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直投式发酵剂DVS增菌培养基的优化及冻干保护剂的筛选1彭亚会，高学军，刘营东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，黑龙江哈尔滨（150030）E-mail：pyhui7856@摘要：对直投式酸奶发酵剂的制备工艺中的关键技术进行研究，在超浓缩培养基的筛选中利用脱脂乳代替乳酸菌所需的氮源部分，可以大大降低生产成本，并通过正交试验筛选出三株菌的最优的冻干保护剂配方，本研究结果将为我国工厂化生产质地优良的直投式酸奶发酵剂提供最佳且廉价的培养基组合。
关键词：乳酸菌，直投式发酵剂，增菌培养基，冻干保护剂中图分类号：Q933 文献标识码：A直投式酸奶发酵剂（Direct Vat Set, DVS）是指一系列高度浓缩和标准化的冷冻或冷冻干燥发酵剂菌种，每克活菌数在1011个以上，在生产酸奶或发酵乳制品时可直接加入到热处理的原料乳中进行发酵，而无需对其进行活化、扩培等其它预处理工作[1]。
直投式发酵剂使用方法快捷经济，使用量少，易于贮存，降低噬菌体的污染的可能，所发酵产品性质稳定、香味清新、口感爽滑、且货架期长，是生产优质酸奶的关键因素。
它的生产和应用促使酸乳和其它发酵乳制品生产专业化、社会化、规范化和统一化。
本实验根据对实验室保存的乳酸菌菌株超浓缩培养基以及冻干保护剂进行优化，筛选出最佳的成本低廉的超浓缩培养基及冻干保护剂配方，制备出性能优良的且生产成本较低的新型直投式酸奶发酵剂，以期为我国进一步直投式酸奶发酵剂的产业化提供理论依据及技术参数。
1. 材料与方法1.1材料1.1.1实验材料本实验室保藏的乳酸菌单菌株（嗜热链球菌1株，以下简称乳球菌；保加利亚乳酸杆菌2株，以下简称杆菌1和杆菌2）。
麦芽汁（青岛啤酒集团）；番茄汁（本实验室自制）；脱脂乳粉。
1.1.2培养基复壮培养基（乳球菌和乳杆菌分别采用液体M17培养基和液体MRS培养基）；乳球菌液体超浓缩培养基组；杆菌1液体超浓缩培养基；杆菌2液体超浓缩培养基见文献[2]。
培养基、保护剂和饥饿处理对冻干乳酸菌存活性的影响2962007,V o1.2&No.07食品科学※生物工程培养基,保护剂和饥饿处理对冻干乳酸菌存活性的影响靳志强2,李平兰2,(1.长治学院生化系,山西长治046011;2.中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京100083)摘要:研究了培养基,冻干保护剂,饥饿处理对冻干乳酸菌存活性的交互影响.结果表明,培养液中加入NaC1,干燥介质中添加冻干保护剂蔗糖,冻干前对L.bulgaricusS-1细胞饥饿,这三种处理都可以提高冻干菌体在贮藏期的存活性;然而当培养液中含有NaC1时,保护剂蔗糖以及对细胞饥饿处理并不能进一步提高该培养液中生长的细胞在贮藏期的存活性.关键词:乳酸菌;存活性;培养基;保护剂;饥饿处理EffectsofGrowthMedium,CryoprotectorandStarvationOilSurvivalduringStorageof Freeze.driedLacticAcidBacteriaJINZhi—qiang?LIPing—lan?(1.DepartmentofBiochemistry,ChaagzhiCollege,Changzhi046011,China;2.CollegeofFoodScienceandNutritionalEngineering,ChinaAgriculturalUniversity,Beiji ng100083,China)Abstract:Interactiveeffectsofgrowthmedium,cryoprotectorandstarvationtreatmentonba cterialsurvivalduringthestorageoffreeze—dIiedlacticacidbacteriahavebeenstudi~.factors,includingadditionofNaC1tothegrowthm edium,additionofsucrosetothedryingmediumandstarvationofS一1inthestationaryphase,couldhelpsurviveduringstorageinthedriedstate.However,inthecaseofNaC1inthegrowthmedium,notonlySULTOseinthedryingmediums eemedtobelargelyineffectivein furtherincreasingthesurvivalrateofdriedcellsthroughoutstorage,butalsostarvationwasrat herinadequateinprotectingdriedcellssurvivalduringstorage.Keywords:lacticacidbacteria;survival;growthmedium;cryoprotector;starvation中图分类号:TS201.3文献标识码:A文章编号:1002.6630(2007)07.0296.04乳酸菌培养物在冷冻干燥和随后长期的贮藏过程中,最大限度的保持乳酸菌的活性无论从经济角度还是从技术角度来讲都是至关重要的.