新型乳酸菌增菌培养基研究

乳酸菌的培养作者：王庆起来源：《科技资讯》 2012年第18期王庆起(山东睿鹰先锋制药有限公司山东菏泽 274039)摘要:乳酸菌是发酵食品中应用最为广泛的细菌之一。

基于其特殊的生理功能,在发酵工程中,首先要选育优良菌种,但由于微生物在自然条件下都是杂居混生的,因此要选育良种,就必须对其中的纯种微生物进行分离或鉴定。

关键词:乳酸菌生理鉴定中图分类号:TS252.1 文献标识码:A 文章编号:1672-3791(2012)06(c)-0093-01乳酸菌(Lactic acid bacteria,LAB)是一类可发酵碳水化合物产生乳酸的革兰氏阳性细菌的总称,主要包括乳杆菌、乳球菌、明串珠菌、片球菌、链球菌及双歧杆菌等。

1 乳酸菌的生理功能乳酸菌的生理功能主要有:(1)具有粘附性和定植能力。

(2)产生抑菌活性的代谢产物。

(3)降低胆固醇。

(4)具有抗变异原性。

(5)改善肝脏功能。

(6)增强免疫功能。

2 乳酸菌的类型乳酸菌大体上可分为两大类。

一类是动物源乳酸菌,一类是植物源乳酸菌。

3 材料与方法3.1 材料3.1.1 样品市售进口奶酪。

3.1.2 培养基(1)MRS液体培养基:蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖20g、乙酸钠5g、柠檬酸三铵1.45g、K2HPO4·H2O 2.6g、MgSO4·7H2O 0.58g、MnSO4·4H2O 0.25g、吐温80 1.0g、蒸馏水1000mL。

(pH 6.2～6.4,121℃,灭菌20min)。

(2)BCG培养基:A、B液灭菌后混匀。

A液:脱脂奶粉50g,1.6%溴甲酚绿酒精液0.35ml,蒸馏水250ml.(90℃,开盖灭菌10min).B液:酵母膏5g,琼脂10g,蒸馏水250ml。

(pH 6.8,121℃灭菌20min)A、B液灭菌后在无菌状态下混匀后倒平板。

3.2 方法3.2.1 样品的处理奶酪的处理:以无菌操作取奶酪1g,放入含有9mL灭菌加热至含40℃左右的生理盐水的灭菌广口瓶内,待奶酪溶解制成1∶10的均匀稀释液,并用无菌生理盐水逐级稀释至10-3、10-4、10-5。

《乳酸菌胞外多糖的筛选、纯化及免疫活性研究》篇一一、引言乳酸菌是一类重要的微生物，其产生的胞外多糖（Exopolysaccharides, EPS）具有多种生物活性，包括增强免疫力、抗肿瘤、抗氧化等作用。

