乙醇提取茶皂素的研究

茶皂素的分离纯化方法的初步研究茶皂素是一种具有抗氧化、抗菌、抗病毒和抗肿瘤等多种生物活性的天然产物，广泛存在于茶叶、蔬菜、水果等植物中。

在茶叶中，茶皂素是一种主要的次生代谢产物，对茶叶的品质和药用价值具有重要影响。

研究茶皂素的分离纯化方法对于深入了解其生物活性和开发利用具有重要意义。

目前，关于茶皂素的分离纯化方法主要包括溶剂萃取、柱色谱分离、薄层层析、高速离心、超滤等技术。

下面将对这些方法进行初步研究。

1. 溶剂萃取溶剂萃取是最常用的茶皂素提取方法之一。

主要步骤包括茶叶的粉碎、溶剂提取和溶剂回收等。

常用的溶剂有乙醇、甲醇、丙酮等。

溶剂萃取的优点是简单、操作方便，但存在溶剂残留和由于溶剂对溶剂的明显溶解度差异导致的茶皂素混合提取等问题。

2. 柱色谱分离柱色谱是茶皂素分离纯化的常用方法之一。

主要原理是利用茶皂素在固定相和流动相之间的分配系数差异进行分离。

通过改变固定相的种类和组成、流动相的流速和温度等参数，可以实现茶皂素的选择性分离。

常用的柱色谱包括硅胶柱色谱、偏极柱色谱、脱色树脂柱色谱等。

柱色谱分离的优点是分离效果好、分离度高，但存在操作复杂、耗时和成本高等问题。

3. 薄层层析薄层层析是一种简便、快速的分离方法。

主要原理是通过茶皂素在薄层板上的吸附、分配和迁移差异实现分离。

常用的薄层层析剂有硅胶、氮化铝、纸等。

通过改变薄层板的固定相种类、移动相的组成等，可以实现茶皂素的快速分离。

薄层层析的优点是操作简单、快速，但分离度较差，不适用于分离复杂样品。

4. 高速离心高速离心是一种将茶叶中的茶皂素与其他杂质通过离心力的差异进行分离的方法。

主要原理是茶皂素在离心力作用下沉降到底部，而杂质则悬浮在上层。

通过调节离心时间和离心速度，可以实现茶皂素的快速分离。

高速离心的优点是分离速度快、操作简单，但分离度较低，不适用于分离复杂样品。

5. 超滤超滤是一种利用膜的分子筛选性和泵送压力差异进行分离的方法。

主要原理是将茶胶素通过超滤膜的孔隙进行分离，茶皂素和其他分子则被滞留在膜上。

茶皂素的分离纯化方法的初步研究茶皂素是一种天然的生物活性物质，具有抗氧化、抗菌和抗炎的作用。

它被广泛应用于医药、保健品和化妆品等领域，因此对茶皂素的提取纯化方法进行研究具有重要意义。

本文将对茶皂素的分离纯化方法进行初步研究，以期能够为茶皂素的产业化生产提供参考。

茶叶中的茶皂素主要存在于茶叶的表面和内部的表皮细胞中，因此要想提取茶皂素，首先需要将茶叶中的茶皂素与其他组分进行有效分离。

目前，常用的茶叶提取方法包括水提取、有机溶剂提取和超临界流体提取。

本文将采用有机溶剂提取的方法进行茶叶中茶皂素的提取。

有机溶剂提取是通过有机溶剂与茶叶中的茶皂素进行物理或化学作用，使茶皂素从茶叶中转移到有机溶剂中，从而实现茶皂素的提取。

在选择有机溶剂的时候，需要考虑其对环境的影响和提取效果。

一般来说，乙醇是一种常用的有机溶剂，它既具有较高的提取效果，又对环境影响较小，因此本文将选择乙醇作为有机溶剂进行茶叶的提取。

在实验中，首先将茶叶粉末与乙醇进行浸泡，使茶叶中的茶皂素充分溶解到乙醇中。

然后通过离心等手段，将茶叶渣和乙醇进行分离，得到含有茶皂素的乙醇提取液。

接下来，通过蒸发乙醇，得到茶皂素的粗提取物。

得到茶皂素的粗提取物后，接下来就需要对其进行纯化。

目前，茶皂素的纯化方法主要包括硅胶柱层析法、凝胶层析法和高效液相色谱法。

本文将采用硅胶柱层析法对茶皂素的粗提取物进行纯化。

硅胶柱层析法是一种通过硅胶对混合物进行分离的方法，其原理是通过混合物中各成分与硅胶的亲和性差异来实现分离。

在进行硅胶柱层析时，首先将硅胶填充到玻璃柱中，并采用合适的流动相来实现混合物中各成分的分离。

通过不同成分对硅胶的亲和性差异，从而实现对目标物质的纯化。

通过上述实验方法，我们将得到纯化后的茶皂素样品。

接下来，可以通过质谱、红外光谱等手段对其进行分析，确认其纯度和结构。

通过对茶皂素的分离纯化方法的初步研究，我们可以为茶皂素的产业化生产提供参考，为其在医药、保健品和化妆品等领域的应用打下基础。

茶皂素的分离纯化方法的初步研究茶皂素是从茶叶中分离出来的一种具有抗氧化和抗肿瘤活性的化合物，具有广泛的研究价值。

本文主要介绍了茶皂素的分离纯化方法的初步研究。

茶皂素的分离纯化方法有很多种，常见的包括溶剂萃取、薄层色谱、柱层析、高效液相色谱、气相色谱等。

本次研究中选择了柱层析法作为初步的分离纯化方法。

选择适合的柱层析填料。

在本次研究中，选择了聚苯乙烯高分子树脂作为填料。

这种填料具有很高的亲和力和吸附能力，对茶皂素有良好的吸附效果。

然后，制备茶叶提取物。

将新鲜的茶叶经过粉碎后加入适量的溶剂，如乙醇或甲醇，进行浸泡提取。

提取物中包含了茶皂素以及其他的化合物。

接下来，进样进行柱层析。

将提取物溶解于适量的溶剂中，然后利用注射器将样品注入柱层析柱中。

通过柱层析，不同的化合物在填料中有不同的相互作用力，因此会在填料中以不同的速度迁移。

通过调整柱层析的条件，如填料的粒径、填料的长度、样品溶剂的组成等，可以使得茶皂素与其他化合物分离出来。

收集茶皂素的纯化产物。

经过柱层析后，茶皂素会逐渐从柱子上迁移到柱底。

根据不同的组分在柱子中的保留时间进行分离，可以将茶皂素集中到某一小管中，完成分离纯化的过程。

收集的纯化产物可以进行进一步的结构鉴定和活性测试。

除了柱层析法，我们还可以使用其他分离方法进行初步的分离纯化。

茶皂素可以通过溶剂萃取和薄层色谱等方法进行初步的分离，然后再进行进一步的纯化。

茶皂素的分离纯化方法研究需要选择合适的柱层析填料，制备茶叶提取物，进行柱层析分离，并收集纯化产物。

这是茶皂素初步分离纯化的一种研究方法，需要进一步优化和改进。

希望本次研究可以为茶皂素的分离纯化提供一定的参考。

超声波辅助乙醇提取茶皂素工艺研究陈慧玲;刘芳;苏张蕾;黄苑君【摘要】为优化超声波辅助乙醇提取茶皂素的工艺,探讨茶皂素作为起泡剂、表面活性剂的可行性.试验以油茶饼粕为原材料,通过控制因素变量,采用超声波辅助乙醇,以正交试验优化获得了从油茶饼粕中提取茶皂素的最佳工艺,并分析其在手工皂中所起的重要作用.结果表明,油茶茶饼中茶皂素的最佳提取工艺为:超声波功率300W、乙醇浓度65％、浸提温度75℃、浸提时间17min、固液比1∶7、浸提次数1次.在该条件下,茶皂素的提取量到达16.72％.当茶皂素液体量为12mL时,制得的手工皂溶解度32.10％,起泡性169mL,含水量33.20％,去污性良好,洁后肤感清爽.本研究对于茶皂素的提取以及作为起泡剂和表面活性剂等的应用具有一定的借鉴意义.【期刊名称】《宁德师范学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2019(031)002【总页数】5页(P187-191)【关键词】茶皂素;超声波;提取;起泡剂;表面活性剂【作者】陈慧玲;刘芳;苏张蕾;黄苑君【作者单位】宁德师范学院生命科学学院,福建宁德352100;宁德师范学院闽东特色生物资源福建省高校工程研究中心,福建宁德352100;宁德师范学院生命科学学院,福建宁德352100;宁德师范学院闽东特色生物资源福建省高校工程研究中心,福建宁德352100;宁德师范学院生命科学学院,福建宁德352100;宁德师范学院生命科学学院,福建宁德352100【正文语种】中文【中图分类】TQ423茶皂素别名茶皂甙，纯品是无色的柱状形晶体[1].茶皂素用途广泛，是一种优良的非离子型天然表面活性剂，具有强烈的起泡、乳化和分散作用，并具有抗渗、抗炎、镇痛、抗癌等生理活性，在生产各类乳化剂、洗涤剂、防腐剂以及农药、杀菌剂等方面具有广阔的应用前景[2-4].我国现有油茶林400 万hm2，年产茶油约15 万t，油茶饼粕约50 万t.油茶饼粕又名茶饼粕，是茶籽被挤压后的残渣，茶饼粕的量是茶籽油的3 倍[5-6].据报道，茶饼粕内含有12%～18%的茶皂素、15%的水分、15%的蛋白质、40%的糖类、3%的丹宁、0.95%的咖啡碱等物质[7]，其加工利用价值很高.由于茶饼粕味苦、有毒，剩余的茶籽粕在榨油后常被直接丢弃、焚烧或以较低的价格出口到国外，造成大量浪费.如果这些残留物没有有效处理，长期的积压将会导致茶籽粕发霉，进而引起严重的环境污染和资源浪费[8].随着科技的进步，各国开始探讨茶饼粕的利用途径，目前，国内茶饼粕的主要利用包括从茶粕中提取茶油、茶皂素，用茶粕制取酸洗缓蚀剂、活性炭及作为饲料等[9].本研究采用超声波辅助乙醇浸提茶皂素，利用超声波施加高频振动以及茶皂素易溶于乙醇的特点，有效提高了萃取物的物质提取率，缩短提取时间，节约成本[10-12]，在提取物质的生物活性上保持不变；且初次探讨把茶皂素应用到手工皂中，研究了油茶作为起泡剂、天然非离子表面活性剂在肥皂中所起的重要作用，对茶皂素的综合利用及我国资源的可持续发展具有重要意义[13-15].1 材料与方法1.1 试验材料油茶饼粕产自广东梅州；芦荟粉产自安徽合肥；天然皂基(植物脂肪酸为主，添加甘油、维生素E、维生素C）产自上海.1.2 试验方法1.2.1 茶皂素的提取工艺流程见图1.图1 茶皂素的提取工艺流程1.2.2 茶饼粕材料的预处理取适量茶饼粕，用植物粉碎机进行粉碎后，过40 目筛，取适量粉粹后的茶饼粕粉末于索氏提取器，并在石油醚中回流脱脂，然后取出烘干，备用.1.2.3 茶皂素含量测定采用香草醛浓硫酸法[6].吸取1 mL 茶皂素粗滤液用80%乙醇稀释10 倍，得茶皂素稀释液.取1 mL 茶皂素稀释液置于比色管中，加入80%的乙醇1 mL 并摇匀；然后加入1 mL 质量分数为8%的香草醛溶液和8 mL 质量分数为77%硫酸溶液，摇匀，在60 ℃的水浴锅中加热20 min；最后放入冰水中10 min，取出，置于室温下60 min，所得试剂为样品试剂.