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利用蛋白质微阵列筛选抗胸腺瘤优势抗原表位

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第９卷第４期　２０１０年７月　

杭州师范大学学报（自然科学版）　

Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈａｎｇｚｈｏｕ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）　ＶｏＩ｜９　ＮＯ．４　

Ｊｕ１．２０１０　

ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４—２３２Ｘ．２０１０．０４．００ｌ　

利用蛋白质微阵列筛选抗胸腺瘤优势抗原表位　方　序　，王轶雄　，罗陈启　，闻树群　，陈　敏。　（１．浙江省微生物研究所，浙江杭州３１００Ｉ２；２．浙江大学医学院附属二院，浙江杭州３１０００９　３．杭州师范大学生命与环境科学学院，浙江杭州３１００３６）　

摘　要：通过设计多个针对Ｔｉｔｉｎ蛋白胞外区多肽序列，用蛋白质微阵列方法筛选抗Ｔｉｔｉｎ抗体识别的优势　抗原表位，并用ＥＬＩＳＡ法进行验证．结果显示，在８４例ＭＧ血清中，５１例抗多肽自身抗体阳性，阳性率６Ｏ．７１　．　经蛋白质微阵列筛选和ＥＬＩＳＡ法验证，发现在设计的９条多肽抗原中，Ｐ５、Ｐ６和Ｐ９是优势识别抗原线性表位；　进一步发现自身抗体识别的Ｐ５与Ｐ９多肽表位存在交叉性，并且均能被多肽抗原阻断．结果表明，用蛋白质微阵　列方法可有效筛选针对Ｔｉｔｉｎ自身抗体识别的优势抗原线性表位．　关键词：重症肌无力；Ｔｉｔｉｎ；自身抗体；优势抗原表位　中图分类号：Ｑ－３１；Ｒ３９２　３　文献标志码：Ａ　文章编号：１６７４—２３２Ｘ（２Ｏ１０）０４～０２４１一Ｏ４　

重症肌无力（ｍｙａｓｔｈｅｎｉａ　ｇｒａｖｉｓ，ＭＧ）发病率近年在我国呈明显上升趋势，重症肌无力是一类自身免　疫病，是由于机体免疫抑制性Ｔ细胞功能减弱，在自身反应性Ｔｈ细胞协同作用下，以神经肌肉接头处的　Ｎ型乙酰胆碱受体（Ｎｉｃｏｔｉｎｉｃ　ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＡＣｈＲ）等分子作为抗原诱发自身抗体，通过抗体依　赖的补体溶解作用参与对突触后膜运动终板的破坏，导致神经肌肉传递功能障碍，从而引发了一系列临床　症状口。］．目前发现ＭＧ除了产生抗乙酰胆碱受体抗体外，还产生针对胸腺瘤相关抗原Ｔｉｔｉｎ等多种抗原　成分的自身抗体．Ｔｉｔｉｎ是个大分子蛋白，是维持横纹肌功能的关键组分．以前的自身抗体检测集中在它的　

一个多肽片段（ＭＧＴ３０）上　］，除了ＭＧＴ３０，ＭＧ血清是否还存在Ｔｉｔｉｎ其他表位自身抗体呢？探明抗　Ｔｉｔｉｎ抗体识别抗原表位，特别是优势抗原线性表位对进一步的免疫干预有重要意义．但迄今为止尚缺少　相应文献报道．在此通过设计了多个针对Ｔｉｔｉｎ蛋白胞外区的多肽序列，用蛋白质微阵列的方法筛选抗　Ｔｉｔｉｎ抗体识别的优势抗原表位，结果报告如下．　

１　材料与方法　１．１　样　本　共收集重症肌无力患者新鲜血清８４例，由浙江大学医学院附属第二医院神经内科实验室提供．重症　肌无力诊断均由浙江大学医学院附属第二医院神经内科确认．所有样本经ＥＬＩＳＡ法检测为抗ＡｃｈＲ自身　

