (HA )were measured ,meanwhile ,the antioxidant activity in serum was detected ,hematoxylineosin staining (HE )staining was used to observe skin tissue structure.The results showed that ,Rosa roxburghii Tratt significantly increased skin moisture content ,enhanced the activity of SOD in skin tissue ,reduced the accumulation of MDA ,increased the level of HYP and HA ,and improved the tissue structure of aging skin in aging mice induced by D-galactose injection.It could be seen that Rosa roxburghii Tratt could significantly prevent the skin aging induced by D-galactose in mice.Key words :Rosa roxburghii Tratt ;skin aging ;D-galactose ;antioxidant ;mice引文格式:刘思彤,尹日凤,韦玥吟,等.刺梨预防D-半乳糖诱发小鼠皮肤衰老的作用研究[J].食品研究与开发,2020,41(9):1-5LIU Sitong ,IN Rifeng ,WEI Yueyin ,et al.Study on the Effect of Rosa roxburghii Tratt on Preventing Skin Aging In 原duced by D-galactose in Mice[J].Food Research and Development ,2020,41(9):1-51刺梨(Rosa roxburghii Tratt.)为蔷薇科蔷薇属多年生落叶灌木缫丝花的果实,主要出产于我国西南地区及陕西、甘肃、江西、福建、湖北、广西等地,其营养价值高兼有滋补健身之效[1]。
目前,随着老年人口的迅速增加[1],衰老相关疾病发病率也在不断增长[2]。
生物体的衰老过程主要表现为机体组织和细胞中自由基累积。
自由基是正常代谢的中间产物,其反应能力强,可使细胞中多种物质发生氧化,损害生物膜,还可引发DNA 的损伤,进一步诱发肿瘤等疾病。
随着年龄的增长,人体的自由基防御能力减弱。
葡萄籽的提取物葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidin extract,GSPE)具有增强心血管活性、抗氧化、抗衰老等多种生物活性和药理作用[3]。
GSPE用于食品中能有效清除体内自由基,防治与自由基相关的心血管等疾病[4];在化妆品中使用也可使皮肤老化减慢[5]。
研究显示模拟自然衰老过程公认的研究方法是持续注射一定量D-半乳糖[6]。
本研究采用D-半乳糖建立小鼠衰老模型,检测葡萄籽原花青素对衰老小鼠的抗氧化功效,探讨葡萄籽原花青素的抗衰老作用,为其在抗衰老方面的应用提供依据。
1 仪器与材料1.1 仪器AE224电子天平(上海恒平);SG-4054恒温水浴锅(上海硕光);JJ-2高速组织捣碎机(上海净信科技);XSP-9CA光学显微镜(上海光学仪器一厂);Varioskan Flash全波长扫描多功能读数仪(美国Thermo Scientific公司)。