在最大波长550 nm下测量吸光度以确定茶皂素含量.样品的茶皂素含量计算公式如下：式中：x 表示恒定体积后稀释茶皂素溶液的吸光值；N＝10 表示稀释的倍数；V表示滤液的体积（mL）；W＝5.0 g 表示茶饼粕质量（g）.1.2.4 手工皂的制作将天然皂基加热溶解，然后加入茶皂素、芦荟、皂角、油脂、水，不停地搅拌，直至成乳液状.将制好的皂液倒入模具中，用硅胶刮刀填平，待其自然冷却后，脱模、切块、备用.1.2.5 手工皂的溶解度测定将一块手工皂切成小块(0.4～0.6 g)备用，放在烧杯里，精确称量(精确至0.001 g)，将处理后的皂液样品用蒸馏水50 mL 全部洗入洁净烧杯中,放在水浴锅上加热,皂液溶解后，加入3 滴甲基橙指示剂，用0.1 mol·L-1 盐酸标准溶液滴定至淡红色[3].1.2.6 手工皂的起泡性测定皂液(悬浮液)浓度为1%，取50 mL 皂液置于量筒中（V=250 mL）；倒置摇晃量筒大约50 次，并直接读出泡沫体积[3].1.2.7 手工皂的水分测定参考我国轻工行业标准QB/T 2623.4—2003《肥皂试验方法肥皂中水分和挥发物含量的测定烘箱法》[16]，称取1.5 g 手工皂试样放入称量瓶中，放入105 ℃的烘箱中，1 h 后取出、冷却、称量，计算手工皂中的含水量.1.2.8 手工皂的洁后肤感测定将1.5 cm 厚度的肥皂挤压在手掌上，加入水揉出泡沫，涂抹到手部按摩30 s，用清水冲洗并烘干手，30 s 后体验皮肤感觉，皮肤感觉包括油腻、清爽、干涩3 种[16].1.2.9 手工皂的去污性测定按照我国国标GB/T 13174—2008《衣料用洗涤剂去污力及循环洗涤性能的测定》[17]，取1 块纱布，剪成4 块相等大小，分成2 组，每组纱布上番茄糊和泡沫表面油脂，分别取10 g 茶皂素手工皂和市场肥皂在烧杯中，加150 mL 自来水，搅拌至肥皂完全溶解，然后放入试验布，浸泡10 min，并用玻璃棒搅拌1min（20 s·次-1），取出布料，干燥后用自来水冲洗2 次，对比观察净化效果[17].1.3 数据统计分析所有的数值均为3 次重复的平均值，采用方差分析（ANOVA）进行显著性差异比较.2 结果与分析2.1 超声波辅助乙醇提取茶皂素单因素试验固定超声波功率为300 W 时，考察乙醇浓度、浸提温度、浸提时间、浸提次数4 个单因素对茶皂素提取率的影响.2.1.1 乙醇浓度对茶皂素提取率的影响茶皂素粉末与乙醇液体的固液比（质量比）为1∶7、浸提时间20 min、浸提次数1 次、浸提温度50 ℃，乙醇的浓度设为50%、60%、70%、80%、90%.研究不同浓度的乙醇对茶饼粕中茶皂素含量的影响.由图2A 可知，当乙醇浓度较低时，茶皂素的含量随着乙醇浓度增加而增加，当乙醇浓度为70%时，茶皂素提取效果最佳，提取率达到15.97%.当乙醇浓度过低时，茶皂素不能完全溶解出来，茶皂素的提取率下降；当浓度超过70%时，由于乙醇浓度过高，易挥发，且茶饼粕里含有蛋白质、淀粉等多种杂质[18]，它们在溶液中极其容易被浸出，进而影响提取效果，导致茶皂素的含量减少.2.1.2 浸提温度对茶皂素提取率的影响茶皂素粉末与乙醇液体的固液比（质量比）为1∶7、浸提时间20 min、浸提次数1 次、乙醇浓度70%，分别设定浸提温度为40、50、60、70、80 ℃，研究不同浸提温度对油茶饼粕中茶皂素提取率的影响.由图2B 可知，茶皂素的含量随浸提温度的升高先增加后减少，当温度为70 ℃时，茶皂素的提取率达到16.04%.温度升高，茶皂素的溶解度增加，茶皂素含量增加；但是温度过高时，高温可能破坏茶皂素的结构[2]，使得茶皂素被分解，导致茶皂素含量减少.2.1.3 浸提时间对茶皂素提取率的影响茶皂素粉末与乙醇液体的固液比1∶7、乙醇浓度70%、浸提次数1 次、浸提温度70 ℃，浸提所用时间设定为10、15、20、25、30 min，研究时间对茶饼粕中茶皂素提取含量的影响.由图2C 可知，茶皂素含量随着浸提的时间先增加后减少，当浸提时间为15 min 时，茶皂素提取率最高，为16.60%.随着浸提时间的延长，茶皂素的提取率上升，可能是因为茶皂素在茶饼粕中要有一定的时间发生溶解及扩散；但是随着浸提的时间的延长，茶皂素的含量减少，可能是因为时间的增加使浸提出来的蛋白质等物质变性，将茶皂素包裹起来[19]，使得茶皂素含量减少.2.1.4 浸提次数对茶皂素提取率的影响茶皂素粉末与乙醇液体的固液比1∶7、乙醇浓度70%、浸提温度70℃，浸提时间15 min 条件下，分别设置浸提次数为0、1、2 次，研究不同浸提次数对油茶饼粕中茶皂素含量的影响.由图2D 可知，在没有超声波辅助浸提的情况下，茶皂素含量为12.65%；在超声波辅助乙醇1 次浸提的茶皂素含量增加至16.60%，表明超声波辅助乙醇的提取方法，可以减少杂质沉淀，提高茶皂素提取率[20].当继续第2 次浸提时，茶皂素含量变化很小，只增加了1.96%，表明经过1 次浸提，茶皂素提取已较完全，且茶饼粕的原料比较便宜，没有必要进行2 次浸提.因此采用茶饼粕1 次超声浸提是合适的.图2 不同提取条件对茶饼粕中茶皂素含量的影响2.2 超声辅助乙醇提取茶皂素优化试验根据单因素试验结果，从节能、省时和得到高品质的茶皂素等方面综合考虑，固定超声波功率300 W，固液比1∶7，对乙醇浓度（A）、浸提温度（B）、浸提时间（C）这3 个单因素进行正交试验，得到最优提取条件，正交试验结果如表1 所示.正交试验中，乙醇浓度水平设置为1（65%）、2（70%）、3（75%）；浸提温度水平设置为1（65 ℃）、2（70 ℃）、3（75 ℃）；浸提时间水平设置为1（13 min）、2（15 min）、3（17 min）.由表1 可知，不同的因素对茶饼粕中茶皂素提取率的影响顺序为浸提温度>浸提时间>乙醇浓度，最优化的工艺条件为A1B3C3，此时乙醇浓度65%，浸提温度75 ℃，浸提时间17 min.通过试验验证，得到茶皂素的提取率为16.72%，实验结果比正交试验的最高含量稍高，表明优化是可行的.表1 正交试验结果表1、2、3 表示不同水平，K 表示差异极显著，k 表示差异显著.2.3 茶皂素对手工皂的影响由表2 可得，当茶皂素添加量为12 mL 时，制得的手工皂最好，此时溶解度32.10%，起泡性169 mL，含水量33.20%，去污性良好、洁后肤感清爽.随着茶皂素添加量的增加，溶解度、起泡性和水分含量都呈现先增加后减少的趋势.可能是因为茶皂素本身富含非离子型天然表表面活性剂和具有较强乳化功效[19]，导致手工皂的溶解度增加，具有良好的发泡性能，且茶皂素具有润湿和对皮肤具有营养滋润功效.但是随着茶皂素含量的增加，水分含量减少，会导致肥皂干涩，对皮肤有刺激性，而溶解度和发泡性也有一定程度的降低，且含水量过多容易发生变形收缩，硬度偏低，洗涤不耐摩擦[20].表2 茶皂素添加量对手工皂的影响3 小结本研究通过单因素试验得到的条件为：超声波的功率300 W，茶皂素粉末与乙醇液体的固液比1∶7，乙醇浓度70%，浸提温度70 ℃，浸提时间15 min，浸提次数1 次，茶皂素含量提取率为16.60%.在此基础上运用正交试验，得到提取茶饼粕中茶皂素含量的最优化条件：超声波的功率300 W，固液比1∶7，乙醇浓度65%，浸提温度75 ℃，浸提时间17 min，此时茶皂素含量提取率为16.72%.当茶皂素的添加量为12 mL 时，制得的手工皂溶解度32.10%、起泡性169 mL、含水量33.20%、去污性良好、洁后肤感清爽.本研究采用超声波辅助乙醇提取茶皂素提取率有较高的提升，首次探讨了茶皂素在手工皂中的应用，茶皂素作为天然非离子表面活性剂，具有发泡、去污功能，同时，具备有一定的抗菌效果，这对于未来开发茶皂素在作为起泡剂和表面活性剂方面的应用具备一定意义.参考文献：【相关文献】[1]夏春华.茶叶科学研究论文集[M].上海：上海科技出版社，1991：30-32.[2]任慧璟.茶皂素的提取纯化及在日化产品中的应用[D].上海：上海海洋大学，2016：35-40.[3]李杨.茶皂素的提取及其洗涤产品的开发研究[D].广州：华南农业大学，2016：188-193.[4]邓桂兰，彭超英，卢峰.油茶饼粕的综合利用研究[J].广州食品工业科技，2004，20（3）：130-132.[5]国家统计局.中国统计摘要[M].北京：中国统计出版社，2010：124：145-151.[6]熊道陵，张团结，陈金洲，等.茶皂素提取及应用研究进展[J].化工进展，2015，34（40）：1080-1087.[7]胡平平，李加兴，李忠海，等.油茶饼粕茶皂素与多糖综合提取工艺[J].食品科技，2012，37（2）：196-204.[8]邓桂兰，彭超英，卢峰.油茶饼粕的综合利用研究[J].广州食品工业科技，2004，20（3）：30-35.[9]李永峰，简健明，王少纯，等.超声波细胞粉碎辅助乙醇浸提法提取茶皂素[J].日用化学品科学，2016，39（11）：17-19，25.[10]MAO H L,WANG J K,ZHOU Y Y，et al.Effects of addition of teasaponins and soybean oil on methane production,fermentation and microbial population in the rumen of growing lambs[J].Livestock Science，2010，129（1）：56-62.[11]DU Z X，ZHANG C J，WAN D J.Optimization 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设计实验茶皂素的提取和测定设计性实验探究茶皂素的提取和测定实验⼩组成员：袁国明王蓉⼀、实验⽬的1、掌握⽔提---醇萃法提取茶皂素的原理、⽅法和⼀般步骤。