微生物细胞的存活取决于许多因素,包括微生物起始浓度,培养基,非致死性处理,冻干保护剂和复水环境等【_3】.保护剂可以减轻冷冻干燥或复水对细胞的损害,尽可能保持原有的各种生理生化特性和生物活性.筛选适宜的冻干保护剂对细胞在冻干和贮藏过程中的存活性至关重要.目前研究的重点主要放在保护剂对乳酸菌存活率的影响上,但培养基也是一个关键因素.可混溶溶质的积累,胞外多糖的产生和膜的脂肪酸的改变等因素可以解释各种培养基对冻干菌体的保护作用0-61.可混溶溶质是一些有机小分子,溶解性较好,高渗环境下在细胞质内可以积累到一个高的水平.可混溶溶质具有渗透保护作用,诸如甜菜碱,肉碱,甘露糖等可混溶溶质在干燥过程中对乳酸菌的保护作用已被报道【4】.Glaasker等提出,加入NaC1和蔗糖的培养液都可以使可混溶溶质在细胞内产生和富集【.另外,外界环境的改变使菌体通过代谢调控做出反应,从而使细胞的抗性增强,例如细胞生长的低pH值环境,细胞生长期的饥饿处理等可以提高细胞对冷冻干燥的抗性【s-.Giard等研究表明,在生长过程中由于葡萄糖耗尽引起的营养匮乏使粪肠球菌对其它逆境产生了巨大的耐受力【引.本研究就添加蔗糖或氯化钠的培养液,保护剂蔗收稿日期:2007—02.28通讯作者基金项目:国家"863"计划目标导向性项目(2006AA10Z343)作者简介:靳志强(1976一),男,助教,硕士,研究方向为食品微生物与发酵.※生物工程食品科学2007,V oL28,No.07297糖,细胞的饥饿处理对乳酸菌在贮藏过程中存活性的交互影响进行了探讨,为进一步研究冻干乳酸菌的细胞损伤和保护机理提供一定的理论依据.1材料与方法l|1菌株Lactobacillusdelbeueckiisubsp.bulgaricusS.l(简称S-1)CGMCC1358(专利保藏菌种)以冻干菌粉的形式贮存于一20℃的冰箱中,用于所有的实验中.1.2培养基MRSa:标准MRS;MRSb:将MRSa中的20g葡萄糖替换为10g葡萄糖+10g蔗糖;MRSc:MRSa+5g氯化钠,NaC1对MRS培养液中生长的S-i的最小抑制剂量(MIC)为6.25g/L,因此选择5g/LNaC1的添加浓度,该添加量仍然可以使细胞在40℃下生长良好.l-3仪器YX.280D自动蒸汽消毒器江阴市滨江医疗设备厂:DNP.9162电热恒温培养箱上海精宏实验设备有限公司;SCL.1300型垂直流洁净工作台北京赛伯乐实验仪器有限公司;E系列生物显微镜麦克奥迪实业集团有限公司:GL.20G.II高速冷冻离心机上海安亭科学仪器厂;FD.1冷冻干燥机北京博医康实验仪器有限公司.l4方法1.4.1细胞制备菌株S.1在培养液MRSa,MRSb和MRSc中40℃培养12h进入稳定期后,8000r/min10min离心收集,磷酸缓冲液清洗两次.每种培养液中所得菌体沉淀都分为三组:a组样品悬浮于无菌的脱脂奶中作为对照;b组样品在无菌水中室温下饥饿处理20min,然后悬浮于无菌的脱脂奶中;C组样品悬浮于添加冻干保护剂蔗糖(10g/L)的脱脂奶中.细胞悬浮液在室温下平衡20min, 不停振荡以使细胞适应.1.4.2冻干与贮藏装有lml细胞悬浮液的小瓶放置于一20℃冰箱中冻结24h.然后在冻干机中一45℃,1Pa压力下干燥24h. 冻干菌粉密封避光保存于室温下.1.4-3菌株S1在冻干和贮藏过程中存活性的测定冻干前后及在贮藏期每隔半个月,随机取出样品用11%的脱脂奶复水到原体积,然后梯度稀释倾倒平板进行计数.2结果与分析许多因素影响到乳酸菌在冻干和贮藏过程中的存活性.在本研究中,就添加蔗糖或氯化钠的培养液,保护剂蔗糖,细胞的饥饿处理对S.1在贮藏过程中存活性的交互影响进行了探讨,实验结果如图1～3所示.蚕篓OO.511,522.533.5贮藏时间(月)图lMRSa培养液中生长的细胞在贮藏过程中的存活性Fig,1CellularsurvivalinMRSaculturemediumdudngstorage雷言呈螟0O,511.522,533,5贮藏时间(月)图2MRSb培养液中生长的细胞在贮藏过程中的存活性CellularsurvivalinMRSbculturemediumduringstorage善蓉蜒OO.511.522.533.5贮藏时间(YJ)图3MRSC培养液中生长的细胞在贮藏过程中的存活性Fig.3CellularsurvivalinMRScculturemediumduringstorage 2.1生长培养基的影响比较图1～3中的对照处理,可以看出S一1在贮藏期的存活性与培养液的成分密切相关.在贮藏期间,MRSa和MRSb中生长的S一1的存活率不断下降,在贮藏后期下降更为迅速,二者之间没有显着差异.