1.2 材料葡萄籽原花青素提取物(GSPE,陕西惠科植物有限公司,纯度大于95 %);D-半乳糖粉剂(上海国药集团,批号:20061025);维生素C注射液[华润双鹤利民药业(济南)有限公司,批号:H20023350];超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒,丙二醛(MDA)检测试剂盒,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒,羟脯氨酸(HYP)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所,生产批号:20190514)。
1.3 实验动物雄性昆明种小鼠60只,20~22 g,购自西安交通大学医学实验动物中心,动物质量合格证号:SCXK(陕)2010-001,动物使用许可证号:SYXK (陕)2018-001。
发酵羊奶对D-半乳糖致衰老模型小鼠皮肤作用的初步探究谷宝祥;祝辉;王凝;魏梦婷;田波【期刊名称】《四川农业大学学报》【年(卷),期】2023(41)1【摘要】【目的】测定酵母菌发酵羊奶的体外总抗氧化能力以及对衰老小鼠皮肤的影响。
【方法】选取健康雌性小鼠40只,随机分成4组,空白对照组,衰老模型组,发酵前对照组,发酵实验组。
除空白对照组外,其余各组每日颈背部皮下注射D-半乳糖,连续42 d建立衰老模型。
造模过程同时对空白对照组与衰老模型组小鼠背部皮肤涂抹无菌水,发酵前对照组涂抹未发酵山羊奶,发酵实验组涂抹发酵后山羊奶。
42 d后测定皮肤组织中的水分含量、丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及羟自由基清除能力。
【结果】与空白对照组比较,衰老模型组小鼠皮肤水分含量、羟自由基清除能力、SOD酶活力均显著降低(P<0.05),MDA含量升高(P<0.05)。
与衰老模型组相比,发酵实验组小鼠皮肤中水分含量、羟自由基清除清除率、SOD酶活力显著升高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。
【结论】发酵羊奶具有一定的延缓皮肤衰老作用。
【总页数】6页(P125-130)【作者】谷宝祥;祝辉;王凝;魏梦婷;田波【作者单位】四川轻化工大学生物工程学院【正文语种】中文【中图分类】Q815【相关文献】1.深海鲣鱼鱼油对D-半乳糖致衰老模型小鼠抗衰老的作用2.草还丹、人参固本丸和二至丸对D-半乳糖\r致衰老模型小鼠抗衰老作用的研究3.富锗金针菇菌丝体对D-半乳糖致衰老模型小鼠抗衰老作用研究4.金水六君煎对D-半乳糖致小鼠皮肤衰老模型作用的实验研究5.蒙药五根油剂对D-半乳糖致亚急性衰老模型小鼠的抗衰老作用研究因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
衰老模型实验方案模型:SAMP系小鼠衰老模型,自然衰老模型,胸腺摘除衰老模型,D-半乳糖致衰老模型,臭氧损伤衰老模型衰老模型建立1.1实验动物与分组选择雄性Wistar 大鼠60 只,3 月龄, 体重200~250 g ;20 月龄雄性大鼠30只,体重500~550 g , 按随机数字表法将60 只青年大鼠和30 只老龄大鼠按造模方法分为:胸腺摘除组、D-半乳糖注射组、臭氧损伤组, 每组20 只青年大鼠10只老龄大鼠。
每法设3 组:青年对照组10只、实验组10 只、老年对照组10 只。
1.2试剂过氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、总抗氧化能力(T-AOC)试剂盒和丙二醛(MDA)试剂盒、D-半乳糖。
血糖及血清胆固醇含量采用HITACHI 全自动生化分析仪(7150)测定。
1.3实验方法1.3.1胸腺摘除法:乙醚麻醉大鼠仰卧固定, 沿胸骨正中线纵行切开皮肤1.0~ 1.5 cm, 用眼科镊子分离皮下组织,再用眼科组织剪从颈部向下沿胸骨正中线纵行剪开胸骨至第2肋间, 暴露胸腺,小心剥离并取出胸腺,然后立即缝合切口并于创口上滴加青连霉素。