2、探究不同液料⽐对⽔提---醇萃法提取茶皂素的影响。

3、探究提取茶皂素的最佳溶剂热⽔、含⽔⼄醇、正丁醇及冰醋酸。

4、掌握⽤紫外分光光度法测定茶饼中茶皂素的含量。

⼆、实验原理茶皂素难溶于冷⽔、⽆⽔甲醇、⽆⽔⼄醇，不溶于⼄醚、丙酮、苯、⽯油醚等有机溶剂，稍溶于温⽔，易溶于热⽔、含⽔甲醇、含⽔⼄醇、正丁醇及冰醋酸，根据以上特性，本次实验来探究提取茶皂素的最佳溶剂。

⽔提---醇萃法⼜是在以上基础上，根据茶皂素易溶于热⽔和95％的⼄醇，不溶于冷⽔性质，⽤热⽔浸提茶饼，然后于浸提液中加⼊絮凝剂 Al 2(SO4 )3，沉降除杂冷却后，再⽤95％的⼄醇转萃提纯⼀种⽅法。

茶皂素与⾹草醛在浓硫酸作⽤下表现呈⾊反应，茶皂素的含量和吸光度值成线性关系，本⽂利⽤此性质对茶皂素的分析⽅法进⾏研究。

三、实验材料1、实验试剂：95％⼄醇；Al 2(SO4 )3；活性炭；NaOH；蒸馏⽔；⾹草醛；硫酸；含⽔⼄醇、正丁醇及冰醋酸2、实验材料：油茶饼粕3、实验仪器：电⼦天平、⾼速万能粉碎机、电热恒温⽔浴锅、蒸发器、电热恒温⿎风⼲燥箱、紫外可见分光光度计、三⾓锥形瓶、纱布、抽滤瓶、滤纸、分液漏⽃、烧杯、表⾯容器、容量瓶、具塞刻度试管四、实验步骤1、茶皂素的提取操作(1) 油茶饼粕的处理取⼀定量的油茶饼粕放⼊⾼速万能粉碎机中粉碎成油茶饼粕粉末，但不可过细（不利于下⼀步的过滤），⼀般粉碎粒度在 l～3 mm为宜。

(2) 探究提取茶皂素的最佳溶剂称取1g的油茶饼粕粉末4份分别加⼊到三⾓锥形瓶中，分别加⼊热⽔、含⽔⼄醇、正丁醇及冰醋酸按1:7⽐例，标记，置⼊温度为90℃的恒温⽔浴锅中处理1.5h，得到茶皂素浸取液。

浸取液要趁热⽤纱布过滤。

(2) 探究⼀定固液⽐下恒温热⽔浴浸提称取1g的油茶饼粕粉末3份分别加⼊到三⾓锥形瓶中，分别加⼊蒸馏⽔和固体的⽐例为1:6、1:7、1:8，置⼊温度为90℃的恒温⽔浴锅中处理1.5h，得到茶皂素浸取液。

无水乙醇提取茶皂素工艺研究全昌云;应哲;黄小兵;陈远道;张亚;刘北平【摘要】温度较低时,茶皂素在无水乙醇中溶解度随温度升高快速增大,温度超过50℃后,再升高温度茶皂素溶解度变化很小,根据这一结论建立了通过改变温度分离茶皂素的工艺,用液固比为5∶1的无水乙醇量75℃浸提1h,冷却结晶析出茶皂素产品,其得率可达到13.87％.这种工艺较好地解决了现有技术存在的问题,可用油脂提取的常规设备逆流提取茶皂素,实现工业化的连续操作.【期刊名称】《粮油食品科技》【年(卷),期】2013(021)004【总页数】4页(P32-35)【关键词】茶皂素;提取;响应曲面法【作者】全昌云;应哲;黄小兵;陈远道;张亚;刘北平【作者单位】湖南文理学院化学化工学院,湖南常德415000;湖南文理学院化学化工学院,湖南常德415000;湖南文理学院化学化工学院,湖南常德415000;湖南文理学院化学化工学院,湖南常德415000;湖南文理学院化学化工学院,湖南常德415000;湖南文理学院化学化工学院,湖南常德415000【正文语种】中文【中图分类】TS229茶皂素是一种纯天然非离子型表面活性剂［1］，它的分子中有亲水性的糖体和疏水性的配基团，具有乳化、分散、润湿、去污、发泡、稳泡等多种表面活性。

此外，茶皂素还具有显著的祛痰、消炎、止咳、镇痛、抗渗透、杀菌、杀虫及促进植物生长等作用，因而广泛用于日用化工作洗涤剂(如洗发香波、丝绸和毛料洗涤剂等)，饲料添加剂，农药的乳化剂、增效剂、杀菌剂和杀虫剂，在医药、兽医、啤酒等工业中用作发泡剂和稳泡剂，在选矿中用作浮选剂，在胶片工业中用作感光剂及展开剂等。

茶皂素具有广阔的应用前景［2－3］。

目前，茶皂素的提取方法主要有有机溶剂法和水浸法以及在此基础上推广的新方法，如水提–沉淀法、水提–醇萃法、树脂吸附法、超声波法、膜分离法等［4－5］。

在二十世纪八十年代中后期，国内曾有生产厂以水作溶剂提取茶皂素，因技术原因，能耗高，提取率低，产品质量差，生产成本高而陆续停产。

茶皂素的分离纯化方法的初步研究
茶皂素是一类存在于茶叶中的重要化合物，具有多种生物活性，包括抗氧化、抗炎、抗癌等作用。

茶皂素的分离纯化方法对于研究其生物活性和开发利用具有重要意义。

茶皂素的分离纯化方法可以根据其化学性质的不同进行选择，常见的方法包括溶剂萃取、色谱技术等。

溶剂萃取是茶皂素分离纯化的一种常用方法。

首先将茶叶样品研磨成细粉，然后用适当的有机溶剂（如乙醇、醚类等）与茶叶粉混合，进行浸提。

浸提时间、温度和溶剂的浓度等因素会对提取效果产生影响，因此需要进行优化。

提取后，使用旋风离心机将悬浮液离心，得到茶皂素的粗提取物。

为了进一步提高纯度，可以通过溶剂分配、溶剂萃取、凝固调温和蒸馏等方法对粗提取物进行分离纯化。

色谱技术也是茶皂素分离纯化的重要手段之一。

常用的色谱技术包括薄层色谱、柱层析、凝胶过滤、高效液相色谱等。

薄层色谱是最常用的初步分离方法之一，通过将茶皂素溶液滴于预处理好的薄层板上，然后将薄层板置于适当的溶剂系统中，待溶剂上升至一定高度时取出薄层板，以紫外灯或其他合适的方法观察并取下目标色斑，再进行荧光显色或者取下刮下进行进一步分析。