添加氯化钠的培养液(MRSc)中生长的S一1在贮藏期的存活率虽然也呈下降趋势,但下降平缓.与MRSa和MRSb中生长的S1的存活率相比,MRSc中生长的S-1在贮藏∞鲫∞∞加O∞鲫∞∞加O∞∞∞∞加O2982DD7.V o1.28,No.07目晶科学※生物工程末期的存活率显着高于前两者.在培养液中加入氯化钠或蔗糖等化合物,提高了渗透压,降低了水分活度.在此高渗环境下,诸如甜菜碱,肉碱等可混溶溶质在胞内积累,从而使细胞可以重建渗透平衡Do].由于可混溶溶质在细胞处于不利条件下可以稳定蛋白,因此对高渗环境和干燥过程的乳酸菌都有益处[1l1.本研究中,向培养液中加入氯化钠或蔗糖提高培养液的同渗容摩,对S.1在贮藏过程中的稳定性有不同的影响,只有含NaC1的MRS培养液中生长的细胞在贮藏过程中才具有更高的存活率.有研究证实,植物乳杆菌和保加利亚乳杆菌在上述两种高渗培养液中积累的可混溶溶质并不相同[71.可混溶溶质的不同可以一定程度上解释本研究中两种培养液内生长的S.1在贮藏阶段表现出不同的存活性.2.2将蔗糖加入干燥介质(脱脂奶)中的影响由图1,2看出,冻干保护剂蔗糖可以显着增加MRSa和MRSb中生长的S1在冻干过程中和贮藏期的存活性.然而从图3看出,MRSc培养液中生长的S.1在三种干燥条件下均表现出很好的存活性.保护剂蔗糖似乎并不能进一步提高冻干细胞在贮藏期间的存活性. Leslie等研究表明,蔗糖可以保护脂质体,生物膜以及一些完整的细胞免于冷冻干燥的有害作用[12】.由于在冻干过程中形成了高粘性,低流动性的玻璃态基质,而且束缚在蛋白上的溶质在蛋白质周围的水化层被去除后可以充当水分子的替代物,因此保护了蛋白质的功能,从而提高了细胞的存活率l.除了保护干燥过程中蛋白质的结构和功能以外,蔗糖和其他碳水化合物降低了细胞膜的相变温度,阻止了相变,因此防止了复水时细胞内容物的泄漏】.本研究中,保护剂蔗糖对MRSc培养液中生长的s.1在贮藏期并没有显示出有效的保护作用,可能是因为蔗糖的保护效果被培养液的保护效果所平衡的缘故.延长贮藏期,蔗糖加入干燥介质中的积极的保护作用可能体现出来.2-3饥饿处理的影响细胞的饥饿处理对S.1在贮藏过程中的存活性的影响因培养液不同而不同.如图3所示,与对照相比,当S.1生长在添加了氯化钠的培养液(MRSc)中时,饥饿处理对贮藏期冻干细胞的保护作用并不明显;从图1,2看出,与对照相比,饥饿处理对MRSa和MRSb中生长的S.1则表现出积极的保护作用.Beney等报道,热激产生的热激蛋白对膜蛋白和脂质体具有稳定效果[141.正如热激和冷激对乳酸链球菌的作用一样,饥饿处理对贮藏期冻干细胞的保护作用可能归因于:(1)应激反应引起细胞膜的变化,膜的变化增强了细胞对冷冻和干燥的忍耐力.(2)合成应激蛋白,应激蛋白作为高分子稳定物,可以增强水分子的氢键结构,从而提高高分子周围非冻结水的水平】.培养液MRSb和MRSc中生长的细胞所积累的可混溶溶质的不同可能使细胞处于不同的生理状态,从而对饥饿处理引起的应激表现出不同的忍耐力.在MRSc中生长的S.1胞内富集了可混溶溶质,由于可混溶溶质的保护作用,对细胞饥饿处理20min可能不足以在细胞内产生任何应激反应.3结论向培养液中加入电解液(NaC1)或非电解液(蔗糖)来提高培养液的同渗容摩,二者对S.1菌体贮藏期间的存活率有不同的影响,只有含NaC1的MRS培养液中生长的细胞在贮藏过程中才具有更高的存活率;保护剂蔗糖,冻干前对S1细胞饥饿处理都可以提高冻干菌体在贮藏期间的存活性;然而当培养液中含有NaC1时,保护剂蔗糖以及对细胞饥饿处理并不能进一步提高该培养液中生长的细胞在贮藏期间的存活性.乳酸菌在冷冻,干燥和贮藏过程中,细胞的损伤和保护机理是相当复杂的,至今尚未完全搞清楚.由于众多原因,不同研究的实验数据加以比较是困难的,大多数报道的研究重点是干燥过程中的存活而不是贮藏期间的存活.此外,由于不同研究中应用的微生物菌种不同,干燥方法不同和保护剂的浓度不同,造成文献中研究结果间的差异.然而,多数研究均表明,为给贮藏期间的冻干细胞提供保护,培养基和保护剂的适当选择是必需的.需要强调指出的是,每一保护剂对每一乳酸菌菌株的存活率的影响都应当逐一确定.而且,搞清楚不利环境因素(例如冷冻干燥,贮藏,复水)给细胞带来的损伤以及应激蛋白(尤其是那些在干燥和贮藏期间提供抗性的应激蛋白)的诱导产生,这对乳酸菌菌种的保存及商品化直投式发酵剂的生产均具有十分重要的理论与实践意义.参考文献COSTAE,RSALLJ.