下载文档原格式
绿色荧光蛋白——结构及应用孙艺佩【摘要】绿色荧光蛋白(GFP)有稳定、灵敏度高、无毒害、载体便于构建等优点,因此在各个领域已经有了广泛的应用,在细胞生物学与分子生物学领域中,基因常被用作一个报导基因作为生物探针,拿来映证某些假设的实验方法;在医学领域,常用利用绿色荧光蛋白观测肿瘤发生、生长和转移等过程.本文就绿色荧光蛋白的发现与应用背景、结构、生色机理、相对于其他荧光分子的优点和在各领域的应用进行了综述.【期刊名称】《化工中间体》【年(卷),期】2017(000)008【总页数】2页(P124-125)【关键词】绿色荧光蛋白(GFP);荧光生色机理;生色团;技术应用【作者】孙艺佩【作者单位】山东省实验中学山东 250000【正文语种】中文【中图分类】Q绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein，GFP）是一类能被蓝紫光激发而发出绿色荧光的蛋白，1962年，下村修等人于维多利亚管状水母中第一次发现并提取出了绿色荧光蛋白。
1994年，马丁·查尔菲首次在实验中成功表达GFP基因，向人们展示了绿色荧光蛋白作为遗传标签的价值。
同年，钱永健与其同事提出GFP生色团发光机理并改造GFP，使其更易作为标记物应用于各类试验。
2008年，诺贝尔化学奖授予钱永健、马丁·查尔菲和下修村，以表彰他们发现和发展了绿色荧光蛋白。
这一发现成果为生命科学的进步提供了更便捷的渠道。
从维多利亚多管水母中分离出来的野生型GFP由238个氨基酸残基组成，分子量约27kDa。
它具有β-桶的结构，几乎是个直径2.4nm，长4.2nm的完美圆柱。
11个β-折叠链形成β-筒的外周，筒两端分别被一些分子量较小的短α-螺旋覆盖，组成生色团的三个残基（Ser65-Tyr66-Gly67）与α-螺旋共价相连，位于圆筒中央螺旋中部。
β-圆筒与短α-螺旋形成致密的结构域，使配体不能扩散进入,生色团被严格保护在筒内，因此其性质稳定，不易被淬灭。
小鼠胚胎干细胞移植后两种示踪方法的比较关云谦;谢淑;孙静敏;邹春林;陈凌;张愚【摘要】目的观察小鼠胚胎干细胞(ES)移植入大鼠脑内后绿色荧光蛋白(GFP)质粒和Thy-1抗体在指示细胞及细胞分化方面的特点.方法标记方法一:将p-EGFP-N1质粒转入ES细胞,连续10代抗生素筛选表达GFP的GFP-ES,并将GFP-ES移植入活体大鼠脑内.取材后冰冻切片,在荧光显微镜下观察切片上的绿色荧光.标记方法二:直接移植胚胎干细胞后取材,用特异性抗小鼠Thy-1抗体作移植细胞的免疫组织化学染色,荧光显微镜下观察.另外,两种标记方法均做神经元和胶质细胞的特异抗体神经细胞核抗体(NeuN)和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的免疫组织化学染色,观察是否与GFP或Thy-1抗体双标记,以此判定细胞分化情况.结果 GFP质粒转化后的ES 细胞团和单细胞均表达亮绿色的GFP,转化效率为30%;移植21d后,大鼠脑内存活的移植细胞仍表达GFP,但不能和NeuN、GFAP的染色双标记.大量Thy-1阳性的植入细胞和NeuN、GFAP双标记.结论 GFP质粒标记胚胎干细胞后移植可以较好地显示移植细胞,但不能观察细胞分化;而Thy-1抗体不仅在显示移植细胞上有较好的效果,还可以准确地标记分化细胞.