表面微生物五指手套测定法

空气、食品接触面微生物检查措施、检查原则1、目旳：检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面旳机械设备旳微生物指标，生产区域环境当中病原微生物旳监控，达到规定原则，以控制食品成品旳质量。

2、参照原则：中华人民共和国国标《一次性使用卫生用品卫生原则》GB15979－1995、《HACCP原理与实行》、中华人民共和国国标《公共场合空气微生物检查措施细菌总数测定》GB/T 18204.1－、中华人民共和国进出口商品检查行业原则SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、出入境检查检疫局二000四年《出入食品微生物检查培训教材》中《出入食品生产厂卫生细菌检查措施》、日本东京冷冻食品检查措施。

3、采样与检测措施：3.1空气旳采样与测试措施3.1.1样品采集：(1)取样频率：a)车间转换不同卫生规定旳产品时，在加工迈进行采样，以便理解车间卫生打扫消毒状况。

b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行采样。

c)产品检查成果超内控原则时，应及时对车间进行采样，如有检查不合格点，整治后再进行采样检查。

d)实验性新产品，按客户规定频率采样检查。

e)正常生产状态旳采样，每周一次。

（2）采样措施在动态下进行，室内面积不超过30 m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1 m；室内面积超过30 m2，设东、西、南、北、中五点，周边4点距墙1 m。

采样时，将含平板计数琼脂培养基旳平板(直径9 cm)置采样点(约桌面高度)，并避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5 min。

采样后必须尽快对样品进行相应指标旳检测，送检时间不得超过6h，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24h。

3.1.2菌落培养：（1）在采样前将准备好旳平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃培养24 h，取出检查有无污染，将污染培养基剔除。

（2）将已采集样品旳培养基在6 h内送实验室，细菌总数于37℃±1℃培养48h观测成果，计数平板上细菌菌落数。

空气、食品接触面微生物检验方法、检验标准1、目的：检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。

2、参照标准：中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979－1995、《HACCP原理与实施》、中华人民共和国国家标准《公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定》GB/T 18204.1－2000、中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、出入境检验检疫局二000四年《出入食品微生物检验培训教材》中《出入食品生产厂卫生细菌检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。

3、采样与检测方法：3.1空气的采样与测试方法3.1.1样品采集：(1)取样频率：a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行采样，以便了解车间卫生清扫消毒情况。

b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行采样。

c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间进行采样，如有检验不合格点，整改后再进行采样检验。

d)实验性新产品，按客户规定频率采样检验。

e)正常生产状态的采样，每周一次。

（2）采样方法在动态下进行，室内面积不超过30 m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1 m；室内面积超过30 m2，设东、西、南、北、中五点，周围4点距墙1 m。

采样时，将含平板计数琼脂培养基的平板(直径9 cm)置采样点(约桌面高度)，并避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5 min。

采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6h，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24h。

3.1.2菌落培养：（1）在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃培养24 h，取出检查有无污染，将污染培养基剔除。

（2）将已采集样品的培养基在6 h内送实验室，细菌总数于37℃±1℃培养48h观察结果，计数平板上细菌菌落数。

一、目的：建立表面微生物检验标准操作规程，确保表面微生物检验结果的准确。

二、适用范围：适用于表面微生物检验操作。

三、责任人：QC检验人员负责本规程的实施，QA负责人、QC负责人监督检查。

四、内容：1、测试方法1.1 方法提要：表面微生物测试可采用棉签擦拭法取样或市售预制TSA培养皿直接接触采样法，即通过对一定面积的（约25m2）的表面进行取样后，接种至培养基后，经若干时间，在适宜的生长条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，从而判定洁净环境内表面和操作人员单位面积表面的活微生物数，以此来评定洁净室（区）的洁净度。