衄ON.eta1.Effectofprotectiveagents, rehydrationmediaandinitialcellconcentrationonviabilityofPantoea agglomeransCPA-2subjectedtofreeze-drying田.AppliedMicrobiology, 2oo0.89:793—8oo.CARVALHOAS,SILVAJ,HOP,cta1.Effectofvariousgrowthmedia uponsurvivalduringstorageoffl'l~zc—driedEnterococcusfaecalisand Enterococcusdurans[J].AppliedMicrobiology,2003,94:947-952. DESMONDC,STANTONC.FrIZGERAIDGF.eta1.Environmen- taladaptationsofprobioticlaetobacillitowardsimprovementofperfor-nlallceduringspraydrying[Y].InternationalDairyJournal,2001,11:8O1—808.O'CALLAGHANJ.CONDONS.GrowthofLO~tococcl~loCfiSsgra~sa￡lowwateractivity:Correlationwith也eabilitytoaccumulateglycine※生物工程食品科学2007,V o1.28,No.07299鸡胸大肌中焦磷酸酶的分离纯化及特性研究姚蕊,彭增起,周光宏,何燕,靳红果(南京农业大学教育部肉品加工与质量控制重点实验室,江苏南京210095)摘要:经匀浆,0.6mol/LNaC1提取,硫酸铵分级分离,DEAE-纤维素离子交换柱层析,从鸡胸肉中纯化了焦磷酸酶.该酶有较强的底物专一l生,只对添加到肉中的焦磷酸四钠发生作用.Mg 不仅是其激活剂,还对酶的稳定性发挥作用,ca",EDTA.Na2抑制酶活性.以焦磷酸四钠为底物,测得该酶的最适pH为7.4,最适温度为40℃.关键词:鸡胸肉;焦磷酸酶;分离纯化;性质StudyonIsolationandPurificationofPyrophosphatasefromChickenBreastandItsPropertie sY AORui,PENGZeng-qi,ZHOUGuang-hong,HEY an,JINHong-guo (KeyLaboratoryofAniamlProductsProcessingandQualityControl,MinistryofEducation, NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210095,China)Abstract:Thepyrophosphatasewasisolatedandpartiallypurifiedfromchickenbreast,byme ansofhomogenation,0.6mol/LNaC1extractions,armnoniumsulfateprecipitation,andion-exchangechromatog raphyonDEAEcellulosecolumn.This enzymecatalyzesthehydrolysisofsodiumpyrophosphatebutnotthatofotherphosphateeste rs.Mgnotonlyisitsactivator,butalsostabilizer,Ca2andEDTA-Na2haveinhibitingeffects.WithPPiasthesubstrateofpyr ophosphatase.ItsoptimumpHandtemperatureare7.4and40℃respectively.Keywords:chickenbreast;pyrophosphatase;isolationandpurification;properties中图分类号:TS201.25文献标识码:A文章编号:1002-6630(2007)07.0299—06 收稿日期:2007.01.26通讯作者基金项目:江苏省自然科学基金项目(Q200633)作者简介:姚蕊(1981-),女,硕士研究生,研究方向为畜产品加工与质量控制. 【6】【8】【9】[10]andbetaine[J].InternationalJournalofFoodMicrobiology.2Oo0,55(3):127一l31.RUAS—MADⅡDOP.HUGENHO【ZJ.Z0oNP.Anoverviewofthefuncfion~ityofexopolysaccharidesproducedbylacticacidbacteria们. InternationalDairyJournal,2002,12:163171.ML刀RGAMLF.CABRERAGM,FONTdEVG.eta1.Influenceof growthtemperatureoncryotoleraneeandlipidcompositionofLactoba—cillusacidophilus们.AppliedMicrobiology.2001.88:342—348. GLAASKERE,STEEGPFT,KOMNGSWN,eta1.Physiological responseofLactobacillusplantarumtosaltandnonelectrolytestresses【J】_Bacteriol,1998.l80:4718-4723.GIARDJF.HARTKEA.FLAHAUTS,eta1.Starvation—induced