当前位置：文档之家 › 新型佐剂狂犬病灭活疫苗的研制

新型佐剂狂犬病灭活疫苗的研制

  • 格式：pdf
  • 大小：299.40 KB
  • 文档页数：4
２ Ｇ ａ ｇ ｈ ｕＳ ｕ ｈｎ ｇ ｉ ｌ ｒｌ ｎｖ ｓｙ Ｂｏｏ ｉ ｌ ｒｇ Ｃ ． ｔ． Ｇ ａ ｇｈ ｕ５ １ ０ ； ｈｎ ） ． ｕ ｎ ｚｏ ｏ ｔ Ｃ ｉａＡ ｒ ｕｔ ａ ｉ ｒ ｔ ｉ ｇｃ ｕ ｏ Ｌｄ ， ｕ ｎ ｚ ｏ １ ３ ０ Ｃ ｉ ｈ ｃ ｕ Ｕ ｅｉ ｌ ａ Ｄ ａ
［ 摘
要 ］ 利用 反 向遗传 操作 系统拯 救 出狂 犬病毒 的携 带双 Ｇ基 因 的 Ｈ Ｐ—ｄ Ｅ Ｇ株 ， 选用新 型佐
剂制成狂 犬病 灭活疫 苗 ， 进行 小 鼠免 疫试 验 、 比格 犬最 小 免疫 剂 量试 验 、 免疫 持 续期 试 验。试 验 表 明 ， 带双 Ｇ基 因的 Ｈ Ｐ—ｄ 携 Ｅ Ｇ株 具有 良好 的免疫原 性 ， 新型佐 剂 狂犬 病灭 活疫 苗 免疫 效果 该 较好， 具有 完全 的保 护 力和较长 的免 疫保护持 续期 。 ［ 关键 词 ］ 狂 犬病灭活 疫苗 ； 剂 ； 佐 免疫试验
Ｄｅ ｅ ｐ ｎ ｆＲ ｂｅ ｎ ｃｉａｅ ｃｉｅｗｉ ｗ Ｔ ｐ ｊ ｖ ｎ ｖｌ ｍｅ ｔ ａ ｉｓＩ ａｔ ｔｄＶａｃｎ ｔ ａＮｅ ｙ ｅＡｄｕ ａ ｔ ｏ ｏ ｖ ｈ
Ｄ Ｎ Ｃ ｎ ，Ｕ ｈ ｏ ｊ Ｘ Ｅ Ｓ Ｕ ａ Ｓ Ｎ Ｚ ａ — ｉ ， Ｕ ｕ—ｑａｇ ， Ｉ ｎ ， Ｉ Ｎ ｏｇ—ｒ。ＷＡ Ｇ Ｙ ｎ ｉ Ｌ ＬＡ Ｇ Ｈ ｎ ｎ Ｍｉ ｕ， Ｎ ｕ，
ＸＩ ｎ—ｂｎ Ｚ Ｅ Ｙｕ ｉｇ ， ＨＡＮＧ Ｊ ｇ ， ＨＡＮＧ Ｄｏ ｇ—ｘａ ， ｉ Ｚ ｎ ｎ ｉ ＨＵＡＮ ｎ Ｇ Ｙｏ ｇ—ｌ ｎ ＧＵＯ Ｘｉｏ—ｆｎ ｉ ｇ， ａ ａ ｅｇ
（ ． ｏｌ ｅｏ ｔｉａｙＭｅｉｎ ，ｏｔ ｈｎ ｇｉ ｌ ｒｌＵ ｉ ｒｔ， ｕｎ ｚｏ １６ ２； １ Ｃ ｌｇ Ｖ ｅｎ ｒ ｄｃ ｅ ＳｕｈＣ ｉａＡ ｒｕｔ ａ ｎｖ ｓｙ Ｇ ａ ｇｈｕ５ ０４ ｅ ｆ ｅｒ ｉ ｃ ｕ ｅｉ
ｔ ｓ ｒ ｏ ｄ ｃ ｅ ｎ ｂｅ ｇ ｅ ｅ ｔｗｅ ｅ ｃ ｎ ｕ ｔｄ ｉ ａ ｌ ．Ｔｈ ｅ ｕ ｔ ｅ ｎ ｔａ ｅ ｈ ｔｒ ｃ ｍｂ ｎ ｎ ｅ ｒ ｓ ｌ ｄ ｍｏ ｓｒ பைடு நூலகம்ｄ ｔ ａ ｅ ｏ ｉ ａ ｔＨＥＰ —ｄ ｒｂ ｅ ｉ ｓ ｓｒ ｉ ａ ｏ ｄ ｓ Ｇ ａ ｉ ｓ ｖｒ ｔａ ｎ ｈ ｓ ｇ ｏ ｕ
极低 ， 野生 动 物更 无 狂 犬 病 的计 划 免 疫 。 因此 ， 从
鼠免 疫试验 和 比格 犬最 小免疫 剂 量试 验 ， 为现 阶段 兽用 狂犬病 灭活疫 苗 的研 制提 供参考 。
１ 材料 与方法
１１ 病 毒和 实验 动 物 ．
