下载文档原格式
荧光分光光度计的原理光度计工作原理荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。
其能供应包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等很多物理参数，从各个角度反映了分子的成键和结构情况。
通过对这些参数的测定，不但可以做一般的定量分析，而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化，从而阐明分子结构与功能之间的关系。
荧光分光光度计的激发波长扫描范围一般是190～650nm，发射波长扫描范围是200～800nm。
可用于液体、固体样品（如凝胶条）的光谱扫描。
荧光分光光度计的原理：由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接受，然后以图或数字的形式显示出来。
物质荧光的产生是由在通常情形下处于基态的物质分子吸取激发光后变为激发态，这些处于激发态的分子是不稳定的，在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出，从而产生荧光。
不同物质由于分子结构的不同，其激发态能级的分布具有各自不同的特征，这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱，因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。
在溶液中，当荧光物质的浓度较低时，其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系，即IF=KC，利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析，与紫外—可见分光光度法仿佛，荧光分析通常也接受标准曲线法进行。
超微量分光光度计的日常维护和保养超微量分光光度计是一类很紧要的分析仪器，常用于定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。
利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器，常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
无论在物理学、化学、生物学、医学、材料学、环境科学等科学讨论领域 ,还是在化工、医药、环境检测、冶金等现代生产与管理部门 ,紫外可见分光光度计督有广泛而紧要的应用。
超微量分光光度计是精密光学仪器，正确安装、使用和保养对保持仪器良好的性能和保证测试的精准度有紧要作用。
F-7000及F4500荧光分光光度计操作规程
1．把稳压器输入电源插入墙壁电，打开稳压器开关，稳定10分钟
2. 刷卡登入信息解锁计算机电源，开始实验。
并在
记录本登记开始时间，仪器，使用人等息息。
3. 打开荧光分光光度计
顺序：power （on）→等约10秒，按Xe lamp
（start）至亮→按 MAN 到 ON状态。
4. 打开计算机，找到运行程序开始菜单中选择程序
下的¡°FL menu¡±，点击进入仪器操作界面，选择测试模式
5. 将样品放入样品室，按F5，进行样品测量，如有
多个样品，依次测量。
6. 测量完毕后在数据转换窗口进行数据转换，处理
完毕可保存结果。
7. 刷卡下机，记录结束时间，告知仪器管理员
8 .关机关闭计算机，再以开机的相反顺序关机，但
Xe Lamp 不用关，最后关闭电源。
关机后30分钟内不得重开仪器。
9. 如稳压电源已经无其它仪器使用，关闭稳压电源，
拔出墙壁电。
荧光分光光度计的基本原理荧光分光光度计（Fluorescence Spectrophotometer）是一种测量物质荧光强度的仪器。
它可用于分析、研究、检测生物分子的结构、功能和相互作用等领域，在生物学、化学、生物医学、制药等领域有着广泛的应用。
本文将介绍荧光分光光度计的基本原理及其测量过程。
