下载文档原格式
猪肉组织及尿液中莱克多巴胺的快速检测党娟;李平;牛治存;王大敏;何国书;冯才伟【摘要】为实现猪肉组织中莱克多巴胺残留大量样本的快速检测,选用莱克多巴胺酶联免疫吸附(ELISA)、化学发光微粒子免疫(CMIA)检测试剂盒对猪肉、猪肝和尿液3种样品中莱克多巴胺残留量进行检测,并与国家标准检测气相色谱—质谱法(GC-MS)进行比较.结果表明:ELISA、CMIA这2种试剂盒对猪肉、猪肝、尿液样品在莱克多巴胺0.5 μg/kg和1.0 μg/kg 2个水平的平均回收率达90.4％～103.4％,变异系数均小于10％;对猪肉、猪肝和尿液3种样品的最低检测限分别为0.28 μg/kg、0.33 μg/kg和0.12 μg/kg,0.45 μg/kg、0.50 μg/kg和0.20μg/kg;2种试剂盒与GC-MS检测实际样品的判断结果一致,且检测时间短,仅需少量仪器,检测准确度高,适合大批量样品检测.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2016(044)008【总页数】4页(P61-64)【关键词】莱克多巴胺;酶联免疫吸附法;化学发光微粒子免疫法;气相色谱—质谱法【作者】党娟;李平;牛治存;王大敏;何国书;冯才伟【作者单位】贵州勤邦食品安全科学技术有限公司,贵州贵阳550009;贵州勤邦食品安全科学技术有限公司,贵州贵阳550009;贵州勤邦食品安全科学技术有限公司,贵州贵阳550009;贵州勤邦食品安全科学技术有限公司,贵州贵阳550009;贵州勤邦食品安全科学技术有限公司,贵州贵阳550009;北京勤邦生物技术有限公司,北京100012;贵州勤邦食品安全科学技术有限公司,贵州贵阳550009【正文语种】中文【中图分类】S859.84β－兴奋剂是营养重分配剂的一种，是一类结构及功能类似肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙醇胺类衍生物，莱克多巴胺（Ractopamine，RAC）属于β－兴奋剂，可以加快畜禽生长速度，降低酮体脂肪含量，提高瘦肉率［1－3］。
ICS 65.120 B 46备案号：DB33饲料中莱克多巴胺的测定Determination of ractopamine in feedstuffs浙江省质量技术监督局发布前言本标准是在参阅了国内外文献的基础上，根据我国技术发展水平研究制定的，采用了酶联免疫法、高效液相色谱－荧光检测法和气相色谱-质谱法。
本标准由浙江省农业厅提出并归口。
本标准由浙江省畜产品质量安全检测中心、浙江省疾病预防控制中心负责起草，浙江一星集团饲料有限责任公司参与起草。
本标准主要起草人：陈慧华、吴平谷、应永飞、任玉琴、屈健、周文海、陈勇、浦琴华。
饲料中莱克多巴胺的测定1 范围本标准规定了以酶联免疫（ELISA）法、高效液相色谱（HPLC）法和气相色谱－质谱（GC－MS）法检测饲料中莱克多巴胺的方法，规定GC－MS法为仲裁法。
本标准适用于饲料和饲料添加剂中莱克多巴胺的测定。
酶联免疫（ELISA）法为筛选方法，检测限为0.01mg/kg，高效液相色谱（HPLC）法和气相色谱－质谱（GC－MS）法为定量方法，定量限HPLC法为0.1mg/kg、GC－MS法为0.05mg/kg。
线性范围：酶联免疫（ELISA）法为0.005ng-0.05ng，高效液相色谱（HPLC）法为2.5ng-10ng，气相色谱－质谱（GC－MS）法为0.05ng-1.0ng。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699.1 饲料采样方法3 试样制备按GB/T 14699.1抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取约200g，粉碎至过0.45mm孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中备用。
浅谈畜产品中莱克多巴胺的检测方法作者：李政清，聂婉，伍晓红，等来源：《江西饲料》 2016年第3期李政清，聂婉，伍晓红，陈秋玲，王琤韡①（江西科技师范大学生命科学学院南昌330013）摘要：介绍了莱克多巴胺的组成与危害，酶联免疫法（ELISA）、胶体金免疫层析法（GICA）、高效液相色谱法（HPLC）、质谱联用法（MS）、毛细管电泳法（CE）、免疫传感器法和化学发光免疫分析法(CLIA) 等莱克多巴胺的检测方法。