ｉ ｍｍｕ ｏ ｅ ｉ ｉ ， ｎ ｈ ａ ｉ ｓｉ ａ ｔ ａｅ ａ ｃ ｎ ｓｗｅ ｅ ｅｆ ｃｉｅ ａ ｄ ｐ ｏｅ ｔ ｅ ｎ ｇ ｎ ｃｔ ａ ｄ ｔ ｅ ｒｂ ｅ ｎ ｃｉ ｔｄ ｖ ｃ ｉ ｅ ｒ ｆ ｔ ｎ ｒｔ ｃｉ ． ｙ ｖ ｅ ｖ ｖ
Ｋｅ ｒ ｓ ｒｂｅ ａｔ ａ ｄｖｃｉｅ ；ｄｕａ ｔｉ ｍ ｎ ｓ ｙｗｏｄ ： ａｉｓ ｎ ｃ ｖｔ ａｃ ｓａｊｖｎ； ｕ ｅｔ ｔ ｉ ｉ ｅ ｎ ｍ ｅ
・
２ ０・
中国兽药杂志
２ １ ，４ １ ）２ ２／ 灿 ， ００ ４ （０ ： ０～ ３ 顿 等
新 型佐 剂 狂犬 病 灭 活疫 苗 的研 制
顿 灿 孙招金 薛素强 ， 敏 梁红茹 王 玉 ， ， 李 ， ， ， 谢运冰 张 婧 张东霞 黄永亮 郭 霄峰 ， ， ， ，
Ａｂｓｒ ｃ ：Ｒｅ ｏ ｉ ａ ｔＨＥＰ —ｄ ｒｂｉｓｖｒ ｓｓｏ ｋ ｗａ ｅ ｃ ｅ ｙ ｔ ｅｔ ｃ ｉｕ ｆｒ ｖ ｒｅ ｇ ｎ ｔｃ ｉ ｃ ｉａｅ ｔａ ｔ ｃ ｍｂ ｎ ｎ Ｇ ａ ｅ ｉｕ ｔｃ ｓｒ ｓ ｕ ｄ ｂ ｈ ｅ ｈｎｑ ｅ ｏ ｅ ｅ ｓ ｅ ｅｉｓ，ｎａ ｔ ｔｄ ｖ
（． １ 华南农业大学兽医学院 ， 广州 ５ ０４ ； ． １６ ２ ２ 广州市华南农大生物药品有 限公司 ， 广州 ５ １０ ） １３ ０ ［ 收稿 日期］０ ０— ７— ０ ［ ２１ ０ ２ 文献标识码］ ［ Ａ 文章编号］０ ２—１ ８ （０ ０ １ ０ ２ ０ ［ １０ ２ ０ ２ １ ）０— ０ ０— ４ 中图分类号］ ８９ ７ ７ ￥５ ．９
．
狂犬病 是重要 的人 兽共 患病 ， 引起人 和 哺乳 能
传操 作 系统拯救 的狂犬 病病毒 ＨＥ Ｐ—ｄ Ｇ株 ， ３ 经１一
丙 内酯灭 活 ， 选用 一种新 型佐 剂制 成疫 苗 后进 行 小
动 物的急性 致 死 性 中枢 神 经 系 统 的 自然 疫 源性 疾
病 ， 死 率 几 乎 １０ ｌ 。据 世 界 卫 生 组 织 报 道 ， 病 ０％ Ｉ Ｊ ９ ％ 以上 的狂犬 病 死 亡 病例 发 生 在 包括 我 国在 内 ９ 的发展 中 国家 ｊ 。许 多动 物 都 可 以感 染 及 传播 本 病， 家犬是 我 国人 狂犬病 的 主要传 染来 源 Ｊ 由于 。 缺少 安 全 有效 、 格 低 廉 、 用 方 便 的动 物 狂犬 病 价 使 疫 苗 ， 之 群众 意 识 淡 薄 ， 国家 犬 的免 疫 覆 盖率 加 我
ｒｂｅ ａｃｎｓ ｉ ｅ ｐ ｄ ｖｎ ｆ ｍｕ ｅｔ ｔ ｅｅ ｏ ｄ ｃ ｄｉ ｉ ｎ ｅｍ ｎｍ ｍ ｉ ｍ ｎ ｏｅ ａ ｉ ｖｃｉｅ ｔ ａｎ ｗ ｔ ｅａｊ ａ ｔｏ ｉ ｓ ｗｈ ｙ ｕ ｒ ｍ ｎ ｓ ｗ ｒ ｃ ｎ ｕｔ ｍ ｃ ａ ｄｔ ｉｉ ｕ ｕ ｅｄｓ ｅ ｅ ｎ ｅ ｈ ｍ

