人脐带间充质干细胞移植对IgA肾病小鼠肾功能的影响

红芪多糖对糖尿病小鼠肾脏组织α-SMA表达及肾小管间质损伤的影响研究

毛明锋;雷文晖;周丽美;金烈

【摘 要】目的 探讨红芪多糖(HPS)对糖尿病小鼠肾脏组织α-SMA表达及对肾小管间质损伤的影响.方法 将32只2型糖尿病db/db小鼠按随机数字表法分为糖尿病模型组、HPS高剂量组、HPS中剂量组、HPS低剂量组,每组各8只;另择8只db/m小鼠作为正常对照组.HPS高、中、低剂量组小鼠分别给予HPS 400、200、100mg/(kg·d)灌胃干预,正常对照组、糖尿病模型组小鼠以等量的0.9％氯化钠溶液灌胃.各组小鼠均连续灌胃8周后处死,取肾脏组织作病理检查,比较各组肾脏组织肾小管间质损伤程度;采用免疫组化法检测肾脏组织α-SMA表达强度,Western

blot法检测α-SMA表达水平,并进行比较.结果 5组小鼠肾脏组织肾小管间质损伤程度比较差异有统计学意义(P<0.05),糖尿病模型组小鼠肾脏组织肾小管间质损伤程度最重,除正常对照组外,HPS高剂量组小鼠肾脏组织肾小管间质损伤程度最轻.5组小鼠肾脏组织α-SMA表达阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05),HPS高剂量组明显低于糖尿病模型组(P<0.05).5组小鼠肾脏组织α-SMA表达水平比较差异均有统计学差异(P<0.05),HPS高、中、低剂量组与糖尿病模型组均高于正常对照组(均P<0.05),HPS低剂量组小鼠肾脏组织α-SMA表达水平>HPS中剂量组>HPS高剂量组(均P<0.05).结论 HPS能够抑制2型糖尿病db/db小鼠肾脏组织α-SMA的表达,减轻肾小管间质损伤程度.

【期刊名称】《浙江医学》

【年(卷),期】2019(041)005 【总页数】4页(P424-427)