收稿日期：２０１Ｏ－０４—３０　基金项目：浙江省科技厅面上项目（２００７ｃ２３０２７；２００８ｃ２３０４９）．　作者简介：方序（１９６４～），男，浙江临安人，副研究员，主要从事分子生物学研究．Ｅ—ｍａｉｌ：ｈｚｆａｎｇｘｘ＠ｙａｈｏｏ．ＣＯ１ＴＩ．ｃｎ　通信作者：陈敏（１　９６３），女，浙江绍兴人，教授，主要从事微生物研究．Ｅ—ｍａｉｌ：ｍｃｈｅｎ６３＠１６３．ｃｏｍ　２４２　杭州师范大学学报（自然科学版）　２０１Ｏ年　抗体阳性．　１．２多肽设计和蛋白质偶联　根据生物信息学方法设计９条针对Ｔｉｔｉｎ　蛋白胞外区多肽序列见表１．多肽合成采用固相　合成法（ＳＰＰＳ），合成后的多肽再采用琥珀酰亚　胺４－［Ｎ一甲基马来酸］一１一羧环己烷（ＳＭＣＣ）双功　能交联剂在多肽巯基端与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）　的氨基端偶联．　１．３蛋白质微阵列点制　用ＢＣＤ法调整各蛋白浓度后，用蛋白点样　仪按８×１２的方式将各多肽一ＢＳＡ偶联蛋白点样　于硝酸纤维膜（１００　ｎｇ／点），每个多肽检测重复　６次，同时设立　肌动蛋白（　ａｃｔｉｎ）和甘油醛一３一　磷酸脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）内参照，待干燥后，用５％　小牛血清封闭后，备用．　１．４蛋白质微阵列检测　

表１合成多肽序列　Ｔａｂ．１　Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　

将待检稀释血清（１：１００，用５　小牛血清稀释）与微阵列芯片反应室温２　ｈ，用含０．５％Ｔｗｅｅｎ　２０的　０．０１　ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．４的磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）洗涤５次，再加入碱性磷酸酶标记的二抗室温１　ｈ，用含０．５　Ｔｗｅｅｎ　２０的０．０１　ｍｏｌ／Ｉ　，ｐＨ７．４的ＰＢＳ洗涤４次和无Ｔｗｅｅｎ　２０的０．０１　ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．４　ＰＢＳ洗涤１次，　最后加入ＣＤＰ～ｓｔａｒ发光底物，曝光显色１　ｍｉｎ．将微阵列检测结果转换成ＴＩＦＦ图片格式后，用Ａｒｒａｙ２．０　ｖｅｒｓｉｏｎ软件分析，凡反应信号与对照比较相差１．５倍以上者，为阳性，否则为阴性．　１．５微阵列结果验证　对微阵列检测阳性结果分别用酶联免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）法进行验证．将各多肽一ＢＳＡ偶联蛋白以１／￣ｇ／ｍＬ　浓度包被微孔，过夜，次日取出，用含０．５％Ｔｗｅｅｎ　２０的０．０１　ｍｏｌ／Ｉ　，ｐＨ７．４　ＰＢＳ洗涤３次，用５％小牛血　清封闭后，加人１００　Ｌ用５　小牛血清１：１００稀释的待检稀释血清，３７℃反应２　ｈ，洗涤５次，再加入辣　根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记的二抗室温１　ｈ，洗涤５次，最后加入邻苯二胺底物１００　Ｌ／孔，室温避光显色　５～１０　ｒａｉｎ．加入５０　ＦＩ　／孔硫酸终止反应，在４９０　ｎｍ处测各孔吸光度（Ａ）．凡Ａ值≥对照１．５倍者，判为　阳性，否则为阴性．　

２　结　果　２．１　重症肌无力患者血清针对各多肽自身抗体阳性例数　在８４例ＭＧ血清中，５１例抗多肽自身抗体阳性，阳性率为６０．７１％．经蛋白质微阵列方法筛选，结果　表明，在设计的９条多肽抗原中，针对多肽Ｐ５、Ｐ６和Ｐ９的阳性例数高于其他各多肽（见图１）．经卡方检　验，Ｐ＜０．０５．说明Ｐ５、Ｐ６和Ｐ９是优势识别表位．　２．２　Ｐ５、Ｐ６和Ｐ９识别表位交叉性鉴定　为鉴定Ｐ５、Ｐ６和Ｐ９识别表位有无交叉性，笔者分析了各样本之间的共同阳性情况．发现Ｐ５与Ｐ９多　肽共同阳性有８例（４４．４　），而Ｐ５与Ｐ６多肽、Ｐ６与Ｐ９多肽间共同阳性例数明显低于Ｐ５与Ｐ９多肽间　（见图２），Ｐ＜０．０５．Ｐ５、Ｐ６和Ｐ９均阳性的血清仅２例．结果表明，自身抗体识别的Ｐ５与Ｐ９多肽表位存在　交叉性．　２４４　杭州师范大学学报（自然科学版）　２Ｏ１０年　（ＭＩＲ），ＭＧＴ３０（３０　ｋＤ）．除了ＭＧＴ３０外是否还存在其他识别的表位呢？目前并不清楚．　微阵列和芯片诊断技术具有同时对几十个，乃至数万个基因或蛋白质进行分析，不仅大大减少了分别　检测的人力和物力，而且同时分析时克服了实验室的检测误差　＿９１．该研究采用生物信息学的手段，在微阵　列检测的基础上，分别对单个表位抗体的诊断有效性进行评估，通过对其有效性的不断拟合，克服了单个　检测的不足．用该方法从中发现了３个多肽表位在重症肌无力患者中呈优势表达，但其是否为对抗原特异　性Ｔｒｅｇ细胞识别表位需进一步研究．　

