实验3 化脓性球菌的分离鉴定
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化脓性球菌分离鉴别的流程英文回答:Identification of Pus-Forming Cocci.The identification of pus-forming cocci, such as Staphylococcus and Streptococcus species, is essential for appropriate antibiotic therapy and infection control measures. The following steps outline a general procedure for their identification:1. Specimen Collection: Collect specimens from the infected site, such as wound swabs, blood, or sputum.2. Gram Staining: Perform Gram staining on the specimen to determine the morphology and staining characteristics of the bacteria. Pus-forming cocci are typically Gram-positive and appear as cocci (round or oval cells).3. Colonial Morphology: Culture the specimen onappropriate media, such as blood agar or chocolate agar, and observe the colony morphology. Staphylococcus species often form colonies that are round, opaque, and golden or white in color, while Streptococcus species tend to form colonies that are beta-hemolytic, meaning they cause a clear zone of hemolysis around the colonies.4. Catalase Test: Differentiate between Staphylococcus and Streptococcus species using the catalase test. Staphylococcus species produce the enzyme catalase, which breaks down hydrogen peroxide into water and oxygen, creating bubbles during the test. Streptococcus species do not produce catalase and therefore do not elicit a positive result.5. Coagulase Test: Further differentiate Staphylococcus species using the coagulase test. Staphylococcus aureus, a common pathogen, produces the enzyme coagulase, which converts fibrinogen into fibrin, causing clot formation in the test. Other coagulase-negative Staphylococcus species do not produce this enzyme.6. Hemolysis Test: Determine the hemolytic propertiesof Streptococcus species on blood agar plates. Beta-hemolytic Streptococcus species cause a clear zone of hemolysis around the colonies, while alpha-hemolyticspecies produce a greenish zone of hemolysis, and non-hemolytic species do not cause any hemolysis.7. Lancefield Grouping: Further differentiate Streptococcus species based on their Lancefield group antigens. This involves using specific antibodies to determine the group (A, B, C, D, etc.) to which the Streptococcus species belongs.8. Antibiotic Susceptibility Testing: Performantibiotic susceptibility testing to determine the appropriate antimicrobial agents for treating the infection.中文回答:化脓性球菌分离鉴别流程。
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实验设计:局部化脓性炎症病原菌的分离鉴定及敏感药物筛选小组成员:范子文孙琦黄必胜雍之瑶【实验病例】刘正春,男,38岁,建筑工人,上班时被石头砸断了胳膊,由于长时间不接受正规治疗,他的胳膊上的伤口感染开始化脓,发热1天,伤口肿胀疼痛体检:体温39℃,伤口局部红肿,有黄色粘稠脓汁血象:血白细胞12x109/L,中性粒细胞80%,淋巴细胞28%。
要求:1 脓汁标本病原菌的分离和鉴定;2 选择敏感抗生素治疗【实验目的】掌握病原菌的分离和鉴定,掌握化脓性细菌的主要特点选择合理的敏感抗生素进行治疗【设计思路】球菌是细菌中的一个大类,根据格兰染色的不同,可分为革兰阳性和革兰阴性两类。
阳性:葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、肠球菌等阴性:脑膜炎球菌、淋球菌等病原性球菌中常引起人类化脓性疾病的细菌,又称为化脓性球菌。