1.2 所用的仪器、设备和培养基a）一次性采样管；b）培养皿；c）培养基；d）恒温培养箱。

1.3 注意事项：1）采样用采样棒及培养皿或培养基均应在有效期内且包装密封完好。

2）所有取样操作应在生产关键操作结束后取样。

2、测试步骤：2.1棉签擦拭法取样2.1.1按标准要求进入相应洁净区指定位置，用灭菌镊子夹取浸有无菌生理盐水（放在灭菌锅中于121℃灭菌20分钟）的无菌棉签，管口处轻轻挤压多余的溶液，擦拭取样点表面5×5cm2的范围，来回涂擦5次，翻转取样棉签，再与前次擦拭移动方向垂直来回涂擦5次，见：药签擦拭取样图示意图:2.1.2取样要求：取样过程严格控制操作过程微生物的带入，尽可能采用固定力度、擦拭速度和擦拭线路。

2.1.3取样后将取样棉签放入装有10ml采样液的试管中，随即盖上无菌塞，外用牛皮纸包裹，用绳扎紧。

在运送和存放过程中保持试管竖直，直至做完菌检。

2.1.4将取样后的采样管用力振摇3分钟以上，将管内溶液照微生物限度检查法（薄膜过滤法）进行检查，置于30～35o C恒温培养箱中，培养72小时，计数。

2.2表面接触皿取样2.2.1 选择取样点后，打开市售预制TSA培养皿，对取样范围表面进行接触取样，接触时间不少于5秒钟，取样完成后立即加盖,并用消毒剂对取样点进行表面擦拭。

2.2.2 将取样后的培养皿用其所附包装袋包装好后，置于30～35o C恒温培养箱中，培养72小时，计数。

手的消毒效果监测一、采样前准备：被采样者进行卫生手消毒或外科手消毒。

（-）卫生手消毒方法：1取适量速干手消毒剂于掌心2 .均匀涂抹至整个手掌、手背、手指和指缝。

3 .认真揉搓双手，具体揉搓步骤为：①掌心相对，手指并拢，相互揉搓。

（内）②手心对手背沿指缝相互揉搓，交换进行。

（外）③掌心相对，双手交叉指缝相互揉搓。

（夹）④弯曲手指使关节在另一手掌心旋转揉搓，交换进行。

（弓）⑤右手握住左手大拇指旋转揉搓，交换进行。

（大）⑥将五个手指尖并拢放在另一手掌心旋转揉搓，交换进行。

（立）待手上的速干手消毒剂彻底干燥后才能进行下一步操作卫生手消毒总时间20-30s（二）外科手消毒原则和方法：原则:1先洗手，后消毒。

2 .不同患者手术之间、手套破损或手被污染时，重新进行外科手消毒。

方法：1穿戴整齐、摘饰物、修指甲3 .淋湿双手4 .视情况刷手5 .取适量洗手液6 .按照内、外、夹、弓、大、立、腕、前臂、上臂下1/3顺序揉搓6,冲洗皂液，沥干数秒7 .干手8 .右手取消毒液5m1,左手指甲部立于右手掌心揉搓至少5秒，揉搓左手背，揉搓左前臂、上臂下1/39 .左手取消毒液5m1,右手指甲部立于左手掌心揉搓至少5秒，揉搓右手背，揉搓右前臂、上臂下1/310 .再取5m1涂抹双手，按照内、外、夹、弓、大、立、腕消毒双手至消毒液干燥总计揉搓时间＞2-6min注意事项：1不应戴假指甲，保持指甲周围组织的清洁。

2 .在整个手消毒过程中应保持双手位于胸前并高于肘部，使水由手部流向肘部。

3 .洗手与消毒可使用海绵、其他揉搓用品或双手相互揉搓。

4 .术后摘除外科手套后，应用肥皂（皂液）清洁双手。

5,用后的清洁指甲用具、揉搓用品如海绵、手刷等，应放到指定的容其中；揉搓用品应每人使用后消毒或者一次性使用；清洁指甲用品应每日清洁与消毒。

二、采样时间在手卫生后，接触患者或从事医疗活动前采样。

三、采样方法（一）压印法采样时被检人5指并拢，将营养琼脂培养基（直径5.6cm,面积约为25cm2）表面直接压贴在手掌根部至指尖曲面10-20秒后送检。