参考文献：　Ｅｌｉ　Ｓｋｅｉｅ　Ｇ　Ｏ，Ａａｒｌｉ　Ｊ　Ａ，Ｇｉｌｈｕｓ　Ｎ　Ｅ．Ｔｉｔｉｎ　ａｎｄ　ｒｙａｎｏｄｉｎｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｉｎ　ｍｙａｓｔｈｅｎｉａ　ｇｒａｖｉｓ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｎｅｕｒｏｌ　Ｓｃａｎｄ　Ｓｕｐｐｌ，２００６，　１８３：ｌ９—２３．　Ｅ２］Ｂｅｎｎｅｔｔ　Ｄ　Ｌ，Ｍｉｌｌｓ　Ｋ　Ｒ，Ｒｉｏｒｄａｎ—Ｅｖａ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｔｉ—ＭｕＳＫ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｉｎ　ａ　ｃａｓｅ　ｏｆ　ｏｃｕｌａｒ　ｍｙａｓｔｈｅｎｉａ　ｇｒａｖｉｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｎｅｕｒｏｌ　Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ　Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２００６，７７（４）：５６４—５６５．　［３３　Ｍｙｇｌａｎｄ　Ａ，Ｔｙｓｎｅｓ　Ｏ　Ｂ，Ｍａｔｒｅ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｔｉ—ｃａｒｄｉａｃ　ｒｙａｎｏｄｉｎｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｉｎ　ｔｈｙｍｏｍａ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｍｙａｓｔｈｅｎｉａ　ｇｒａｖｉｓ［－Ｊ］．　

Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ，１　９９４，１７（４）：３２７—３３１．　［４］Ｘｕ　Ｔｏｎｇｈｕｉ，Ｊｕｎ　Ｄｉｎｇ，Ｓｈｉ　Ｙｕｌｉａｎｇ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｍｙａｓｔｈｅｎｉａ　ｇｒａｖｉｓ　ｐａｔｉｅｎｔｓ’ｓｅｒａ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｏｎ　ｓｌｏｗ　Ｋ　ｃｕｒｒｅｎｔ　ａｔ　ｍｏｕｓｅ　ｍｏｔｏｒ　ｎｅｒｖｅ　ｔｅｒｍｉｎａｌｓ［Ｊ３．Ｎｅｕｒｏｌ　Ｒｅｓ，２００３，２５（１）：５８—６２．　ｒ５］Ｅｖｏｌｉ　Ａ，Ｔｏｎａｌｉ　Ｐ　Ａ，Ｐａｄｕａ　Ｌ，ｅｔ　ｎ１．Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ　ｗｉｔｈ　ａｎｔｉ—ＭｕＳＫ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｉｎ　ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ　ｓｅｒｏｎｅｇａｔｉｖｅ　ｍｙａｓｔｈｅｎｉａ　ｇｒａｖｉｓ［Ｊ］．　