荧光的基本原理荧光是自然界中一种常见的现象，指的是物质受到激发后放出的短波长光线，这种现象与物质的分子结构和化学成分有关。
当物质受到激发后，外部能量使得其激发态能量提高，分子内部发生跃迁，最终返回到基态时发出荧光。
荧光的光谱分布范围通常从400nm到750nm，与吸收光谱的重叠区有关。
荧光测量的原理荧光的强度与物质的分子结构、环境条件和激发波长等因素有关。
荧光分光光度计采用的测量原理是荧光分析，它通过激发光激发荧光，然后测量荧光发射的强度，从而分析样品中某种荧光物质的含量。
在荧光分析中，激发光的波长需要与目标荧光物质的吸收光谱重叠，以激发目标荧光物质的分子。
当荧光物质受到激发后，分子会从基态到激发态跃迁，然后辐射出相应的荧光。
荧光的强度与荧光物质的浓度成正比，因此可以通过测量荧光强度来计算荧光物质的浓度。
荧光强度的测量需要使用荧光分光光度计。
该仪器可以选择恰当的激发波长，测量荧光发射的强度，并将荧光强度转换为相应的荧光物质浓度值。
荧光分光光度计的组成及测量过程荧光分光光度计的组成包括光源、单色器、样品室、检测器和记录装置等。
在测量过程中，样品需放置在样品室内，通过调节激发光波长和荧光发射波长来测定样品中荧光物质的浓度。
荧光分光光度计的具体测量过程如下：1.设定激发波长：荧光分析中，激发波长需要与目标荧光物质的吸收光谱重叠，以激发目标荧光物质的分子。
通过调节单色器可以选择恰当的激发波长。
2.注入样品：样品通过样品室，可以防止激发光对测量的影响。
样品需要与激发波长重叠，并且需要稳定地放置在样品室内。
3.测量荧光强度：通过检测器测量样品产生的荧光强度。
荧光分光光度计技术指标主要参数1.光源：15OW稳态敬灯，自动去臭氧灯室设计2.光源寿命：2000小时质保3.光栅：1300线∕mm全息闪耀凹面光栅4.检测器：光电倍增管R928（发射侧），硅光电二极管（参比侧）★5.光谱范围：200"900nm6.光谱带宽:激发侧15nm,3nm,5nm,10nm,15nm,20nm六档自动可调；发射侧1.0nm,3nm,5nm,10nm,15nm,20nm六档自动可调7.光谱分辨率：Inm（发射光谱）★8.波长准确度：±1nm9.波长重复性：±0.2nm★10.波长扫描速度：20nm∕min~60000nm∕min,九档自动可调11.波长切换速度：60000nm∕min★12.信噪比：1000:1（RMS值），350:1（峰-峰值），水的拉曼峰（取峰值点抖动，而非远端基线点噪音），激发波长350nm,激发和发射光谱带宽5nm,积分时间2秒13.光源补偿方式：单色光监测比例运算14.灵敏度选择：高、低和自动15.通讯接口：USB2.0/3.0,自动进样器接口，外部触发接口，模拟输出端口16.操作软件运行环境：WindOWS7（32位或64位）17.软件功能模块：包括光谱扫描、三维荧光扫描、时间程序测定、定量测定、光度测定、量子产率测定、量子效率测定、报告打印、原始数据导出、仪器性能认证等18.光谱测量模式：可测量激发荧光光谱、发射荧光光谱、同步荧光光谱、三维荧光光谱和生物发光光谱、化学发光光谱、电致发光光谱★19.光谱校正：可实现激发光谱和发射光谱的自动光谱校正（荧光强度标准化）20.固体样品尺寸限制：宽5~140≡ι,高12~1Iomn1,厚20mm以下21.样品最小量：InI1。
荧光分光光度计的使用流程1. 准备工作在使用荧光分光光度计之前，需要进行一些准备工作。
以下是一些必要的准备事项： - 确保荧光分光光度计已经连接到电源，并且通电正常。
- 检查荧光分光光度计的灯泡是否正常工作，灯泡是否需要更换。
- 确保荧光分光光度计的样品室是干净的，没有任何杂质或污垢。
2. 打开荧光分光光度计软件打开荧光分光光度计的软件，通常会有一个图形界面供用户使用。
以下是打开软件的步骤： 1. 双击荧光分光光度计软件的图标，启动软件。
2. 在软件界面上找到并点击“打开”按钮，选择要分析的样品文件。
3. 样品的输入在荧光分光光度计软件中，需要输入样品的相关信息。
以下是样品输入的步骤：1. 在软件界面上找到并点击“新建样品”按钮，创建一个新的样品文档。
2. 在样品文档中填写样品的名称、浓度、体积等信息。
