德国Leica TCS SP5 II 激光扫描共聚焦显微镜简介
TCS SP5 II系统是德国徕卡仪器有限公司推出的新一代激光扫描共聚焦显微镜， 具有高灵敏度(棱镜分光、狭缝扫描的专利技术，全无滤片、全光谱扫描)、高准确率（8192x8192的扫描分辨率；大扫描视野，均一性好；解决串色问题；专业的共聚焦物镜及校正系统；超精细Z轴扫描平台，可进行高精度XZ扫描）、高应用性（智能化的软件）的技术特色。
德国徕卡TCS SP5 II激光扫描共聚焦显微镜具有多种功能，它能够无损伤逐层扫描获取一维、二维及三维图像、多重荧光分离及重组成像、动态时间控制及快速扫描成像、荧光和时空参数定量测定等，因此该仪器常用于生物细胞或组织内的分子原位鉴定和定量、细胞及亚细胞结构形态学观察以及活体细胞或组织功能的动态监测，其在生命科学领域的分子水平、细胞及组织水平的研究中得到广泛应用。
激光扫描共聚焦显微镜主要有四部分组成：
1、显微镜光学系统。2、扫描装置。3、激光光源。4、检测系统。整套仪器由计算机控制，各部件之间的操作切换都可在计算机操作平台界面中方便灵活地进行。
本实验室激光共聚焦显微镜的基本参数：
型号：德国Leica SP5 II
激光器：4个 发射波长400 nm-800 nm
物镜：10倍 20倍 63倍
通道：多通道 多色
像素：可到达 8192×8192像素
系统：windows 7＋LAS AF
活体细胞装置：配有
基本功能：
多荧光标记样品的高清晰度、高分辨率图像采集
无损伤、连续光学切片，显微“CT”
三维重组
定位、定量分析
时间序列扫描: xyt 、xyzt 扫描等
感兴趣区域扫描
图像处理功能
多重荧光分离及重组成像 三维图像重构成像
活体细胞荧光染色的动态时间控制及快速扫描成像
达格列净对ApoE-/-小鼠单核巨噬细胞系统
及动脉粥样硬化的影响
李 宵1,王丹丹1,马 巍2,李 兵1,贾俊栋1,王泰然1,赵季红3
摘要 目的:研究达格列净对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块的影响,探讨其抗AS作用的可能机制。方法:
16只8周龄雄性ApoE-/-小鼠高脂饮食喂养8周形成AS模型后,随机分为对照组和实验组,每组8只,实验组予达格列净干预,对照组予同等剂量的生理盐水,两组干预4周后取材。油红O染色检测主动脉及主动脉瓣AS斑块面积比例;流式细胞术分析循环中单核细胞亚群的比例(Ly6G-CD11b+Ly6Chi和Ly6G-CD11b+Ly6Clo);免疫荧光染色和共聚焦显微镜成像检测斑块内的巨噬细胞和
增殖的巨噬细胞(F4/80和Ki67双阳性细胞);酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平。结果:实验组与对照组比较有降低主动脉及主动脉瓣斑块负荷的作用,降低循环中Ly6Chi单核细胞比例,降低斑块内增殖巨噬细胞比例,降低LDL-C水平,且具有升高HDL-C作用。结论:达格列净可减轻ApoE-/-小鼠AS负荷的作用,可能与调节单核细胞亚群和血脂代谢相关。关键词 动脉粥样硬化;达格列净;单核细胞亚群;增殖巨噬细胞;血脂;实验研究doi:10.12102/j.issn.1672-1349.2024.03.012
动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是导致心血
管疾病的主要病理生理基础,其发病机制有多种学说,
包括脂质浸润学说、慢性炎症学说等[1],其特征是动脉
壁内膜发生明显的慢性炎症反应,而单核巨噬细胞系
统参与了炎症反应的过程,在AS的进程中发挥了重
要作用[2]。达格列净作为钠-葡萄糖协同转运体2(sodiumglucoseco-transporters2,SGLT2)抑制剂,
大肠埃希菌生物膜两种检测方法对比研究
耿朝萌;刘林波;郭瑞林;苏冰;张晓雪
【摘 要】目的：刚果红-阿利新蓝联合染色和半定量粘附实验检测大肠埃希菌生物膜的敏感性和特异性比较。方法：对临床分离的83株大肠埃希菌进行生物膜形成实验，分别经刚果红-阿利新蓝联合染色和半定量粘附实验，随机抽取25株进行激光共聚焦显微镜（CLSM ）观察。结果：临床分离的83株大肠埃希菌经刚果红-阿利新蓝联合染色阳性率37．3％，敏感性81．8％，特异性100％；半定量粘附实验阳性率45．8％，敏感性100％，特异性78．6％；两种检测方法比较差异无统计学意义。结论：刚果红-阿利新蓝联合染色、半定量粘附实验均可用于大肠埃希菌生物膜的检测。