【期刊名称】《中国医学科学院学报》【年(卷),期】2010(032)004【总页数】6页(P445-448,后插4,后插5)【关键词】绿色荧光蛋白;胚胎干细胞;分化【作者】关云谦;谢淑;孙静敏;邹春林;陈凌;张愚【作者单位】首都医科大学,宣武医院,老年病研究所细胞治疗室,北京,100053;教育部神经变性病重点实验室,北京,100053;国家人类基因组北方研究中心,北京,100176;空军第三通信修理所卫生所,北京,100075;首都医科大学,宣武医院,老年病研究所细胞治疗室,北京,100053;教育部神经变性病重点实验室,北京,100053;首都医科大学,宣武医院,老年病研究所细胞治疗室,北京,100053;教育部神经变性病重点实验室,北京,100053;首都医科大学,宣武医院,老年病研究所细胞治疗室,北京,100053;教育部神经变性病重点实验室,北京,100053【正文语种】中文【中图分类】Q2-33干细胞移植治疗常需要在体外对将要移植的细胞进行标记，使这些细胞植入及体内分化后仍能携带标记，借此可以对其进行监测。
2013届高三生物一轮复习《分子与细胞》试题【满分100分，考试时间100分钟】第Ⅰ卷 (单项选择题，每题2分共60分)1. 细胞学说建立于19世纪，揭示了细胞的统一性和生物体结构的统一性，下列符合细胞学说的是①一切动植物都由细胞发育而来②病毒没有细胞结构③细胞通过分裂产生新细胞④细胞分原核细胞和真核细胞两大类⑤细胞是一个相对独立的单位⑥一切动植物都由细胞和细胞产物所构成A．①③⑤⑥B．②④⑤C．③④⑤D．①②③④⑤2. 地球上的生命千姿百态，从生物圈到细胞，生命系统层层相依又各有特定的组成、结构和功能。
下列属于生命系统结构层次中细胞层面的是A．一个病毒B．一个受精卵C．一个洋葱D．一个蜂巢3．细胞是生命的基本单位，细胞的特殊性决定了个体的特殊性，因此，对细胞的深入研究是揭开生命奥秘、改造生命和征服疾病的关键。
下列关于细胞结构和功能的叙述中，正确的是①硝化细菌、霉菌、水绵的细胞不都含有核糖体、DNA和RNA②人和动物细胞在无氧条件下也能分解有机物，释放能量，并产生二氧化碳③能进行光合作用的细胞不一定有叶绿体；无线粒体的细胞不能进行有氧呼吸④抑制细胞膜上载体活性或影响线粒体功能的毒素，都会阻碍根细胞吸收矿质离子⑤性激素的合成与内质网有关⑥细菌和植物细胞都有细胞壁，但其主要成分不同⑦在一个细胞周期中，T和U两种碱基被大量利用时，细胞一定处于分裂间期A．①②③④B．④⑤⑥⑦C．①③⑤D．②④⑥4. 下列关于细胞生理活动的叙述，正确的是A．细胞分化使各种细胞的遗传物质有所差异，进而导致细胞的形态和功能各不相同B．细胞的增殖、分化、坏死、凋亡在生物体的生命历程中都具有积极意义C．细胞分裂伴随个体发育的整个过程中，细胞分化仅发生于胚胎发育阶段D．细胞凋亡是受遗传物质控制的正常生理过程，溶酶体在细胞凋亡中起重要作用5．下列关于生物体内化合物的正确叙述是A．蛋白质的空间结构被破坏时，其特定功能不会发生改变B．RNA与DNA分子均由四种核苷酸组成，前者不能储存遗传信息C．ATP、脱氧核苷酸、线粒体外膜共有的组成元素是C、H、0、N、PD．葡萄糖、乳酸、氨基酸依次是光合作用、细胞呼吸、基因表达的产物6. 基因是有遗传效应的DNA片段，中国科学家参与的千人基因组计划旨在对全球各地至少1000个人类个体的基因组测序。
间充质干细胞治疗卵巢早衰的最新进展及机制（全文）卵巢早衰是一种常见的妇科内分泌疾病，发生在40 岁以下女性，其主要特点是闭经、促性腺激素过高和雌激素缺乏，发病率在0.9%-1.2%。
