实验室增菌方法

实验报告实验名称实验室平菇栽培法班组姓名学号日期成绩教师签名一、实验目的1.掌握平菇基本栽培方法及其原理。

2.掌握平菇栽培中器械和培养基的灭菌方法及原理，如高压蒸汽灭菌法、干热灭菌、灼烧灭菌和紫外灯灭菌法等。

3.了解食用菌母种扩大繁殖生产的基本原理,掌握斜面母种的接种和培养方法。

4.掌握平菇栽培中原种、栽培种培养基的制备方法。

5.培养学生自行设计出菇的方案。

二、基本原理1.平菇是木质腐生菌，生长发育所需各种营养物质均从木屑、棉籽壳、稻草等培养料中获得。

平菇生长周期短，从播种到第一批采收一般为30天到40天，栽培方法简便，成功率高。

本实验在实验室条件下，用袋装方法出菇。

2.食用菌生产中，培养基、器皿及接种工具的消毒灭菌，是防止杂菌污染，提高食用菌产量的关键措施，灭菌和消毒法主要有物理方法（高温灭菌和紫外线灭菌）、化学灭菌法。

干热灭菌是在保持恒温的电烘箱中进行的,适用于各种耐热的玻璃器皿、棉塞、滤纸、以及不能与蒸汽充分接触的液体的灭菌.一般在160摄氏度持续1.5—2小时,就可达到灭菌的目的.灼烧灭菌可直接在酒精灯外火焰灼烧灭菌,酒精灯所用的酒精浓度要在百分之95以上.紫外灯灭菌是接种室(箱)最常用的方法之一,每次在使用前开灯20—30分钟.紫外线可导致细胞内核酸和酶发生变化而使细胞死亡,还可使空气中氧气产生臭氧,臭氧也具有杀菌作用.因其透射力差只适用于空气及物体表面的灭菌,有效距离为1.5—2米,以1.2米内为最好.3.食用菌母种培养基和分离菌种时用斜面培养基，适用于一般食用菌的母种分离与培养用的培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基（即PDA培养基），配成后用加压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。

4.食用菌菌种生产一般按母种——原种——栽培种进行。

母种数量少，要进行试管移接扩大培养才能进行生产。

5.原种由母种繁殖而成，由原种扩大培养成栽培种。

原种和栽培种生产一般包括配料——装瓶（袋）——灭菌——接种——培养等流程。

无菌体液细菌培养的新方法探讨【摘要】目的：探讨无菌体液培养的最佳方法。

方法：对278份无菌体液标本用双相液体培养基法和直接接种法培养分离细菌。

结果：双相液体培养基检测278份标本，40份培养出细菌，阳性率为％，直接接种法培养19份标本培养出细菌，阳性率为％，经SPSS 软件处理，χ2检验，,差异有非常显着性。

结论：用双相液体培养基法培养无菌体液标本，可明显提高细菌检出率，是较好的方法。

【关键词】无菌体液；细菌培养；双相液体培养基无菌体液(胸腹水、关节液、胆汁、脓液等)标本细菌培养是诊断各种细菌感染的一种重要方法。

直接接种法(传统方法)细菌培养阳性率低,往往易造成误诊,为改变上述现状,作者经过两年的研究,终于发现一种新的细菌培养方法，即能做到床边接种又能增菌分离，现报告如下。

1 材料和方法材料标本来源278份标本为我院住院患者标本，其中胸腔积液52份，腹水51份，脑脊液49份，腹透液53份，胆汁37份，脓液36份。

培养基双相液体培养基(上海奥普生物医药有限公司提供)。

方法标本采集双相液体培养基接种法临床医生床边采样(立即接种)，无菌操作采集无菌体液标本≥3 ml,注入双相液体培养瓶内, 充分混匀,并覆盖整个固相培养基,立即送实验室，置35℃孵育箱培养。

直接接种法用接种环直接接种血平板、巧克力平板和麦康凯平板，置35℃孵育箱培养。

结果判断次日将培养瓶取出,观察液体是否混浊,固相是否有菌落和菌苔生长,若无菌生长或混浊,继续培养。

如有菌生长,立即涂片染色镜检、鉴定和药敏实验，48 h无菌生长,报告未见细菌生长。

鉴定涂片、染色分属后，采用珠海黑马生物鉴定板进行鉴定、药敏［1，2］。

2 结果两种方法检测分离出的细菌标本数用双相液体培养基检测278份标本，40份培养出细菌，阳性率为％。

胸腔积液标本阳性8份，阳性率%,腹水标本阳性8份，阳性率%,脑脊液标本阳性5份，阳性率%,腹透液标本阳性8份，阳性率%，胆汁标本阳性6份，阳性率%,脓液标本阳性5份，阳性率%；而用直接法培养，仅有19份标本培养出细菌，阳性率为％。