因此，对乳酸菌胞外多糖的筛选、纯化及免疫活性研究具有重要的科学意义和应用价值。

本文旨在探讨乳酸菌胞外多糖的筛选、纯化方法及其免疫活性的研究进展。

二、乳酸菌胞外多糖的筛选1. 菌种筛选首先，从各种乳酸菌中筛选出能够产生胞外多糖的菌种。

通过观察菌株在培养基上的生长情况、产糖量的多少以及产糖速度的快慢等因素，初步筛选出具有产糖潜力的菌种。

2. 发酵条件优化对初步筛选出的菌种进行发酵条件的优化，包括温度、pH值、接种量、培养时间等因素的调整，以提高胞外多糖的产量和质量。

三、乳酸菌胞外多糖的纯化1. 初步纯化采用离心、沉淀、超滤等方法对发酵液中的胞外多糖进行初步纯化，去除杂质和未完全分解的物质。

2. 高级纯化通过凝胶过滤、离子交换、高效液相色谱等方法对初步纯化后的胞外多糖进行进一步纯化，得到较为纯净的胞外多糖样品。

四、免疫活性研究1. 细胞免疫实验通过细胞免疫实验，观察乳酸菌胞外多糖对免疫细胞的影响，包括刺激淋巴细胞增殖、促进细胞因子分泌等作用。

2. 动物实验通过动物实验，观察乳酸菌胞外多糖对动物免疫功能的影响，包括增强体液免疫、细胞免疫等作用，以及其对肿瘤的抑制作用等。

五、结果与讨论经过筛选、纯化后的乳酸菌胞外多糖具有较高的纯度和生物活性。

在细胞免疫实验和动物实验中，均表现出较强的免疫增强作用，能够刺激免疫细胞增殖、促进细胞因子分泌，增强体液免疫和细胞免疫等作用。

此外，乳酸菌胞外多糖还具有抗肿瘤、抗氧化等作用，具有广泛的应用前景。

在研究过程中，我们还发现乳酸菌胞外多糖的产量和纯度受发酵条件、菌种类型等多种因素的影响。

因此，在今后的研究中，需要进一步探讨不同因素对乳酸菌胞外多糖产量和纯度的影响，以及不同来源的乳酸菌胞外多糖的生物活性差异等方面的内容。

乳酸菌发酵培养基中麦芽糊精的作用Maltodextrin plays a crucial role in lactic acid bacteria fermentation media. Maltodextrin is a type of carbohydrate derived from starch. Its main function in fermentationmedia is to serve as a source of carbon and energy for the growth and multiplication of lactic acid bacteria.麦芽糊精在乳酸菌发酵培养基中扮演着重要角色。

麦芽糊精是一种从淀粉中提取得到的碳水化合物，其在发酵培养基中的主要功能是为乳酸菌的生长和繁殖提供碳源和能量。

Lactic acid bacteria are known for their ability to convert sugars into lactic acid through the process of fermentation. This is why they are widely used in the production of fermented dairy products such as yogurt and cheese. Maltodextrin, being a complex carbohydrate, can be easily broken down by lactic acid bacteria through enzymatic hydrolysis. The enzymes produced by lactic acid bacteriacan effectively break the glycosidic bonds present in maltodextrin molecules, releasing simple sugars such as glucose and maltose.乳酸菌以其通过发酵将糖分解为乳酸的能力而闻名。

乳酸菌Weissella cibaria 27胞外多糖的生产优化和特性分析乳酸菌胞外多糖(Exopolysaccharide,EPS)是乳酸菌在生长代谢过程中分泌到胞外的一种糖类复合物。

因其理化性质特殊,具有抗氧化、抑菌等特性,在食品及医药等领域被广泛应用,常作为乳制品中的持水剂、稳定剂、增稠剂及凝胶剂,亦可作为医用血浆替代品。

本文通过添加蔗糖并优化生产条件来提高食窦魏斯氏菌Weissella cibaria 27(W27)的EPS产量,分析其EPS的理化性质、菌株的生理特性、疏水性、抑菌能力等,开发此新型乳酸菌的应用潜力。

具体结果如下:蔗糖添加对于W27生产EPS 具有极大的促进作用,于30℃添加2%(w/w)蔗糖后其产量从0.082 g/L增加至9.8 g/L。

利用单因素探究,发现W27的EPS产量随温度升高而减少;并随培养基初始pH值的下降而下降;而且W.cibaria27的培养时间不宜过长或过短。

经DOE-L9正交实验优化后,生产EPS的最佳条件为添加6%(w/w)蔗糖、初始pH 6.2、22℃下培养24小时,最高EPS产量为 25.65 g/L。

经鉴定,本研究中的EPS主要成分为dextran,其含量高达87.2%,其中97%为葡萄糖,其结构为α-(1→6)-dextran。

高效体积排阻色谱(HPSEC)数据显示,EPS 分子量随蔗糖浓度增加由1.2×107Da提升至3.9×107Da,粘度亦随之增大。

经扫描电镜(SEM)分析,添加蔗糖后,W27细胞略有变短,粘度增加。

接触角分析可知其菌体的细胞疏水性随着蔗糖浓度的增加而增加。

抑菌实验结果显示,相较于原始菌株,添加蔗糖培养的W27对于蜡状芽孢杆菌及大肠杆菌的抑制作用有明显提升,对金黄色葡萄球菌的抑制作用无帮助。

通过HPLC分析代谢产物发现,W27能分解代谢葡萄糖及蔗糖,但无法利用乳糖,此外,其代谢过程中会产生乳酸、乙酸、乙醇等物质。

MC培养基在乳酸菌菌落计数中的应用
MC培养基用途：
用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数(GB/T 4789.35-2010)。