【关键词】红芪多糖;糖尿病肾病;α-SMA

【作 者】毛明锋;雷文晖;周丽美;金烈

【作者单位】323000 丽水市中心医院肾内科;323000 丽水市中心医院肾内科;323000 丽水市中心医院肾内科;323000 丽水市中心医院肾内科

·综述·间充质干细胞的免疫学特性与系统性红斑狼疮的治疗丘美兰陈建

DOI：10.3877/cma．j．issn．1674-0785．2012．22．065作者单位：350025福州，福建医科大学福总临床医学院（丘美兰）；南京军区福州总医院肾内科（陈建）通讯作者：陈建，Email：doctorj1@163．com系统性红斑狼疮（SLE）是一种以多器官或多系统病变和血清中出现多种自身抗体为特征的自身免疫性疾病。SLE传统的治疗方案，如糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗，虽能有效提高SLE患者的长期存活率，但部分患者仍然复发，部分患者治疗无效，这类SLE被称为难治性SLE，而糖皮质激素及免疫抑制药物不良反应大，骨髓抑制和感染的发生率高。SLE目前尚无特效的治疗方法，近10年来大量实验与临床证据显示干细胞包括间充质干细胞（MSC）、［脐带血MSC（UC-MSC）或其他来源的MSC］具有显著的组织与细胞修复、抗纤维化、免疫抑制与免疫调节功能。MSC在治疗SLE上取得了一定的疗效，而理论上MSC的生物学作用可用于治疗SLE。一、SLE的发病机制SLE有明显的免疫紊乱，其基本病理改变是免疫复合物介导的血管炎，具体机制尚未完全清楚，目前认为其发病是在多种因素作用下，引起机体免疫调节功能紊乱，出现造血干细胞、B淋巴细胞、T淋巴细胞、巨噬细胞和NK细胞功能异常，细胞因子分泌异常，机体失去正常的免疫耐受性，发生自身免疫反应，产生自身抗体。1．SLE存在MSC异常：研究发现，SLE患者MSC存在异常，表现为MSC生长较正常缓慢，易衰老，传代过程中活力会逐渐丧失［1］，因此有些学者认为，SLE是一种MSC异常性疾病［2］。Papadaki等［3］研究表明SLE患者骨髓MSC不能正常支持造血。2．SLE的发病与免疫紊乱：SLE是一种免疫复合物病［4］。B淋巴细胞高度活化，功能亢进，而自发产生大量多克隆免疫球蛋白和针对自身组织的自身抗体、免疫复合物异常沉积及多系统损害是SLE最突出的表现［5］。T细胞在SLE的发病机制中亦具有一定作用，SLE存在T细胞异常。主要表现为辅助性T细胞（Th）CD4+亚群功能增强，细胞毒T细胞CD8+亚群功能下降，使之不能产生抑制CD4+T细胞的作用，CD4+T细胞刺激B细胞产生大量致病性自身抗体。Kojo等［6］报道SLE患者不仅由于T、B细胞相互作用活化B细胞产生自身抗体，而且免疫复合物还可以直接激活B细胞产生自身抗体。SLE患者Th1和Th2细胞亚群平衡免疫调节存在缺陷，Th1/Th2平衡向Th2方向偏移，Th2细胞占优势，促进B细胞产生自身抗体，诱发自身免疫反应。此外调节性T（Treg）细胞是一类具有免疫抑制作用的CD4+T细胞，它在SLE诱导免疫耐受方面有重要意义，Treg细胞可通过抑制Th的活性及B细胞功能、抑制树突细胞的成熟与抗原递呈功能，诱导免疫耐受［7］。有些研究显示SLE患者存在Treg数量下降和（或）功能缺陷，维持免疫耐受的能力降低，导致体内自身活化性T细胞大量增殖，产生自身抗体，可能参与了SLE的发病。二、MSC的生物学特性及免疫学特性（一）MSC的来源MSC是来源于发育早期中胚层的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的多能干细胞，MSC最常见的来源是骨髓，故称骨髓MSC，另外MSC也可从其他组织，外周血、脐带血、骨组织、软骨组织、肌肉组织、肌腱组织、脂肪组织、血管组织等分离。与骨髓相比，脐带血有更充足的来源，免疫原性较弱，能够耐受更大程度上的人类白细胞抗原（HLA）配型不符，移植物抗宿主病（GVHD）发生率较低；其MSC更为原始，扩增能力更强等优点，故UC-MSC可作为临床运用MSC主要的来源［8］。2000年，Erices等［9］首次报道了脐带血中可以分离培养出MSC，随后Ro-manov等［10］又分别从脐静脉内皮和内皮下、脐带Whartong胶质和血管周围组织中分离培养出了MSC，并建立了UC-MSC的分离培养方法。