multiresistanceinEnterococcusfaecalisJI-I2—20].CurrentMicrobiology, 1996,32:264—271.SILVALCARV AIH0AS,D0佃UEP'etaLEffectofflaepI-Iofgrowfla ontheresistanceofLactobacillusdelbrueckiispp.Bulgaricustostress conditions;叨.AIandEn~talMicrobiology,submitte,2003.BAYI正SDo.WⅢ.K玳SONBJ.Osmoprotectantsanderyoprotectants【l2】【l3】【l4】【l5】forListeriamonocytogenes们.LettersinAppliedMicrobiology,2OOO, 30:23—27.ROEBLERM.MUILEV.Osmoadaptationinbacteriaandarchaea: conalTlonprinciplesanddifference[J].EnvironmentalMicrobiology.2001 (3):743-754.LESU哐SB,ISRAEUE,UGHrHARTB,eta1.Trehaloseandsu- croseprotectbothmembranesandproteinsinintactbacteriaduringdrying[J].AppliedandEnvironmentalMicrobiology,1995.61:3592—3597.CARP】田rElRJE,ARAKAWA T,CROWEJH,eta1.Interactionsof stabilizingadditiveswithproteinsduringfreeze.thawingandfreeze-drying 【DevelopmentsinBiologicalStandardization,1991,74:225-239. BENEYL,GERVAISP.Influenceofthefluidityofthemembranein responseofmicroorganismstoenvironmentalstresses[J].AppliedMi- crobiologyandBiotechnology.2001,57:34-42.BROADBENTJR.UNC.Effectofheatshockorcoldshocktreatment ontheresistanceofLactococcus/act/stofreezingandlyophilization们. Cryobiology,1999,39:88—102.。
双歧杆菌增殖因子的筛选及培养基的优化
韩雪;张兰威
【期刊名称】《食品与生物技术学报》
【年(卷),期】2005(024)004
【摘要】研究了各种增殖因子对双歧杆菌的增殖效果,选出几种增殖效果好、价格低的物质进行正交试验优化培养基.得出长双歧杆茵(PBA)增殖培养基:在基础培养基基础上额外按体积分数添加平菇汁20%、卷心菜汁20%、豆浆20%、胡萝卜汁5%.在此培养基中,PBA经16 h培养,茵数可达2.45×109CFU/mL;得出婴儿双歧杆茵(INF)增殖培养基:在基础培养基基础上额外按体积分数添加平菇汁10%,蕃茄汁15%,肝浸汁15%,在此培养基中INF经16 h培养,茵数可达2.58×109CFU/mL.【总页数】4页(P69-72)
【作者】韩雪;张兰威
【作者单位】东北农业大学,食品学院,黑龙江,哈尔滨,150030;东北农业大学,食品学院,黑龙江,哈尔滨,150030
【正文语种】中文
【中图分类】TQ920
【相关文献】
1.响应面法优化长双歧杆菌增殖培养基 [J], 孙鹏;赵旭博;孙先锋;马永征
2.两歧双歧杆菌增殖培养基的优化 [J], 肖仔君;陈惠音;杨汝德
3.中药及其优化培养基对双歧杆菌增殖的影响 [J], 张火云;孙启玲;袁月祥;刘晓风;
陈飞
4.短双歧杆菌增殖培养基的优化研究 [J], 陈惠音;肖仔君;杨汝德
5.响应面法优化青春双歧杆菌增殖培养基 [J], ZHU Mengmeng;LI Guoying;GU Qiuya;YU Xiaobin
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用于乳酸菌分离鉴定的几种培养基的筛选及应用资料
一、乳酸菌介绍：
乳酸菌是一类可发酵糖类产生大量乳酸的、无芽孢、革兰氏阳性细菌的通称。
主要有乳杆菌属（Lactobacillus）、双歧杆菌属（Bifidobacterium）和嗜热链球菌属（Streptococcus）、明串珠菌属（Leuconostoc）和片球菌属（Pediococcus）。
