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检测乙型脑炎病毒中和抗体的简化试验摘要：在亚洲，乙型脑炎病毒是病毒性脑炎的常见病因，据统计，每年大约有45000例病例。
它导致显着的发病率和死亡率。
乙型脑炎病毒主要通过库蚊在鸟类和动物之间传播，而人类被认为是其终末宿主。
由于登革热在乙型脑炎流行地区也很普遍，因此必须通过检测乙型脑炎病毒特异性中和抗体来证实乙型脑炎阳性血清。
噬斑减少中和试验是检测以及量化乙型脑炎病毒中和抗体的黄金标准。
然而，噬斑减少中和试验大约需要一个星期，并且在在6个或24孔板中进行，这对于大规模筛选具有局限性。
因此有必要开发一种可用于检测和定量乙型脑炎病毒中和抗体的简化方案。
该法在96孔板中进行，将适合用于大规模筛查人群的免疫水平以及疫苗的免疫效力研究。
关键词：乙型脑炎病毒；中和抗体；酶联免疫引言在亚洲，主要由节肢动物传播的乙型脑炎病毒是病毒性脑炎的常见病原。
据统计，每年大约有45000个病例，死亡率为25%;并且有高达50％的患者留有神经系统后遗症（世界卫生组织，1996年）。
乙型脑炎病毒为RNA正链病毒，属于黄病毒科。
病毒发生表现有地方性周期性特点，库蚊和猪为其主要的宿主，病毒在其体内大量复制。
然而，人类被认为是其终末宿主。
（Sabchareon和Yoksan，1998）在亚洲许多地方乙型脑炎病毒都有流行，往往在这些地方都伴随有登革热病毒流行。
因此，为了与登革热区分，就必须通过检测乙型脑炎病毒特异性中和抗体来证实其确为乙型脑炎病毒阳性血清。
此外，检测中和抗体也可作为检测乙型脑炎疫苗效力的合理的替代措施。
（Markofff L.，2000）。
“斑减少中和试验是检测和量化乙型脑炎病毒中和抗体的标准方法（Shyu等.1997）。
然而，斑减少中和试验需要一周才能完成并且仅在6或24孔板中进行，从而对于大规模的筛选表现出一定的局限性，在疫苗的效力学研究以及血清流行病学调查方面其局限性表现得更加突出。
结果通过肉眼计数斑块的数量来获得，而这，也有一定的主观偏差。
微生物检验技术中级《基础知识》（题库）模拟试卷二[单选题]1.《突发公共卫生事件应急条例》规定突（江南博哥）发事件责任报告人是指A.疾病预防控制中心B.卫生行政部门C.医疗卫生机构和有关单位D.各级地方人民政府E.突发事件监测机构、医疗卫生机构和有关单位参考答案：E参考解析：《突发公共卫生事件应急条例》第二十条规定：突发事件监测机构、医疗卫生机构和有关单位发现有本条例第十九条规定情形之一的，应当在2h内向所在地县级人民政府卫生行政主管部门报告。
所以突发事件责任报告人是指突发事件监测机构、医疗卫生机构和有关单位。
[单选题]2.用酶联免疫吸附试验（ELISA）最早检出SARS冠状病毒抗体的时间为A.1dB.7dC.10dD.15dE.28d参考答案：B参考解析：非典"病人发病后，最早的抗体IgM出现要在7d左右，10d时达到高峰，15d左右下降，抗体IgG10d后产生，20d左右达到高峰。
[单选题]4.抗原抗体的结合力最重要的是A.范德华引力B.氢键C.静电引力D.共价结合力E.疏水作用力参考答案：E参考解析：抗原抗体是一种非共价的结合，不形成共价键，需要四种分子间引力参与。
1.静电引力又称库伦引力，是因抗原、抗体带有相反电荷的氨基与羧基基团间相互吸引的能力，这种吸引力的大小和两个电荷间的距离平方成反比。
两个电荷距离越近，静电引力越大。
2.范德华引力这是原子与原子、分子与分子相互接近时分子极化作用发生的一种吸引力，是抗原、抗体两个大分子外层轨道上电子相互作用时，两者电子云中的偶极摆动而产生的引力。
这种引力的能量小于静电引力。
3.氢键结合力是供氢体上的氢原子与受氢体上氢原子间的引力。
其结合力较强于范德华引力。