继续常规饲养至6 月龄,做耐冻试验:大鼠先在4℃水中游泳 2 min, 然后进入-8℃冰柜中,隔玻璃门观察其完全冻僵的时间;股动脉采血测血清SOD活性、T-AOC、7MDA 含量。
1.3.2 D-半乳糖注射法:实验组腹腔注射D-半乳糖生理盐水溶液500 mg kg·d, 青年对照组与老年对照组注射同体积的生理盐水, 连续56 d。
然后股动脉采血测血糖、血清胆固醇、SOD活性、MDA 含量。
1.3.3臭氧损伤法:臭氧吸入组大鼠放入木制的臭氧发生柜内, 柜内O 3 浓度为 1.9 mg m3, 24 h 照射,大鼠生活其中21 d。
每天取出, 常规给水、饲料、换垫料、及观察大鼠活动情况。
第22天股动脉采血测血清SOD活性、MDA 含量,大鼠称重后处死,将胸腺和脾脏取出用电子天平称重并且计算胸腺指数和脾脏指数。
红芪多糖对D-半乳糖致衰老小鼠抗免疫衰老作用的研究柳春玲;寇宁;张高林;李磊强;庞大勇;程卫东【摘要】目的:研究红芪多糖(hedysamn polysaccharide,HPS)的抗免疫衰老作用.方法:使用清洁级昆明种小鼠,采取D-半乳糖腹腔注射的方法构建亚急性衰老小鼠模型;分为正常对照组,模型对照组,维生素E组和HPS高、中、低剂量组.除正常对照组外,其余各组小鼠连续腹腔注射D-半乳糖(120 μg/g);正常对照组灌胃生理盐水,维生素E组灌胃维生素E溶液(50μg/g),HPS高、中、低剂量组依次灌胃200,100,50 μg/g HPS水溶液.观察小鼠胸腺和脾脏指数、T淋巴细胞增殖能力、T 淋巴细胞亚群的水平,测定小鼠血清IL-2、IFN-γ、IL-4、TNF-α含量.结果:模型对照组小鼠脏器指数、T淋巴细胞增殖能力、T淋巴细胞亚群测定、血清IL-2、IFN-γ、IL-4、TNF-α与正常对照组对比,差别有统计学意义(P<0.01).与模型对照组对比,HPS高、中、低剂量组的胸腺指数和脾脏指数、T淋巴细胞的增殖能力,CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+ CD8+T细胞百分比,CD3+ CD28+T细胞均升高;HPS高、中、低剂量组小鼠血清细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4水平升高,TNF-α水平降低.HPS高、中、低剂量组间诸指标对比,高、中剂量作用明显.结论:HPS具有一定的抗免疫衰老作用,可通过调节T淋巴细胞作用来廷缓衰老,能有效改善亚急性衰老小鼠的细胞免疫和体液免疫功能.【期刊名称】《中医研究》【年(卷),期】2016(029)006【总页数】6页(P63-68)【关键词】红芪多糖;D-半乳糖;衰老小鼠;抗免疫衰老【作者】柳春玲;寇宁;张高林;李磊强;庞大勇;程卫东【作者单位】兰州市中医医院,甘肃兰州730050;兰州大学基础医学院,甘肃兰州730000;兰州大学基础医学院,甘肃兰州730000;兰州大学基础医学院,甘肃兰州730000;兰州大学基础医学院,甘肃兰州730000;兰州大学基础医学院,甘肃兰州730000【正文语种】中文【中图分类】R285.5伴随着人类平均寿命的延长,人口老龄化问题日益成为深刻的社会和医学问题,与衰老相关的疾病呈逐年上升趋势,寻找能够延缓衰老、减少老年疾病发生的药物和方法,具有非常重要的社会价值。
D-半乳糖致衰老模型小鼠皮肤衰老的观察
关键词: 皮肤衰老 半乳糖2008-07-14 00:00 来源:丁香园 点击次数:1741
[摘要] 目的 观察D-半乳糖连续皮下注射对小鼠皮肤衰老指标的影响。方法 3月龄KM雌性
小鼠60只,随机分为空白对照组(注射生理盐水)、D-半乳糖低剂量组(80mg/kg)和D-半乳糖
高剂量组(1000mg/kg),连续每日背部皮下注射42天后,观察小鼠皮肤中与衰老相关的生化指
标及组织病理学变化,并用计算机图像分析系统定量分析。结果 高剂量组小鼠真皮厚度