双歧杆菌呈短杆状、纤细杆状或球形,可形成各种分支或分叉等多形态，如Y字形、v字形、弯曲状、勺形（图2），典形形态为分叉杆菌，因而取名bifidus，不抗酸，无动力。
培养基成分（g/L）如下：
原理：
蛋白胨、牛肉膏粉、酵母膏粉提供氮源、维生素、生长因子；葡萄糖为可发酵糖类；磷酸氢二钾为酸碱缓冲剂；柠檬酸三铵、硫酸镁、硫酸锰、吐温-80和醋酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌并中和细胞毒性物质，为乳酸菌提供一个良好的生长环境；琼脂是培养基的凝固剂。
用法：
称取本品66.2g，加热溶解于1000mL蒸馏水中，分装，121℃高压灭菌15-20分钟，备用。
基于培养基优化和保护剂筛选的直投式酸奶发酵剂的研制张锋【摘要】利用正交试验确定了嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌培养基优化,冷冻保护剂筛选实验的最佳条件.添加1.0％番茄汁+0.3％玉米浆+2.0％乳糖的优化培养基具备良好生理特性,谷氨酸钠与脱脂乳对菌种活性在冷冻过程中有明显保护作用.在优化工艺下,冻干后活菌数分别达到4.3×1011cfu·g-1和4.2×1011cfu·g-1;冻干粉复配成直投式发酵剂后具有良好的发酵特性,完全符合发酵高粘度酸奶用直投式发酵剂的要求.【期刊名称】《化学工程师》【年(卷),期】2016(030)007【总页数】4页(P18-21)【关键词】冻干粉;直投式发酵剂;酸奶发酵【作者】张锋【作者单位】宝鸡文理学院化学化工学院,陕西省植物化学重点实验室,陕西宝鸡721013【正文语种】中文【中图分类】TS252.4发酵酸奶由于其具有丰富的营养价值和良好的保健功能，国内消费者对酸奶的认识逐步提高，其产销量亦呈迅猛增长之势。
目前，我国发酵酸奶的生产过程中，一般采用继代式酸奶菌种和直投式酸奶发酵剂（Direct-to-vat cultures，简称DVS）。
继代式酸奶菌种方便、价廉，使得大小生产厂家均可自行调制，极大地扩充了酸奶生产领域，但在酸奶生产的进一步集约化、规模化发展中，继代式酸奶菌种的多次活化和扩培的烦琐工艺越来越不能满足要求［1］。
直投式酸奶发酵剂不需要经过活化、扩增而直接应用于生产，邮寄储藏方便、保质期长，接种量少，使得每批发酵产品质量稳定，也防止了菌种的退化和污染，大大提高了发酵酸奶制品工业的劳动生产率和产品质量。
因此，近年来越来越多的酸奶生产公司选择直投式酸奶发酵剂用于生产［2］。
为了得到高活菌数并且具有良好发酵性能的发酵剂，本文从培养基优化、冷冻干燥保护剂筛选关键技术方面入手，研究了适合保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌生长的培养基和培养时间，确定最佳的培养条件，并配制成具有良好发酵特性的直投式酸奶发酵剂。
乳酸菌生长最佳培养基的筛选Prepared on 22 November 2020乳酸菌生长最佳培养基的筛选摘要：文中通过检测乳酸菌在不同固体和半固体培养基中的菌落数、菌落大小及溶钙圈大小,以筛选出乳酸菌生长的最佳培养基。
实验表明,在添加胡萝卜汁的乳酸菌分离固体培养基上,乳酸菌生长最好,活菌数含量最高,菌落和溶钙圈最大。
同种培养基,半固体培养较固体培养更适于乳酸菌生长,前者出菌快,活菌数多。
关键词：乳酸菌固体培养基半固体培养基菌落乳酸菌是有益于人体健康的益生菌,主要存在于人体肠道,其有助于宿主调整正常菌群,维持肠道微生态环境的平衡。
乳酸菌的代谢产物能降低肠道内的pH值,抑制肠道中腐败菌的生长和减弱腐败菌在肠道的产毒作用,并有帮助消化、防止便秘,防止细胞老化,降低胆固醇,抗肿瘤以及调节人体生理机能等保健和医疗作用[1-5]。
在食品向天然型、功能型发展的今天,乳酸菌制品正愈来愈受到人们的重视,通过检测乳酸菌在不同固体和半固体培养基中的菌落数,菌落和溶钙圈的大小,以筛选出乳酸菌生长的最佳培养基,用于乳酸菌制品的研究与开发一、材料及方法111菌种及来源保加利亚乳杆菌(lactobacillusbulgaricus),由西北农业大学微生物室提供。
(以下简称乳酸菌)。
112培养基11211固体培养基的筛选RJP培养基(1号):牛肉膏3g;蛋白胨3g;酵母膏3g;乳糖20g;琼脂15g;蒸馏水1000ml;pH610。
LAB培养基(2号):牛肉膏10g;酵母膏10g;乳糖20g;琼脂15g;吐温80110ml;CaCO310g;KH2PO42g;蒸馏水950ml;pH616。
214号培养基(3号):牛肉膏3g,胰胨10g;NaCl5g;酵母膏6g;葡萄糖2g;半胱氨酸013g;琼脂15g;蒸馏水1000ml;pH714~715乳酸菌分离培养基(4号):牛肉膏1g;蛋白胨1g;酵母膏1g;葡萄糖1g;蕃茄汁20%;吐温800105%;CaCO32g;溴甲酚绿0101%;琼脂115g;蒸馏水100ml;pH615。
乳酸菌冷冻干燥过程中保护剂的选择
金雪霞;路怀灯
【期刊名称】《中国饲料添加剂》
【年(卷),期】2015(000)006