中华医学会妇产科学分会给出的诊断标准为：闭经时间≥4-6 个月，两次间隔4 周以上卵泡刺激素>40 U/L，伴有雌激素降低及绝经症状。
大部分临床卵巢早衰的具体病因尚不明确，目前认为有遗传性因素、自身免疫性因素、医源性因素、环境因素等几种原因，随着化疗在妇科肿瘤的广泛应用，医源性继发性卵巢早衰的发病率正呈逐渐上升的趋势。
卵巢早衰对于女性的生理及心理健康影响巨大。
首先，患者由于卵巢功能减退及衰竭，激素分泌急剧降低，其女性生理如月经周期、生育功能等会随之衰退，主要表现为停经或月经稀发，也可以出现潮热、盗汗、性交不适、情绪改变等绝经期症状；其次，由于卵巢早衰对生理的各种负面影响，女性心理也会出现波动，造成其心理的严重负担。
所以探讨其有效的治疗方法是目前亟待解决的重要任务。
针对前述病因，目前治疗卵巢早衰的主要措施包括激素替代治疗、免疫调节、卵巢组织冻存移植、胚胎冻存移植等，这些临床治疗方法可以改善卵巢早衰症状并能促进患者生育，但并不能从根本上恢复卵巢功能，且存在伦理争议及不良反应。
因此，探寻一种能够高效、安全地恢复卵巢功能的治疗手段是学界的当务之急。
间充质干细胞是一种具有黏附性、成纤维样的多能非造血祖细胞，最初从骨髓中分离出来，具有多系分化潜能。
目前研究中常用的间充质干细胞可以从多种组织中分离提取出来，它们都具有干细胞的共性，即自我更新和多向分化能力。
间充质干细胞具有多向分化潜能及无限增殖特性，在体内外均可被诱导分化为多种成体细胞如成骨细胞、神经细胞、心肌细胞、脂肪细胞、肝脏细胞等，并可定位于组织损伤部位，分化为组织特定的细胞类型，还可以通过增强内源性细胞功能、调节免疫反应及重建局部微环境参与组织损伤修复。
因此，间充质干细胞为临床诸多难治性疾病如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、急性心肌梗死、糖尿病和肝硬化等提供了一个新的治疗途径。
2024学年第一学期青浦区高三年级期终学业质量调研生物学 试卷（时间60分钟，满分100分）考试须知：1．答题前，请将你的姓名及准考证号认真填写在试卷和答题纸上。
2．所有答案必须涂（选择题）或写（非选择题）在答题纸的相应位置上。
3．“单选”指每题只有一个选项为正确答案；“多选”指每题有两个或两个以上选项为正确答案；“编号选填”指每空有一个或多个选项为正确答案。
一、互花米草的入侵与治理（18分）某滨海湿地森林植被退化，形成的裸滩被外来入侵植物互花米草占据。
群落中芦苇、耐高盐的碱蓬和互花米草的相对多度（群落中某一种植物的个体数占该群落所有植物个体数的百分比）与入侵时间的关系如图1所示1.（1分）该滨海湿地在互花米草入侵前后的变化属于______（初生/次生）演替。
2.（3分）若不加以干预，互花米草会导致沉积物逐渐增多，推测N 年后该湿地可能发生的变化有_____。
（多选）A.为某些非本地昆虫提供了生态位B.生态系统抵抗力稳定性下降C.芦苇和互花米草的种间关系为正相互作用D.群落水平结构和垂直结构均更加复杂麋鹿常食互花米草，科研人员向该湿地投放麋鹿，构建“互花米草防治与麋鹿保护耦合生态系统”。
小青同学绘制了能量流经麋鹿所属营养级的过程图如图2（图中实线箭头，不考虑“未利用的能量”）。
图1互花米草入侵5年后陆地芦苇陆地芦苇沉积物互花米草入侵前图23.（2分）麋鹿在此生态系统中属于______。
（编号选填）①分解者②初级消费者③次级消费者④第一营养级⑤第二营养级4.（2分）图2中还少了一个麋鹿所属营养级的能量流动去向，图中能正确表示该能量流动去向的虚线箭头是______。