关键词：莱克多巴胺; 检测; 畜产品中图分类号：S816.17 文献标识码：A 文章编号：1008-6137（2016）03-0011-030 引言近年来，畜产品中莱克多巴胺的问题越来越严重，面对日益严重的问题，莱克多巴胺检测方法愈加先进，本文对莱克多巴胺检测技术做一概述，以期对畜产品安全监察有一定的参考作用。
1 莱克多巴胺的组成与危害莱克多巴胺·盐酸又称激动剂，是一种苯酚胺类β-肾上腺素兴奋剂。
其结构以两种非对应异构形式存在，分别为RS、SR、RR和SS。
市场销售的莱克多巴胺为其盐酸盐，是RS、SR、RR、SS 4种异构体的混合物，其中异构体RR是莱克多巴胺主要生物活性异构体。
莱克多巴胺的过量摄取会引起神经兴奋，出现肌肉振颤、恶心、头疼、呕吐等症状。
用量巨大可能引发高血压、心脏病严重的可导致死亡。
本文针对莱克多巴胺的检测方法做简略介绍。
2 莱克多巴胺的检测方法2.1 酶联免疫法（ELISA）目前莱克多巴胺检测应用最广的方法是竞争性ELISA。
随着单克隆抗体技术的发展，莱克多巴胺的检测由传统的多抗体检测试剂盒转型为选工业生产化简单且选择性强的单克隆抗体检测试剂盒，灵敏度可达0.5 ng/mL，并建立了单抗的酶联免疫分析方法，可检测动物组织（肉、肝脏）、尿样、饲料中的莱克多巴胺残留。
竞争ELI?SA分为两种，分别是直接竞争ELISA与间接竞争ELISA，相比之下国内莱克多巴胺ELISA检测试剂盒多为间接竞争ELISA，而国外检测试剂盒多为直接竞争ELISA。
摘要：酶联免疫吸附法是畜产品质量安全检测常用的快检方法之一，能快速、准确、高效地对相关产品进行检测。
伴随着行业的高速发展，人们对畜产品的需求数量及质量要求也在逐步上升，畜产品的食品安全问题越来越受到重视。
但近年来，畜产品中存在着动物疫病、兽药残留及产品非法添加物等相关问题。
因此，使用快速、准确的检测方法筛查畜产品的质量安全至关重要。
本文以酶联免疫吸附法为主要技术导向，深入剖析其原理，同时对该技术在畜产品快检中的应用情况分层介绍，以期为行业相关研究人员提供依据。
关键词：酶联免疫吸附法；畜产品；检测技术；应用酶联免疫吸附法在畜产品快速检测中的应用程俊嘉，陈源，刘冬梅（昌吉州畜产品质量检测中心新疆昌吉831100）收稿日期：2023-06-29作者简介：程俊嘉（1990.06—），男，陕西人，畜牧师，硕士研究生，从事畜产品质量检测工作。
doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2024.05.056科研动态中国是畜产品的生产及消费大国，随着世界经济的全球化发展，标有“中国造”的畜产品对外出口比例逐年上升。
但近年来，随着禽流感病毒、非洲猪瘟病毒等疾病的不断肆虐，动物感染疫病的概率也不断增加，畜产品源头安全无法得到保障。
无独有偶，随着生活环境中外源性化学物质的日益增长，包括畜产品在内的日常消费食品也经常被查出含有违禁的化学药物，如瘦肉精、抗生素、雌雄激素类、抗病毒类药物等[1]，这些化学药物在食品中的滥用会导致兽药残留并引发严重的食品安全问题，对消费者的身心健康也具有较大的影响。
国家食品药品监督管理总局也多次发文要求严厉打击畜产品中滥用药物的问题，因此，对畜产品建立快检方法具有重要意义。
1快速检测技术概述畜产品安全快速检测技术是保障畜产品安全的重要技术，主要特点便是操作简易、速度快、成本低廉，能提高检测效率及工作效率，使得监管机构及相关人员能迅速处理突发事件。
同时，使安全的畜产品及时投入市场，使有害的畜产品中断市场流通并快速召回，以防止给人体和环境带来潜在危害。
抽检发现猪肉制品中检测出莱克多巴胺
近日，食品安全监督抽检中发现个别猪肉制品中检测出莱克多巴胺。
莱克多巴胺究竟是什么物质？食用含有此物质的肉品会对人体
健康造成哪些伤害？国家食药监总局对莱克多巴胺进行科学解读指出，过量摄入莱克多巴胺会出现不同程度中毒反应，在我国禁止使用，要求对检出莱克多巴胺的个别批次产品追根溯源，严格查处，同时提醒消费者从正规渠道购买肉品，关注食药监部门公布的抽检结果。
