7衰老动物模型

收稿日期:2004212229;　修订日期:2005202204作者简介:孙艳红(19762),女(满族),河北承德人,现在读上海中医药大学2003级博士研究生,硕士学位,主要从事中药药理及毒理研究工作.女性更年期综合征动物模型制备的研究进展孙艳红,金若敏(上海中医药大学中药药理及安全评价实验室,上海　201203)摘要:综述了近年来国内外有关各种更年期模型的制备,从病理模型、病证结合模型、其它相关模型进行分类归纳,并对不同的动物模型进行评价,为进行治疗更年期综合征药物作用的研究提供了不同类型的模型。

关键词:更年期综合征;　动物模型中图分类号:R711.75 文献标识码:A 文章编号:100820805(2005)0720657202Progress of R esearch on Establishing Female Climacteric Syndrome Animal ModelsSUN Y an 2hong ,J IN R uo 2min(Pharm acolog y and S af et y Ev al ution L ab ,S hang hai U ni versit y of T CM ,S hang hai 201203,Chi 2na )Abstract :Several climacteric syndrome models are summarized ,which include pathological models ,symptom and syn 2drome combinated models ,as well as other related models.Different climacteric models are evaluated in order to provide proper model for the research of drugs on climacteric syndrome.K ey w ords :Climacteric syndrome ;　Animal models 更年期综合征(climacteric syndrome ,CS )是指更年期妇女因卵巢的功能衰退,引起机体内分泌失调、免疫力低下和植物神经功能紊乱的症候群。

衰老的生物学指标人的年龄可以分为生理年龄、心理年龄和历法年龄。

历法年龄又叫做年代年龄、时序年龄和实足年龄，也就是说自出生后每过1年则增加1岁。

心理年龄即指不同年龄层人群的心理特点各不相同。

但是，心理年龄目前尚无明确的划分标准。

关于生理年龄，即衰老的生物学指标，国内外已有很多研究，大体可分为解剖学指标、生理学指标和生物化学指标。

1．衰老的解剖学指标衰老的解剖学指标包括身高、坐位身高、体重、指距(两臂展开时两中指端的最大距离)、胸围、呼吸差(用力吸气末和用力呼气末的胸围差)、腰围、皮下脂肪厚度、皮肤弹性、体表面积、脊柱变形程度、皮肤白斑、老年斑、白发数量、脱发程度、甲皱微循环情况、耳垂及人中长度、眼裂大小、角膜老年环情况、角膜和晶体的浑浊程度、鼻毛白化率等。

2．衰老的生理学指标衰老的生理学指标包括视觉、听觉、嗅觉、味觉、皮肤痛温觉、肢体位置觉、震动觉、周围神经的传导速度及反应时间等神经系统检查；肺活量、最大通气量、深吸气量、1秒时间与时间肺活量百分比(即吸气末1秒钟内以最大速度呼出的气体量除以肺活量所得的结果，成年男性为82.14％，女性为84.11％，此数值与年龄呈负相关。

也就是说，年龄越大，此数值越小)、闭合气量(主要反映小气道功能)与肺活量的百分比、功能残气量与肺活量的比等呼吸功能检查；标准肾小球滤过率(与肾血流量密切相关，随着年龄增长逐渐减低，90岁时可减至46％)、标准肾血流量、内生肌酐清除率、血清尿素氮定量检查、血及尿微球蛋白检查、酸负荷试验等肾功能检查；血液流变学，如红细胞压积、全血粘度、血沉等，凝血指标，如血小板聚集性、血栓素A2、纤维蛋白原等，抗凝指标，如前列环素、抗凝血酶Ⅲ等，纤溶指标，如组织纤溶酶原激活物、纤溶酶原激活抑制物等血液系统的检查；外周血酸性非特异性酯酶标记的T淋巴细胞阳性率(青年期最高，中年期显著下降，老年期最低)、刀豆A诱导的T淋巴细胞转化率、外周稳定性花环及活性花环形成试验、血清免球蛋白A、G、M和总补体活性、白细胞介素-2、白细胞介素-3等免疫功能的检测；血清性激素、甲状腺激素、肾上腺皮质激素、胰岛素、生长激素等内分泌功能的检查；骨皮质及骨密度、肌力、闭目单腿直立试验等运动系统的检查等。

