血红蛋白电泳说明书-new
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碱性血红蛋白
电泳说明书
Kit Cod. : SRE600K-SRE601K PKCE 110.0
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碱性血红蛋白电泳说明书
意大利Interlab公司
Via Rina Manti,26-00155 Roma
+39-06-227.54.350
碱性血红蛋白
电泳说明书
Kit Cod. : SRE600K-SRE601K PKCE 110.0
2 用途：
此碱性血红蛋白电泳试剂的包装是用于696PC系统的电泳试剂，此试剂可对人类的正常血红蛋白如H-A,H-A2和H-F通过琼脂糖凝胶的方法进行定性和定量的分离，以及可检测出异常的血红蛋白如S,C,D,E等
概述
血红蛋白合成受遗传基因的控制，并且异常血红蛋白的出现会引起红细胞形态和功能的变性。
血红蛋白是由珠蛋白肽链和含有铁的原卟啉组成。
正常的血红蛋白结构相似，分子量在67000道尔顿左右，由两对珠蛋白肽链和1个亚铁血红素组成。
HbA: 多肽链 2和2
HbA2: 多肽链 2和2
HbF: 多肽链 2和2
正常成人血红蛋白中，HbA占总蛋白浓度的98％，HbA2和HbF相对数量少些。
珠蛋白肽链中某一氨基酸被其他氨基酸所取代会导致Hb变异即可出现血红蛋白病。目前可鉴定出600多种变异的血红蛋白即结构变异的血红蛋白（S 、C、 E、 D、
G、 H、 I 、Lepore等）。在异常的血红蛋白中约有60％血红蛋白会有电荷差异，这样可用电泳的方法对这些血红蛋白进行鉴定。HbC和HbS是两种常见的变异的血红蛋白。HbA伴随有S,C,E等变异的血红蛋白出现称为杂合子血红蛋白病如AS或AC等。
只有一种变异的血红蛋白的出现称其为纯合子血红蛋白病如HbS病、HbC病等。这些变异的血红蛋白一般可导致地中海贫血。纯合子型血红蛋白病可引起一系列的临床症状。
碱性血红蛋白电泳主要用于分离正常血红蛋白如HbA、HbA2和异常或变异的血红蛋白（HbS、“快速”血红蛋白和D、C、E）。然而，在碱性Hb电泳中，一些正常的和异常的血红蛋白有相同的迁移率即这些蛋白质在同一位点（如HbA2与HbC，HbS与HbD）
琼脂糖酸性血红蛋白电泳可确定HbS或HbC。
原理：
根据蛋白质亚结构的电荷分布，在一定的PH值条件下，蛋白质分子可表现出有极性或非极性。
在琼脂糖凝胶电泳中，蛋白质分子根据分子量和等电点的不同而被分离出来。
电泳结束后，用氨基黑染料染色，可看到电泳结果。
警告: 此包装仅用于体外诊断
操作仪器
Interlab碱性血红蛋白电泳的试剂包装，货号为SRE604K在Microtech696PC仪器下可实现全自动分析。
试剂：
请参照使用者手册和手册中的图表来进行试验前的准备
碱性血红蛋白
电泳说明书
Kit Cod. : SRE600K-SRE601K PKCE 110.0
3 试剂的保存：
所有的试剂储存在室温15－30°C.在有效期的范围内所有的试剂都是稳定的。有效期过后，不宜再使用此试剂。
1. 琼脂糖凝胶片
成分：琼脂糖、巴比妥缓冲液、防腐剂、稳定剂
应用前的准备：此胶片可直接使用。
存储和稳定性：储存在室温15到30C，胶片在有效期内稳定。有效期过后，勿使用此胶片
勿将此胶片冰冻保存
注意：胶片必须保持水平放置
试剂变质的标志：
－在胶片包装里面有液体出现
－胶片的厚度不均
－有细菌生长
注：胶片表面吸水后出现波纹状为正常现象，可正常使用。
R: 22 吞咽有害
R: 36/38 损坏皮肤和眼睛
S: 26 一旦眼睛接触到，需立刻用大量清水清洗
S: 28 一旦皮肤接触到，需立刻用大量清水清洗
S: 46 如果吞咽，需立刻找医生就诊
2、酸蓝染料
成分：醋酸溶液中含有奈酚蓝浓缩液.