对于比较复杂的化合物混合物，柱层析和高效液相色谱是常用的技术。

这些方法可以根据茶皂素的性质选择适合的固定相和移动相，并通过梯度洗脱或选择性吸附来分离纯化茶皂素。

茶皂素的分离纯化方法应根据所需纯度和所需量来选择，溶剂萃取和色谱技术是较常用的方法。

未来可以进一步研究优化这些方法，提高茶皂素的纯度和提取效果，为茶皂素的研究和开发利用提供更好的条件。

茶皂素提取条件的优化及纯化研究茶皂素是一种从茶叶中提取的活性成分，具有抗氧化、抗菌、抗炎等多种生物活性。

茶皂素的提取和纯化关系到其效果和用途，因此对其提取条件的优化和纯化方法的研究具有重要意义。

本文将从实验设计、提取条件优化和纯化方法研究等方面进行讨论。

一、实验设计茶皂素的提取条件优化和纯化方法研究需要进行实验设计来确定最佳条件和方法。

首先需要选择适当的茶叶样品作为原料，并根据提取目标和实验目的确定提取剂、提取温度、提取时间等条件。

在实验设计中可以应用单因素实验、正交实验等方法，对不同的因素进行独立变化，并通过评价茶皂素提取率、纯度等指标来确定最佳条件和方法。

二、提取条件的优化1.提取剂的选择：茶皂素提取剂的选择是影响提取效果的关键因素之一、常用的提取剂包括乙醇、酒精、水等。

不同的提取剂对茶皂素的溶解能力和选择性也不相同，因此需要通过对比实验来确定最佳提取剂。

2.提取温度：提取温度是影响茶皂素溶解速度和稳定性的重要因素。

在一定范围内，提取温度越高，茶皂素的溶解度也越高，但过高的温度可能会导致茶皂素降解。

因此，需要在实验中探讨不同温度下提取效果的变化，确定最佳提取温度。

3.提取时间：提取时间是影响茶皂素溶出速度和提取率的重要因素。

一般情况下，提取时间越长，茶皂素的溶出量也越高，但超过一定时间后茶皂素的提取率不再增加。

因此，需要进行不同提取时间的对比实验，确定最佳提取时间。

三、纯化方法的研究茶皂素的纯化方法包括溶剂分配法、柱层析法、薄层层析法等多种方法。

纯化的目的是去除杂质，提高茶皂素的纯度。

在纯化方法的研究中，首先需要选择适当的分离材料或溶剂，然后通过溶剂分配、柱层析或薄层层析等方法对茶皂素进行分离和纯化。

不同的纯化方法适用于不同的茶皂素样品，因此需要结合实际情况选择合适的方法。

四、其他影响因素的考虑除了提取条件和纯化方法，还有一些其他因素也会影响茶皂素的提取和纯化效果，如茶叶的产地、品种、采摘时间等。

茶皂素的分离纯化方法的初步研究茶皂素是一种天然的花生素化合物，具有抗氧化、抗菌、抗炎和抗肿瘤等多种生物活性，因此受到了广泛关注。

茶皂素存在于茶叶、苹果、葡萄、辣椒、草莓等植物中，是一种重要的天然抗氧化剂。

如何有效分离和纯化茶皂素成为了研究的热点之一。

目前已有很多关于茶皂素的分离纯化方法的研究，如超临界流体萃取、液相色谱、固相萃取等。

不同的分离纯化方法存在着各自的优缺点，并且在实际应用中还存在着一定的局限性。

本文旨在通过对茶皂素的分离纯化方法进行初步研究，探索一种简便、高效的分离纯化方法。

一、茶皂素的提取提取是茶皂素分离纯化的第一步，常用的提取方法包括乙醇提取、甲醇提取、水提取等。

本研究选择了乙醇提取的方法。

首先将茶叶样品研磨成粉末状，然后加入适量的乙醇溶液，浸泡一定时间后，采用振荡器进行振荡。

振荡结束后，用滤纸过滤，将滤液收集起来，得到含有茶皂素的乙醇提取液。

二、茶皂素的初步分离将得到的乙醇提取液置于旋转蒸发仪中蒸发浓缩，得到茶皂素的粗提取物。

然后将粗提取物溶解在适量的乙酸乙酯中，进行液液萃取。

在液液萃取过程中，茶皂素主要分布于乙酸乙酯相中。

接下来，将乙酸乙酯相进行旋转蒸发，得到粗分离的茶皂素。

三、茶皂素的进一步纯化得到的粗分离茶皂素是混合物，含有其他杂质，需要进行进一步的纯化。

本研究选择了硅胶柱层析法进行茶皂素的进一步纯化。

首先将硅胶填料装入柱内，然后将粗分离茶皂素溶解在适量的溶剂中，加入到硅胶柱中。

根据茶皂素与硅胶的亲和性差异，通过控制流动相的流速，使得茶皂素与其他杂质分离，从而得到相对纯净的茶皂素。

四、茶皂素的鉴定和分析得到相对纯净的茶皂素后，需要进行鉴定和分析，确定其纯度和结构。

可以运用一些常见的分析方法，如高效液相色谱（HPLC）、质谱分析（MS）、核磁共振（NMR）等技术，对茶皂素进行定性和定量分析，确定其结构和纯度。

通过上述方法，我们初步完成了对茶皂素的分离纯化，得到了相对纯净的茶皂素。

茶籽粕中茶皂素的提取及性质表征茶籽粕中茶皂素的提取及性质表征引言：茶籽是一种重要的农作物，其粕副产物中含有丰富的茶皂素。

茶皂素是茶叶中的一种重要活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗菌等多种生物活性。

因此，我们对茶籽粕中茶皂素的提取方法进行了研究，并对提取得到的茶皂素的性质进行了详细的表征。

一、提取方法1. 原料准备：将茶籽粕研磨成细粉末，并用乙醇对其进行提取。

2. 提取工艺：将茶籽粕粉末与乙醇按照一定的比例混合，然后通过超声波法进行提取。

将混合物放入超声波浴中进行超声处理，使茶皂素从茶籽粕中溶解到乙醇中。

3. 过滤分离：将提取液过滤分离，得到含有茶皂素的乙醇溶液。

4. 浓缩：通过加热蒸发的方法，将茶皂素乙醇溶液浓缩至一定浓度。

5. 结晶：将浓缩后的溶液静置，促使茶皂素结晶沉淀。

6. 洗涤：用适量的乙醇将茶皂素结晶洗涤干净。

7. 干燥：将洗涤后的茶皂素结晶放置在通风干燥的环境中，使其完全干燥。

二、性质表征1. 红外光谱分析：利用傅里叶变换红外光谱仪对茶皂素进行分析，观察其吸收峰的位置和强度，进而确定其结构特征。

2. 紫外光谱分析：在特定波长下，测量茶皂素的吸光度，判断其含量和纯度。

3. 热重分析：通过加热茶皂素样品，观察其在不同温度下质量的变化情况，得出茶皂素的热稳定性和热分解特性。

4. 核磁共振谱分析：通过核磁共振仪对茶皂素样品进行分析，获得茶皂素的结构式和分子式。

5. X射线衍射分析：使用X射线衍射仪对茶皂素样品进行分析，确定其晶体结构和晶体形貌等信息。

6. 溶解性测试：将茶皂素样品与不同溶剂进行混合，观察其溶解情况，判断茶皂素的溶解性。

7. 粒度分析：利用粒度仪对茶皂素样品进行分析，得出茶皂素的平均粒径和粒度分布情况。

结论：通过乙醇超声波法对茶籽粕中的茶皂素进行提取，得到了结晶纯度较高的茶皂素样品。

通过红外光谱、紫外光谱、热重分析、核磁共振谱、X射线衍射、溶解性测试和粒度分析等性质表征方法对茶皂素进行了详细的分析，对其进行了结构表征和性质表征。

高纯度茶皂素的制备方法研究茶皂素是一种与茶叶密切相关的化合物，具有多种生物活性和医疗价值。

在茶叶中，茶皂素主要以茶多酚形式存在，而要获得高纯度的茶皂素，需要进行一系列的制备方法研究。

本文将探讨几种常用的高纯度茶皂素制备方法。

一、水提法水提法是制备高纯度茶皂素的常用方法之一。

其步骤主要包括茶叶粉末的制备、溶剂的选择和浸提工艺的优化。

首先，将新鲜的茶叶晒干并研磨成粉末状。

随后，选择适合的溶剂，如水、乙醇或醚类溶剂，与茶叶粉末进行浸泡。

而后，在合适的温度下进行浸提过程，通常可利用恒温水浴或超声波辅助提取。

为了提高茶皂素的提取效率，可通过对浸提条件的优化来达到高纯度茶皂素的目的。

例如，调整浸提时间、浸提温度和液固比等因素，以最大化茶皂素的提取。

最后，可通过过滤、浓缩和冷却结晶等工艺步骤来获得高纯度的茶皂素。

二、超临界流体萃取超临界流体萃取是一种相对较新的茶皂素制备方法。

超临界流体是指在临界温度和临界压力下具有较高溶解能力和传质能力的流体。

常用的超临界流体包括二氧化碳和氢气等。

超临界流体萃取的步骤通常包括预处理、提取和纯化过程。

在预处理阶段，茶叶通常需要经过研磨、干燥等处理以增加其物质的溶解性。

随后，将茶叶与超临界流体进行混合反应，并在高压下进行。

茶皂素会在超临界流体中溶解，而杂质则会被保留在固体残渣中。

最后，通过调整温度和压力等参数，茶皂素可以被纯化并从超临界流体中回收。

三、分子筛吸附法分子筛吸附法是一种通过选择性吸附和分离茶皂素的方法。

这种方法的关键是选择合适的分子筛材料和优化吸附条件。

常见的分子筛材料包括硅胶、活性炭和沸石等。

首先，将茶叶提取液与分子筛进行接触，茶皂素将被分子筛表面的微孔所吸附。

随后，调整吸附条件，如温度、压力和吸附时间，并通过适当的洗脱方法来分离茶皂素。