（二）MSC的基本特征MSC以骨髓、脐带血中含量最为丰富。UC-MSC与骨髓来源的MSC一样，能够稳定表达CD29、CD44、CD73、CD105和HLA-1，但不表达CD34、CD45和HLA-DR，不表达协同刺激分子CD80、CD86和CD40。一般认为，整合素家族成员CD29，黏附分子CD44、CD105等是其重要标志［11］。UC-MSC的CD106、SH2（CD105）、HLA-1表达低于骨髓MSC，表明UC-MSC是更原始的MSC。MSC具有低免疫原性，研究表明［12］，MSC不表达MHCⅡ分子、不表达或极低水平表达MHCⅠ分子，由于人类MHCⅡ分子是诱发异体免疫排斥的主要抗原，因而导致了MSC的低免疫原性。此外MSC表面不表达T细胞共刺激分子B7-1、B7-2，也不表达刺激细胞凋亡的分子如CD40、CD80、CD86和FasL，从而缺少T细胞活化所必需的第二信号。（三）MSC的生物学作用与SLE的治疗理论1．MSC具有多向分化潜能：MSC具有向成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌（肌腱）细胞、骨髓基质细胞、肝脏细胞和神经细胞等多种细胞分化的能力，能对SLE所导致的多系统、多脏器损伤进行修复。2．MSC的免疫调节机制：（1）MSC对B淋巴细胞的调节：①抑制B淋巴细胞增殖，细胞周期被停滞在G0/G1期。②抑制B细胞分泌免疫球蛋白IgM、IgG和IgA。MSC在体外可抑制B淋巴细胞增殖和分泌功能，具有一定的免疫调节能力。Coreione等［13］报道将MSC和健康志愿者的外周血中分离的B细胞共同培养，给予B细胞不同的刺激原，发现B细胞增殖被抑制，合成IgM、IgG及IgA能力明显减弱。③影响趋化功能，如B细胞表面CXCL12、CXCL13、CR4配体、CXCR5配体表达下调。（2）MSC对T细胞的调节：①抑制所有种类的T细胞增殖。Yoo等［14］发现脐血MSC能有效抑制有丝分裂原诱导的T淋巴细胞增殖，这和骨髓MSC一样有效。Krampera等［15］在MSC对静息性和记忆性T细胞免疫应答的抑制效应的研究中发现，MSC可抑制静息性和记忆性T细胞的增殖和细胞毒作用，使产生IFN-γ的T细胞减少，且这种抑制作用是剂量依赖性的。研·7437·中华临床医师杂志（电子版）2012年11月第6卷第22期ChinJClinicians（ElectronicEdition），November15，2012，Vol．6，No．22究显示MSC对免疫细胞的调节具有剂量依赖性，尤其是对T细胞增殖的抑制作用，随着MSC剂量的增加，抑制作用加强。当MSC与淋巴细胞混合培养的比例为1∶104和1∶108时，分泌IFN-γ的CD8+T细胞的增殖百分比减少85%和53%［16］。②抑制活化：MSC抑制T细胞凋亡，使T细胞活化标志（CD25、CD69）降低。③改变患者T淋巴亚群的比例。研究发现［17］，MSC产生IL-4的细胞数明显减少，而产生IFN-γ的细胞数明显增加，表明MSC可以改变Th1/Th2的免疫平衡状态。有研究发现，在SLE患者外周血中Th17细胞数较正常人明显增多，且与SLE疾病活动指数呈正相关，Th17细胞通过其分泌的IL-17可以扩大狼疮患者的炎性反应及抗体的产生，而Treg比例明显减少，与疾病活动程度呈负相关。我们研究发现MSC移植可上调脾脏中Treg细胞水平，MSC还可以下调狼疮Th17细胞的表达。④抑制T细胞的因子分泌。MSC抑制聚羟基脂肪酸酯（PHA）刺激的T淋巴细胞的增殖，能够改变T细胞亚群及T细胞分泌的细胞因子，促进T淋巴细胞TGF-β1mRNA的表达及抑制IFN-γ、IL-10mRNA表达来下调SLE患者的免疫反应，这种抑制特性表明，UC-MSC对免疫反应具负调节作用［18］。（3）MSC对树突状细胞（DC）的调节［19-21］：①抑制DC的发育及成熟。MSC可抑制不成熟的DC向成熟DC发育，减少CD80和CD86的表达。Beyth等［22］发现人类MSC可以阻止DC的成熟过程，减少单核细胞向DC转变，间接减弱T细胞活性。②诱导DC分化成Jagged-2依赖的新型调节性DC。③干扰DC迁移能力（CCL19下调）。④抑制细胞因子分泌。相关研究发现MSC可减少Th1分泌IFN-α，增加Th2分泌IL-4；减少NK细胞分泌IFN-α。