合集下载

疫苗制造基本程序[1]

疫苗制造基本程序[1]

常用的浓缩方法: 氧化铝胶吸附沉淀法 离心沉降法 羧甲基纤维沉淀法
以上方法可使菌液浓缩一倍以上。 此外，有些细菌在生长过程中产生分子量小的可溶性抗原（如猪丹 毒杆菌产生的糖蛋白）也可经氢氧化铝吸附浓缩；将破伤风脱毒液按盐 酸—食盐法处理，以作进一步精制成提纯破伤风类毒素。
一、细菌性灭活疫苗制造
菌种的选择 菌液培养 灭活 浓缩 配苗
内按规定加入灭活剂，在一定的温度下作用一定的时间，有 的灭活剂还需加入阻断剂中止灭活。灭活疫苗配置通常都需 加入佐剂，充分混合、分装，制成灭活疫苗。 2. 冻干苗
细胞毒液内按比例加入保护剂或稳定剂，充分混合 、分装，进行冷冻真空干燥制成冻于疫苗。
流程图3——病毒性细胞疫苗制造工艺流程
毒株 培育 鉴定
培养细胞和增殖病毒用的营养液又称培养液, 通常分为细胞培养用的生 长液和病毒增殖用的维持液, 两者不同的之处通常只是生长液内含有5%10%的血清；维持液血清浓度为2%-5%。
不同细胞所需的营养成分和生长条件不尽相同。 目前常用的细胞培养方法为静止培养和转瓶培养, 至于微载体培养和悬 浮培养在我国尚处于试验之中。
（五）配苗与分装
由于灭活菌苗所用的佐剂不同，所以配苗方法也不相同。 氢氧化铝菌苗：可在加入甲醛灭活的同时，按比例加入氢氧化铝胶 配制；也可在菌液经甲醛灭活后再按比例加入氢氧化铝胶配苗。 有的厂油佐剂菌苗的配制程序为：于灭菌的油乳剂135m110号白油、 11.4m1Span-85.3.6ml Tween80混合液中，在边搅拌下加入等量甲醛灭 活菌液配制。 配苗和分装：应充分混匀，及时塞塞、贴签或印字。
一、病毒性禽胚培养疫苗制造
鸡胚选择 种毒与毒种继代 接毒与收获 配苗 （三）接毒与收获
1.接毒
鸡胚接毒涉及接毒途径和接毒量两方面。根据不同的病毒与不同疫
项目四 灭活剂、保护剂与免疫佐剂