原理：
大豆蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子;葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源;乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解，以辨别乳酸菌;琼脂是培养基的凝固剂;中性红为pH指示剂。

培养基配方(每升)：
大豆蛋白胨5g
牛肉膏粉3g
酵母膏粉3g
葡萄糖20g
乳糖20g
碳酸钙10g
琼脂15g
中性红0.05g
最终pH6.0±0.2
使用方法：
1、称取培养基76g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15-20min。

2、无菌操作将经过充分摇匀的检样25g(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内，振摇均匀，即为1：10稀释液，依次做1：100、1：1000……稀释。

3、将MC培养基凉至50℃左右，注入平皿中约15mL(本品含有碳酸钙，摇匀后方可倾注平板)，待琼脂凝固。

4、选择2-3个合适的稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，吸取0.1mL 稀释液于平皿上，用L型棒涂布，每个稀释度做2个平皿。

翻转平板置于36±1℃兼性厌氧培养48h。

5、选择菌落数在30-300个之间的平皿进行计数，并乘以相应的稀释倍数，
以10的指数表示进行报告。

一种提高乳酸菌粘附肠道上皮细胞能力的方法
一种提高乳酸菌粘附肠道上皮细胞能力的方法是通过增加乳酸菌与肠道上皮细胞之间的相互作用。

以下是一些可能的方法：
1. 增加乳酸菌表面的粘附因子：乳酸菌表面的粘附因子能够与肠道上皮细胞表面的受体结合，从而增加粘附能力。

通过基因工程或其他方法，可以增加乳酸菌表面粘附因子的表达量，从而增强其粘附能力。

2. 优化培养条件：乳酸菌在培养过程中的环境条件会影响其粘附能力。

通过调整培养基的组成、温度、pH值等条件，可以优化乳酸菌的生长环境，从而提高其粘附能力。

3. 利用共培养系统：将乳酸菌与肠道上皮细胞一起培养，可以模拟其在肠道内的相互作用。

这种共培养系统可以提供更接近真实肠道环境的条件，从而促进乳酸菌与肠道上皮细胞的相互作用，增强粘附能力。

4. 使用粘附促进剂：一些物质可以促进乳酸菌与肠道上皮细胞之间的粘附。

例如，一些多糖类物质如乳寡糖和果寡糖被证明可以增加乳酸菌的粘附能力。

在培养基中添加这些物质，可以提高乳酸菌的粘附能力。

需要注意的是，乳酸菌的粘附能力受到多种因素的影响，因此提高乳酸菌粘附肠道上皮细胞能力的方法可能需要综合考虑多个因素，
并进行相关研究和优化。

乳酸菌计算活菌数培养基国标乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的细菌，具有很高的益生作用。

