绿竹笋的石蜡切片制作

石蜡切片方法步骤每次操作切片刀和标本，或更换标本前一定要锁定手轮，并用护刀罩将刀刃遮住！1. 锁定手轮，夹紧标本再装刀片.（10分）2. 将蜡块装在标本夹上，小心误切！3. 转动粗转轮，将标本退到后面的极限位置，将护刀罩移向刀架中间（盖上护刀罩）4. 调节切削角度5. 将基体上的刀架尽可能靠近蜡块标本6. 调整标本表面位置,使之与刀刃平行.7. 松开手轮,匀速转动,修片8. 修平蜡块表面到达标本层时停止修片,调整切片厚度.9. 一切调整好后可以开始切片。

此时右手摇动转轮，让蜡块切成蜡带，左手持毛笔将蜡带提起，摇转速度不可太急，通常以40-50r/min。

10. 切成的蜡带到20-30cm长时，右手用另一支毛笔轻轻将蜡带挑起，以免卷曲，并牵引成带，平放在蜡带盒上准备漂片和捞片.11. 切片结束后锁定手轮, 盖上护刀罩.12. 把蜡块从标本夹上取下.13. 将切片机上的废片清理干净.1. Locking hand wheel, put wax blocks on sample folder.2. Turn rough runner, return the wax block back to the limit position, covered with knife protection cover.3. Adjust cutting angle4. Push the base knife holder to block as close as possible5. Adjust the specimen surface position, so that in parallel with the blade.6. Loosen the hand wheel, cutting paraffin block with uniform rotation, rim excessive paraffin7. Stop trimming, adjust the section thickness.8. Cutting sections in a regular rhythm9. The sections are gently lifted off the knife with bushes and floated out on a water bath.10. Stop cutting, after slicing lock the hand wheel, cover knife cover nursing11. Remove the block from the samples folder, clean the microtome.评分标准。

石蜡切片制作流程表一. 取材1，样品要求：长，宽各1cm左右，厚不超过5mm2，固定液：10%福尔马林固定液或4%多聚甲醛：组织块=20:1为宜3，固定时间：依大小而定，一般3-5h即可，如24h或更长，应密封瓶口，封前换液4, 修块二.脱水1，水洗：将固定组织块放入广口瓶，瓶口用纱布包好，置流水下水洗，水洗时间依固定时间而定，一般12h以上，固定时间越长水洗时间越长。

2，脱水1）75%酒精1h2) 80%酒精1h3）95%酒精Ⅰ1h4) 95%酒精Ⅱ1h5) 100%酒精Ⅰ1h6) 100%酒精Ⅱ1h组织块在进入下一阶段梯度酒精前要用吸水纸吸干水，尤其在95%酒精（Ⅱ）中进入100%酒精（Ⅰ）中，切记防止带入水分，所有过程要在瓶口加盖，防止水分进入。

三．透明1)酒精（100%）：二甲苯=1：1 10min2)二甲苯Ⅰ透明10min3二甲苯Ⅱ10min四．浸蜡1）二甲苯：石蜡=1：1 30min 温箱56—58℃2）石蜡Ⅰ1h 温箱56—58℃3) 石蜡Ⅱ1h 温箱56—58℃4) 石蜡Ⅲ1h 温箱56—58℃温度保持在56—58℃，温度太高会烧坏组织块，太低石蜡会凝固。

五．包埋首先在金属框架上涂抹凡士林，以保证石蜡到入后不会外溢。

将包埋用石蜡及浸蜡组织块放在有石棉网的电炉上保温。

在框架中先倒入少许包埋用石蜡，再用镊子将组织块迅速移入框架，再倒入石蜡，待完全凝固后取出待用。

六．切片和烘片（烘片温度38℃）七．附贴（45℃）；烤片（一）附贴（45℃）附贴液的配制：新鲜蛋白20ml,麝香草酚少许，用玻璃棒混匀，再加入甘油20ml,继续混匀。

若有多聚懒氨酸处理的切片则直接用之。

（二）烤片：温箱内的温度应保持在40-45℃之间，烤片时间至少1小时。

八．H．E染色（一）脱蜡1 二甲苯Ⅰ（脱蜡） 10min2 二甲苯Ⅱ（脱蜡） 10min3 100%酒精Ⅰ（脱二甲苯） 10min4 100%酒精Ⅱ（脱二甲苯） 10min5 95%酒精Ⅰ（脱二甲苯） 5 min6 95%酒精Ⅱ（脱二甲苯） 5 min7 80%酒精（脱二甲苯） 5 min8 自来水或蒸馏水洗（去酒精）5 min （二）染色1 苏木素染液 6 min2 冲洗清水（兰化）15 min3 酸水分化视情况而定 10-20S4 冲洗淡蓝色即可 20 min5 伊红染液视情况而定6 min （三）脱水，透明13 80%酒精颜色淡化14 95%酒精Ⅰ 5min15 95%酒精Ⅱ 5 min16 100%酒精Ⅰ 5min17 100%酒精Ⅱ 10min18 二甲苯Ⅰ（透明） 5min19 二甲苯Ⅱ（透明） 10 min 九．封片：用中性树胶将切片标本封固。