（编号选填）5.（2分）若营养级效率为10% ~ 20%，则图2中c 的最大值为______。
（单选）A.5aB.a/5C.5bD.b/56.（3分）该生态系统中生物之间信息传递关系正确的是______。
（多选）A.COB.C.D. 7.（2分）若干年后动物学家考察该地，认为当地鹿群正处于增长高峰期，预测今后还能增长十几年才会停止。
2021-2023北京高考真题生物汇编生物技术与工程C．注射入的细胞会分化成Mc的多种组织D．将接受注射的囊胚均分为二，可发育成两只幼鼠6．（2021·北京·统考高考真题）关于物质提取、分离或鉴定的高中生物学相关实验，叙述错误的是（）A．研磨肝脏以破碎细胞用于获取含过氧化氢酶的粗提液B．利用不同物质在酒精溶液中溶解性的差异粗提DNAC．依据吸收光谱的差异对光合色素进行纸层析分离D．利用与双缩脲试剂发生颜色变化的反应来鉴定蛋白质7．（2021·北京·统考高考真题）社会上流传着一些与生物有关的说法，有些有一定的科学依据，有些违反生物学原理。
以下说法中有科学依据的是（）A．长时间炖煮会破坏食物中的一些维生素B．转基因抗虫棉能杀死害虫就一定对人有毒C．消毒液能杀菌，可用来清除人体内新冠病毒D．如果孩子的血型和父母都不一样，肯定不是亲生的8．（2021·北京·统考高考真题）野生草本植物多具有根系发达、生长较快、抗逆性强的特点，除用于生态治理外，其中一些可替代木材栽培食用菌，收获后剩余的菌渣可作肥料或饲料。
相关叙述错误的是（）A．种植此类草本植物可以减少水土流失B．菌渣作为农作物的肥料可实现能量的循环利用C．用作培养基的草本植物给食用菌提供碳源和氮源D．菌渣作饲料实现了物质在植物、真菌和动物间的转移9．（2021·北京·统考高考真题）人体皮肤表面存在着多种微生物，某同学拟从中分离出葡萄球菌。
下述操作不正确的是（）A．对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌B．使用无菌棉拭子从皮肤表面取样C．用取样后的棉拭子在固体培养基上涂布D．观察菌落的形态和颜色等进行初步判断10．（2021·北京·统考高考真题）研究者拟通过有性杂交的方法将簇毛麦（2n=14）的优良性状导入普通小麦（2n=42）中。
用簇毛麦花粉给数以千计的小麦小花授粉，10天后只发现两个杂种幼胚，将其离体培养，产生愈伤组织，进而获得含28条染色体的大量杂种植株。
新人教选择性必修3《生物技术与工程》综合检测(A卷)(时间:90分钟满分:100分)一、选择题(本题共20小题,每小题2.5分,共50分。
每小题只有一个选项符合题目要求)1.下列关于制作果酒、果醋的叙述,错误的是()A.生产过程中都需要利用真菌,但种类不同B.可从打开瓶盖的食醋中得到醋酸菌,加入果酒中制果醋C.当糖源等条件充足时,醋酸菌可以直接分解葡萄汁中的糖生成乙酸D.果酒发酵后期放气时间间隔可延长2.下列关于制作果酒和果醋的叙述,正确的是()A.为了提高果酒的产量,果汁应尽量装满发酵瓶B.果醋发酵阶段应封闭充气口,防止杂菌污染C.在果酒和果醋的制作过程中,每天需适时打开瓶盖D.果酒制成后,需将装置移到温度较高的环境中进行乙酸发酵3.下列关于植物组织培养中灭菌操作的叙述,错误的是()A.外植体可以用酒精消毒B.镊子等器械需要用酒精灭菌C.操作者的手需要用酒精消毒D.培养基需要进行高压蒸汽灭菌4.严格控制发酵条件是保证发酵正常进行,得到质量高、产量多的理想产物的关键。