最后，经过多次吸附-洗脱过程，可以获得高纯度的茶皂素。

综上所述，高纯度茶皂素的制备方法有许多途径，包括水提法、超临界流体萃取和分子筛吸附法等。

第５３卷第６期２０１９年１１月生㊀物㊀质㊀化㊀学㊀工㊀程ＢｉｏｍａｓｓＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＶｏｌ.５３Ｎｏ.６Ｎｏｖ.２０１９㊀㊀收稿日期:２０１９￣０２￣２６㊀㊀基金项目:宜春学院地方发展研究中心招标项目(２２１０８１６０２６)㊀㊀作者简介:孙万里(１９６７ )ꎬ男ꎬ江西修水人ꎬ副教授ꎬ博士ꎬ主要从事生物质资源生物转化的研究ꎻＥ￣ｍａｉｌ:ｗｌｓｓｓ＠１６３.ｃｏｍꎮ ｄｏｉ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１６７３￣５８５４.２０１９.０６.００７研究报告 生物质天然活性成分茶皂素提取条件的优化及纯化研究孙万里(江西省宜春学院化学与生物工程学院ꎬ江西宜春３３６０００)摘㊀要:以油茶茶籽粕为原料ꎬ采用乙醇水溶液提取茶皂素ꎮ在茶籽粉和乙醇料液比１ʒ９(ｇʒｍＬ)ꎬ乙醇体积分数６０％ꎬ提取温度６０ħ和提取时间３ｈ的最佳条件下茶皂素的提取得率达１４.９％ꎮ用ＮＫＡ￣９型大孔吸附树脂吸附纯化茶皂素粗品ꎬ树脂静态吸附与解吸结果表明:树脂静态吸附茶皂素粗提液０.５ｈ基本饱和ꎬ体积分数８０％乙醇解吸率为９１.１％ꎻ动态吸附与解吸时ꎬ上样流速８ｍＬ/ｍｉｎ较佳ꎬ吸附率为６６.０４％ꎬ体积分数８０％乙醇洗脱ꎬ洗脱流速５.０ｍＬ/ｍｉｎꎬ洗脱体积５０ｍＬ时ꎬ可使流出液中茶皂素质量浓度在１.２５~１.５７ｇ/Ｌ之间ꎬ茶皂素纯度为９５％ꎮ关键词:茶籽粕ꎻ茶皂素ꎻ提取ꎻ纯化ꎻＮＫＡ￣９型大孔吸附树脂中图分类号:ＴＱ３５ꎻＴＱ９１㊀文献标识码:Ａ㊀㊀文章编号:１６７３￣５８５４(２０１９)０６￣００３９￣０６引文格式:孙万里.茶皂素提取条件的优化及纯化研究[Ｊ].生物质化学工程ꎬ２０１９ꎬ５３(６):３９４４.ＳｔｕｄｙｏｎＥｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＴｅａＳａｐｏｎｉｎｆｒｏｍＴｅａＳｅｅｄＭｅａｌＳＵＮＷａｎｌｉ(ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇꎬＹｉｃｈｕｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＹｉｃｈｕｎ３３６０００ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｔｅａｓａｐｏｎｉｎｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙａｌｃｏｈｏｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｕｓｉｎｇｔｅａｓｅｅｄｍｅａｌａｓｒａｗｍａｔｅｒｉａｌ.Ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｔｅａｓａｐｏｎｉｎｗａｓａｓｆｏｌｌｏｗｓ:ｔｈｅｒａｔｉｏｏｆｓｏｌｉｄｔｏｌｉｑｕｉｄｗａｓ１ʒ９(ｇ/ｍＬ)ꎬｔｈｅｖｏｌｕｍｅｆｒａｃｔｉｏｎｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓｏｌｕｔｉｏｎ(ｅｔｈａｎｏｌ)ｗａｓ６０％ꎬｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓ６０ħａｎｄｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｉｍｅｗａｓ３ｈꎬｕｎｄｅｒｔｈｅａｂｏｖｅｒｅａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓꎬｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｙｉｅｌｄｏｆｔｅａｓａｐｏｎｉｎｗａｓ１４.９％.ＣｒｕｄｅｔｅａｓａｐｏｎｉｎｗａｓｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙＮＫＡ￣９ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓｒｅｓｉｎ.Ｉｎｔｈｅｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔꎬｔｈｅｓｔａｔｉｃａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｒｅａｃｈｅｄｓａｔｕｒａｔｉｏｎｆｏｒ０.５ｈａｎｄｔｈｅｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｔｈｅｖｏｌｕｍｅｆｒａｃｔｉｏｎ８０％ｅｔｈａｎｏｌｒｅａｃｈｅｄｔｈｅｍａｘｉｍｕｍｏｆ９１.１％ｉｎｔｈｅｓｔａｔｉｃｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎꎬｗｈｉｌｅｔｈｅｄｙｎａｍｉｃａｄｓｏｒｐｔｉｏｎａｎｄｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ.Ｔｈｅａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｒａｔｅｒｅａｃｈｅｄ６６.０４％ａｔｔｈｅｒａｔｅｏｆ８ｍＬ/ｍｉｎꎬａｎｄｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｔｅａｓａｐｏｎｉｎｗａｓｂｅｔｗｅｅｎ１.２５ｇ/Ｌａｎｄ１.５７ｇ/Ｌａｆｔｅｒｅｌｕｔｉｏｎｗｉｔｈｔｈｅｖｏｌｕｍｅｆｒａｃｔｉｏｎ８０％ｅｔｈａｎｏｌｏｆ５０ｍＬａｔｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｏｆ５.０ｍＬ/ｍｉｎꎬｔｅａｓａｐｏｎｉｎｐｕｒｉｔｙ９５％.Ｋｅｙｗｏｒｄ:ｔｅａｓｅｅｄｍｅａｌꎻｔｅａｓａｐｏｎｉｎꎻａｂｓｔｒａｃｔꎻｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎꎻＮＫＡ￣９ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓｒｅｓｉｎ茶皂素又称茶皂苷ꎬ是一类天然糖苷化合物ꎬ茶皂素主要来源于油茶(ＣａｍｅｌｌｉａｏｌｅｉｆｅｒａＡｂｅｌ)ꎬ具有一般皂苷的通性ꎬ茶皂素难溶于无水甲醇㊁无水乙醇㊁冷水ꎬ且不溶于丙酮㊁苯㊁乙醚㊁石油醚等有机溶剂[１]ꎬ易溶于含水甲醇和乙醇ꎬ是一种非离子型极性物质ꎬ其分子中有亲水性的糖体和疏水性的配位基团ꎬ具有乳化㊁分散㊁润湿㊁发泡㊁去污等功能和溶血㊁抗菌㊁抗病毒㊁降血脂等生理活性[２－４]ꎮ因此ꎬ茶皂素在日用化工㊁农药㊁医药㊁食品等领域具有广泛的应用价值ꎮ目前ꎬ茶皂素的提取方法主要有２种:一是水提法[５]ꎬ利用茶皂素溶于热水的性质ꎬ选取热水作为浸提剂从而将茶皂素提取出来ꎮ水提法虽然简单易操作ꎬ但是浸出的成分复杂ꎬ不利于后续分离纯化ꎬ且耗能较多ꎻ二是有机溶剂提取ꎬ有乙醇㊁甲醇提取法等ꎬ这２种方法中乙醇的安全性更高ꎬ甲醇毒性大ꎬ且甲醇提取过程中带入的杂质较多ꎬ导致产品纯度降低[６－７]ꎮ杨坤国等[８]尝试用无水乙醇回流提取茶籽中茶皂素ꎬ趁热过滤ꎬ使得粗产品和原料迅速分离ꎬ提取收率为９.７％㊁纯度８０.１％的茶皂素ꎮ初步提取的茶皂素含有多酚类化合物㊁多糖类㊁植物色素和粗脂肪㊁粗纤维等杂质ꎬ需要进一步纯４０㊀生㊀物㊀质㊀化㊀学㊀工㊀程第５３卷化ꎬ才能达到一定的纯度ꎮ目前ꎬ如何进一步提高茶皂素纯度和降低提取费用仍然是一个有待解决的问题ꎮ分离纯化茶皂素的方法有沉淀㊁溶剂萃取㊁膜分离㊁硅胶柱层析㊁高速逆流色谱分离以及大孔吸附树脂分离等ꎬ其中采用大孔树脂吸附法[９]或超滤膜法[１０]来纯化茶皂素被认为是一种具有巨大推广价值的方法ꎬ在树脂吸附后ꎬ通过水洗㊁碱洗和醇洗等步骤可以有效地将茶皂素与杂质进行分离ꎮ有报道表示采用大孔吸附树脂吸附法提取的茶皂素收率㊁纯度和色泽等指标都明显高于传统工艺所制得的茶皂素[１１]ꎮ因此ꎬ本研究采用油茶茶籽饼为原料ꎬ经乙醇水溶液提取茶皂素后ꎬ用大孔树脂ＮＫＡ￣９纯化茶皂素进行前期提取和纯化的初步研究ꎬ以期为茶皂素开发利用提供基础数据ꎮ１㊀实验１.