方法验证报告公共场所卫生检验方法第4部分：公共用品用具微生物GB/T18204.4-2013(5)胰酪胨（或胰蛋白胨17g 植物蛋白胨（或大豆蛋白胨） 3g 氯化钠 100g 磷酸氢二钾 2.5g 葡萄糖 2.5g蒸馏水1000m L制法：将上述成分混合后，加热溶解，调pH 为7.2~7.3，分装，121C 、20min高压灭菌。

2.1.2氯化钠肉汤(75g/L)成分： 蛋白胨 10g 牛肉膏 10g 氯化钠 75g 蒸馏水1000mL制法：将上述成分加热溶解，调pH 为7.4,分装，121°C 、20min 高压灭菌。

2.1.3BairdParker 平板成胰蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 酵母浸膏1g 丙酮酸钠 10g甘氨酸 12g1. 目的验证平皿鉴定法测定公共用品用具微生物中的金黄色葡萄球菌，来判断在本实验室此方法的适用性。

2.培养基和试剂2.1培养基和试剂2.1.1胰酪胨大豆肉汤成分：氯化锂（LiCl.6H2O）琼脂5g 20g蒸馏水950mL增菌剂的配制：卵黄盐水（30%,体积分数）50mL与除菌过滤的亚碲酸钾溶液（质量浓度=1%）10mL混合，保存于冰箱内。

制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸完全溶解，冷至25°C校正pH至7.0±0.2。

分每瓶95mL,121C高压灭菌15min,临用时加热熔化琼脂，每95mL加入预热至50C的卵黄亚碲酸钾增菌5mL,摇匀后倾注平板。

培养基应是致密不透明的。

使用前在冰箱储存，不得超过48h。

2.1.4血琼脂培养基成分：营养琼脂100mL脱纤维羊血（或兔血）10mL制法：将营养琼脂加热溶化,待冷至50C左右以无菌方法加人脱纤维羊血摇匀，制成平板，置冰箱内备用。

2.1.5革兰氏染色液2.1.5.1结晶紫染色液成分：结晶紫1g乙醇（95%,体积分数）20mL草酸铵水溶液（质量浓度=1%）80mL制法：将结晶紫溶于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合2.1.5.2革兰氏碘液成分：碘1g碘化钾2g蒸馏水300mL制法：将碘与碘化钾先进行混合，加人蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水。

摘要 / Abstract[目的]研究丁酸梭菌的营养条件并优化发酵工艺，为与丁酸梭菌培养发酵相关的实验室研究及规模化生产工艺优化提供依据。

[方法]通过单因素试验，比较8 种常见廉价碳氮源对丁酸梭菌增菌的影响，对高密度发酵培养基和培养条件进行优化。

[结果]丁酸梭菌MY-Z 发酵最佳营养组分为：葡萄糖30.0g/L、酵母粉5.0g/L、鱼粉30.0g/L 或肽粉30.0g/L、K2HPO4 1.05g/L、MgSO4·7H2O 1.21g/L、NaCl 0.3g/L、CaCO3 1.5g/L、MnSO4·H2O 0.012 g/L、促生长因子 0.2 g/L；最佳发酵工艺为：37 ℃恒温培养30～36 h，发酵过程中恒定pH 为6.5，并在发酵10 h 左右进行总量为5%的连续变量补料。

丁酸梭菌MY-Z 在此发酵工艺下，发酵32 h 左右，芽孢数可达2.28×109CFU/mL。

[结论]通过优化发酵工艺可有效提高发酵液菌数，从而降低生产成本，对丁酸梭菌的产业化推广与应用具有重要意义。

研究背景丁酸梭状芽孢杆菌（Clostridium butyricum），又名丁酸菌、宫入菌、酪酸菌，在自然界中多分布在肠道、酒窖、奶酪中。

1933 年，由日本千叶医科大学宫入近治博士首次发现。

丁酸梭菌属于严格厌氧的革兰氏阳性内生芽孢杆菌，细胞直径（0.6～1.2）μm×（3.0～7.0）μm；在梭菌增菌培养基（RCM）平板上和高层琼脂柱内菌落呈奶白色，边缘不整齐；显微视野中菌体呈杆状或梭状，多数单个，少数呈短链，部分菌株在对数生长初期菌体会呈现长丝状。

近几年来，丁酸梭菌作为微生态制剂被广泛应用于食品、医药、饲料与养殖等领域。

2009 年7月，原农业部批准了丁酸梭菌为新饲料添加剂。

丁酸梭菌作为微生态制剂饲料添加剂，具有较强的抗生素耐受性，对氨苄西林、强力霉素、甲硝唑等抗生素均不敏感，相对于乳酸菌、枯草芽孢杆菌等常规菌剂，与抗生素联用时受限度较小。