通常所指的发酵条件不包括()A.温度B.溶氧量C.pHD.酶的含量5.下列操作需要在酒精灯火焰旁进行的有()①土壤取样②称取土壤③稀释土壤溶液④涂布平板⑤微生物的培养A.①②③④⑤B.②③④⑤C.③④⑤D.②③④6.将细菌接种在固体培养基上培养,它会繁殖并形成菌落(如右图)。
某实验小组想检验两种抗生素的杀菌作用,下列实验方案最合适的是()7.“筛选”是生物工程中常用的技术手段。
下列关于筛选的叙述,错误的是()A.基因工程中利用标记基因筛选出的细胞不一定含重组质粒B.在诱变育种中需要通过筛选才能得到数量较少的有利变异C.在植物体细胞杂交过程中,需要对融合细胞进行筛选D.在单克隆抗体制备过程中,第一次筛选的目的是获得足够数量的能产生所需抗体的杂交瘤细胞8.细胞工程中,选择合适的生物材料是成功的关键。
下列叙述错误的是()A.选择高度分化的动物体细胞进行培养有利于获得大量的细胞B.选择去核的卵母细胞作为核受体进行核移植可提高克隆动物的成功率C.选择植物的愈伤组织进行诱变处理可获得有用的突变体D.选择一定大小的植物茎尖进行组织培养可获得脱毒苗9.甲、乙是严重危害某二倍体观赏植物的病害。
单元过关检测卷(A卷)第2章细胞工程(时间:90分钟满分:100分)一、选择题(本题共20小题,每小题2.5分,共50分。
每小题只有一个选项符合题目要求)1.下列有关菊花组织培养的叙述,错误的是()A.菊花组织培养的全过程都要在有光条件下进行B.为防止杂菌污染,所用器械需灭菌,实验人员需进行无菌操作C.切取幼嫩的菊花茎段,因为该部位容易诱导形成愈伤组织D.实验中,用酒精和次氯酸钠溶液对外植体消毒2.在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织的过程中,一般不需要的条件是()A.消毒和灭菌B.适宜的温度C.充足的光照D.适宜的营养和激素3.下列选项中,没有用到植物组织培养技术的是()A.利用花药离体培养得到单倍体植株B.大规模培养高产紫杉醇的细胞,以获取紫杉醇C.利用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗,得到多倍体植株D.利用细胞工程培育“番茄—马铃薯”杂种植株4.下列有关植物体细胞杂交和生物个体杂交的比较,错误的是()A.植物体细胞杂交打破了不同种生物之间的生殖隔离B.植物体细胞杂交获得的是杂种细胞,生物个体杂交获得的是生物个体C.生物个体杂交属于有性繁殖,而植物体细胞杂交属于无性繁殖D.植物体细胞杂交可发生在不同种植物个体之间,生物个体杂交只能在同种生物个体之间5.下列关于动物细胞培养及植物组织培养的说法,错误的是()A.选材时,一般都选分裂、分化能力强的组织B.均在离体、无菌、无毒条件下进行C.都能体现细胞的全能性,其原理相同D.培养基成分的差异主要是动物细胞培养的培养基中含血清等天然成分,植物组织培养的培养基中含细胞分裂素、生长素等植物激素6.下列不属于植物细胞工程的应用的是()A.单倍体育种B.获得脱毒草莓C.微型繁殖杨树D.水稻杂交育种7.下列关于动物细胞培养的叙述,错误的是()A.动物细胞培养需要无菌、无毒的环境,充足的营养,适宜的温度和pH等条件B.将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞C.在培养瓶中要定期用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离,制成细胞悬液D.干细胞只存在于早期胚胎中8.动物细胞融合和植物原生质体融合取决于()A.细胞膜的流动性B.细胞膜的选择透过性C.细胞质的流动性D.细胞质中酶的活性9.下图为制备单克隆抗体过程的示意图,下列叙述错误的是()A.B淋巴细胞和骨髓瘤细胞均是从小鼠的脾中提取的B.④中的筛选是通过抗原—抗体反应进行的C.②促进细胞融合可以利用聚乙二醇作诱导剂D.⑤可以无限增殖10.动物克隆繁殖的基本过程如下图所示。