【摘要】乳酸菌作为一种微生态制剂，运用效果及安全性已经得到实际认证。
但是乳酸菌制品从生产到运输、销售、再被口服经上消化道到达肠道的过程中大量细菌失活，限制了乳酸菌生理作用的发挥，而关键在于乳酸菌有效保护剂的使用。
因此本文主要介绍了乳酸菌制剂在冷冻干燥过程中保护剂的重要性及各类保护剂的研究进展。
【总页数】3页(P8-10)
【作者】金雪霞;路怀灯
【作者单位】江苏绿科生物技术有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】S858.31
【相关文献】
1.保护剂对冷冻干燥过程中乳酸菌特性影响的研究
2.嗜酸乳杆菌冷冻干燥过程中保护剂的筛选及液氮预冻
3.真空冷冻干燥过程中保护剂对乳酸菌的保护机理
4.乳酸菌冷冻干燥保护剂的筛选及加速储存稳定性试验
5.冷冻干燥浓缩乳酸菌发酵剂抗冷冻保护剂的选择
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题目:高活性益生乳酸菌产品制造关键技术推荐单位意见：该项目“高活性益生乳酸菌产品制造关键技术”是针对目前国内外益生乳酸菌产品普遍存在功能性菌株少、同质化严重，作为益生菌针对人群不强，作为食品发酵剂活菌数低、活力差等突出行业共性难题，张兰威教授领导的课题组在本成果在国家“863”计划、国家自然基金等课题的支持下，取得了一系列创新性研究成果。
发明了基于錨定乳酸菌功能性基因或代谢酶的菌株快速筛查技术，解决了传统筛菌方法耗时长、针对性不强的技术难题，发掘获得了适合中国人体肠道的典型益生乳酸菌；发明了乳酸菌发酵供能途径转换技术，解决了乳酸菌厌氧发酵中产能低的技术难题；创新了乳酸菌胞内酸度控制方式与应激蛋白高效合成技术，突破了功能乳酸菌活菌数低的技术难题，使活菌数浓度达到了国际先进水平；发明了载体与基料相结合促进蒸发的乳酸菌低温喷雾干燥技术，制造出首台逆流低温喷雾干燥设备，实现了乳酸菌的低致死率和高活力，解决了益生乳酸菌活菌数低、活力差的行业瓶颈问题，实现了工程化应用。
该项目显著地提高了益生乳酸菌制剂的活菌数和活力，达到国际先进水平，部分关键指标达到国际领先水平。
产品已成功应用在发酵食品等领域，提高了我国益生乳酸菌产业的自主创新能力和技术水平，有助于我国在该行业掌握核心技术，打破国际垄断，增强市场竞争力，适应了目前全球“大健康产业”时代行业的发展要求，推动了我国高活性益生乳酸菌及相关行业的技术进步。
推荐国家技术发明二等奖。
项目简介:乳酸菌对人体消化食物，保持肠道微生态平衡，维持生理功能和改善机体健康发挥着极为重要的作用。
功能性乳酸菌被视为人体重要的“生理器官”，与免疫、营养、代谢等诸多生理功能紧密相关，成为推动全球“大健康产业”时代不可或缺的重要领域。
但国内外普遍存在功能性乳酸菌菌株少，作为益生乳酸菌针对人群生理功能不强，作为食品发酵剂活菌数低、活力差、同质化严重等突出问题，严重阻碍了益生乳酸菌产业发展。
本项目历时15年研究，利用组学技术对特色乳酸菌株功能特性进行分析，发现了控制路径中的关键酶、关键基因和功能代谢产物，以此为靶标建立了功能性乳酸菌株高效、快速发掘技术；将从细胞学水平和分子水平揭示了乳酸菌生长繁殖过程生理特点和营养需求机制，形成了益生乳酸菌高密度培养技术的发明点，大幅度提高了益生乳酸菌的活菌数；基于干燥过程对菌体细胞损伤机制研究，形成了乳酸菌高活性保护体系的发明点，有效保持了乳酸菌功能活性，解决了益生乳酸菌活菌数低、活力差的瓶颈问题，实现了工程化应用。
常压干燥乳酸菌粉生产菌株高温驯化及抗热保护剂筛选曾海英;谭书明;母应春;覃新妍【摘要】为给常压干燥乳酸菌粉生产提供高活力、高含量的抗热型菌株,研究了常压干燥乳酸菌粉生产菌株1L-2的生长规律、嗜温特性,并对其进行高温驯化及抗热保护剂筛选.结果表明:1 L-2菌株作为试验材料的最佳收获期为培养至12～15 h,最佳驯化温度为55℃,收获该期菌细胞于55℃下进行高温驯化(5次),可获得抗热型益酵乳酸菌株1 L-2(RT).同时,添加3%甘油、6%蔗糖及2%明胶作抗热保护剂,可提高该菌的高温存活率,菌量达2.2×108cfu/mL.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2010(038)008【总页数】3页(P207-209)【关键词】乳酸菌;常压;抗热保护剂【作者】曾海英;谭书明;母应春;覃新妍【作者单位】贵州大学,生命科学学院,贵州,贵阳,550025;贵州大学,生命科学学院,贵州,贵阳,550025;贵州大学,生命科学学院,贵州,贵阳,550025;贵州大学,生命科学学院,贵州,贵阳,550025【正文语种】中文【中图分类】TQ92乳酸发酵果蔬制品是一类深受老百姓喜爱的传统发酵食品，其营养与保健功效逐渐被人们熟知。
然而传统自然乳酸发酵产品菌群复杂多样、难控制、产品品质不稳定；采用人工接种菌群强化乳酸发酵则需要对生产菌种进行繁琐的纯活化复壮、扩大培养；种子液培养基多为化学药品配制，存在不安全因素，而采用冻干菌粉或喷雾菌粉则生产成本昂贵，获得率低[1-2]。