应用前的准备：此染液直接使用
存储和稳定性：储存在室温15到30C。浓缩液在有效期内稳定；工作液（稀释后的染液）储存时瓶盖要盖紧并在室温15到30C条件下稳定6个月。工作液用过10次染色循环后即染过10张胶片后应不能再使用。厂家建议，每五张胶片更换染液，保证无沉淀并染色效果良好。
试剂变性标志：无
R: 10 易燃
R: 35 引起严重烧伤
R: 36/37/38 对眼睛、呼吸系统及皮肤有刺激作用
S: 23 勿呼吸挥发气体
S: 26 一旦眼睛接触到，立刻用大量清水清洗
S:37/39 应戴保护手套及防护眼镜 碱性血红蛋白
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3. 含有缓冲液的海绵
缓冲液成分: 含有巴比妥的碱性缓冲液及防腐剂
使用前的准备：直接使用
存储和稳定性：储存在室温15到30C，缓冲绵条在有效期内稳定。有效期过后，勿使用。
缓冲液：巴比妥缓冲液（PH值为碱性）、防腐剂
试剂变性标志：如果试剂包装已被打开或缓冲绵条是干燥的则勿使用。绵条有黑色或黄色污点出现不会影响实验结果。
警告：
R: 25 吞咽有毒性
R: 36/38 对皮肤及眼镜有刺激性
R: 52 对水生生物有害
S: 26 一旦眼睛接触到，需立刻用大量清水清洗
S: 46 如果吞咽，需找医生就诊
4、点样器清洗液
成分：表面活性剂、防腐剂
应用前的准备：直接使用
存储和稳定性：储存在室温15到30C。有效期内稳定。
试剂变性标志：有云雾状沉淀出现
5、一次性载样盘
成分： 带有微孔的塑料盘
应用前的准备： 直接使用
存储和稳定性： 储存在室温15到30C。
6、吸水纸
成分： 薄吸水纸用于吸收凝胶片中多余的水分
应用前的准备： 直接使用
存储和稳定性： 储存在室温15到30C。有效期内稳定。
7、脱色液 (货号.: SRE201M; 不包括在此试剂盒中)
成分： 柠檬酸水溶液
应用前的准备： 此包装为浓缩液，应用前必须以1:1000比例用蒸馏水溶解
存储和稳定性： 储存在室温15到30C。浓缩液在有效期内稳定；工作液（稀释后的染液）于室温稳定2星期。
试剂变性标志： 有云雾状及黑色氧化斑点出现
R: 36/38 对眼睛、皮肤有刺激作用
R：41 对眼睛有严重损坏
S:37/39 应戴保护手套及防护眼镜 碱性血红蛋白
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5 8、裂解液：
成分：含有防腐剂的EDTA水溶液
应用前的准备：此裂解液直接使用
试剂变质的标志：此溶液必须是澄清的
R:22 勿吞咽
S:46 如果吞咽，请立刻找医生就医
试剂包装的组成
货号：SRE604K
用于696PC系统130人份
货号 产品描述 数量
SFE 166M Agarose plates
琼脂糖胶片 10
SCE 149M Sponges
海绵条
10
SRE 600A Acid Blue stain(500ml)
酸蓝染液（500ml） 1
SRE 150M Washing applicators（100ml）
洗液（100ml） 1
SCE 605M Sample wells plates(10)
载样盘(10) 1
SCE 602 A Blotters(10)
吸水纸（10） 1
SRE 140B Lysing reagent(60ml)
裂解液 1
此包装不含有的试剂但额外需要的试剂
货号 产品描述 数量
SRE201A 脱色液（100ml） 1
100l 、1000l加样枪
蒸馏水
0.90%NaCl
Interlab血红蛋白质控品SCE129E和或SCE130E
离心机
10ml移液器
样本要求
新鲜的肝素或EDTA抗凝的全血 碱性血红蛋白
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6 存储和稳定性：全血样本可储存在2-6°C保存1周
试验过程
样本的制备：
1. RBC洗涤：
1） 用3000转速的离心机离心全血5分钟
2） 弃去上层血浆
3） 加入约2ml的生理盐水，上下颠倒混匀5次
4） 用3000转速的离心机离心5分钟并弃去浮在表面上的悬浮液
5） 重复2）和3）步骤，直到上层液无色透明
说明：若无法使用全管血进行样本制备，则取200μL血细胞，加2mL生理盐水，依序3）4）5）步骤进行。
RBC裂解过程
1. 除掉表面的悬浮液确保没有多余的生理盐水残留在RBC表面上
2. 取30l RBC于一试管中，加150l裂解液
3. 充分混匀，使用前需要等5分钟。
说明：RBC及裂解液比例浓度可据标本情况调整。
试验运行条件
确定电脑软件中的参数是否正确包括（点样参数、电泳参数、染色脱色参数和结果判读参数），各参数设置请参照如下介绍。请参考“User’s Manual”查阅有关仪器参数设置的详细说明。
胶片的处理
用吸水纸C（SCE602A）吸取胶片表面多余的缓冲液（时间为2秒钟），将胶片插入胶片支架中。
696PC系统参数一览表：
碱性血红蛋白样本处理参数
SAMPLES DRAWING TIME
吸样时间 10
SAMPLES APPLICATION TIME
点样时间 40
AFTER APPLICATION WAITING TIME
点样后等待的时间 0
NUMBER OF APPLICATIONS
点样梳的数量 1
WASHING 1 TIME
用洗液1清洗点样梳的时间 10