衰老动物模型的建立及评估1 衰老学说与衰老动物模型的造模机制1.1 自由基氧化应激学说该学说于上世纪50年代由Harman首次提出。

该学说提出，在人体代谢过程中会产生不稳定的自由基，当机体年龄增加时，自由基产生增多，清除能力下降，造成自由基在机体过量堆积。

过量的自由基对细胞和结缔组织产生有害攻击，导致细胞损伤、组织器官功能紊乱，从而引起衰老[1] 。

1.2线粒体DNA损伤学说Miquel于1980年提出该学说，认为DNA损伤是细胞衰老与损伤的基础[2]。

DNA由于本身结构特点，易被自由基等多种有害物质的袭击，致使其产生突变，从而引起衰老和相关的机体功能减退。

1.3 内分泌功能减退学说神经内分泌系统在维持机体正常功能中有着重要的作用。

该学说认为，随着机体年龄增长，内分泌系统地分泌、调节功能出现紊乱，机体靶器官对于内分泌物质的反应性发生改变，从而产生生理机能的紊乱[3] 。

1.4 免疫功能退化学说正常机体的免疫功能，能够识别异体抗原，而对自身的细胞、组织和器官不产生反应。

当机体的年龄逐渐增加，机体免疫功能逐渐下降，无法有效的清楚外源性抗原或内源性异常抗原如突变的肿瘤细胞。

1.5 糖基化衰老学说该学说认为，糖基化造成的蛋白质交联损伤能够造成结构蛋白的硬化和多种功能酶的功能下降，引起机体代谢水平降低、DNA 损伤加剧、内环境稳态破坏等老化过程，是衰老发生中的重要原因。

2 自发性衰老动物模型2.1 自然衰老动物模型自然衰老动物模型在生理变化上与人类的自然衰老过程最为相近。

目前该模型以哺乳动物为主，最常使用的是大鼠与小鼠，因其价格低廉、寿命短且饲养成本低。

常用的衰老模型动物年龄为：大鼠衰老早期21-26 月龄，衰老晚期30-32 月龄；小鼠12-24 月龄[3] 。

该模型在应用中面临的主要问题是饲养时间长和价格昂贵，且难以保证动物批次相同，影响实验可靠性。

2.2 快速老化小鼠( sensecence accelerated mouse，SAM) 模型该小鼠衰老模型由日本东京大学研究人员经过20 多年培育成功的近交系小鼠群，该种小鼠寿命较短，约为1 年左右。

细胞衰老(cellular senescence,CS)是细胞增殖、分化能力和生理功能逐渐发生衰退的变化过程[1~2]。

细胞衰老研究是衰老机制、抗衰老、抗癌[3]研究的重要内容之一,而构建细胞的衰老模型是研究细胞衰老必不可少的步骤。

根据诱发因素的不同,细胞衰老可以划分成应激诱导早衰(stress-inducedpremature senescence,SIPS)、复制性衰老(replicative senescence,RS)[4~5]、癌基因诱导衰老(oncogene-in-duced senescence,OIS)。

衰老指标对于验证所制备模型成功与否十分重要,指标的选择也同样重要。

目前,不同文献中使用的衰老细胞模型和检测指标都不尽相同。

不同情况下如何选用合适的模型和检测指标尚无统一标准。

本文讨论和分析了现有的一些细胞衰老模型的建立方法,列举了常用的细胞衰老检测指标并总结了其选择方法,以便为相关的研究提供参考。

1检测指标细胞衰老的特征包括细胞形态变化、细胞周期阻滞、氧化应激水平和染色质的改变。

由于没有单一的性状可以独自定义细胞衰老,所以体外衰老表型的确定往往需要多个特征同时验证,有文献建议至少验证3个不同的特征[6]。

具体的检测指标有基于这些特征的通用指标,如:衰老相关的β-半乳糖苷酶(senescence-associated beta-galac-tosidase,SA-β-Gal)活性升高、细胞形态改变、衰老相关蛋白质累积、细胞周期分布改变、DNA 损伤灶产生[7]、衰老相关的分泌表型(senescence-as-sociated secretory phenotype,SASP)[1,8]等;也有基于DOI:10.16605/ki.1007-7847.2021.03.0138细胞衰老检测指标及衰老模型研究进展张凌云,刘缨*(北京中医药大学生命科学学院,中国北京102488)摘要:细胞衰老被认为是一种细胞生长周期停滞状态,它不可逆转。