【期刊名称】《陕西医学杂志》
【年(卷),期】2016(000)003
【总页数】2页(P364-365)
【关键词】大肠埃希菌;生物膜/细胞学;刚果红-阿利新蓝联合染色;细菌粘附;染色与标记;显微镜检查 ,共焦;比较研究
【作 者】耿朝萌;刘林波;郭瑞林;苏冰;张晓雪
【作者单位】陕西中医药大学医学技术系 咸阳712000;陕西中医药大学医学技术系 咸阳712000;陕西中医药大学第二附属医院检验科;陕西中医药大学第二附属医院检验科;陕西中医药大学第二附属医院检验科
【正文语种】中 文 【中图分类】R446.5
·临床检验·
主题词 @大肠埃希菌 生物膜/细胞学 刚果红-阿利新蓝联合染色 细菌粘附
染色与标记 显微镜检查，共焦 比较研究
细菌生物膜形成在细菌感染中的作用已引起广泛关注，对生物膜的检测也得到了越来越高的重视，出现了各类不同的检测方法[1-5]。本文对我院临床分离的83株大肠埃希菌在体外能否形成生物膜进行实验，并分别采用刚果红-阿利新蓝联合染色，半定量粘附实验，比较其阳性检出率、敏感性和特异性，对其临床意义进行探讨，现报告如下。
1 实验菌株、主要试剂与仪器 收集2014年8～11月陕西中医药大学第二附属医院临床标本中分离的83株大肠埃希菌，删除同一患者相同感染部位分离的重复分离菌株，所有菌株均经临床鉴定。LB肉汤，刚果红(中国远航试剂厂)，阿利新蓝8GX(上海如吉生物科技有限公司)，结晶紫为国产分析纯，光学显微镜(OLYMPUS)，激光共聚焦显微镜(Leica TCS SP8),全自动酶标仪等。
徕卡显微镜惠更斯STED反卷积快速指南
本文档的目的是给徕卡STED用户简要介绍了使用与Leica TCS STED SP8 3倍显微镜获得的图像惠更斯专业解卷积图像。
图1（从左至右）：共焦; 受激发射损耗; 受激发射损耗反褶积
参数编辑器（在图像的缩略图右键点击）
图2：概述惠更斯图像参数编辑器。 这个窗口可以访问所需的受激发射损耗解卷积图像的所有相关图像参数。 导入时，LIF文件，大部分参数都自动从元数据提取（见惠更斯Pro用户指南从SVI更多信息）。
采样间隔（XYZT）：从图片属性获得的值
显微镜类型：值从图片属性取
数值孔径：数值从图片属性取
客观质量：取默认值“好”
盖玻片位置：使用专用工具（图示左侧）
拍摄方向：对于DMI显微镜总是“向上”
针孔间距：不相干的共焦/ STED显微镜
镜片浸泡：用“油”
包埋剂：从下拉菜单中选择合适的媒介。
Backproj。 从图片属性获得的值： 针孔
激发波长值从图片属性取
发光波长值从图片属性取
多光子激发：值从图片属性取
激发填充因子：从图片属性获得的值; 默认值= 2，除了TiSaph受激发射损耗（值= 1.2）
受激发射损耗耗尽型：从图片属性获得的值
STED饱和系数：见下面的更多细节
受激发射损耗波长值从图片属性取
受激发射损耗免疫力分数：见下面的更多细节
受激发射损耗3X：请参阅下面的详细资料
受激发射损耗饱和度的因素
饱和因素原本是指期限：
这是受激发射损耗分辨率公式的一部分：
它定义了STED PSF的全宽半高（FWHM），最后STED图像的分辨率。 与门控受激发射损耗和TCS STED SP8 3X，经典的理解饱和因子（主要依赖于激光强度和所选择的染料的消耗效率）的实施是由包括关于激励和损耗激光模式（附加信息扩展脉冲或CW）和门控检测。 在实践中，有两个参数影响STED的分辨率，因此惠更斯饱和系数：STED耗尽激光强度和栅极起始数值。 请记住，为了简化和整体实用性，被用于受激发射损耗PSF在惠更斯的计算只有一个“理想”染料的I SAT值。 每默认情况下，3.3和LAS AF版本后，预测值（来自成像参数）会自动在图像属性中设置并转移到惠更斯。 对。LIF的是在LAS AF的早期版本中获得的文件，饱和度的因素需要在惠更斯手动输入。 饱和系数的值可能需要取决于染料的受激发射损耗效率进一步调整。 保持眼睛上的图像分辨率（线剖面测量）的情况下，需要一些额外的改变。 下面，将显示一个阵列示出了饱和度因子与几种计算出的PSF的FWHM值之间的关系。 它应该提供的情况下的基准的实际图像分辨率不同于预测1。