〔(624.5±48.5)μm〕较对照组〔(839.3±58.4)μm〕显著变薄(P<0.05),胶原纤维减少,排列疏
松,弹力纤维总面积亦显著减少(P<0.05);高剂量组皮肤中超氧化物歧化酶(SOD)活性
〔(131.2±11.5) U/ml〕、羟脯氨酸含量〔(0.57±0.13)μg/mg〕显著低于对照组的〔(178.1±20.7)
U/ml、(0.74±0.17)μg /mg,P<0.05〕,丙二醛(MDA)含量增加〔(9.4±1.5)nmol/g和
(6.8±1.5)nmol/g,P<0.05〕;而低剂量组上述改变则不显著。结论 每日1000mg/kg D-半乳
糖连续皮下注射42天,可导致小鼠皮肤的明显衰老,为抗皮肤衰老研究提供一个简便、稳定
的实验模型。
衰老是生物体在生命周期中随年龄增长而发生的全身组织、器官功能减退和稳态下降的过
程。随着世界人口加速老龄化,抗衰老研究已成为迅速崛起的一门应用科学。若在人体上进
行这一漫长衰老过程的研究及对抗衰老药物进行疗效观察是不易做到的,因此,人们根据衰
老的机制建立了许多动物衰老模型。目前,应用最多的是D-半乳糖所致的亚急性衰老模型,
它可引起心、肝、肾、脑等重要器官的代谢异常,类似人类自然衰老时的表现[1]。我们于2003
年1~6月采用KM雌性小鼠连续皮下注射D-半乳糖,建立小鼠亚急性衰老模型,观察衰老小
鼠皮肤中与衰老相关的生化指标及组织病理学变化,为皮肤抗衰老研究提供实验工具。
材料和方法
一、材料与仪器
1.实验动物:选用3月龄清洁级KM雌性小鼠60只(广东医学院实验动物中心提供),平均体重
(30±2)g,标准饲料饲养。
2.实验仪器:AE-240型电子分析天平(上海Mettler-Toledo仪器有限公司),JB-2型恒温磁力搅
拌器(上海雷磁仪器厂),SHHW21.600三用电热恒温水浴箱子(天津市华北实验仪器有限公
司),DHG-9070型电热恒温鼓风干燥箱子(上海医用恒温设备厂),752型紫外分光光度计(上
海第三分析仪器厂),内切式组织匀浆机(浙西机械厂);55P-72超速离心机(日本Hitacht公司);
计算机图象数字化分析系统(德国LEICA公司)。
3.主要试剂:D-半乳糖(上海试剂二厂);盐酸苄胺(上海试剂厂);硫代巴比妥酸(TBA,美国
Sigma公司);四乙二氧基丙烷(瑞士Fluka公司);L-羟脯氨酸(中科院上海生化所);DTNB(德国
Feinbiochemica公司);超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(南京建成生物科技公司);考马斯亮蓝
G250(瑞士Fluka公司);其余试剂均为市售分析纯。
二、实验方法
1.动物分组、给药及处理:动物随机分为3组:空白对照组、D-半乳糖低剂量组和D-半乳糖高
剂量组,每组20只。对照组:每日背部皮下注射生理盐水0·2 ml。低剂量组:每日背部皮下注
射D-半乳糖80 mg/kg;高剂量组:每日背部皮下注射D-半乳糖1000 mg/kg,注射均按无菌操
作进行。42天后,所有小鼠摘眼球放血处死,立即检测全血中过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过
氧化物酶(GSH-Px)活力;取背部正中皮肤0.5 cm×0.5 cm大小,迅速放入10%中性福尔马林
液中固定,拟作组织切片进行组织形态学观察及定量分析;余背部皮肤取下后迅速冰冻保存,
拟作皮肤组织匀浆及测定皮肤羟脯氨酸之用。
2.10%皮肤匀浆的制备:取脱毛背部皮肤组织0.5 g,经预冷生理盐水漂洗,除去皮下脂肪和其
它结缔组织,滤纸拭干,称重,量筒量取该组织块9倍重量预冷生理盐水,用内切式组织匀浆机
制成10%组织匀浆(在冰水中),反复冻融3次,使细胞完全破碎,内容物全部游离在液相中。
3.全血CAT及GSH-Px活力测定:取新鲜30% H2O2液0.5 ml加蒸馏水50 ml混匀,从中取