有关衰老的理论及药物研究进展摘要衰老是自然发生的生理过程，是不可抗拒的，进入衰老阶段往往伴随着各项生理机能的下降及衰老相关疾病的产生,了解衰老是怎样发生的, 对衰老的预防和延缓有很大帮助。

目前关于衰老相关的理论学说及抗衰老药物的研究已取得了一定的进展，本文就诱发衰老的作用机理、延缓衰老天然活性物质及抗衰老研究中动物模型应用的研究进展进行简要综述及总结。

关键词：衰老；动物模型；衰老药物1.引言随着老龄人口的日益增多，我国将逐步进入老龄社会，因此深入的认识衰老、预防衰老相关疾病的发生对提升生活质量具有重要意义。

目前有关衰老形成的理论学说有很多种，包括自由基学说、遗传学说、端粒学说、细胞凋亡学说、免疫衰老学说等。

衰老虽然不可逆、无法避免，但通过有效的治疗可延缓衰老的速度及老年病的发生发展，实现健康。

目前发现多种天然产物和合成药物具有抗衰老作用，为促进人类健康和延缓衰老提供了更多的选择。

2.衰老相关学说2.1自由基学说衰老的自由基氧化应激学说最早由Harman上世纪50年代首次提出了，自由基学说认为衰老和衰老相关的退行疾病都是由于自由基对细胞和结缔组织损伤造成，当机体衰老时，受多方面因素影响体内的自由基增多，而能够清除自由基的物质减少，致使自由基在体内过量积累，造成细胞损伤、组织器官功能异常，从而加速衰老[1]。

经过长时间的发展，自由基氧化应激学说已被广泛接受，已成为公认的的衰老学说之一，许多由老龄化引起的疾病的发病机制都与机体参与氧化应激有关。

2.2端粒学说端粒由DNA序列和蛋白质所构成，其主要作用是可保证染色体结构的完整和稳定，使染色体末端免于被化学修饰或被核酶降解，防止染色体在复制过程中产生丢失、重排或两条染色体的端区融合[2]。

细胞衰老端粒学说是由Herley在1992年提出的，端粒学说认为细胞的衰老与端粒的长度有直接关系，随着细胞的分裂端粒逐渐缩短，当端粒无法缩短，细胞就会停止分裂而衰老死亡，但当细胞中端粒酶的活性恢复时，就可以继续保持细胞端粒的长度，延缓衰老的加剧，能够激活端粒酶使细胞继续复制的细胞非常少。

DOI:10.12280/gjszjk.20200406伏玉洁，孙小燕，张学红△【摘要】由于社会角色转变，女性生育延迟现象明显，女性生育力的降低显著早于全身机体的衰老，卵巢储备一般在35岁开始下降。

而早发性卵巢功能不全是女性在40岁之前卵巢功能衰退的临床综合征，以月经紊乱伴高促性腺激素及低雌激素为特征，影响女性的身心健康。

目前发病机制尚不明确。

早发性卵巢功能不全动物模型是研究的基础，不同模型制备特点不尽相同。

本文就早发性卵巢功能不全研究中，常见啮齿类动物模型，如免疫反应、放化疗、连续超排卵、D-半乳糖诱导和基因编辑等模型的制备方法、特点及判断标准进行综述，为探索早发性卵巢功能不全的发病机制、开发新的治疗方法提供研究基础。