4. 调整荧光分光光度计的参数荧光分光光度计的参数调整非常重要，直接影响到后续的实验结果。
以下是参数调整的步骤： 1. 在软件界面上找到并点击“参数设置”按钮，进入参数设置界面。
2. 根据实验要求，调整荧光分光光度计的激发波长、发射波长、积分时间等参数。
5. 测量样品的荧光信号完成参数调整后，可以开始测量样品的荧光信号了。
以下是测量样品荧光信号的步骤： 1. 将准备好的样品放入荧光分光光度计的样品室中。
2. 在软件界面上点击“开始测量”按钮，荧光分光光度计开始记录样品的荧光信号。
3. 等待一段时间后，荧光分光光度计会自动停止测量。
6. 分析和保存实验结果测量完成后，需要对实验结果进行分析和保存。
以下是实验结果分析和保存的步骤： 1. 在软件界面上找到并点击“数据分析”按钮，进入数据分析界面。
2. 根据需要，选择相应的数据分析方法，进行实验结果的分析。
3. 点击“保存”按钮，将实验结果保存到指定文件夹中。
7. 清洁和关闭荧光分光光度计实验结束后，需要进行荧光分光光度计的清洁和关闭。
以下是清洁和关闭荧光分光光度计的步骤： 1. 关闭荧光分光光度计软件，确保所有操作已保存。
原子荧光分光光度计的原理1.原子激发：首先，样品中的原子被光源中的光子激发。
光源通常使用空气-氧乙炔火焰或电感耦合等离子体（ICP）等。
火焰中的能量来自于氢气和乙炔的燃烧，产生高温和高压的条件，使得原子能级跃迁的能量变得可行。
ICP使用高频电源产生电磁场，使氩气离子化，形成等离子体，并产生高温和高能的原子激发。
2.原子荧光：原子在激发态的能级上停留的时间非常短暂，通常在纳秒量级，然后从高激发态退回到基态。
在这个过程中，原子会发出荧光辐射。
荧光发射的波长和强度与元素的特征有关，每个元素具有唯一的光谱“指纹”，可以用来识别和定量分析。
3.分光光度计：在荧光发射过程中，原子产生的荧光光子以球面波的方式向四面八方传播。
为了测量和分析荧光光子的波长和强度，需要使用分光光度计。
分光光度计将荧光光子引导到光学器件（例如光栅或玻璃棱镜）中，在光学器件中，不同波长的光经过衍射和干涉效应后，被分离成谱线。
4. 探测器：分光光度计将分离后的荧光谱线引导到探测器上进行测量。
探测器通常是光电二极管（photodiode）或光电倍增管（photomultiplier tube，PMT）。
荧光光子在探测器上产生光电效应，产生电流信号。
电流信号的强度与荧光光子的强度成正比。
5.数据分析和结果处理：探测器输出的电流信号经过放大和数字化后，可以通过计算机进行数据处理和分析。
通过比较样品信号和标准品信号，可以定量分析样品中元素的含量。
总之，原子荧光分光光度计的原理是将样品中的原子激发后，产生的原子荧光辐射通过分光光度计分离成谱线，然后使用探测器测量荧光光子的强度。
通过分析荧光光子的波长和强度，可以实现元素的定量分析。
这种分析技术具有较高的选择性、灵敏度和准确性，广泛应用于化学、环境、生物、地质等领域的分析实验中。
荧光分光光度计的优缺点荧光分光光度计是一种广泛使用的光学仪器，主要用于分析化学、光学、生物医学和环境科学等领域。
以下是该仪器的优缺点及其应用。
优点高灵敏度荧光分光光度计可以对微弱的荧光信号进行检测和分析，灵敏度高。
其检测限可以达到纳摩尔级别，适用于低浓度荧光分子检测。
例如，在制药工业中，荧光分光光度计被用于药品的纯度检测和杂质检测。
良好的选择性荧光分光光度计可以根据不同的分子的荧光特性进行分析，并且可以选择性地对不同的荧光信号进行检测，避免了背景信号的干扰。
例如，在生物医学领域，荧光分光光度计被广泛应用于检测细胞、分子、蛋白质和DNA等生物分子。
快速分析荧光分光光度计可以实现非破坏性、快速分析，可以大大缩短分析时间。
例如，在环境保护领域，荧光分光光度计被用于检测大气和水中的污染物，并可以快速分析样品中的各种污染物的成分和含量。
缺点灵敏度受环境影响荧光分光光度计的灵敏度受环境影响，例如光的强度、温度和湿度等因素，这些因素会影响分子的荧光特性，从而影响荧光分析数据的准确性。
因此，在实验操作时，必须对环境条件进行严格控制和稳定。
背景信号影响荧光分光光度计检测荧光信号时，可能会受到背景光的影响。