项目四 灭活剂、保护剂与免疫佐剂


三、影响灭活作用的因素
⒈灭活剂特异性：石炭酸对真菌和病毒效果差，甲醛 最常用。 ⒉微生物的种类和特性：一般含氮量越高，甲醛等灭 活剂的消耗量就越大，灭活脱毒速度越慢。 ⒊灭活剂浓度（一定要合适） ⒋灭活温度（具体不同病原体和或毒素，其灭活时间 和温度不一致）。 ⒌灭活时间：随灭活剂浓度及温度升高，灭活时间则 缩短。 ⒍PH：微酸时灭活速度慢，抗原性保持较好。 ⒎有机物的存在：被灭活的病毒或细菌液中，如果含 有血清或其它有机物质，会影响灭活剂的灭活能力。
当以水为分散相，以加有乳化剂的油为连续相时，制
成的乳剂为油包水型乳剂（水／油或W／O），是生物 制品采用的主要剂型。
白油佐剂
一种好的乳剂苗，应该是W／O或O／W型，粘度较低， 颗粒大小均匀，稳定性良好，呈乳白色。
（四） 蜂胶佐剂 （五）ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ生物佐剂
三、新型免疫佐剂
1、细胞因子类 2、免疫刺激复合物
二、常用灭活剂的应用
⒈甲醛溶液：最常用 2.苯酚（石炭酸）：用于防腐，很少用于疫苗研制。 3.结晶紫：蛋白质变性。（溶于有机溶剂）用于诊断抗原 的制备：鸡白痢抗原 4.β-丙内酯 狂犬病灭活苗制备所用 5 烷化剂 乙酰基乙烯亚胺 二乙烯亚胺 缩水甘油醛 6 硫柳汞 用于生物制品的防腐和消毒。 7 缩水甘油醛 注意：灭活剂对人有害，有时对皮肤黏膜有强烈刺激性。
④干扰素类生物活性物质的保存：加葡聚糖。
二、冻干保护剂的组成
⒈低分子物质（营养液）：
营养液：脱脂乳、蛋白胨、氨基酸、和糖类 等 ⒉赋形剂(高分子物质）骨架
赋形剂：蔗糖、山梨醇、乳糖、PVP、葡聚 糖等 ⒊抗氧化剂 抗氧化剂：Vit.C、Vit.E和硫代硫酸钠等
动物疫苗中灭活剂与佐剂的种类及其作用

动物疫苗中灭活剂与佐剂的种类及其作用

动物疫苗中灭活剂与佐剂的种类及其作用摘要介绍了动物疫苗中的灭活剂和佐剂的种类及其作用,以期为灭活剂和佐剂的推广应用提供参考。

关键词动物疫苗;灭活剂;佐剂;种类;作用动物疫苗种类包括弱毒苗和灭活疫苗,在灭活疫苗生产过程中,必然涉及灭活剂和佐剂,二者的安全性和效力也决定了疫苗的质量和推广应用效果。