（4）MSC对NK细胞的调节［23］：①抑制增殖；②改变细胞的表型（如减低CD56的表达）；③抑制NK细胞的因子（IFN-α，IL-10）分泌；④抑制细胞毒作用的靶细胞。Krampera等［24］在早期研究中就发现MSC可以抑制NK细胞对靶细胞的溶解作用。综上所述，MSC具有多向分化能力，可通过调节淋巴细胞功能，诱导免疫耐受，抑制自身免疫反应等机制发挥治疗作用。作为MSC的一大来源，脐带血是来自于脐带内及胎盘近胎儿一侧血管内的血液，含有丰富的干细胞和祖细胞，其主要包括造血干细胞（HSC）和MSC。同为脐带血来源，与UC-HSC相比UC-MSC具有更多的优点：UC-MSC主要来源于脐带组织；属于多能干细胞，扩增后的子代干细胞数量过亿；且增殖能力强，可供多次使用；用途广泛，可用于组织器官损伤与及神经系统、免疫系统、内分泌系统等系统疾病的治疗；治疗适用于各年龄段人群。而UC-HSC来源于脐带血液；属于专能干细胞，体外扩增难，技术操作复杂，需要大剂量化疗；获得后只供一次使用；主要用于治疗血液系统疾病，如白血病、再生障碍性贫血、地中海贫血等，并发症多，费用高，自体HSC治疗易复发，异体HSC治疗易发生GVHD；主要用于30kg左右的患者（相当于10周岁儿童的体重）。UC-MSC基于其来源广泛，便于取材，对供者无不利影响，低免疫原性，无伦理道德问题的限制，无GVHD，且细胞增殖、分化能力较强，适合体外大规模培养，越来越多的临床运用不断被报道。MSC移植治疗SLE是一个相对全新的领域，在细胞治疗领域具有广阔的应用前景。新近有研究表明［25］，应用UC-MSC治疗严重、反复发作的SLE患者，结果显示患者的病情活动指数明显下降；血清抗核抗体、抗dsDNA抗体浓度下降；血白蛋白、补体C3改善；肾脏功能恢复；复发减少并且没有移植相关并发症，治疗后外周血Treg细胞的数量增加，Th1/Th2细胞因子得以重新平衡，治疗效果与注射次数的增加有关，即呈剂量依赖性。随着这一新技术的广泛开展，这些潜在的临床应用价值将不断体现，从而为更多的SLE患者带来福音。参考文献［1］张华勇，冯学兵，孙凌云．系统性红斑狼疮患者骨髓间质干细胞生物学特性及对造血支持的研究．中华风湿病学杂志，2006，10：331-334．［2］GuZ，AkiyamaK，MaX，etal．Transplantationofumbilicalcordmes-enchymalstemcellsalleviateslupusnephritisinMRL/lprmice．Lu-pus，2010，19：1502-1514．［3］PapadakiHA，BoumpasDT，GibsonFM，etal．IncreasedapoptosisofbonemarrowCD34+cellsandimpairedfunctionofbonemarrowstro-malcellsinpatientswithsystemiclupuserythematosus．BrJHaema-tol，2001，115：167-174．［4］王华民，徐军发，陈雪玲．临床免疫学．北京：军事医学科学出版社，2010，146．［5］蔡辉，姚茹冰，郭郡浩．新编风湿病学．北京：人民军医出版社，2007：317-320．［6］KojoS，AdachiY，KeinoH，etal．DysfunctionofTcellreceptorAV24AJ18+，BV11+double-negativeregulatorynaturalkillerTcellsinautoimmunediseases．ArthritisRheum，2001，44：1127-1138．［7］孙铀，张凤山，张志毅．骨髓间质干细胞对系统性红斑狼疮患者调节性T细胞的免疫调节作用．中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网络出版时间：２０２３－０７－２５１７：４１：２０　网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｌｉｎｋ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｕｒｌｉｄ／３４．１０８６．Ｒ．２０２３０７２４．１３４４．０４０◇肾脏药理学◇