酶联免疫法测定猪肉中磺胺类药物的残留冯才伟;朱君红;王会玲;罗晓琴;崔廷婷【摘要】The method of enzyme-linked immunosorbent assay （ ELISA ）was used to detect the residues of sulfonamides in pork. The results showed that the sensitivity and detection limit of ELISA were 1 μg/L and 1.5μg/kg, the range of average recovery was 76.1%-101.7%, and the coefficient of variation was 4.6% -11.9% when the blank samples were spiked with 100, 200 Ixg/kg. The judgement of positive and negative were the same when using ELISA and LC-MS/MS to detect the samples. The ELISA method was sensitive with high repeatability and specificity, and suitable for detecting sulfonamides residues in pork.%利用酶联免疫法对猪肉中的磺胺类药物残留进行检测，结果表明：该方法的灵敏度为1μg，L，最低检测限为1．5μg/kg；向空白样本中添加浓度为100、200}xg／kg磺胺标准品时，平均回收率范围为76．1％。
101．7％变异系数为4．6％-11．9％；利用该方法与液相色谱一串联质谱法检测实际样本，其阴、阳性判断结果一致。
该法灵敏准确、重复性好、特异性高，适用于对猪肉中15种磺胺类药物进行多残留检测。
用酶联免疫法检测猪肉中莱克多巴胺含量
摘要用酶联免疫法对某区域内的猪肉进行莱克多巴胺含量检测，结果表明：在低添加水平为0.012 5mg/kg、0.025 0mg/kg、0.050 0 mg/kg、0.100 0mg/kg、1.000 0mg/kg时，均能将莱克多巴胺检出，该法具有灵敏度高、简单、快捷的优点。
关键词猪肉；莱克多巴胺；酶联免疫法
近年来全社会对“瘦肉精”猪非常关注，政府出台了一系列相关法律法规，加大了对生产、销售以及在猪饲料、饮水中添加“瘦肉精”等违禁药物的打击力度，同时对饲料、尿样、内脏中“瘦肉精”残留量的检测水平和检测频率也有了很大的提高，现有证据表明，莱克多巴胺作为“瘦肉精”替代品已在养猪生产中被使用。
对于莱克多巴胺含量的测定，常用的检测方法有分光光度法、液相色谱法和气相色谱法等。
本试验用酶联免疫方法对某区域内的猪肉进行莱克多巴胺含量检测，以摸索有效、快速的莱克多巴胺检测方法。
1材料与方法
1.1材料与试剂
样品来源：采自某区域销售的5份猪肉样品。
莱克多巴胺标准品，纯度99.5%，购自中国药品生物制品检定所；超纯水由Milli-Q liocel纯水器制备；莱克多巴胺标准溶液，质量浓度为10ug/mL，用莱克多巴胺标准品自行配制。
1.2仪器
96孔的酶标板；BP310S电子分析天平，感量为0.001g，Sartorius公司；RJ-TDL-40B离心机，转速为4 000rmp，锡市瑞江分析仪器有限公司；Wellscan MW．3型酶联检测仪，芬兰Labsystems；MS2型漩涡混合器，IKA公司；100μL 可调微量移液器，美国RAININ。
1.3试验方法
1.3.1样品前处理。
加4倍样品抽提缓冲液到适量的样品中，用均质器混匀。
称取1.4g均质样品，4 000rmp在室温（20～25℃）下离心5min，转移0.5mL上清液到管子里，75℃孵育5min，最大速度涡旋1min。
4 000rmp室温离心5min，转移0.2mL上清液到1个新管子里，加5μL样品平衡缓冲液，混合，稀释因子为4。
1.3.2测定。
采用间接ELISA法，操作步骤如下：用碳酸盐缓冲液将包被抗原按合适浓度稀释后包被酶标板（100 μL/孔），于37℃温箱中反应1~2h，然后移至4℃冰箱过夜；洗涤液洗酶标板3次，每次3～4min；用1％OV A封闭，300μL/孔，置37℃反应lh；洗涤后加入倍比稀释的待测抗体（100μL/孔），置37℃反应2 h；洗涤后加羊抗兔IgG-HRP（1∶1 000），置37℃反应1h；洗涤后每孔加入底物溶液100μL，置37℃反应15～20min后，每孔加入50μL终止液以终止反应。
待测抗体每个稀释度作3个平行试验。
1.3.3加标样品测定。