1疫苗灭活剂灭活是指破坏病原体的生物学特性,但尽可能避免影响其免疫原性或破坏血清中补体活性的过程。

常用的灭活剂有甲醛、β-丙内酯(BPL)或其他有效灭活剂。

1.1甲醛甲醛是一种有强烈刺激性的致癌物质,其既可作用于病毒含氨基的核苷酸碱基(如A,G,U),又可作用于病毒壳蛋白。

作用于病毒壳蛋白时,易使蛋白质发生交联或病毒颗粒聚集,不能再作用于壳蛋白内的核酸。

这样,病原体蛋白的抗原性会遭到严重破坏,并可能有病原体存活。

用甲醛灭活时间长,一般需要在37～39℃处理24h以上或更长时间,使用浓度一般为0.1%。

其灭活的效果易受温度、pH值、浓度、是否存在有机物、病原体的种类和含氮量等因素影响,残留的游离甲醛若随疫苗注入机体后,会产生制激性反应。

1.2β-丙内酯β-丙内酯(Beta-Propiolactone,BPL)在国外已广泛用于各种疫苗的灭活,是一种杂环类化合物,沸点155℃,常温下是无色粘稠状液体,对病毒具有很强的灭活作用。

能作用于病原体DNA或RNA,改变病毒核酸结构达到灭活目的,而不直接作用于蛋白,不破坏病原体的免疫原性。

大剂量β-丙内酯(BPL)虽是一种致癌物,但极易水解,在37℃水浴水解2h后消失,其水解为无毒性的人体脂肪代谢产物β-羟基丙酸。

另外,由于其能在疫苗液体中完全水解,不必考虑在成品疫苗中的残留,接种反应也轻微。

同时,β-丙内酯灭活病原时间短,从而显著地缩短了疫苗生产周期,提高了经济效益。

但与甲醛相比,价格明显昂贵,不适用于发展中国家或经济落后国家。

2免疫佐剂免疫佐剂是指与抗原同时或预先应用、能增强机体针对抗原的免疫应答能力、或改变免疫反应类型的物质。

狂犬病的免疫防制研究进展

狂犬病的免疫防制研究进展

狂犬病的免疫防制研究进展摘要狂犬病作为我国二类动物疫病，病死率高，一旦发病，无药可医，成为危害公共卫生最为严重的问题之一。

介绍狂犬病的流行现状，简要介绍了狂犬病免疫学、综合防制、狂犬疫苗的研究进展，以有效降低狂犬病对人类的潜在威胁。

关键词狂犬病；免疫；防制；研究进展中图分类号 s855.3 文献标识码 a 文章编号 1007-5739（2013）14-0258-02狂犬病是由狂犬病病毒引起的传染病，严重威胁人类健康和生命安全，多发于春、夏等温暖季节，主要发生于亚洲、非洲、欧洲等，在发展中国家更为严重[1]。

狂犬病病毒可经伤口沿末梢神经直达中枢神经系统，或经血液而进入脑脊髓内，继而在机体神经细胞内繁殖，并形成细胞浆内包涵体，使人或畜发病。

狂犬病的潜伏期长短不一，因进入机体的病毒数量、毒力及咬伤部位而有所不同，一般为1～2个月，最短仅10 d，长者可逾1年[2]。

伴随着城市、农村养犬数量的不断增加，狂犬病的潜在威胁和疫情形势也随之变的严峻。

因此，如何预防、消灭狂犬病就成了现在面临的亟待解决的重大问题。

1 流行现状几乎所有温血动物都对狂犬病易感，狂犬病病毒在自然界中主要存在于犬科和猫科等动物，野生动物可作为狂犬病病毒的储藏宿主。

蝙蝠、野鼠等野生啮齿类动物对狂犬病病毒都比较易感，这些动物在一定条件下又可成为该病的潜在危险疫源。

2010年，全国报告发病数最多的5个省区，分别是广西壮族自治区、湖南省、广东省、湖北省和贵州省，报告发病数占全国总发病数的67.86%。

而广西是中国狂犬病高发区[3]，狂犬病已逐渐成为广西不容忽视的公共卫生安全问题。

我国南方地区犬类有1～3成的狂犬病隐性带毒，如此高的隐性带毒率是狂犬病传染的一个重要原因，存在极大的安全隐患。

2 狂犬病的免疫学研究进展狂犬病是一种急性接触性人畜共患传染病，目前对控制狂犬病感染还没有特效治疗药物，一旦受感染而发病，病死率几乎可达100%，高居各类传染病病死率之首，严重威胁着人畜的健康。