真菌培养及鉴定方法有哪些真菌培养及鉴定方法有哪些真菌的营养要求不向。

在一般细菌培养基上均能生长。

真菌培养及鉴定有哪些的呢?本文是店铺整理真菌培养及鉴定的资料，仅供参考。

真菌培养及鉴定1.采集标本体表真菌的标本有毛发、皮屑、甲屑、痂等，标本在分离前常先用75%的乙醇消毒。

深部真菌的标本可根据情况取痰、尿液、粪便、脓液、口腔或阴-道分泌物、血液、脑脊液、各种穿刺液和活检组织，采集标本应注意无菌操作。

2.培养检查：可提高真菌检出率，并能确定菌种。

标本接种于葡萄糖蛋白胨琼脂培养基(Sabouraud agar)上，置室温或37℃培养1～3周。

必要时可行小培养协助鉴定。

菌种鉴定常根据菌落的形态及显微镜下形态判断。

对某些真菌，有时尚需配合其他鉴别培养基、生化反应、分子生物学方法确定。

真菌培养的方法与直接镜检法相比较而言，更能对大部分真菌感染的灰指甲作出准确的鉴定，也是诊断灰指甲的一个很重要的手段。

下面我们就从培养基的选择、培养时间、菌种鉴定三方面来了解一下灰指甲的真菌培养法。

1.培养基的选择通常培养真菌会同时选用两种培养基，如果单用一种培养基，则容易忽略其它种类的真菌诊断。

常见的两种培养基，一种为沙氏葡萄糖琼脂培养基中加抗菌剂，常为氯霉素和放线菌酮;另一种是沙氏葡萄糖琼脂培养基中仅加氯霉素，不加放线菌酮。

2.培养时间各种真菌的生长速度不同，所以报告的时间也不同。

一般皮肤癣菌生长较缓慢，在26℃-28℃的环境下需要培养2-4周才能发报告，但是，皮肤癣菌含盖的菌种较多也需要区别对待;酵母菌生长较快，通常2-3就可以发报告，如果为阴性则需要观察1周;霉菌生长也比较快，一般2-4天就可以发报告。

3.菌种鉴定(1)丝状真菌：包括皮肤癣菌和霉菌，根据菌落形成所需要的时间，在不同条件下生长的情况，菌落表面及背面的形态、色素，培养基中有无色素，培养物用乳酚棉蓝染色后镜检找特征性标志结构。

(2)酵母菌：分为形态学鉴定及生化试验。

生物实验室细菌和病毒处理指南实验室是进行生物学研究的关键场所，其中包括对细菌和病毒的处理。

为了确保实验室的安全以及实验结果的准确性，对于细菌和病毒的正确处理是非常重要的。

本文将为您介绍生物实验室细菌和病毒的处理指南。

一、实验室细菌处理指南1. 培养细菌：在实验室中培养细菌之前，必须确保培养基的制备和消毒工作得到妥善处理。

使用无菌技术进行培养基的制备，避免可能的细菌污染。

2. 操作前准备：在处理细菌之前，必须首先进行个人防护措施，包括戴上实验手套、穿上实验服，并确保所有操作台面和器材已经消毒。

3. 细菌传代：在进行细菌传代时，必须使用无菌的技术，避免出现细菌交叉污染。

使用无菌的移液器、培养皿和培养瓶，并保持操作区域的无菌状态。

4. 废弃物处理：处理细菌培养物产生的废弃物时，必须采取适当的方法进行处理。

细菌培养物应该在高温条件下进行灭活，并跟随实验室安全处置程序进行相应的废弃物处理。

二、实验室病毒处理指南1. 操作前准备：在进行病毒实验之前，操作人员必须接受相关的培训，并具备相关的个人防护常识。

必须佩戴防护服、手套、面罩等个人防护装备，并确保操作区域的无菌状态。

2. 病毒培养和操作：进行病毒培养时，必须遵循严格的操作规程，避免病毒泄露和扩散。

在病毒培养过程中，应确保使用无菌的培养基和器具，并注重操作技巧，避免操作失误。

3. 废弃物处理：在进行病毒实验后，所产生的废弃物必须进行专门处理，避免病毒的扩散。

病毒培养物应在高温条件下进行灭活和处理，并按照相应的实验室安全处置程序进行废弃物处置。

三、细菌和病毒的应急处理指南1. 突发事件处理：在突发事件发生时，如病毒泄漏、细菌污染等，必须立即采取措施进行处理。

首先，应尽快通知相关的安全人员，并按照相应的应急预案进行操作。

2. 污染区域隔离：在发生病毒或细菌污染时，必须立即对污染区域进行隔离措施，禁止非相关人员进入。

同时，尽快通风和消毒污染区域，以降低污染的扩散风险。

实验室六大常用消毒灭菌方法目前常用的消毒灭菌方法多采用物理方法(如干热灭菌法、湿热灭菌法、过滤除菌法、射线杀菌法等)和化学方法(消毒剂、抗生素)两大类。

1、湿热灭菌法湿热灭菌法是指用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法，压力蒸汽湿热灭菌法是目前最常用的一种灭菌方法。