１㊀材料、试剂与仪器油茶茶籽饼由江西青龙高科集团提供ꎻＮＫＡ￣９型大孔树脂购于天津南开波鸿树脂科技有限公司ꎻ无水乙醇(纯度９９.５％)㊁石油醚(沸程６０~９０ħ)㊁香草醛(纯度９９％)㊁茶皂素标准品(纯度９８％)ꎮＢＺ４０１３８索式提取器ꎬ上海洪纪仪器设备有限公司ꎻ７２２￣１００型可见分光光度计ꎬ上海天普分析仪器仪表有限公司ꎻＳＨＺ￣Ⅲ型循环水真空泵ꎻＲＥ￣３０００旋转蒸发仪ꎮ１.２㊀茶皂素的提取１.２.１㊀原料预处理㊀取一定量的茶籽饼ꎬ粉碎ꎬ于恒温干燥箱中在６０ħ下干燥４ｈ或以上ꎬ控制茶籽粉的水分ɤ５％ꎮ过筛筛分出粒径０.４ｍｍ茶籽粉ꎬ加入一定量的石油醚经索式抽提器抽提４~６ｈꎬ直至抽提液无色ꎬ其目的是除去油脂以防后续干扰[１２]ꎮ将经脱脂处理过的茶籽粉置于通风良好处自然风干ꎬ后于干燥箱中６０ħ条件下干燥４ｈ烘干备用ꎮ１.２.２㊀标准曲线的建立㊀采用香草醛￣浓硫酸显色法[１３]检测茶皂素的含量ꎮ首先ꎬ准确称取茶皂素标准品０.０４ｇꎬ用体积分数８０％乙醇溶液将其溶解于２０ｍＬ容量瓶中ꎬ定容至刻度后摇匀ꎬ得到茶皂素质量浓度为２ｇ/Ｌ的标准溶液ꎮ然后ꎬ准确称取８ｇ香草醛于１００ｍＬ容量瓶中ꎬ用无水乙醇溶解并定容ꎬ配制香草醛乙醇溶液ꎮ用移液枪精密移取０.１㊁０.２㊁０.３㊁０.４㊁０.５ｍＬ茶皂素标准溶液分别放置于５个比色管中ꎬ加入蒸馏水直到溶液体积均为０.５ｍＬꎬ精密加入香草醛乙醇溶液０.５ｍＬꎬ并将比色管置于冰水混合物中ꎬ分别移取４ｍＬ７７％浓硫酸于比色管中ꎬ摇匀ꎮ将比色管置于６０ħ恒温水浴锅中水浴１５ｍｉｎꎬ再将其置于冰水混合物中反应１０ｍｉｎꎬ取出恢复至室温ꎮ取配置好的样品溶液ꎬ以空白试剂为对照ꎬ在波长５５０ｎｍ处测定吸光度(Ａ)ꎬ以Ａ为纵坐标ꎬ茶皂素标准品溶液质量浓度(ｘꎬｇ/Ｌ)为横坐标作标准曲线ꎬ得标准曲线方程:Ａ＝０.９０４ｘ＋０.００７７ꎬ相关系数Ｒ２＝０.９９７８ꎮ１.２.３㊀提取流程及优化㊀准确称取２ｇ经脱脂处理的茶籽粉于２５０ｍＬ锥形瓶中ꎬ以一定体积的不同体积分数的乙醇水溶液作为浸提液ꎬ在一定温度下恒温水浴浸提一定时间ꎬ在λ＝５５０ｎｍ处分别测定Ａꎬ由标准曲线方程换算成浸提液中茶皂素质量浓度ꎬ进而算出得率ꎮ分别考察料液比㊁浸提液乙醇体积分数㊁浸提温度㊁浸提时间对茶皂素得率的影响ꎬ从而选出最佳的工艺条件ꎮ提取得率(ｙ)计算公式:ｙ＝ＣˑＶ/ｍˑ１００％(其中ꎬＣ为浸提液中茶皂素质量浓度ꎬｇ/ＬꎻＶ为浸提液体积ꎬｍＬꎻｍ为原料的质量ꎬｇ)ꎮ１.３㊀大孔树脂ＮＫＡ￣９纯化茶皂素１.３.１㊀茶皂素粗提液的制备㊀将最佳单因素提取试验所得提取液经过滤ꎬ滤液经旋转蒸发回收乙醇ꎬ真空干燥ꎬ可得到粗茶皂素ꎮ准确称取１ｇ粗茶皂素用热水溶解ꎬ然后进行抽滤以除去不溶物质ꎬ再用蒸馏水定容至１０００ｍＬ容量瓶中ꎬ备用ꎮ１.３.２㊀大孔吸附树脂预处理㊀将ＮＫＡ￣９型大孔吸附树脂放于无水乙醇中浸泡８ｈꎬ除去醇溶物ꎬ然后用蒸馏水反复洗涤至无醇味ꎮ在５％的盐酸中浸泡３ｈꎬ用蒸馏水洗至中性ꎬ再用５％ＮａＯＨ溶液浸泡３ｈꎬ蒸馏水洗至中性ꎬ备用[１４]ꎮ１.３.３㊀静态吸附与解吸１.３.３.１㊀吸附时间的影响㊀准确称取２ｇ预处理过的ＮＫＡ￣９树脂置于２５０ｍＬ锥形瓶中ꎬ加入５０ｍＬ第６期孙万里:茶皂素提取条件的优化及纯化研究４１㊀１ｇ/Ｌ茶皂素粗提液ꎬ树脂吸附前皂茶素的质量浓度(Ｃ０)为０.６６７ｇ/Ｌꎬ温度为３７ħꎬ摇床转速１４０ｒ/ｍｉｎ条件下振荡３ｈꎬ每３０ｍｉｎ测一次溶液中茶皂素的质量浓度ꎬ按式(１)和(２)计算吸附量和吸附率:Ｑ＝(Ｃ０－Ｃᶄ)ˑＶᶄ/ｍᶄ(１)Ｗ＝(Ｃ０－Ｃᶄ)/Ｃ０ˑ１００％(２)式中:Ｑ 吸附量ꎬｍｇ/ｇꎻＷ 吸附率ꎬ％ꎻＣ０ 吸附前茶皂素的质量浓度ꎬｇ/ＬꎻＣᶄ 吸附后粗提液中残余茶皂素的质量浓度ꎬｇ/ＬꎻＶᶄ 茶皂素粗提液的体积ꎬｍＬꎻｍᶄ 大孔吸附树脂的质量ꎬｇꎮ１.３.３.２㊀洗脱剂体积分数的影响㊀准确称取５份预处理过的ＮＫＡ￣９型树脂ꎬ每份２ｇ置于２５０ｍＬ锥形瓶中ꎬ加入５０ｍＬ茶皂素粗提液ꎬＮＫＡ￣９树脂吸附前皂茶素的质量浓度(Ｃᶄ０)为０.４７７ｇ/Ｌꎬ在温度为３７ħꎬ摇床转速１４０ｒ/ｍｉｎ条件下摇床振荡至吸附饱和ꎬ过滤ꎬ用蒸馏水洗去树脂表面的残留溶液ꎬ而后分别加入５０ｍＬ４０％㊁５０％㊁６０％㊁７０％和８０％体积分数的乙醇溶液ꎬ置于恒温摇床中振摇１２ｈꎬ取上清液ꎬ测定茶皂素质量浓度ꎬ按式(３)计算解吸率:Ｄ＝Ｃᶄ/(Ｃᶄ０－Ｃ１)ˑ１００％(３)式中:Ｄ 解吸率ꎬ％ꎻＣ１ 解吸后解吸液中茶皂素的质量浓度ꎬｇ/Ｌꎮ１.３.４㊀动态吸附与解吸㊀称取一定量的预处理好的ＮＫＡ￣９型树脂湿法上柱ꎬ将质量浓度１ｇ/Ｌ的茶皂素粗提液上样ꎬ控制一定的流速ꎬ上样完毕ꎬ用５０ｍＬ的蒸馏水洗ꎬ水洗后再用一定量不同体积分数的乙醇溶液进行洗脱ꎬ控制一定的洗脱流速ꎬ测定洗脱液中茶皂素的质量浓度ꎮ茶皂素纯度由洗脱液中茶皂素与干物质的质量比值计算得到ꎮ２㊀结果与讨论表１㊀不同浸提条件对茶皂素得率的影响Ｔａｂｌｅ１㊀Ｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｎｔｈｅｙｉｅｌｄｏｆｔｅａｓａｐｏｎｉｎ提取条件ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ质量浓度/(ｇ Ｌ－１)ｍａｓｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ得率/％ｙｉｅｌｄ料液比ｍａｔｅｒｉａｌｔｏｌｉｑｕｉｄｒａｔｉｏ１ʒ３(ｇʒｍＬ)１.１４㊀５.７１ʒ５(ｇʒｍＬ)０.６６６.６１ʒ７(ｇʒｍＬ)０.４０８.０１ʒ９(ｇʒｍＬ)０.２９８.７１ʒ１１(ｇʒｍＬ)０.１８７.４乙醇体积分数ｅｔｈａｎｏｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ５０％０.３８１１.３６０％０.３９１１.８７０％０.３８１１.４８０％０.３０９.１９０％０.３０６.８浸提温度ｌｅａｃｈｉｎｇｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ５０ħ０.４４１３.１６０ħ０.４６１３.８７０ħ０.４５１３.６８０ħ０.４５１３.５９０ħ０.５５１６.５浸提时间ｌｅａｃｈｉｎｇｔｉｍｅ１ｈ０.４５１３.６２ｈ０.４４１３.２３ｈ０.５０１４.９４ｈ０.４８１４.５５ｈ０.４５１３.５２.１㊀浸提条件对茶皂素得率的影响２.１.１㊀料液比㊀考察不同料液比对茶皂素得率的影响ꎬ以体积分数９５％乙醇水溶液为浸提液ꎬ６０ħ恒温水浴浸提２ｈꎬ结果见表１ꎮ由表可知随着料液比的减小ꎬ茶皂素得率随之增大ꎬ而到了料液比１ʒ１１(ｇʒｍＬꎬ下同)时ꎬ茶皂素得率反而下降ꎬ可能是茶皂素提取过程中ꎬ需要一定量的提取剂才能完全渗透至原料的微孔中ꎬ进而溶解出茶皂素ꎬ而料液比１ʒ１１时ꎬ茶皂素得率下降ꎬ可能是由于浸提液过多ꎬ稀释了茶皂素的缘故ꎮ考虑到能耗及得率ꎬ确定最佳料液比为１ʒ９ꎮ２.１.２㊀乙醇体积分数㊀考察不同的乙醇体积分数对茶皂素得率的影响ꎬ料液比为１ʒ９ꎬ６０ħ恒温水浴浸提２ｈꎬ结果见表１ꎮ由表可知ꎬ乙醇体积分数小于６０％时ꎬ可能是乙醇浓度小ꎬ含水较多ꎬ达不到应有的浸取效果ꎬ故浸提液中茶皂素质量浓度不高ꎬ以体积分数５０％乙醇水溶液浸提得率为１１.３％ꎬ而乙醇体积分数为６０％时ꎬ茶皂素得率最高达到１１.８％ꎬ由此确定最佳浸提液体积分数为６０％乙醇水溶液ꎮ随着乙醇体积分数逐渐增大ꎬ茶皂素的质量浓度反而降低ꎬ可能是茶皂素不溶于无水乙醇ꎬ浸提液中含醇较多的缘故ꎮ４２㊀生㊀物㊀质㊀化㊀学㊀工㊀程第５３卷２.１.３㊀浸提温度㊀考察不同的浸提温度对茶皂素得率的影响ꎬ料液比为１ʒ９ꎬ以体积分数６０％乙醇水溶液为浸提液ꎬ浸提时间２ｈꎬ结果见表１ꎮ从表中可知从５０到８０ħ这一段ꎬ茶皂素得率变化不大ꎬ而９０ħ时ꎬ茶皂素得率突增ꎬ可以解释为温度过高ꎬ乙醇挥发导致浸提液量变少ꎬ在时间一定的前提下ꎬ９０ħ时的浸提液量少ꎬ导致其中的茶皂素质量浓度过高ꎮ从能耗角度考虑ꎬ确定６０ħ为最佳的浸提温度ꎮ２.１.４㊀浸提时间㊀考察不同的浸提时间对茶皂素得率的影响ꎬ料液比为１ʒ９ꎬ以体积分数６０％乙醇水溶液为浸提液ꎬ浸提温度６０ħꎬ结果见表１ꎮ由表可知ꎬ随着时间的递增ꎬ茶皂素得率呈现先上升后下降的趋势ꎬ先上升可能是茶皂素从原料中渗透出来至浸提液中需要一定的时间所致ꎬ后下降可能是时间长了茶皂素易失活的缘故ꎬ故最佳的浸提时间为３ｈꎬ此时茶皂素得率最高为１４.