出4 ml,加入pH7.0的0.05 mol/L磷酸盐缓冲液26 ml,紫外分光光度计测定其230 nm波长
处1 cm光路A值,调节A值在0.50~0.55之间,作为CAT底物液。25℃条件下,取底物液3 ml,
迅速加入1:50溶血液0.01 ml,230 nm波长处立即测定其A值,1min后再测其A值,同时测
定蛋白质含量。GSH-Px活力测定参照南京建成生物工程公司GSH-Px试剂盒说明书方法
测定。
4.组织切片染色法:参考文献(2)。弹力纤维染色采用Weigert's间苯二酚品红法;胶原纤维染
色采用Mallory-Heidenhain's改良法。
5.皮肤生化指标的测定:参照南京建成生物工程公司SOD试剂盒说明书方法测定SOD活力;
皮肤中丙二醛(MDA)含量测定、皮肤CAT活力测定、皮肤羟脯氨酸含量测定参见文献(3)。
三、统计学处理
数据采用均数±标准差表示,组间比较采用t检验。
结 果
一、全血CAT、GSH-Px活力检测结果
见表1。高剂量组血中CAT、GSH-Px活力较对照组显著降低,差异有显著性(P<0.05);而低
剂量组改变不显著。
二、皮肤组织病理学形态观察及定量分析
见表2及图1~6。与对照组比较,高剂量组小鼠真皮显著变薄,细胞层数减少,真皮胶原纤维排
列疏松;弹力纤维总面积显著减少,且增粗、变性、堆积。计算机图像定量分析,差异均有显著
性,而表皮厚度改变不明显。低剂量组皮肤组织形态学改变不明显。
三、小鼠皮肤生化指标检测结果
与对照组相比,高剂量组小鼠皮肤中SOD活力明显降低,MDA含量显著增多,而皮肤CAT活
力检测结果因各组标准差太大,无统计学意义;低剂量组皮肤组织生化指标改变不明显,见表
3。
讨 论
D-半乳糖所致的亚急性衰老模型系在一定时间内通过皮下连续注射D-半乳糖,使机体细胞内
半乳糖浓度增高,在醛糖还原酶催化下,还原成半乳糖醇,该物质不能在细胞内进一步代谢而
堆积,影响细胞正常渗透压,导致细胞代谢紊乱,自由基堆积,造成细胞损伤〔3〕;又由于糖代谢
在三大物质代谢中具有重要作用,糖代谢的紊乱进而影响到蛋白质、脂质的代谢,也影响到细
胞内抗氧化酶的合成,从而使细胞清除自由基的能力下降,细胞发生一系列退行性变化,呈现
衰老状态[4]。如青年鼠造模后,某些衰老指标检测可达21月龄的自然衰老小鼠的衰老程度
[1,5]
。
本实验结果显示,小鼠每日D-半乳糖(1000mg/kg)连续皮下注射42天可导致小鼠皮肤细胞代
谢紊乱,皮肤SOD活性明显降低,提示皮肤自由基防护功能下降;皮肤MDA含量较对照组显
著增多,表明脂质过氧化产物堆积;而皮肤羟脯氨酸含量较对照减少,表明小鼠皮肤胶原蛋白
含量减少,皮肤趋于老化;皮肤CAT活力检测结果因各组标准差太大,不宜作为皮肤抗衰老指
标。皮肤组织学显示,小鼠皮肤真皮层显著变薄,胶原纤维减少,排列疏松,弹力纤维变性、堆
积,皮肤处于衰老状态,该模型简便易行,结果稳定可靠,可作为抗皮肤衰老研究中皮肤衰老的
实验模型。
参 考 文 献
1 李文彬,韦丰,范明,等.D-半乳糖在小鼠上诱导的拟老化效应.中国药理学与毒理学杂
志,1995,9:93-95.
2 刘培辉,主编.病理染色技术.第2版.北京:人民卫生出版社,2000. 56-61.
3 徐叔云,陈修,主编·药理实验方法学.第3版·北京:人民卫生出版社,2002.1464-1472.
4 Chung JH, Seo JY, Choi HR, et al·Modulation of skin collagen metabolism in aged and
photoaged human skin in vivo.J Invest Dermatol,2001,117:1218-1224.
5 Frolkis VV.Aging, anti-aging, ontogenesis and periods of age
development.Gerontology,1999,45:227-232.