它利用高压蒸汽以及在蒸汽环境中存在的潜热作用和良好的穿透力，使菌体蛋白质凝固变性而使微生物死亡。

适合于布类工作衣、各种器皿、金属器械、胶塞、蒸馏水、棉塞、纸和某些培养液的灭菌。

分为三种:（1）流通蒸气灭菌法：是指在常压条件下，采用100摄氏度流通蒸气加热杀灭微生物的方法，灭菌时间通常为30-60分钟。

该法适用于消毒以及不耐高热制剂的灭菌，但不能保证杀灭所有芽孢，是非可靠的灭菌方法。

（2）间歇蒸汽灭菌法：利用反复多次的流通蒸汽加热，杀灭所有微生物，包括芽胞。

方法同流通蒸汽灭菌法，但要重复3次以上，每次间歇是将要灭菌的物体放到37℃孵箱过夜，目的是使芽胞发育成繁殖体。

若被灭菌物不耐100℃高温，可将温度降至75℃～80℃，加热延长为30～60分钟，并增加次数。

适用于不耐高热的含糖或牛奶的培养基。

（3）高压蒸汽灭菌法：103.4千帕蒸汽压温度达121.3℃，维持15-20分钟。

2、干热灭菌法是利用恒温干燥箱内120ºC～150ºC的高热，并保持90～120分钟，杀死细菌和芽孢，达到灭菌目的的一种方法。

主要适用于不便在压力蒸汽灭菌器中进行灭菌，且不易被高温损坏的玻璃器皿、金属器械以及不能和蒸汽接触的物品的灭菌。

用此方法灭菌的物品干燥，易于贮存。

酒精灯火焰烧灼灭菌法也是属于干热灭菌的方法之一，在进行动物细胞体外培养工作时，常须利用工作台面上的酒精灯火焰对金属器具及玻璃器皿口缘进行补充灭菌。

3、射线灭菌法利用紫外线灯进行照射灭菌的方法。

紫外线是一种低能量的电磁辐射，可以杀灭多种微生物。

紫外线的作用机制是通过对微生物的核酸及蛋白质等的破坏作用而使其灭活。

第1篇1. 引言控制菌检验是微生物实验室对样品进行质量评估的重要环节，旨在确保产品中不含有危害人体健康的致病菌。

本规程规定了控制菌检验的操作步骤、注意事项和质量控制要求。

2. 适用范围本规程适用于所有需要进行控制菌检验的样品，包括但不限于药品、食品、化妆品、水质、土壤等。

3. 术语和定义- 控制菌：指样品中可能存在的致病菌，如沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。

- 增菌培养：将样品中的微生物进行繁殖，以便进行后续的分离和鉴定。

- 选择和分离培养：通过特定的培养基和培养条件，选择并分离目标微生物。

4. 操作步骤4.1 样品准备1. 样品采集：按照样品采集规范进行，确保样品的代表性。

2. 样品处理：根据样品性质，进行适当的预处理，如溶解、稀释等。

4.2 增菌培养1. 取适量样品加入适宜的增菌培养基中，进行增菌培养。

2. 培养温度和时间根据增菌培养基和目标微生物的要求进行设定。

4.3 选择和分离培养1. 将增菌培养后的样品接种到选择和分离培养基上。

2. 根据目标微生物的特性，选择合适的培养基和培养条件。

3. 培养温度和时间根据培养基和目标微生物的要求进行设定。

4.4 观察和记录1. 定期观察培养基上的菌落生长情况，记录菌落特征。

2. 对疑似控制菌进行进一步鉴定。

4.5 鉴定1. 对疑似控制菌进行生化试验、血清学试验等鉴定方法。

2. 确认目标微生物后，记录鉴定结果。

5. 质量控制5.1 人员培训1. 对参与控制菌检验的人员进行专业培训，确保其掌握操作规程。

2. 定期对人员进行考核，确保其操作技能符合要求。

5.2 仪器设备1. 定期对仪器设备进行校准和维护，确保其正常运行。

2. 对仪器设备进行清洁和消毒，防止交叉污染。

5.3 培养基和试剂1. 使用合格、有效的培养基和试剂。

2. 定期检查培养基和试剂的保质期，确保其新鲜。

6. 记录和报告1. 对检验过程进行详细记录，包括样品信息、操作步骤、结果等。

2. 检验报告应包含样品名称、检验方法、结果、结论等信息。