在食品工业中，乳酸菌被广泛应用于发酵食品的制作中，如酸奶、乳酸菌饮料等。

为了保证发酵食品的品质和安全性，需要对乳酸菌进行活菌数的检测。

而乳酸菌活菌数的检测方法和标准在我国被统一为《乳酸菌活菌数测定方法》（GB 4789.38-2016）。

乳酸菌活菌数的测定方法主要包括直接计数法和间接计数法两种。

直接计数法是通过显微镜观察乳酸菌在培养基上的菌落数来进行活菌数的估计。

间接计数法则是通过测定乳酸菌产生的酸度或气体量来间接反映活菌数。

在进行乳酸菌活菌数测定之前，首先需要准备好培养基。

培养基的选择对乳酸菌的生长和繁殖起着至关重要的作用。

常用的培养基有MRS培养基、LBS培养基等。

这些培养基能提供乳酸菌所需的营养物质，并且能够抑制其他细菌的生长。

接下来是乳酸菌的接种和培养。

将待测样品接种到培养基上，并且在适宜的温度下进行培养。

乳酸菌的适宜生长温度一般在35℃左右。

在培养的过程中，乳酸菌会利用培养基中的营养物质进行生长和繁殖，最终形成可见的菌落。

乳酸菌活菌数的测定可以通过直接计数法进行。

将培养基上的菌落取出，制备菌悬液后，使用显微镜观察菌落中的乳酸菌数量。

在显微镜下观察时，可以使用乳酸菌特异性染色剂来染色，以便更好地观察和计数。

通过计算所观察到的菌落数和稀释倍数，最终可以得出乳酸菌活菌数的估计值。

除了直接计数法，间接计数法也是一种常用的测定乳酸菌活菌数的方法。

其中，酸度测定法是一种常用的间接计数法。

乳酸菌在发酵过程中会产生乳酸，从而使培养基的酸度增加。

通过测定培养基的酸度变化，可以间接反映出乳酸菌的活菌数。

利用酸度计或pH计进行测定，可以得到乳酸菌活菌数的近似值。

乳酸菌活菌数的测定方法在GB 4789.38-2016中还规定了一些其他的注意事项。

比如，在进行直接计数法时，要求在菌落形成之前进行计数，以避免菌落过大或过小对计数结果的影响。

乳酸菌功能研究进展及限制发展因素分析作者：任磊杨玲何方霍世和贾洪利赵林森来源：《食品安全导刊》2021年第10期摘要：乳酸菌因具有增强免疫反应、平衡肠道菌群、降低血清胆固醇、抑制幽门螺杆菌等生理功效，成为了功能性食品研发的热点，但乳酸菌在生产、储存及运输过程中，活菌数量和活性难以保持，使其发展严重受限。

本文通过查阅文献资料，结合笔者自身工作经验，总结了乳酸菌的生理功能，并分析了限制乳酸菌应用发展的因素，旨在为乳酸菌应用提供参考。

关键词：乳酸菌;功能;限制发展因素20世纪初期，梅契尼科夫提出了乳酸菌概念[1]，乳酸菌被作为生长促进剂和疾病抵抗剂引入动物饲料领域。

研究结果显示，乳酸菌在调节肠道菌群、改善胃肠道环境、降低胆固醇、控制内毒素以及提高食物消化效率等方面发挥着至关重要的作用。

对这些功能的应用也大大促进了乳酸菌相关产品的开发。

目前，乳酸菌也已应用于植物酵素饮品、酸奶、配方奶粉等食品中。

乳酸菌对环境温度、湿度、氧气浓度要求较高，双歧杆菌更是如此，常温条件下活菌数衰减明显，如何保证乳酸菌产品的品质已成为当前食品及饮料行业及科研领域研究的热点及难点。

1 乳酸菌功能研究进展1.1 免疫反应方向乳酸菌参与机体免疫机制主要和刺激特异性免疫反应和非特异性免疫反应有关。

在非特异性免疫方面，乳酸菌可通过控制炎症反应、调控细胞因子、增强吞噬细胞作用以及黏膜的屏障作用来提高免疫功能。

在特异性免疫方面，乳酸菌可增强T细胞增殖能力，激活抗肿瘤免疫机制。

多数研究结果显示，乳酸菌在提高免疫力方面具有显著功效。

钱丹[2]以老年阴道炎患者为研究对象，对比了单纯甲硝唑、乳酸菌阴道胶囊联合甲硝唑治疗方式对阴道免疫功能的影响，结果显示，乳酸菌阴道胶囊联合甲硝唑不仅可改善患者阴道免疫机制，还能有效降低复发率。

LIU等人[3]筛选了具备抗炎活性的益生菌——干酪乳杆菌，并研究了其对免疫细胞反应和组蛋白乙酰化的影响，结果表明干酪乳杆菌可通过减少巨噬细胞及其分泌的炎症因子，改善结肠炎。