小动物活体成像的原理及特点小动物活体成像主要采用生物发光（bioluminescence）与荧光（fluorescence）两种技术。
生物发光是用荧光素酶（Luciferase）基因标记细胞或DNA，而荧光技术则采用荧光报告基团（GFP、RFP, Cyt及dyes等）进行标记。
利用一套非常灵敏的光学检测仪器，让研究人员能够直接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为。
通过这个系统，可以观测活体动物体内肿瘤的生长及转移、感染性疾病发展过程、特定基因的表达等生物学过程。
传统的动物实验方法需要在不同的时间点宰杀实验动物以获得数据, 得到多个时间点的实验结果。
相比之下，可见光体内成像通过对同一组实验对象在不同时间点进行记录，跟踪同一观察目标（标记细胞及基因）的移动及变化，所得的数据更加真实可信。
另外, 这一技术对肿瘤微小转移灶的检测灵敏度极高，不涉及放射性物质和方法, 非常安全。
因其操作极其简单、所得结果直观、灵敏度高等特点, 在刚刚发展起来的几年时间内，已广泛应用于生命科学、医学研究及药物开发等方面。
一、技术原理1. 标记原理哺乳动物生物发光，是将Fluc基因整合到细胞染色体DNA上以表达荧光素酶，当外源（腹腔或静脉注射）给予其底物荧光素（luciferin），即可在几分钟内产生发光现象。
这种酶在ATP 及氧气的存在条件下，催化荧光素的氧化反应才可以发光，因此只有在活细胞内才会产生发光现象，并且光的强度与标记细胞的数目线性相关。
对于细菌，lux操纵子由编码荧光素酶的基因和编码荧光素酶底物合成酶的基因组成，带有这种操纵子的细菌会持续发光，不需要外源性底物。
基因、细胞和活体动物都可被荧光素酶基因标记。
标记细胞的方法基本上是通过分子生物学克隆技术, 将荧光素酶的基因插到预期观察的细胞的染色体内，通过单克隆细胞技术的筛选, 培养出能稳定表达荧光素酶的细胞株。
目前, 常用的细胞株基本上都已标记好, 市场上已有销售。
GFP转基因裸鼠脾脏组织学观察方天，尤金炜，张立波，田小芸，刘彪，吴正林，许龙祥，周森妹，赵志刚，恽时锋＊（南京军区南京总医院比较医学科，全军实验动物科普与伦理教育基地，全国科普教育基地，江苏南京，210002；）摘要：目的探讨GFP基因导入对BALB/c荧光裸鼠脾脏组织学及免疫功能的影响。
方法取不同日龄（14日龄、28日龄、49日龄、70日龄）BALB/c荧光裸鼠及BALB/c普通裸鼠各32只，雌雄各半，处死取脾脏，对脾脏的绝对重量、脾脏指数进行测量分析，对脾脏的组织学改变进行观察，并对脾脏淋巴细胞数进行统计分析。
结果与14日龄荧光裸鼠相比，28日龄荧光裸鼠脾脏指数明显较高（P<0.05）。
与14日龄荧光裸鼠相比，49日龄、70日龄荧光裸鼠淋巴细胞数明显变少（p<0.05）。
与普通裸鼠（14日龄、28日龄、49日龄、70日龄）相比较，相同日龄荧光裸鼠（14日龄、28日龄、49日龄、70日龄）淋巴细胞数明显减少（p<0.05）。
结论GFP基因对不同日龄荧光裸鼠的脾脏发育及其功能有一定影响。