Ｂｒａｉｎ，２００３，１２６（１０）：２３０４—２３１１．　［６］Ｙａｍａｍｏｔｏ　Ａ　Ｍ，Ｇａｊｄｏｓ　Ｐ，Ｅｙｍａｒｄ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｔｉ—Ｔｉｔｉｎ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｉｎ　ｍｙａｓｔｈｅｎｉａ　ｇｒａｖｉｓ：ｔｉｇｈｔ　ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｙｍｏｍａ　ａｎｄ　ｈｅｔｅｒｏｇｅ—　ｎｅｉｔｙ　ｏｆ　ｎｏｎｔｈｙｍｏｍａ　ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ａｒｃｈ　Ｎｅｕｒｏｌ，２００１，５８（６）：８６９—８７０．　［７］Ｃｈｅｎ　Ｘｉａｎｇｊｕｎ，Ｊｉａｎ　Ｑｉａｏ，Ｘｉａｏ　Ｂａｏｇｕｏ，ｅｔａ１．Ｔｈｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ｏｆ　Ｔｉｔｉｎ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｉｎ　ｍｙａｓｔｈｅｎｉａ　ｇｒａｖｉｓ：ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｙｍｏｍａ　ａｎｄ　ｓｅｖｅｒｉｔｙ　ｏｆ　ｍｙａｓｔｈｅｎｉａ　ｇｒａｖｉｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｎｅｕｒｏｌ，２００４，２５１（８）：１００６—１０１１．　［８］Ｄｅ　Ｗｉｌｄｔ　Ｒ　Ｍ，Ｍｕｎｄｙ　Ｃ　Ｒ，Ｇｏｒｉｃｋ　Ｂ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｔｉｂｏｄｙ　ａｒｒａｙｓ　ｆｏｒ　ｈｉｇｈ—ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　ａｎｔｉｂｏｄｙ—ａｎｔｉｇｅｎ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ［Ｊ￣．Ｎａｔ　

Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０００，１８（９）：９８９—９９４．　［９］Ｅｌｓｈａｌ　Ｍ　Ｆ，ＭｃＣｏｙ　Ｊ　Ｐ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ　ｂｅａｄ　ａｒｒａｙ　ａｓｓａｙｓ：ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｔｏ　ＥＬＩＳＡ［Ｊ］．Ｍｅｔｈｏｄｓ，　

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免疫组化抗体手册范本

免疫组化抗体手册范本

免疫组织化学抗体手册目录中间丝细胞角蛋白AE1/AE3Cam5.2MNF-11634βE12CK5/6常见肿瘤中的特殊角蛋白CK1CK7CK8CK13CK14CK18CK19CK20TTF-1，CK7和CK20的表达有助于诊断原发性肺腺癌还是转移性腺癌Vimentin（波形蛋白）Desmin（结蛋白）GFAP（胶质纤维酸性蛋白）Neurofilament proteins（神经细丝蛋白）Acid phosphatase（酸性磷酸酶）Actins（肌动蛋白）Muscle-specific actin（HHF35）肌肉特异性肌动蛋白（MSA）Smooth muscle actin（SMA）平滑肌肌动蛋白α-actinin（α-肌动蛋白）NPM/ALK（间变性淋巴瘤激酶）AAT、AACT （α1-抗胰蛋白酶、α1－抗糜蛋白酶）AFP （甲胎蛋白）α-lactalbumin （α-乳清蛋白）Angiotensin-converting enzyme（血管紧素-转换酶）Anti- Mullerian hormone（AMH），Mullerian-抑制因子Cyclin D1（PRAD-1，bcl-1,CCND1）细胞周期蛋白D1bcl-2Bcl-6Ber-EP4Ca15.3B72.3 (BRST-3)BCA-225CA125CA19.9CEA（CD66e）CadherinsCalcitoninh-CaldesmonS-100CalponinCalretininCD1CD2CD3CD4CD5CD7CD8CD9（运动相关蛋白，MRP-1）CD10（CALLA，NEP）CD11CD13CD14CD15（LeuM1）CD16CD19CD20CD21CD22CD23CD25CD30（Ki-1）CD31CD33CD34CD35CD38CD43CD44CD45(白细胞共同抗原，LCA)CD45RA（4KB5，MB1，KiB3，MT2）CD45RO（UCHL1，A6，OPD4）CD56（神经细胞粘附分子，NCAM，Leu19）CD57（Leu 7）CD68（Kp1，PG-M1）CD74CDw75CD79aCD99（MIC2）CD101CD117（c-kit癌基因）黑色素瘤细胞粘附分子，Mel-CAM，CD146Chromogranin（嗜铬蛋白）C-mycCAN.42Collagen （胶原）DBA44DesmoplakinEndosialin(FB5)Endothelin(ET-1)上皮膜抗原（EMA、MUC1）Oestrogen Receptor(ER)Factor VIII-related antigen(von willibranel factor ,VWF)Factor XIII aFascinFerritinFli-1Glucose-transporter-4,GLUT-4HBME-1Heppar 1 ,Hepatocyte paraffin 1HLA-DRHMB-45（anti-gp100）Human chorionic gonadotrophin（hCG）Human placental lactogen（hPL）α-InhibinInvolucrinKi-67Ki-S2Laminin（层粘连蛋白）MAC387（巨噬细胞标志物）Melan-A（一种黑色素细胞分化标志物）Microphthalmia transcrftion Factor （mitf）MOC-31MucinsMyogenin和Myo-D1MyoglobinLow-affinity Nerve goowth Factor receptor低亲和力神经生长因子受体 (P75NGFR)NSEOsteocalcin and other putative markers of ostoblastic differantiationgu g 骨钙蛋白和成骨细胞分化其它标志物Osteonectin（SPARC,BM-40）P504SParathyroid hormore-related peptide(PTHrP) 甲状旁腺激素相关肽Pax gene products （Pax 基因产物）Proliferatiny Cell Nucrear Antigen(PCNA)增殖细胞核抗原Placental alkaline phosphataseProgesterone receptor（孕酮受体）Prostate-specific antigen(PSA) 前列腺特异抗原Prostatic acid phosphatase(PAP) 前列腺酸性磷酸酶Protein gene Product 9.5(PGP9.5)蛋白基因产物P53P63Renal cell careinoma marker(RCC Ma)肾细胞癌标志物Rb2/P130Sarcomeric contractile proteins肌肉收缩蛋白Sialosy1-TNSurfactant proteins表面活性蛋白TauSynaptophysin（突触素）Telomerase reverse transcriptase ,TERT端粒酶逆转录因子Tenascin-CTerminal deoxynuckotide transferase(TdT)末端脱氧核苷酸转移酶Thrombomodulin血栓调节蛋白Thyroglobulin甲状腺球蛋白Thyroid transcription factor-1甲状腺转录因子-1Tyrosinase酪氨酸酶VS38Wilms tumor gene ，WT1中间丝这是一组构成细胞骨架的蛋白质，它们形成直径8~10nm的胞浆细丝。