乳酸菌扩培方法
乳酸菌扩培是指将一定量的乳酸菌菌种通过培养、繁殖扩大数量，以达到制备大量乳酸菌的目的。

以下是乳酸菌扩培的一些基本方法: 1. 乳酸菌的复苏和培养：先将乳酸菌菌种进行冻存，然后在适
宜的温度下复苏。

复苏后的乳酸菌菌种需要在高温、高压的环境下进行消毒，以杀灭其中的杂菌。

随后，将乳酸菌菌种接种到相应的培养基中，并在适宜的温度下进行培养。

2. 乳酸菌的分离和纯化：将接种到培养基中的乳酸菌菌种进行
划线分离，并在固体培养基上进行培养。

通过纯化步骤，可以去除混杂的微生物，进一步提高乳酸菌的纯度。

3. 乳酸菌的扩培：在纯化后的乳酸菌菌种中，将其接种到相应
的培养基中，并在适宜的温度下进行培养。

通过不断扩培，可以使乳酸菌的数量不断增多。

4. 乳酸菌的制备：将扩培后的乳酸菌菌种进行最终的制备，例
如通过过滤、离心等方法去除其中的杂质，制备成纯净的乳酸菌菌种。

在乳酸菌扩培过程中，需要严格控制培养条件，例如温度、pH 值、氧气浓度等，以确保乳酸菌的存活和繁殖。

同时，需要避免引入杂菌等因素，以保证乳酸菌菌种的纯度和活性。

乳酸菌及其培养物对鸡致病性大肠杆菌的抑菌试验[摘要] 本试验研究了乳酸菌、乳酸菌上清液、抗生素及MRS 对照液对鸡致病性大肠杆菌的体外抑菌作用。

结果表明，乳酸杆菌菌液及培养后的无菌上清液都有较强的抑菌活性，其抑菌圈的直径显著大于对照组（P < 0.05）；且随着乳酸菌培养时间的不同，乳酸菌培养液的pH 值逐渐降低，对致病性大肠杆菌的抑制作用也逐渐增强。

[关键词] 乳酸菌；鸡致病性大肠杆菌；体外抑菌试验乳酸菌是机体肠道正常菌群中的优势菌，能够产生有机酸（如乳酸、乙酸、丙酸等）、双乙酰、过氧化氢等化合物，能够抑制腐败菌和病原菌。

大肠杆菌在正常条件下是机体肠道的正常菌群，但在异位时或当机体抵抗力下降时又可能成为条件致病菌，引起各种感染（凌代文，1991；Sorrels 和Speck，1970）。

研究表明，乳酸菌通过自身的生长繁殖及其所产生的代谢物等，达到改善动物胃肠道内部微环境、降低pH 值和抑制有害菌生长，对肠道细菌如大肠杆菌、沙门氏菌引起的疾病有治疗和保健作用（Blomberg 等，1993）。

本文旨在通过乳酸菌的体外抑菌试验，探讨乳酸菌菌液及其代谢产物对致病性大肠杆菌的抑制特性。

1 材料与方法1.1 试验菌株及培养条件乳酸杆菌为乳酪杆菌，鸡致病性大肠杆菌为鸡志贺氏大肠杆菌。

培养乳酸菌专性培养液（MRS）组成为：胰蛋白胨10 g，牛肉蛋白胨10 g，酵母浸出物5 g，葡萄糖20 g，吐温（80）1 mL，磷酸氢二钾2 g，乙酸钠5 g，柠檬酸钠2 g，硫酸镁200 mg，硫酸锰50 mg，定容至1L，pH 为6.2 ～6.6。

培养条件为37 ℃，厌氧静止培养18 ～24 h。

LB 培养基的组成为：胰蛋白胨10 g，酵母浸出物5 g，氯化钠10 g，定容至1 L，pH 为7.0。

培养条件为37 ℃，摇床培养（150 r/min）18 ～24 h。

1.2 根据抑菌环直径大小判定抑菌能力的强弱1.2.1 乳酸杆菌菌液的制备取0.1 mL 乳酸菌接种在200 mL MRS 液体培养基中，37 ℃厌氧培养24 h，然后进行抑菌试验。