上述细菌均为化脓性球菌,它们形态、培养上各有特点,可供鉴别。
所可能用到的检查方法:染色镜检、分离培养、生化反应、血清学实验、动物接种。
所以,我们小组的实验设计即围绕取样,检查,确定,选用抗生素治疗的主线流程,结合上述检查方法,最终确定出引起患者化脓的致病菌并治疗。
【初步观察】在病例中,患者的明显体征为伤口局部红肿,有黄色粘稠脓汁,根据金黄色葡萄球菌的致病特点,在发生局部感染时,皮肤化脓感染的特点是脓汁粘稠,病灶局限,界限清楚。
其中患者黄色粘稠脓汁与此特征相符,初步怀疑为金黄色葡萄球菌,需要进一步检验。
肺炎球菌多导致呼吸道炎症,大叶性肺炎,与胳膊外伤无关,可排除。
肠球菌所致感染中常见的为心血管系统感染和尿路感染,可以排除。
脑膜炎球菌主要有呼吸道感染转变为菌血症或者败血症,可以排除。
淋球菌引起人类泌尿生殖系统急慢性化脓性感染,可以排除。
所以实验的目的为分辨引起患者伤口化脓的细菌是葡萄球菌还是链球菌,或者二者兼有。
【标本采集】在本病例中,患者为伤口感染化脓,即开放性脓肿,所以我们采取标本的方法为:用无菌棉拭采取脓液及病灶深部分分泌物。
脓汁标本中病原性球菌的鉴定实验目的:1 、掌握病原性球菌的形态和培养特性。
2 、熟悉病原性球菌的分离和鉴定程序。
实验材料:(1)标本:脓汁(2)培养基:血琼脂平板、液体培养基(3)其他:试管、载玻片、酒精灯、接种环等实验方法(1)化脓性球菌常用标本:化脓部位脓液或分泌物、痰液、咽镊子、血液、脑脊液、泌尿道分泌液。
根据病变部位,无菌采集,并置于无菌容器中。
(2)分离程序1)用无菌接种环取材料少许,拇指推开皿盖。
2)在点燃的酒精灯附近操作。
先平行划线拇指端和食指端平皿直径的三分之一,旋转平皿90度,接种环灭菌,此为第一区。
用无菌接种环从第一区带出细菌作为第二区的开始,再连续划线,大约划平皿面积的四分之一,再次灭菌接种环,再旋转90度,此区为第二区。
第三区方法同第二区。
第三区与第四区之间,接种环不灭菌直接划线划满平皿其他区域。
3)在平皿底部用玻璃铅笔注明班级、姓名、日期等信息。
置于37摄氏度温箱,皿底向上,培养18到24小时,备用。
4)待血琼脂平板第四区上出现菌落,用无菌接种环挑取平皿中菌落在点燃的酒精灯附近接种在液体培养基,用于增菌并编号。
5) 试管上用玻璃铅笔注明班级、姓名、日期等信息。
置于37摄氏度温箱,皿底向上,培养18到24小时,备用。
(3)鉴定程序1)取各液体培养基中的菌液经过涂片→干燥→固定→染色(HE)→显微镜观察。
根据染色结果分为:紫色的革兰染色阳性菌:葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌红色的革兰染色阴性菌:淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌2)对革兰染色阳性菌(葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌)进行溶血实验。
根据结果分为:完全透明溶血环:葡萄球菌、链球菌草绿色溶血环:肺炎链球菌3)对出现完全透明溶血环的细菌做过氧化氢酶实验,根据结果分为:阳性:葡萄球菌阴性:链球菌4)对革兰染色阳性菌(淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌)进行分解麦芽糖实验,根据结果分为:不分解麦芽糖:淋病奈瑟菌分解麦芽糖产酸不产气:脑膜炎奈瑟菌(4)确诊程序根据鉴定程序得出的初步诊断,再进行确诊1)葡萄球菌的确诊①血浆凝固酶试验,鉴定致病性葡萄球菌②耐热核酸酶试验,用于检测金黄色葡萄球菌产生的耐热核酸酶③甘露醇发酵试验,金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇,该试验为阳性2)链球菌的确诊①杆菌肽试验敏感试验,出现抑菌环者即可初步鉴定为A群链球菌②胆盐溶菌试验,肺炎链球菌阳性,草绿色链球菌阴性③血清学鉴定试验,检测链球菌群的特异性抗原,出现凝集者为阳性3)肺炎链球菌的确诊①荚膜肿胀试验,呈现阳性则为肺炎链球菌②菊糖发酵实验,肺炎链球菌可以发酵菊糖③胆盐溶菌试验,肺炎链球菌阳性4)淋病奈瑟菌的确诊①革兰染色后镜检若发现中性粒细胞内有革兰阴性双球菌5)脑膜炎奈瑟菌的确诊①分解葡萄糖、麦芽糖、产生少量酸②氧化酶试验阳性③血清凝集试验阳性鉴定图解。
一、实验目的通过本实验,掌握化脓性球菌的分离、培养、染色和鉴定方法,了解化脓性球菌的生物学特性,为临床诊断和治疗提供依据。
二、实验原理化脓性球菌是一类革兰氏阳性球菌,主要引起化脓性感染。
本实验通过分离、培养、染色和鉴定等方法,观察化脓性球菌的形态、染色特性、生长情况等,从而对病原菌进行鉴定。
三、实验材料1. 菌种:金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎链球菌等。
2. 培养基:血琼脂平板、麦康凯琼脂平板、营养肉汤等。
3. 染色剂:革兰氏染色液、碱性复红染液等。
4. 实验器材:接种环、接种针、玻片、显微镜、酒精灯、无菌生理盐水等。
四、实验方法1. 菌种分离(1)将金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎链球菌分别接种于血琼脂平板上,37℃恒温培养24小时。
(2)挑取单菌落,分别接种于麦康凯琼脂平板上,37℃恒温培养24小时。
2. 菌落观察(1)观察菌落形态、大小、颜色、边缘等特征。
(2)观察菌落是否溶血,记录溶血情况。
3. 革兰氏染色(1)将分离得到的菌落涂于玻片上,滴加革兰氏染色液。
(2)用酒精灯外焰烤干,滴加碘液,烤干。
(3)滴加95%乙醇,脱色。
(4)水洗,晾干。
(5)观察菌体染色情况,记录革兰氏染色结果。
4. 鉴定试验(1)观察金黄色葡萄球菌是否产生金黄色色素。
(2)观察溶血性链球菌是否产生β-溶血。
(3)观察肺炎链球菌是否产生绿色素。
五、实验结果1. 菌落观察金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色,圆形,表面光滑,边缘整齐;溶血性链球菌菌落呈白色,圆形,表面光滑,边缘整齐;肺炎链球菌菌落呈白色,圆形,表面光滑,边缘整齐。
2. 革兰氏染色金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌,菌体呈紫色;溶血性链球菌为革兰氏阳性球菌,菌体呈紫色;肺炎链球菌为革兰氏阳性球菌,菌体呈紫色。
3. 鉴定试验金黄色葡萄球菌产生金黄色色素;溶血性链球菌产生β-溶血;肺炎链球菌产生绿色素。
六、实验结论通过本实验,成功分离出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎链球菌。