例如，样品中存在其他有机物或杂质等，可能会与目标荧光物质发生相互作用，并产生背景荧光信号，这将会影响荧光信号的准确性和测量结果的可靠性。
价格昂贵荧光分光光度计通常是一种昂贵的仪器，因为它需要使用高质量的光学元件、探测器以及高功率的激光和激发源等设备。
因此，它比其他光学分析仪器更昂贵。
应用荧光分光光度计是一种多功能的分析仪器，被广泛用于科学研究、医学、环境、制药和化学等领域。
以下是一些常见的应用场景：生物医学荧光分光光度计用于生物医学研究中的DNA和蛋白质检测、单细胞信号研究和药物筛选等。
制药荧光分光光度计可用于药物的纯度和杂质检测，如荧光显微镜检测药物中的活性成分。
环境保护荧光分光光度计可以用于大气和水体中污染物的检测，帮助环境保护部门分析污染源并判断区域环境是否受到污染。
仪器操作流程荧光分光光度计的操作指南操作指南荧光分光光度计是一种用于测量样品的荧光光谱和荧光强度的仪器。
准确的操作流程能够确保测量结果的准确性和重现性。
本操作指南将介绍荧光分光光度计的基本操作流程，以帮助您正确地操作该仪器。
一、准备工作1. 检查仪器：确保仪器运行正常，灯泡、滤光片和样品池等部件是否齐全、完好，无破损或损坏。
2. 清理仪器：使用干净的软布轻轻擦拭仪器表面，以去除灰尘和污垢。
二、打开仪器1. 打开电源开关，待仪器运行稳定。
2. 检查仪器显示屏是否正常显示。
三、选择测试模式1. 根据实验需求，选择适当的测试模式：荧光光谱或荧光强度测量。
2. 使用仪器面板上的选择钮或相关命令设置仪器工作模式。
四、设置仪器参数1. 设置激发波长：根据需要，在仪器面板上或相关命令中设置激发波长。
2. 设置发射波长：根据需要，在仪器面板上或相关命令中设置发射波长。
3. 设置积分时间：根据样品的荧光强度，确定适当的积分时间。
4. 设置滤光片：根据实验需求，选择适当的滤光片。
5. 设置温度：如需要稳定的温度环境，设置合适的温度参数。
五、样品处理1. 准备样品：根据实验要求，制备需要测量的样品。
2. 使用无尘纸轻轻擦拭样品池，确保样品池表面干净无污垢。
3. 将样品注入样品池中，保持样品池盖密封。
六、开始测量1. 点击仪器面板上的开始测量按钮，或输入相关命令以开始测量。
2. 仪器将自动进行激发和发射光源的控制，同时记录测量数据。
七、数据处理1. 根据实验要求选择适当的数据处理方法。
2. 对荧光光谱测量结果进行波长校正、基线校正等处理操作。
3. 对荧光强度测量结果进行数据分析、结果计算等操作。
八、保存数据1. 将测得的数据保存至计算机或其他存储设备中。
2. 如需要，可以在仪器面板上导出数据以备将来使用。
九、关闭仪器1. 停止测量操作。
2. 关闭仪器电源开关。
操作荧光分光光度计需要仔细的步骤和耐心，确保操作准确无误，以获取可靠的测量结果。
荧光分光光度计操作规程
一、开机
1、确保分光光度计与个人电脑是通过随机配带的USB数据线连接
2、将电脑打开，打开荧光分光光度计的电源开关。
3、检查表示氙灯是否被点着及仪器处于工作状态的批示灯是亮的。
4、双击桌面上荧光分析软件快捷图标。
5、等待程序初始化，系统将自检，如果出现错误提示，立即关闭荧光分光光度计，过15
分钟再重新启动。
二、关机
1、选择文件菜单里的“关闭”命令，点击“是”终止联机。
2、出现是否关机的图示，点击“是”关灯并退出荧光分析软件。
3、等氙灯充分冷却后再关荧光分光光度计。
三、操作
1、创建一个分析方法
从工具菜单中，选择配置命令来设置分析条件。
扫描类型选择波长扫描，根据标准再设定扫描模式、数据模式、发射波长、激发波长等参数。
2、测量样品
选择好测量方法后，进入波长测量界面，将样品入入指定的样品槽，点击菜单工具－扫描进行测量或点击扫描按钮进行测量，如果中途暂停测量，点击工具条上的停止按钮。
扫描完毕后，图谱处理窗口或打印窗口将会自动弹出。
峰值表将显示峰数、峰的起始位置、峰的终止位置、峰高值、谷位置、谷值、半峰宽等信息。
3、谱图处理
对样品和标准按照同样的方法进行处理，并对数据结果进行打印。
F-4600荧光分光光度计实验报告
一﹑荧光分光光度计工作原理：