4.疏水作用力水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。
当抗原表位和抗体超变区靠近时，相互间正负极性消失，周围亲水层也立即消失，从而排斥两者间的水分子，使抗原抗体进一步吸引和结合。
抗原表位的分类和特征
抗原表位是指能够与抗原结合并引发免疫反应的特定区域，它可以分为以下几类：
1. 连续性表位（Continuous epitopes）：连续性表位是指抗原蛋白上具有一定连续氨基酸序列的区域，也称为线性表位。
这种表位通常出现在蛋白的螺旋、折叠或延伸区域。
连续性表位多数由线性的氨基酸序列组成，相对容易识别和结合。
2. 不连续性表位（Discontinuous epitopes）：不连续性表位是指抗原蛋白上的表位不是由连续的氨基酸序列组成，而是由分散的氨基酸残基组成。
这种表位通常由蛋白质在三维结构中相对靠近的氨基酸组成。
不连续性表位通常构成抗原蛋白的特定结构域，如折叠或结构域的交界处。
3. 表面表位（Surface epitopes）：表面表位是指位于抗原蛋白的表面上的表位，易于抗体发现并与其结合。
表面表位通常通过与抗体的可变区域相互作用引发免疫反应。
特征方面，抗原表位具有以下特点：
1. 特异性：抗原表位具有特异性，即只与特定的抗体结合。
它们能够唯一识别并结合与其相互作用的抗体分子。
2. 变异性：抗原表位的变异性表示它们在不同的抗原中可能会发生变化。
这意味着同一个表位可能在不同的抗原中具有不同的氨基酸序列。
3. 免疫原性：抗原表位能够引发免疫反应，激发机体产生特异性抗体，以及效应性T细胞等免疫细胞的免疫应答。
4. 重复性：某些抗原表位可能在同一个抗原中重复出现，从而增加免疫系统检测和识别的机会。
总的来说，抗原表位的分类和特征对于了解免疫反应的机制、抗原-抗体相互作用的基础和免疫诊断等方面具有重要意义。
乙型脑炎的检查1.血象：白细胞计数一般在10～30×109/L，中粒细胞增至80%以上，核左移，嗜酸粒细胞可减少。
2.脑脊液检查：外观澄清或微混，白细胞计数增加，多数在0.05～0.5×109/L之间，个别病人可达1×109/L以上，或始终正常；在病初以中性粒细胞占多数，以后逐渐以淋巴细胞为多。
蛋白稍增加，糖定量正常或偏高，氯化物正常。
脑脊液中免疫球蛋白的测定对鉴别诊断有帮助。
化脓性脑膜炎患者脑脊液中的IgM明显升高，结核性脑膜炎患者则IgA、IgG升高显著，而病毒性脑膜炎患者在后期时IgG可有升高。
3.血清学检查：（1）血凝抑制试验：可测定IgM抗体及IgG抗体，敏感性高，方法简便快速，但试验要求严格，偶见假阳性反应。
双份血清效价增长4倍以上可确诊，单份血清抗体效价1：100为可疑，1：320可作诊断、1：640可确诊。
（2）二巯基乙醇（2ME）：耐性试验检测IgM抗体，患者血清标本在2ME处理前、后分别作血凝抑制试验，如处理后血凝抑制抗体效价下降1/2～3/4，表示特异性Ig M已被2ME裂解，即为试验阳性。
本法可在起病第4～8天即呈阳性，且由于单份血清即有辅助价值，故可对乙脑进行早期诊断。
（3）补体结合试验：特异性较高，但其阳性大都出现在第4～7周，双份血清抗体效价有4倍或以上的增长即可诊断。
若仅单份血清，1：2为可疑，1：4以上有助诊断。
（4）中和试验：病后一周血中出现中和抗体，效价增长4倍以上可确诊。
早期为IgM，后期为IgG.此法特异性及敏感性均较高，抗体持续终生。
一般用于流行病学调查。
（5）免疫荧光试验：发病初1～2天的血液或发热第2～4天的脑脊液及发热全程的脑室内的脑脊液，均可采用本法检测乙脑病毒抗原，方法快速，阳性率高，有早期诊断价值。
酶联免疫吸附试验（ELISA）：一般用于测定血清中的乙脑抗体，比较灵敏、特异。
4.病毒分离：病初可取血清或脑脊液接种乳鼠以分离病毒，但阳性率较低。