石蜡切片制作实验报告(二)石蜡切片制作实验报告实验目的掌握石蜡切片的制作方法，了解其在生物学研究中的应用。

实验原理通过将样品置于石蜡中，使其固定后切割成薄片，然后染色观察样品中的细胞和组织结构。

实验材料•组织样品•石蜡•石蜡切片机•切片染色盒•水、乙醇、甲醇等试剂实验步骤1.取适量的组织样品，放入石蜡中固定。

2.用石蜡切片机将固化后的石蜡和组织样品切割成薄片。

3.用甲醇或乙醇脱除石蜡。

4.进行染色处理，如使用伊红染色。

5.将染好色的切片放入切片染色盒中，加入水并覆盖。

实验结果通过显微镜观察切片中的细胞和组织结构，可窥见其微观世界。

依据样品的不同，可看到各种细胞器、细胞分裂、组织的形态、结构和功能等信息。

实验注意事项1.操作时应戴手套和护目镜以保护手部和眼睛。

2.切片机的切割速度应适中，避免快过头造成样品损伤。

3.染色剂应均匀覆盖于切片表面，以免造成不必要的误差。

实验结论石蜡切片技术是生物学科研中必不可少的一种技术手段，能够突显样品中的微观结构，帮助科研工作者更好地了解和研究生物体的各种组织和器官。

实验应用石蜡切片技术在生命科学与医学领域得到了广泛的应用，如： - 组织学研究：观测组织中各种细胞器、细胞分裂、细胞凋亡等现象。

- 免疫学研究：确定免疫组织化学定位，如免疫组织化学染色等。

- 病理学研究：观测肿瘤等病理组织的构造特征。

- 分子生物学研究：观测基因的表达、蛋白质的结构等。

- 药理学研究：观察药物对细胞和组织的影响。

实验可能出现的问题及解决方法1.样品切面出现粗糙、污染现象：可能是切割速度太快，应适当降低切割速度。

2.切片中出现气泡或破损：可能是样品固定不够完整或者太多切片被叠加在一起，应减少切割深度或重新采集样品。

3.切片上未能完全染色：可能是涂抹染色剂时没有均匀涂抹，应均匀涂抹液体染色剂或更换染色试剂。

4.显微镜观察时出现模糊影响：可能是显微镜镜头或平台不够清洁，应及时清理。

结语石蜡切片技术是生物学研究中不可或缺的重要手段，在多个领域都得到了广泛应用。

石蜡切片制作方法I 第一天：固定FAA固定液：% In Mixture Amount乙醇50.0% 50ml醋酸 5.0% 5ml甲醛 3.7% 10ml of 37%水41.3% 35mltotal 100ml取新鲜材料，立即放入FAA固定液中。

真空抽气机缓慢抽气１５分钟（看材料是否下沉，如果没有下沉，可以再抽15分钟，直到保证材料下沉为止。

），换一次固定液，使材料在固定液中诱导3小时以上（可以保存）。

注意：取材应尽可能小；固定液的体积要是材料体积的20倍以上；换一次固定液的原因是因为在抽气的过程中乙醇和醋酸会挥发走，影响它们的浓度。

II 第二天脱水将固定的材料取出（或直接倒掉固定液），加50％乙醇，室温下诱导30分钟，重复一次。

再经60%乙醇－70%乙醇－85% 乙醇，室温各诱导30分钟。

之后于含有0.1%伊红的95%乙醇中过夜；注意：１）换溶液时，最好是将溶液倒出，再加入新溶液。

应尽量避免用镊子夹取材料；２）加入伊红的主要目的是使包埋时容易辨认，由于经过脱水浸蜡后颜色会褪去一部分，因此此时的染色应较深一些为好。

III 第三天透明将材料转移到100 %乙醇溶液中诱导１小时，尽可能地倒掉上述的100 %乙醇后再转入新的100%乙醇溶液中诱导30分钟；再次100%乙醇溶液诱导30分钟。

经二甲苯：乙醇＝1/4：3/4，1/2：1/2，3/4：1/4（体积比）各诱导30分钟；换入纯二甲苯，室温诱导1小时，重复两次。

最后加入一半二甲苯一半石蜡，室温过夜。

注意：材料在无水乙醇中容易收缩，不能放置时间较长。

IV 第四天浸蜡将混合溶液放入４２℃恒温箱中保温３０分钟，逐步加入石蜡碎片，每次各保温３０分钟（适时地摇晃一下），直到加满为止（约四到五次后至全满）。

将混合液弃去，加入熔融的石蜡（石蜡最好提前５小时放入６０℃恒温箱中，使其融化）放置于57-62℃诱导４小时以上（也要适时地摇晃一下）。

至少重复六次。

注意：不要将混有二甲苯的石蜡放入换纯蜡的恒温箱中，避免污染。