９％ꎮ综上所述ꎬ在单因素试验中ꎬ提取茶皂素最佳的工艺条件为液料比１ʒ９(ｇʒｍＬ)ꎬ浸提液乙醇体积分数６０％ꎬ浸提温度６０ħꎬ浸提时间３ｈꎬ此时茶皂素得率最高可达到１４.９％ꎬ浸提液茶皂素纯度为６７％ꎮ２.２㊀ＮＫＡ￣９型树脂静态吸附和解吸２.２.１㊀静态吸附动力学㊀静态吸附时间对吸附量的影响见图１ꎮ根据图１可知ꎬＮＫＡ￣９型树脂在０~２ｈ内ꎬ其吸附量随时间增加而迅速增大ꎬ吸附０.５ｈ基本饱和ꎬ２ｈ以后吸附量的增加趋于缓慢ꎮ由此可以看出ꎬＮＫＡ￣９型树脂是一种快速吸附型树脂ꎬ这对实际生产中的应用极为有利ꎬ将极大提高生产效率ꎬ同时得到ＮＫＡ￣９型树脂实验所得最大吸附量为１０.７３ｍｇ/ｇꎮ２.２.２㊀洗脱剂体积分数对解吸效果的影响㊀不同洗脱剂体积分数对静态吸附效果的影响见图２ꎮ根据图２可知ꎬ茶皂素的解吸率与乙醇体积分数成正相关ꎬ体积分数７０％和８０％的乙醇静态解吸率分别为８３％和９１.１％ꎮ从经济性角度考虑ꎬ可选择体积分数７０％乙醇为适宜的洗脱剂ꎬ如果从解吸效果来考虑ꎬ可选用体积分数８０％乙醇进行洗脱ꎮ图１㊀ＮＫＡ￣９型树脂静态吸附动力学曲线Ｆｉｇ.１㊀ＤｙｎａｍｉｃａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｃｕｒｖｅｓｏｆｔｙｐｅｓＮＫＡ￣９ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓｒｅｓｉｎｓ㊀图２㊀乙醇体积分数对静态解吸率的影响Ｆｉｇ.２㊀Ｅｆｆｅｃｔｏｆｅｔｈａｎｏｌｍａｓｓｆｒａｃｔｉｏｎｏｎｓｔａｔｉｃｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎｒａｔｅ２.３㊀ＮＫＡ￣９型树脂动态吸附２.３.１㊀泄露曲线㊀由于树脂吸附容量一定ꎬ当大孔树脂吸附达到一定容量时ꎬ其对物质的吸附减弱甚至消失[１５]ꎬ因此动态吸附选择合适的上样量是树脂纯化技术的关键ꎬ而泄露曲线就是为了选择合适的上样量ꎮ实验结果从图３可以看出ꎬ上样量到２５~５０ｍＬ之间ꎬ流出液中茶皂素质量浓度呈大幅上升趋势ꎬ５０到１２５ｍＬ之间ꎬ幅度减小ꎬ１２５ｍＬ之后ꎬ流出液茶皂素质量浓度趋于平缓ꎬ可能是树脂达到了吸附饱和状态ꎮ考虑到尽量接近树脂的吸附容量ꎬ因此选择１２５ｍＬ上样量最为合适ꎮ２.３.２㊀上样流速对吸附率的影响㊀上样流速对吸附率的影响如图４所示ꎮ由图４可知ꎬ吸附率与上样流速成反比ꎬ可以认为流速变大ꎬ茶皂素在树脂内的扩散速度变慢ꎬ导致吸附率减小ꎮ当上样流速为２.５ｍＬ/ｍｉｎ时ꎬ吸附率最大为７３.５８％ꎬ２.５~６.５ｍＬ/ｍｉｎ时ꎬ吸附率没有明显减小ꎬ而当上样流速为８ｍＬ/ｍｉｎ时ꎬ吸附率下降到６６.０４％ꎬ此后吸附率随上样流速的增加而下降平缓ꎬ考虑到吸附稳定性ꎬ故选择上样流速为８ｍＬ/ｍｉｎ较为合适ꎮ第６期孙万里:茶皂素提取条件的优化及纯化研究４３㊀图３㊀ＮＫＡ￣９树脂的泄露曲线Ｆｉｇ.３㊀ＬｅａｋａｇｅｃｕｒｖｅｏｆｔｙｐｅｓＮＫＡ￣９ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｒｅｓｉｎ图４㊀上样流速对吸附率的影响Ｆｉｇ.４㊀Ｅｆｆｅｃｔｏｆｌｏａｄｉｎｇｆｌｏｗｒａｔｅｏｎａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｒａｔｅ㊀㊀图５㊀不同乙醇体积分数动态洗脱效果Ｆｉｇ.５㊀Ｄｙｎａｍｉｃｅｌｕｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｔｈａｎｏｌｍａｓｓｆｒａｃｔｉｏｎ２.４㊀洗脱条件对动态洗脱效果的影响２.４.１㊀洗脱剂乙醇体积分数㊀乙醇是一种较为安全且比较常用的洗脱剂ꎬ能够使树脂产生溶胀作用ꎬ降低树脂与被吸附物质之间的作用力(范德华力或生成氢键)ꎬ使树脂上的被吸附物质容易解吸下来[１６－１７]ꎮ在洗脱流速５ｍＬ/ｍｉｎ时ꎬ洗脱剂用量６０ｍＬ时ꎬ不同的乙醇体积分数洗脱效果如图５ꎮ从图５可以看出体积分数４０％㊁５０％㊁６０％乙醇洗脱效果增速较慢ꎬ从体积分数６０％乙醇洗脱开始ꎬ洗脱液中茶皂素质量浓度随之增加较快ꎬ到９０％乙醇洗脱时茶皂素质量浓度达到最高ꎬ可能是乙醇浓度越高ꎬ对树脂的溶胀作用更好ꎬ洗脱效果也更好的缘故ꎬ从经济角度考虑ꎬ选用体积分数为８０％的乙醇作为后续洗脱条件的研究ꎮ２.４.２㊀洗脱剂用量㊀在洗脱流速５ｍＬ/ｍｉｎ时ꎬ洗脱剂用量对洗脱效果的影响见图６ꎮ由图６可知ꎬ体积分数９０％的乙醇只洗脱部分茶皂素ꎬ且峰形跟８０％乙醇对比较为不对称ꎬ有拖尾现象发生ꎻ反观８０％乙醇洗脱较为集中且峰形对称ꎬ５０ｍＬ洗脱剂用量能使洗脱液中茶皂素质量浓度达到１.５７ｇ/Ｌꎬ可能是洗脱剂用量５０ｍＬ时左右时恰好能把树脂上吸附的茶皂素洗脱下来ꎬ而过多的洗脱剂会稀释洗脱液中的茶皂素的含量ꎬ过少的洗脱剂无法把树脂上吸附的茶皂素洗脱下来的缘故ꎮ因此ꎬ选择体积分数８０％乙醇进行动态洗脱ꎬ用量为５０ｍＬꎮ图６㊀ＮＫＡ￣９型树脂的动态解吸曲线Ｆｉｇ.６㊀ＤｙｎａｍｉｃｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎｃｕｒｖｅｓｏｆｔｙｐｅｓＮＫＡ￣９ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｒｅｓｉｎ㊀㊀图７㊀不同洗脱流速对洗脱效果的影响Ｆｉｇ.７㊀Ｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎｆｌｏｗｒａｔｅｓｏｎｅｌｕｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ２.４.３㊀洗脱流速㊀用８０％乙醇作为洗脱剂ꎬ在不同洗脱剂用量的情况下ꎬ３种洗脱流速的实验结果见４４㊀生㊀物㊀质㊀化㊀学㊀工㊀程第５３卷图７ꎮ３种洗脱流速㊁洗脱效果都是随洗脱剂用量的增加呈现先上升后下降的趋势ꎬ洗脱剂用量５０ｍＬ最好ꎬ与２.４.２节实验结果一致ꎻ流速１０ｍＬ/ｍｉｎ时洗脱有拖尾现象发生ꎻ流速１５ｍＬ/ｍｉｎ时峰形略宽ꎬ洗脱不彻底ꎮ综合来看ꎬ洗脱流速５ｍＬ/ｍｉｎ时最佳ꎮ在以体积分数８０％乙醇ꎬ洗脱流速５ｍＬ/ｍｉｎꎬ用量５０ｍＬ进行洗脱ꎬ洗脱液中茶皂素质量浓度为１.２５ｇ/Ｌꎬ洗脱液经干燥得茶皂素纯品纯度９５％ꎮ李明静等[１８]和曹万新等[１９]对大孔吸附树脂法和传统的有机溶剂萃取法进行比较研究发现工艺较为简单ꎬ得到的茶皂素产品颜色浅ꎬ纯度在９０％左右ꎬ这和本研究的结果基本一致ꎬ且本研究纯化得到的茶皂素纯度更高ꎬ为９５％ꎮ因此ＮＫＡ￣９大孔树脂是一种比较好的纯化茶皂素树脂ꎮ３㊀结论３.１㊀采用茶籽饼为原料ꎬ乙醇为提取剂ꎬ提取茶皂素的最佳工艺条件为料液比１ʒ９(ｇʒｍＬ)ꎬ乙醇体积分数６０％ꎬ提取温度６０ħ和提取时间为３ｈꎬ在此条件下提取得率１４.９％ꎮ３.２㊀采用大孔吸附树脂ＮＫＡ￣９对茶皂素粗品静态吸附实验表明:在０.５ｈ之内ꎬ树脂基本达到饱和ꎬ说明ＮＫＡ￣９大孔树脂是一种快速吸附型树脂ꎻ吸附时间３ｈ时ꎬ吸附量可达到１０.７３ｍｇ/ｇꎬ表明树脂的吸附效果较好ꎮ用８０％体积分数的乙醇进行解吸实验解吸率最大能达到９１.１％ꎬ表明ＮＫＡ￣９树脂具有良好的洗脱性能ꎮ３.３㊀对ＮＫＡ￣９树脂的动态吸附与解吸进行研究ꎬ实验表明进行动态吸附时ＮＫＡ￣９树脂上样量１２５ｍＬ和上样流速８ｍＬ/ｍｉｎ较佳ꎬ吸附率为６６.０４％ꎮ洗脱实验结果表明:洗脱时以体积分数８０％乙醇㊁乙醇用量５０ｍＬ进行洗脱ꎬ洗脱流速为５ｍＬ/ｍｉｎ时效果较好ꎬ这时洗脱液中茶皂素质量浓度在１.２５~１.５７ｇ/Ｌ之间ꎬ洗脱液经干燥得茶皂素纯品纯度为９５％ꎮ参考文献:[１]张星海ꎬ杨贤强.茶皂素性质及应用研究近况[Ｊ].福建茶叶ꎬ２００３(２):１７１９.[２]张国运.茶皂素提取工艺及其应用研究进展[Ｊ].日用化学工业ꎬ２００６ꎬ３６(３):１７４１７７.[３]胡健华ꎬ陈新新.油茶皂素㊁油茶多糖及糖萜素的化学结构㊁理化性质综述[Ｊ].武汉工业学院学报ꎬ２０１２ꎬ３１(２):２０２３. 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茶皂素的分离纯化方法的初步研究茶皂素是一种五环三萜类化合物，可在茶叶中广泛存在。