为此，探索果蔬发酵用乳酸菌粉的常压制备工艺，为今后产业化发展该类产品，保障品质，减少成本，缩短周期就显得尤为迫切。
然而在该常压干燥工艺研究中，如何保护乳酸菌免受干燥高温带来的损伤或提高菌粉中乳酸菌活菌量，尽可能地获得更多的高密度、高生物活性细胞培养物就成为了直投式乳酸菌粉常压干燥制备工艺中的关键技术问题[3-5]。
因此，本课题对常压干燥乳酸菌粉生产用益酵益生乳酸菌株进行生长曲线、嗜温生长情况研究，并对试验菌株进行高温驯化及抗热保护剂筛选，以期掌握试验菌株的生长规律和嗜温情况，以确定最佳收获时间及最佳驯化温度；并通过高温驯化提高菌株的抗热性能，通过抗热保护剂的优化配比及使用，提高菌株的高温成活率。
抑制呕吐毒素生物合成的乳酸菌的筛选及鉴定罗炜;宋春艳;李彦林;张蔚;鲁心怡;曹钰【摘要】以禾谷镰刀菌ACCC36938为指示菌,测定不同乳酸菌对其抑制作用,筛选得到抑菌效果较强的1株乳酸菌A14-2.进一步研究不同温度、pH值和蛋白酶处理对乳酸菌A14-2抑菌活性的影响,结果表明pH值变化对其影响最大,同时也存在非蛋白类热敏感物质具有一定抑菌作用.为了探究乳酸菌A14-2对禾谷镰刀呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)生物合成的影响,选用麦芽汁作为培养基,将乳酸菌和禾谷镰刀菌混合在麦芽汁培养基中共同培养,分析培养基中DON质量浓度变化,结果发现乳酸菌培养物及其上清液均能够在抑制禾谷镰刀菌生长的同时,也显著降低了DON的合成量,但乳酸菌细胞对DON无吸附作用.最后对乳酸菌A14-2进行理化及分子鉴定,显示其为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum).【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2018(044)009【总页数】7页(P41-47)【关键词】植物乳杆菌;禾谷镰刀菌;呕吐毒素;抑菌活性【作者】罗炜;宋春艳;李彦林;张蔚;鲁心怡;曹钰【作者单位】江南大学,教育部工业生物技术重点实验室,江苏无锡,214122;江南大学生物工程学院,江苏无锡,214122;江南大学生物工程学院,江苏无锡,214122;江南大学生物工程学院,江苏无锡,214122;江南大学生物工程学院,江苏无锡,214122;江南大学生物工程学院,江苏无锡,214122;江南大学,教育部工业生物技术重点实验室,江苏无锡,214122;江南大学生物工程学院,江苏无锡,214122【正文语种】中文镰刀菌是谷物感染赤霉病的主要病原菌，其在适宜环境下通过侵染麦子穗部从而导致作物死亡，对农业造成巨大的经济损失[1]。
此外，镰刀菌还会产生各种真菌毒素，包括玉米赤霉烯酮、伏马毒素，以及多种单端孢霉烯族毒素等[2]，其中单端孢霉烯B族化合物呕吐毒素(deoxynivalenol，DON)由于其易溶于水，对各类以谷物为主要原料的食品行业影响巨大，尤其是在啤酒中的大量堆积，会对人体安全产生重大威胁[3]。
冻干保加利亚乳杆菌增菌培养基的筛选余华;颜军;刘海燕;张威;郭平莎【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2004(025)007【摘要】本文采用正交实验对冻干保加利亚乳杆菌的增菌培养基进行了筛选,研究了保加利亚乳杆菌在增菌培养基中的活菌数及菌活力,以寻找冻干保加利亚乳杆菌发酵的最适收获期.结果表明:冻干保加利亚乳杆菌的增菌培养基为:MRS基础培养基、麦芽汁体积分数为10%、番茄汁体积分数10%、CaCO3的质量分数为0.05%、乳糖的质量分数为1.0%.保加利亚乳杆菌的最适收获期为发酵18h,此时为对数生长期后期,活菌数为3.96×1011cfu/g,OD值为0.922,菌活力为500T、pH4.46.增菌培养基增菌效果明显,经增菌培养基培养所得活菌数是基础培养基的202倍,且菌活力也较基础培养基强,OD值和滴定酸度分别是基础培养基的5.6倍和1.3倍.【总页数】4页(P82-85)【作者】余华;颜军;刘海燕;张威;郭平莎【作者单位】成都大学生物工程系,四川,成都,610106;成都大学生物工程系,四川,成都,610106;成都华西乳业集团,四川,成都,610041;四川省质检所,四川,成都,610031;成都大学生物工程系,四川,成都,610106【正文语种】中文【中图分类】TS201.25【相关文献】1.嗜热链球菌与保加利亚乳杆菌麦芽复合汁增菌培养基的优化筛选 [J], 万红兵;田洪涛;山丽杰;孙纪录;李英军;孙永强2.冻干乳酸菌菌种增菌培养基的优化 [J], 张建友;李艳武;赵群波;霍贵成3.保加利亚乳杆菌的增菌培养基设计及生长动力学研究 [J], 戴远臣;侯红漫;张公亮4.冻干乳酸菌菌种增菌培养基增殖因子的优化 [J], 张建友;徐静波;王军良;赵培城;霍贵成5.冻干保加利亚乳杆菌增菌培养基的筛选 [J], 余华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