关键词：GFP基因；荧光裸鼠；脾脏；免疫功能引言BALB/c裸小鼠是先天性胸腺缺陷的突变小鼠,目前已成为医学生物学研究领域中不可缺少的实验动物模型。
特别是在肿瘤学、免疫学、药品与生物制品的安全性评价及有效药品的筛选等实验方面，它有着特殊的价值[1]。
目前已将nu基因导入不同近交系动物，成为系列动物模型，我国所应用的自发性免疫缺陷小鼠，主要应用的是BALB/c遗传背景的裸鼠。
BALB/c荧光裸鼠是将GFP基因导入BALB/c-nu/nu小鼠而得。
来源于水母( Aequorea Victoria) 的绿色荧光蛋白( Green fluorescent protein, GFP) , 现已成为细胞生物学和分子生物学中应用最广泛的分子标记之一。
荧光成像具有简单操作、所得结果直观、灵敏度高等特点，在活体动物体内成像中可得到广泛应用[2-5]。
转基因的方法和原理转基因的方法和原理 1目的基因制备和载体系统 2几种有效的转基因方法 3定点突变和受体系统简介转基因研究技术的中心环节即为DNA重组技术，其最终目的是将DNA片段转入为一个生物体，从而使该生物体具有表现某种性状。
转基因通过获取基因、重组基因和表达基因等过程来实现。
转基因打破了物种的界限，使不同种的生物的遗传物质在分子水平上重新组合在一起，并且完全可以按照人的意志或目的，实现对生物体的改造。
基本步骤 1.分离获得目的基因； 2.在体外进行DNA重组，将外源DNA 连接到能自我复制又带有选择标记的载体上； 3.将重组DNA转移入受体细胞；4.筛选出含有目的DNA的受体细胞克隆；目的基因制备和载体系统目的基因来源：基因组DNA分离、化学合成、PCR扩增、cDNA文库及DNA文库中制得。
载体：质粒、λ噬菌体、柯氏质粒、YAC载体等工具酶：限制性内切酶、连接酶、DNA聚合酶等 PCR反应 PCR技术就是在体外通过酶促反应或自发地扩增一段目的基因的技术。
PCR要求反应体系具有以下条件： 1、要有与被分离的目的基因两条链各一端序列相互补的DNA引物约20个碱基左右； 2、具有热稳定性的酶如Taq DNA聚合酶； 3、4种dNTP； 4、作为模板的目的DNA序列。
PCR反应可扩增出100～5000bp的目的基因。
PCR反应过程 1、变性，即将模板DNA置于95℃的高温下，使双链DNA的双链解开变成单链DNA；2、退火，将反应体系的温度降低至55℃左右，使得一对引物分别与变性后的两条模板链相配对；3、延伸，将反应体系温度调整到Taq DNA聚合酶作用的最适温度72℃，然后以目的基因为模板，合成新的DNA链。
反复进行约30个循环左右，即可扩增得到目的DNA序列。
利用cDNA法由于真核生物的mRNA具有poly A这一结构特点，可以用结合长度大约为15bp的短链多聚DT的纤维素填充的柱子，根据碱基配对原则，将其吸附，从真核细胞的总RNA中提取出来，再用能打断A-T氢键的缓冲液洗脱。
生物安全——转基因生物的安全、应用与管理知到章节测试答案智慧树2023年最新浙江大学第一章测试1.1953年Crick和Watson揭示了遗传物质（）结构，极大促进了现代生物技术的发展。
参考答案:DNA2.截止2019年，全球四大转基因作物是（）参考答案:玉米大豆棉花油菜3.（）中，提出生物多样性的保护、生物资源的可持续性利用、以及基因资源既得利益的平等分享，并将生物安全列为重点内容。