它具有抗氧化、抗癌和抗病毒等多种生物活性，因此引起了广泛的研究兴趣。

为了进一步研究茶皂素的生物活性和应用，需要将茶叶中的茶皂素进行分离纯化。

本文通过初步研究探索了一种简单有效的茶皂素分离纯化方法。

选择新鲜的茶叶作为研究对象，将其加工成茶叶粉末。

茶叶粉末中含有茶皂素以及其他杂质物质，需要通过一系列的分离纯化步骤将茶皂素纯化出来。

第一步是对茶叶粉末进行提取。

将茶叶粉末与乙醇混合，并在适当的温度下进行搅拌。

乙醇能够溶解茶叶中的茶皂素，而对其他杂质物质的溶解能力较小。

经过一段时间的提取，茶皂素被乙醇溶解出来，形成提取液。

第二步是对提取液进行筛选。

将提取液通过滤纸或纱布进行筛选，去除悬浮在液体中的大颗粒物质。

这样可以得到相对清澈的提取液，其中含有茶皂素和少量的乙醇。

第三步是对提取液进行浓缩。

将提取液放在恒温槽或旋转蒸发仪中，通过加热和蒸发的方法将乙醇从提取液中蒸发掉。

在一定的温度和时间条件下，乙醇会逐渐从液体中挥发出去，最终得到浓缩液。

第四步是对浓缩液进行结晶。

将浓缩液溶解在适当的溶剂中，然后通过慢慢冷却的方式促使茶皂素结晶。

结晶过程中，茶皂素会逐渐从溶液中析出出来，并形成结晶物。

最后一步是对结晶物进行干燥和纯化。

将结晶物经过滤和洗涤后，用溶剂或水进行重结晶，将茶皂素纯化到较高的纯度。

最后使用真空干燥或空气干燥的方法将茶皂素完全干燥，得到纯净的茶皂素。

通过上述的分离纯化方法，可以初步得到较为纯净的茶皂素。

这种方法简单易行，适用于茶叶中茶皂素的初步分离纯化。

在实际的研究中，还可以根据需要采用其他分离纯化方法对茶皂素进行进一步纯化和提纯。

茶皂素的提取和测定一实验目的1 通过应用不同的试剂对茶饼中的茶皂素进行提取，研究讨论茶皂素在不同溶剂中的溶解度。

2 应用不同茶皂素易溶于极性溶剂的原理，探究不同浓度的乙醇对茶皂素的提取率，发现其规律。

3 学习和掌握定量测定茶饼中茶皂素的基本原理和方法。

二实验原理1 提取利用超声波具有振动和的原理，可是茶饼细胞破碎，使溶解进入其细胞，溶解茶皂素，再用沉淀剂沉淀，干燥得到粗产品。

2 测定运用分光光度法精确测定其含量，计算产率、提取率。

三实验材料和仪器1 材料和试剂：油茶饼粕（实验室）；95％乙醇、甲醇，蒸馏水，香草醛，硫酸，H2SO4 ,乙醚,活性炭,2仪器超声波清洗器（或振荡器）,高速粉碎机，水真空过滤装置,干燥箱,紫外分光光度计,抽滤装置,分液装置，衡流泵，电子天平(精确至0.0001g ), 电热恒温水浴锅, 电热恒温鼓风干燥箱 , 高速离心机, 20mL具塞试管（若干），吸量管，移液管，三角锥瓶，容量瓶等。

四实验步骤：1 标准曲线的制备：（1）溶液的配置①标准溶液的配制称取0.1 g ( 精确到0.0001 g )茶皂素标准品，用95％乙醇溶解后置入100 mL容量瓶，并用95％乙醇定容。

分别吸取0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL于20 mL具塞试管中，用蒸馏水定容为10ml，则得含茶皂素 0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mg/mL七种不同浓度的标准溶液。

② 5%香草醛-硫酸溶液的配制称5g香草醛，加入10%硫酸乙醇定容100ml即可。

（2）标准曲线的制作在最大吸收波长545 nm 处测定不同浓度的茶皂素标准液的吸光度，以茶皂素含量为横坐标，吸光度为纵坐标，作标准曲线，并计算回归方程。

2 茶皂素的提取：茶皂素超声波提取的具体流程如下：茶皂素实验提取流程图方法一：不同溶剂对茶皂素的提取取脱脂茶饼样品3×1g置于3个三角瓶中，分别加入蒸馏水、70%甲醇、70%乙醇各20ml，加塞摇匀，于超声波清洗器（振荡器）中提取2h，过滤，取上清液，加入沉淀剂沉淀，干燥得到初产品。

乙醇提取茶皂素工艺技术
乙醇提取茶皂素是一种常用的提取方法，下面将介绍其工艺技术。

工艺步骤：
1. 预处理：将新鲜茶叶进行清洗，去除杂质和不健康的叶片，然后晾干待用。

2. 粉碎：将晾干的茶叶使用研磨机进行粉碎，使茶叶颗粒变小，增加茶叶与乙醇接触的表面积。

3. 乙醇浸提：将粉碎后的茶叶与乙醇按一定的比例混合，放入浸取釜中，开始浸提。

浸取釜最好是密闭的，可以充分保持乙醇浸提液的温度和湿度。

浸提的时间一般为24小时，提取的温度为40-60℃，浸提时
间和温度可根据具体实验要求进行调整。

4. 滤液回收：浸提结束后，将浸提液和茶渣通过滤网分离，回收乙醇浸提液。

5. 浓缩：将回收的乙醇浸提液进行浓缩。

浓缩方法可以采用低温浓缩或者真空浓缩。

低温浓缩一般进行于50-70℃的条件下，真空浓缩可以在常温下进行。

浓缩的目的是将提取液中的水分蒸发掉，浓缩后的物料更加
纯净。

6. 结晶：将浓缩后的乙醇提取液冷却至合适的温度，茶皂素会
逐渐析出结晶。

可以通过升温降温等方式控制结晶的速度和纯度。

7. 分离和干燥：将结晶物与溶液分离，可以通过离心机将结晶物离心分离，然后用乙酸乙酯进行洗涤和过滤。

分离后的茶皂素可以通过风干、真空干燥等方式进行最后的干燥处理，使其含水量降至一定的水平，从而得到纯净的茶皂素产品。

以上就是乙醇提取茶皂素的工艺技术。

乙醇提取是一种简单有效的提取方法，可以提取茶叶中的茶皂素等活性成分，具有广泛的应用前景。

同时应注意随时掌握好产量和质量的平衡，保证提取的茶皂素的成分和品质。