某大学生物工程学院《普通生物化学》考试试卷(6601)

某大学生物工程学院《普通生物化学》考试试卷(6601)

某大学生物工程学院《普通生物化学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（140分，每题5分）1. 解偶联剂可抑制呼吸链的电子传递。

（）答案：错误解析：2. 在脂双层分子中，因为脂分子的亲水头部朝向两个表面，因此脂分子是对称性分布的。

（）答案：错误解析：膜脂的不对称性分布是指同一种膜脂分子在膜的脂双层中呈不均匀分布。

如人红细胞膜外层含磷脂酰胆碱和鞘磷脂较多，内层则含磷脂酰丝氨酸和磷脂酰乙醇胺较多。

3. 辅基与辅酶的区别只在于它们与蛋白质结合的牢固程度不同，并无严格的界限。

（）答案：正确解析：4. 真核生物成熟的mRNA的两端都带有游离的3′OH。

（）[华东师范大学2008研]答案：错误解析：成熟的真核mRNA的3′OH在3′末端，5′端没有。

5. 必需氨基酸是指人体不能合成的氨基酸。

（）答案：正确解析：6. DNA的Tm值随（A＋T）（G＋C）比值的增加而减少。

（）答案：正确解析：DNA分子中GC含量越高，DNA越稳定，Tm值就越高。

7. 生物体内脱氧核苷酸的合成一般通过氧化反应实现。

（）答案：错误解析：8. 在肌肉细胞中磷酸戊糖途径比在脂肪细胞中更活跃。

（）答案：错误解析：磷酸戊糖途径能为脂肪酸合成提供大量的还原当量NADPH，因而在脂肪细胞中该途径远比在肌肉细胞中更为活跃。

9. 内含子的自我剪接说明某些RNA也具有酶活性。

（）[中山大学研]答案：正确解析：10. 提高盐浓度可使DNA分子的熔点Tm升高。

（）[厦门大学2014研]答案：正确解析：11. DNA变性是指互补碱基之间的氢键断裂。

（）[中山大学2018研]答案：正确解析：12. 脂肪的皂化价高表示含低相对分子质量的脂肪酸少。

（）[山东大学2017研]答案：错误解析：皂化值是指皂化1g脂肪所需的KOH的毫克数。

PVT1通过促进肿瘤干细胞特性介导肺腺癌细胞PC9厄洛替尼抵抗

PVT1通过促进肿瘤干细胞特性介导肺腺癌细胞PC9厄洛替尼抵抗

•920•中国老年学杂志2019年2月第39卷PVT1通过促进肿瘤干细胞特性介导肺腺癌细胞PC9厄洛替尼抵抗汤中文倪正义（武汉市金银潭医院胸外科，湖北武汉430023）〔摘要〕目的探究浆细胞瘤转化迁移基因（PVT）1对肺腺癌肿瘤干细胞特性及厄洛替尼抵抗的影响。