吸取10μL/mL莱克多巴胺标准溶液50μL、250μL和500μL，分别添加到5g（精确至0．001g）的空白样品中，使添加水平为0.012 5mg/kg、0.025 0mg/kg、0.050 0mg/kg、0.100 0mg/kg、0.500 0mg/kg和1.000 0mg/kg，每添加水平设5个重复，同时设样品空白对照。
2结果与分析
从表1可看出，在低添加水平为0.012 5mg/kg、0.025 0 mg/kg、0.050 0mg/kg、0.100 0mg/kg、0.500 0mg/kg和1.000 0 mg/kg时，检测结果分别为阴性、阴性、阳性、阳性、阳性、阳性。
可以看出用酶联免疫方法均能将莱克多巴胺检出。
3结论与讨论
（1）应用酶联免疫法测定猪肉中的莱克多巴胺，方法可行、灵敏度较高，是一种简单和快捷的筛选方法。
（2）猪肉样品前处理，在转移上清液时，要避免吸入脂肪层，脂肪容易影响抗原与抗体反应，容易得出假阴性的结果。
猪肉样品要充分研磨，以充分将莱克多巴胺抽提出来。
（3）酶联免疫法测定猪肉中莱克多巴胺，方法简捷可靠，是一种值得推广的定性筛选方法，可作为液相色谱等仪器法的补充。
4参考文献
[1] 高燕红，吴西梅．液质联用快速测定饲料中的莱克多巴胺和克伦特罗[J]．中国卫生检验杂志，2005，15（6）：643-645.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（2005年版）[M]．北京：化学工业出版社，2005.
[3] 张晓辉，李余动，孔蕾，等．ELISA和GICA快速检测水产品中氯霉素残留的比较[J]．浙江农业学报，2005，17（4）：216-218．
[4] 陈红青．高效毛细管电泳法用于饲料中盐酸克伦特罗与沙丁胺醇含量的测定[J] ．福建大学学报（自然科学版），2003，31（5）：615-617．
[5]于洪侠，杨曙明．莱克多巴胺残留检测方法研究进展[J]．中国兽药杂志，2004，38（11）：44-47.
[6] 应永飞，皮雄娥，吴平台，等．气相色谱一质谱法同时测定动物尿样中莱克多巴胺和克伦特罗[J]．质谱学报，2006，27（2）：74-78.
[7]KAITADE W ACH，HUBERTDE BRABANDER，RKCOURTHEYN．
LC-MS-MS to detect and identify four beta agonists and quan tify clenbuterol in liver[J].Analyst，1998（123）：2701-2705.
[8] MELLO D．Farm animal metabolism and nutrition[M]．UK：The Scottish Agricultural College，2000．
[9] 张素霞，沈建忠，丁双阳，等．高效液相色谱法测定饲料中莱克多巴胺[J]．中国饲料，2005（10）：33-35．
[10] ANTIGNAC JP，MARCHAND P，LE BIZEC B，et al. Identification of ractopamine residues in tissue and urine sample at ultra-trace level using liquid chromatography-positive electrospray tandem moss spectrometry[J]．JournalofChromatographyB：Analytical Technologiesin comedical -＆rife Sciences，2002，774（1）：59-66．
[11]CHURCHWELL MI，HOLDER CL ．Liquid chromatography/electrospray tandem mass spectric analysis of incurred ractopamine residues in livestock tissues[J]．Rapid Commun Mass Spectrom，2002，16（13）：1261-1265．
[12] SHELVER WL，SMITH DJ．Application of a monoclonal antibody—based enzyme-linked immunosorbent assay for the determination of ractopamine in incurred samples from food animalsl[J]．J Agric Food Chem，2002，50（10）：2742-2747．。