【关键词】早发性卵巢功能不全；模型，动物；化放疗；基因；排卵诱导Animal Model of Premature Ovarian Insufficiency FU Yu-jie,SUN Xiao-yan,ZHANG Xue-hong.The FirstClinical Medical College of Lanzhou University,Lanzhou730000,China(FU Yu-jie,SUN Xiao-yan);ReproductiveMedicine Hospital of The First Hospital of Lanzhou University,Lanzhou730000,China(ZHANG Xue-hong)Corresponding author:ZHANG Xue-hong,E-mail:*****************.cn【Abstract】The childbearing time of woman has been postponed and the willingness decreased,with alarge trend.However,female fertility decrease is earlier than the body physiological senescence,and ovarianreserve remarkably declines from the age of35.Premature ovarian inscufficiency(POI)is a clinical syndrome ofdecreased ovarian function before the age of40,which is characterized by menstrual disorder with highgonadotropin and low estrogen level.It is true that POI affects the physical and mental health of women.Atpresent,the mechanism of POI is not clear.The POI animal model is the basis of the research,and the preparationways of different models are different.This article reviews the preparation methods,characteristics and judgmentcriteria of common rodent animal models of POI,such as the models of immune,chemoradiotherapy,continuousovarian stimulation,D-galactose induction and gene editing.These models provide practical tools for researchers toexplore the pathogenesis of POI and to develop new therapeutic ways.【Keywords】Primary ovarian insufficiency；Model，animal；Chemoradiotherapy；Genes；Ovulation induction（ＪＩｎｔＲｅｐｒｏｄＨｅａｌｔｈ蛐ＦａｍＰｌａｎ，2021，40：131-136）·综述·基金项目：国家自然科学基金（81960273）；兰州大学第一医院院内基金（ldyyyn2018-32）作者单位：730000兰州大学第一临床医学院（优玉洁，孙小燕）；兰州大学第一医院生殖医学专科医院（张学红）通信作者：张学红，E-mail：*****************.cn△审校者卵巢是女性主要的内分泌和生殖器官。

老年痴呆模型(AD)制作因AD病因复杂，故相应的也缺乏严格意义的AD体内外模型，现在国内外大部分体内、外实验只能反映AD某一部分的改变，因而不应称为AD模型。

近年来许多学者正致力于寻找和研究AD动物模型，对AD模型报道也较多，虽然分类各有不同，但大致可分为以下几类（一）胆碱能损伤致痴呆模型1．穹窿-海马伞切断致痴呆大鼠模型该模型是建立在AD认知障碍的胆碱能假说基础上，较好地模拟了AD前脑胆碱能系统的损害，而且造成了神经损伤，可用于观察拟胆碱药物的药效学评价，还可观察药物对神经功能损伤的修复作用，是老年性痴呆临床前药效学研究的重要模型。

2．基底前脑注射鹅蒿蕈氨酸（ibotenic acid ,IBO）致痴呆模型大鼠该模型属兴奋性毒素致基底核损害模型。

通过该模型可反映导致学习记忆功能下降的病理基础-基底前脑胆碱能神经元缺失，因而也是广泛应用的模型。

该类模型的缺陷是不能反映AD发生的病因，不能产生AD的病理学特征，因此不如IBO应用广泛。

3．东莨菪碱致胆碱能损伤拟痴呆小鼠东莨菪碱为M胆碱能受体阻断剂，可阻断乙酰胆碱对M受体的激动作用，造成了学习记忆功能障碍。

但是该模型不直接引起胆碱能神经缺失，而且缺乏研究AD病理生理所必需的特征，如AD是一种进行性不可逆变性，而该模型为化学性模型，恢复快是其局限性，可用于早期药物的筛选。

（二）老化致痴呆模型1．自然衰老动物较常用的是自然衰老大鼠，24月龄以上，另外也有采用老年狗或猴者，该模型是较为接近AD实际病理改变的动物模型，在此基础上观察老年性痴呆治疗药物能较好地反映药物的作用机理和效果。

2．快速老化小鼠（SAM）快速老化小鼠分为快速老化亚系（senescence accelerated mouse/prone,SAM-P）及抗快速老化亚系（senescence accelerated mouse/resistance,SAM-R），它是由日本京都大学首次培育成功，经20多代交配近繁，获得了遗传性与病理表型一致，符合近交系标准的新系列。