方法慢病毒介导转染PVT1干扰载体siPVTl-1及siPVTl-2下调肺腺癌细胞PC9中PVT1的表达作为干扰A组及干扰B组细胞，转染对照载体为对照组细胞。

实时荧光定量PCR（qPCR）技术检测PVT1.CD133和CD44mRNA的表达水平，Western印迹检测CD133和CD44蛋白的表达水平。

CCK-8法检测细胞对厄洛替尼的半抑制浓度（IC50），方差分析及SNK-g检验比较各组指标间的统计学差异。

结果干扰A组及干扰B组PVT1、CD133和CD44mRNA的表达水平均显著低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。

干扰A组及干扰B组CD133和CD44蛋白表达水平均显著低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。

干扰A 组及干扰B组厄洛替尼IC50显著低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。

结论PVT1可通过诱导肺腺癌细胞干细胞特性的维持促进其厄洛替尼抵抗的发生。

〔关键词〕浆细胞瘤转化迁移基因1;肺腺癌;厄洛替尼;肿瘤干细胞〔中图分类号〕R735.9〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-9202（2019）O4Q920Q4;doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2019.04.0502015年我国肺癌新发病例约73.3万，死亡61.0万,且呈快速增长趋势⑴，肺腺癌属于非小细胞肺癌，是肺癌主要的病理类型，其细胞恶性程度强，血行转移发生早，多数患者就诊时已处于晚期⑵。

表皮生长因子受体（EGFR）是影响肺腺癌进展的重要因素,EGFR突变的肺腺癌细胞倾向于更高的恶性程度，同时存在EGFR突变的患者肿瘤进展更快且预后不良⑶，表明EGFR可作为原癌基因参与促进肺腺癌的进展。

《生物化学》课后习题答案

《生物化学》课后习题答案

生物化学（第三版）课后习题详细解答第三章氨基酸提要α-氨基酸是蛋白质的构件分子，当用酸、碱或蛋白酶水解蛋白质时可获得它们。

蛋白质中的氨基酸都是L型的。

但碱水解得到的氨基酸是D型和L型的消旋混合物。

参与蛋白质组成的基本氨基酸只有20种。

此外还有若干种氨基酸在某些蛋白质中存在，但它们都是在蛋白质生物合成后由相应是基本氨基酸（残基）经化学修饰而成。

除参与蛋白质组成的氨基酸外，还有很多种其他氨基酸存在与各种组织和细胞中，有的是β-、γ-或δ-氨基酸，有些是D型氨基酸。

氨基酸是两性电解质。

当pH接近1时，氨基酸的可解离基团全部质子化，当pH在13左右时，则全部去质子化。

在这中间的某一pH（因不同氨基酸而异），氨基酸以等电的兼性离子（H3N+CHRCOO-）状态存在。

某一氨基酸处于净电荷为零的兼性离子状态时的介质pH称为该氨基酸的等电点，用pI 表示。

所有的α-氨基酸都能与茚三酮发生颜色反应。

α-NH2与2,4-二硝基氟苯（DNFB）作用产生相应的DNP-氨基酸（Sanger反应）；α-NH2与苯乙硫氰酸酯（PITC）作用形成相应氨基酸的苯胺基硫甲酰衍生物（ Edman反应）。

胱氨酸中的二硫键可用氧化剂（如过甲酸）或还原剂（如巯基乙醇）断裂。

半胱氨酸的SH基在空气中氧化则成二硫键。

这几个反应在氨基酸荷蛋白质化学中占有重要地位。

除甘氨酸外α-氨基酸的α-碳是一个手性碳原子，因此α-氨基酸具有光学活性。

比旋是α-氨基酸的物理常数之一，它是鉴别各种氨基酸的一种根据。

参与蛋白质组成的氨基酸中色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸在紫外区有光吸收，这是紫外吸收法定量蛋白质的依据。

核磁共振（NMR）波谱技术在氨基酸和蛋白质的化学表征方面起重要作用。

氨基酸分析分离方法主要是基于氨基酸的酸碱性质和极性大小。

常用方法有离子交换柱层析、高效液相层析（HPLC）等。

习题1.写出下列氨基酸的单字母和三字母的缩写符号：精氨酸、天冬氨酸、谷氨酰氨、谷氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。