参考答案:《生物多样性公约》4.世界上第一次正式提出转基因生物安全的会议是（）参考答案:Asilomar会议5.Gordon会议提出的建议有（）参考答案:暂时禁止两类实验的进行：一是关于制造新的、能自我复制的有潜在危险的质粒实验；二是将癌基因或其他动物病毒基因与质粒或其他病毒基因进行连接的实验;对将动物DNA和质粒或噬菌体DNA相连的实验要慎重考虑;在1975年召开一次国际会议，科学家共同讨论如何对待重组DNA分子可能带来的危害;呼吁美国卫生研究院（NIH）建立一个顾问委员会，负责重组DNA的风险评价，建立准则来指导重组DNA研究6.转基因生物安全学的研究内容主要涉及（）参考答案:转基因生物释放后的风险监管;转基因生物安全的风险交流;转基因生物释放前的风险评估7.转基因生物释放前的风险评估包括（）参考答案:环境安全性;食用安全性;遗传安全性8.转基因生物安全的风险交流主要包括（）参考答案:风险评估科学信息的交流;风险评估和管理进程信息的交流;风险管理信息的交流9.生物安全，通常是指防范转基因生物技术及其产品从研究、开发、生产到实际应用的整个过程中可能出现的有关生态环境和人类健康安全的问题。
参考答案:对10.农业与环境社区提出的“生物安全”这一概念的主要目的是减少作物和牲畜病虫害、检疫性生物、外来入侵物种和转基因生物活体传播或传染的危害风险。
参考答案:错第二章测试1.基因是指含有特定遗传信息的（）分子片段，由（）种碱基组成。
2023-2024学年浙江省浙南名校联盟高三上学期（第1次）联考生物试卷一、单选题：本大题共20小题，共20分。
1.密度制约因素是指对种群数量的作用强度与该种群的密度相关的因素，据此推断下列哪项不是密度制约因素（）A. 天敌B. 气候C. 食物D. 病原体2.海萤（一种海生浮游生物）受刺激后，其发光腺会将荧光素、萤光酶和粘液一起排入水中，呈现出浅蓝色的光，俗称“蓝眼泪”，导致海萤发光的直接能源物质是（）A. 葡萄糖B. 脂肪C. 糖原D. ATP3.处理后的核废水中仍残留大量3H、14C、131Ⅰ等放射性元素，这些同位素难降解且更容易被海洋生物吸收。
研究显示，受到放射性污染的核废水一旦排入太平洋，从排放日起，57天内放射性物质将扩散至太平洋大半个区域。
下列叙述正确的是（ ）A. 核废水已经过稀释处理，因此对海洋生物和人类无毒无害B. 物质循环具有全球性，因此核污染将会影响全球的水资源安全C. 核废水排放入海后会提高生物变异概率，定会增加生物多样性D. 放射性物质集中在海洋生物中，不食用海产品就不会影响人类4.某些生命活动的变化曲线可用如图模型表示，下列叙述正确的是（）A. 曲线a可表示某植株的光合速率随光照强度变化的关系B. 曲线a可表示O2进入组织细胞的运输速率随膜两侧浓度差变化的关系C. 曲线b可表示在可见光范围内，叶绿素a的吸光率与光波长变化的关系D. 曲线b可表示在一定条件下，恒温动物的呼吸速率与气温变化的关系5.“嵌合体”是指同一个体或器官，其不同成熟体细胞的核基因组成不同。
下列情况一般不会出现“嵌合体”的是（）A. 经外源基因转入受精卵后正常发育的幼鼠B. 经造血干细胞移植的血友病患者C. 经X射线处理种子后发育成的小麦幼苗D. 经秋水仙素处理的单倍体幼苗6.下列有关同位素示踪技术实验的叙述，正确的是（）A. 用131Ⅰ“饲喂”小鼠，研究生长激素的合成与分布B. 用32P的培养基直接培养T2噬菌体用于标记其DNAC. 用35S标记的噬菌体侵染未标记的细菌，子代噬菌体中能检测到放射性D. 用C18O2“饲喂”藻类，置于适宜光照等环境中，一段时间后，可检测到含18O的O2阅读下列材料，回答以下小题：某研究小组设计了一个利用作物秸秆生产燃料乙醇的小型实验。