依普利酮对慢性肾脏病妊娠大鼠梗阻对侧肾组织的保护作用

许　畅１，２，许庆友２，３，周文平１，２，牛洁琪１，２，熊云昭２，３，王洪双１，４，

张孟娟１，４，刘佳志１，４，钟　艳２，３，王香婷３，王　筝２，３

（１．河北中医药大学研究生学院，河北石家庄　０５００９１；２．河北中医药大学中西医结合学院，河北石家庄　０５０２００；３．河北省中西医结合肝肾病证研究重点实验室，河北石家庄　０５００９１；４．河北中医药大学基础医学院，河北石家庄　０５０２００）

收稿日期：２０２３－０２－２６，修回日期：２０２３－０５－１３基金项目：河北省自然科学基金资助项目（ＮｏＨ２０２１４２３００６）；河北省研究生创新项目（ＮｏＸＣＸＺＺＳＳ２０２２０１０）作者简介：许　畅（１９９７－），女，硕士生，研究方向：肾脏病诊治规律及机制，Ｅｍａｉｌ：１０４１３８１８１７＠ｑｑ．ｃｏｍ；王　筝（１９８４－）女，博士，副教授，硕士生导师，研究方向：肾脏病诊治规律及机制，通信作者，Ｅｍａｉｌ：１０１７４２５８８７＠ｑｑ．ｃｏｍｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２２０９０６３文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２３）０８－１５３４－０７中国图书分类号：Ｒ３３２；Ｒ３２２６１；Ｒ６９２；Ｒ７１４２５；Ｒ９７７１；Ｒ９８３１摘要：目的　研究依普利酮对慢性肾脏病妊娠大鼠梗阻对侧肾脏的保护作用及机制。方法　雌性未经产Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为假手术组、假手术妊娠组、模型组、依普利酮组。模型组和依普利酮组大鼠结扎单侧输尿管，术后ｄ２开始给药，依普利酮组给予依普利酮１００ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１治疗。术后八周将假手术妊娠组、模型组和依普利酮组雌鼠与♂大鼠合笼，制备慢性肾脏病妊娠大鼠模型，妊娠ｄ１９摘取梗阻对侧肾脏。ＨＥ、Ｍａｓｓｏｎ染色观察肾脏病理改变；免疫组化、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ及ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ观察α平滑肌肌动蛋白（αＳＭＡ）、Ⅰ型胶原（ＣｏｌｌａｇｅｎⅠ）、淋巴内皮透明质酸受体１（ＬＹＶＥ１）、血管内皮生长因子Ｃ（ＶＥＧＦＣ）、血管内皮生长因子受体３（ＶＥＧＦＲ３）、盐皮质激素受体（ＭＲ）、血清和糖皮质激素诱导性蛋白激酶１（ＳＧＫ１）、磷酸化核因子κＢ（ｐＮＦκＢ）的表达。结果　肾脏病理显示模型组大鼠炎性细胞浸润增多，胶原纤维沉积增多；αＳＭＡ、ＣｏｌｌａｇｅｎⅠ、ＬＹＶＥ１、ＶＥＧＦＣ、ＶＥＧＦＲ３、ＭＲ、ＳＧＫ１、ｐＮＦκＢ蛋白或ｍＲＮＡ表达增强（Ｐ＜００１），依普利酮可下调其表达（Ｐ＜００１或Ｐ＜００５）。结论　依普利酮可保护慢性肾脏病妊娠大鼠梗阻对侧肾脏，其机制可能与阻断醛固酮与ＭＲ结合，改善淋巴管生成，阻断ＳＧＫ１／ＮＦκＢ信号通路有关。

淫羊藿苷在肾脏疾病中的作用

发布时间：2021-12-29T11:37:36.842Z 来源：《医师在线》2021年8月16期 作者： 李瑾瑾 王丽敏 赵冬梅 聂磊 李春玉

[导读]

李瑾瑾1 王丽敏2通讯作者 赵冬梅2 聂磊2 李春玉2

（1佳木斯大学；2佳木斯大学附属第一医院儿科；黑龙江佳木斯154000）

摘要：淫羊藿苷是常用于治疗肾脏疾病的中药，现代科学研究表明，其具有减轻纤维化，抗炎，抗氧化应激，抗凋亡，抗癌等作用。研究

人员将其应用于神经退行性疾病、心血管疾病、肿瘤等方面，分析其药理机制和药代动力学，已取得部分成果。通过对淫羊藿苷在肾脏疾

病中的作用及研究进行梳理，为后续相关研究提供一定的参考依据，以期进一步开发其医学价值。

关键词：淫羊藿苷；肾纤维化;糖尿病肾病

1淫羊藿苷概述

淫羊藿苷（ICA，icariin）是一种黄酮类化合物，从淫羊藿属植物中提取，是淫羊藿中主要的药效成分，具有多种生物活性作用[1]。药理学研究表明淫羊藿苷具有神经保护、抗炎、抗氧化应激、抗衰老和抗肿瘤等活性。人们发现它对神经退行性疾病、心血管疾病、免疫系

统疾病、内分泌疾病、骨骼等相关疾病有改善作用。在神经系统疾病方面，淫羊藿苷可改善阿尔茨海默病。在心血管系统疾病中，淫羊藿

苷减轻糖尿病大鼠心肌病变，改善异丙肾上腺素诱导的心肌纤维化。在内分泌系统疾病方面，淫羊藿苷可降低糖尿病大鼠血糖水平。在骨

骼系统疾病中，淫羊藿苷可减轻骨质疏松。

2淫羊藿苷对肾脏疾病的作用

2.1淫羊藿苷与糖尿病肾病

糖尿病肾病（DN）是糖尿病复杂的并发症之一，属于严重的慢性肾脏疾病，主要表现为蛋白尿、高血压和肾功能逐渐下降，目前治疗它的药物很少。Qi等[2] 用淫羊藿苷干预DN小鼠,发现它可通过抑制TLR4/NF-κB信号通路，减轻炎症反应，并能提高过氧化氢酶和超氧化物

歧化酶活性，改善肾脏病理损伤。在1型糖尿病肾病模型中[3]，淫羊藿苷抑制氧化应激，抑制大鼠肾纤维连接蛋白表达，减少细胞外基质沉