三种ELISA法检测猪尿中莱克多巴胺的比较分析
- 格式：pdf
- 大小：140.51 KB
- 文档页数：2
直与饲料２００７年第６ 三种ＥＬＩＳＡ法检测猪尿中莱克多 巴胺的比较分析＊ 孔令勇 彭会建何根山 陈阿明 沈培庆 盛祖勋 （江苏省吴江市畜牧兽医站，江苏吴江２１５２００） 摘要在各种莱克多巴胺检测方法中，适合应用于大批检测样品的是ＥＩ ＩＳＡ方法。但目前市场上的大多 数检测莱克多巴胺的试剂盒对猪尿样的检测会造成假阳性，有的假阳性率达到３３、３７ｏ。本实验用三种不同厂 家的试剂盒对１５份猪尿样进行了检测，通过比较分析得出：对尿样的稀释可以有效的减少阳性的产生，在制备 标准曲线时加入尿样背景也可以减少假阳性的产生。方法Ｃ的添加回收率在６５ 以上，可以比较准确的检测 猪尿中的莱克多巴胺。 关键词莱克多巴胺；猪尿样；ＥＩ ＩＳＡ 用ＥＬＩＳＡ方法检测饲料和尿样中莱克多巴胺 含量，具有快速、灵敏、操作简单和一次检测样品量 大的特点，而且可以直接对尿液、饲料样品进行检 测，但ＥＬＩＳＡ法中的抗原抗体反应易受到干扰物质 的影响，而出现假阳性，且抗体易与莱克多巴胺的多 种代谢产物反应而导致结果与ＨＰＩ Ｃ、ＧＣ ＭＳ检 测不一致。目前，进行检测时，一般先用ＥＬＩＳＡ试 剂盒进行筛检，再用其他方法对阳性样品进行确认， 从而可确保检测结果的可靠性。 本试验用目前市场上常用的三种ＥＬＩＳＡ检测 试剂盒对吴江市区域内规模猪场的猪尿样进行莱克 多巴胺含量检测，以摸索有效、快速的莱克多巴胺检 测方法；探明目前吴江地区猪使用违禁药物的现状。 １材料和方法 １．１样品来源 （１）猪尿样：采自吴江市境内规模猪场的２０份 猪尿样。 （２）莱克多巴胺快速检测试剂盒：试剂盒Ａ由 比利时Ｄｅｃｏｙ公司生产；试剂盒Ｂ由美国ＢＩＯ（）公 司生产；试剂盒Ｃ由美国的Ｃｏｒｎｅｌｌ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｐａｒｋ生产。 １．２试验方法 （１）样品前处理 ＊：本试验为吴江市科技项目（ＷＮ２００５０３）的一部分 收稿日期：２００７一Ｏ４—２Ｏ 方法Ａ（试剂盒Ａ）：尿样３０００ ｇ离心５ ｍｉｎ，取 上清用缓冲液５倍稀释后检测； 方法Ｂ（试剂盒Ｂ）：尿样４０００ ｇ离心５ ｒａｉｎ，取 上清直接检测； 方法Ｃ（试剂盒Ｃ）：尿样３０００ ｇ离心５ ｍｉｎ，取 上清用缓冲液１０倍稀释后检测。 （２）标准液处理 试剂盒Ａ与试剂盒Ｂ标准液直接加样。 试剂盒Ｃ：１份标准液加上１份尿样配比液再 加上８份缓冲液。 （３）实验操作 按照常规ＥＬＩＳＡ操作方法。 （４）统计分析 用标准物浓度的对数为横坐标，以相对吸光度 为纵座标，用Ｅｘｃｅｌ软件作出标准曲线。 相对吸光度一标准品或样品吸光值／阴性对照 标准吸光值ｘ１００ ２结果和分析 ２．１ 结果 根据表２可以看出，方法Ａ检测结果有２个阳 性，方法Ｂ有５个阳性，方法Ｃ没有阳性，Ｌ１、ＩＡ、
Ｌ５、Ｌ９、Ｌ１０送南京用气质联用方法检测，结果全部 维普资讯 http://www.cqvip.com 殖 为阴性。这三种方法中以方法Ｃ最为可行。 表１为方法Ｃ标准样品的测定结果，根据表１ 作出标准曲线（见图１）。猪尿中添加一定量莱克多 巴胺标准品的回收率测定结果（见表２）。猪尿样品 的测量结果（见表３）。根据结果看可见：使用本方 法莱克多巴胺的回收率在６５ 以上；吴江地区的猪 没有饲喂莱克多巴胺。 表１ 方法Ｃ标准样品的测定结果 ０．Ｏ０ ０．５Ｏ ｌ ００ 图１方法Ｃ标准曲线 表２ 猪尿中添加一定量莱克多巴胺标准品方法 Ｃ的检测结果 ２．２分析 （１）由表２可以看出，猪尿中添加莱克多巴胺标 准品的回收率在６５ 以上，因此用方法Ｃ来检测猪 尿中莱克多巴胺含量是可行的。 （２）方法Ｃ样品检测限为５ ｎｇ／ｇ，在５ ｎｇ／ｇ以 上时判定结果为阳性。根据检测结果可以看到，检 …Ｉ¨ １ ＾ｖ』０ ”—Ｌ—ｉ．＾、ｎｔｌ 口ｎ｜—广ｒ— ｔＬ 。ｌ—ｒ『’ｒ 日ＩＩＩ ２００７年第６ 如下结论：猪尿中不含有莱克多巴胺。 表３三种方法检测猪尿样品的结果 （３）尿样前处理十分重要，对尿样进行稀释可以 降低尿样中其他物质的十扰，降低背景影响。 （４）尿样标准液中添加尿样配比液可以十分有 效地降低背景影响，防止假阳性的产生。 （５）还有些方法对尿样中的药物进行抽取，这样 也可以降低背景的干扰，但在抽取过程中不可避免 的会造成药物的损耗，且过程繁锁，耗时耗力。 ３ 结 论 （１）本次测试的猪尿样品中不含莱克多巴胺。 （２）用Ｅ１ ＩＳＡ方法可有效、快速检测猪尿中的 莱克多巴胺的含量。 ｍ∞∞∞∞∞∞∞∞∞∞ 呻吣鲫加∞如如 加ｍ 维普资讯 http://www.cqvip.com