采用脉冲氙灯作光源（1 μs 半宽）保证测量结果有很好的重复性。
高档精密仪器配置：激发光部分和荧光发射部分,分别采用900条/mm凹面衍射光栅。
检测器采用高灵敏度高光电倍增管,倍增信号送计算机处理，最后将分析结果转入显示器的屏幕上显示。
由光源氙弧灯发出的光通过切光器使其变成断续之光以及激发光单色器变成单色光后，此光即为荧光物质的激发光，被测的荧光物质在激发光照射下所发出的荧光，经过单色器变成单色荧光后照射于测样品用的光电倍增管上，由其所发生的光电流经过放大器放大输至记录仪，激发光单色器和荧光单色器的光栅均由电动机带动的凸轮所控制，当测绘荧光发射光谱时，将激发光单色器的光栅，固定在最适当的激发光波长处，而让荧光单色器凸轮转动，将各波长的荧光强度讯号输出至记录仪上，所记录的光谱即发射光谱（emission spectrum），简称荧光光谱。
当测绘荧光激发光谱时，将荧光单色器的光栅固定在最适当的荧光波长处，只让激发光单色口的凸轮转动，将各波长的激发光的强度讯号输出至记录仪，所记录的光谱即激发光谱（emission spectrum）。
当进行样品溶液的定量分析时，将激发光单色器固定在所选择的激发光波长处，将荧光单色器调节至所选择的荧光波长处，由记录仪得出的信号是样品溶液的荧光强度。
二﹑方法
液体试样荧光光谱分析、定性和定量测定
自动96位孔板阅读器:用于生物样品分析、PCR技术
液谱联用配套装置: 液相色谱－荧光检测联用技术用于环境检测，如多环芳烃检测
CRYO-1低温荧光装置: 在液氮（温度77K）条件下检测具有线状光谱的试样
CRYO-2低温荧光装置: 在液氮（温度77K）条件下检测具有带状光谱的试样
外接光纤分光检测附件: 有价证券上的荧光标记的检测、漂白剂的性能测试、各种粉末性能测试
分光光度检测:
三﹑使用范围
可测固体、液体样品和薄膜材料。
可完成三维测量，波长扫描(荧光、磷光、发光)，时间扫描(荧光、磷光、发光)，定量分析(荧光、磷光、发光)，磷光寿命测定，叁波长测定。
主要用于荧光、磷光、化学和生物发光的研究，应用于材料，生命科学等高科技领域，还用于质控，教学等常规分析领域。
1、波长范围：200~900 nm，和零级光
2、扫描速度达1200 nm·min-1
3、分辨率：1.0 nm
4、狭缝宽度：1.0nm(最常用)
激发通道波长范围,nm 210-730 (840)(1)
透射通道波长范围,nm 210-730 (840)(1)
荧光通道波长范围,nm 210-690 (840)(1)
光栅分辨率,不大于nm 不大于8 nm (15)(2)(适合定量测定的带宽,如需要高分辨率测定另有单色仪)
光栅波长设置精度,nm 不大于3
水拉曼峰信噪比(3) 不小于100(200)(4)
标准10mm样品池中的
样品量3 ml
供电电源220V,50Hz
四﹑步骤
1﹑打开电脑主机电源。
2﹑,打开F-4600主机电源。
间隔10秒后，按下氙灯开关按键（不得超过5秒），当黄灯亮起不熄灯时（运行20分钟后），打开主板电源。
3﹑点击FLsolutions图标，打开仪器工作程序窗口。
4﹑将待测溶液倒入荧光比色皿，用柔软的滤纸（最好为擦镜纸），拭去荧光比色皿外侧溶液，打开仪器盖，将荧光比色皿放入仪器中的专用位置，盖好盖子。
5﹑点击“方法”图标。
在打开的框图中，点击“一般”图标，选择“波长扫描”方式：点击“仪器”图标，选择扫描方式为“发射”，固定激发波长为某一整数值X，发射扫描开始波长为“X+20”nm，发射扫描结束波长为“2X-20”nm,但发射扫描结束波长最大不超过900nm.。
6﹑点击“测量”图标，开始进行发射光谱扫描。
仪器结束扫描后自动给出相应的测量参数和最大发射波长及对应的荧光强度。
7﹑点击“方法”图标。
在打开的框图中，点击“仪器”图标，选择扫描方式为“激发”，发射波长选择刚才所得的最大发射波长数值Y，激发扫描开始波长为“1/2Ｙ＋２０”nm，激发扫描结束波长为“Ｙ－２０”nm。
８﹑点击“测量”图标，开始进行激发光谱扫描。
仪器结束扫描后自动给出相应的测量参数和最大激发波长及对应的荧光强度。
９﹑将激发波长设为“八﹑”确定的数值后。
重复“五﹑”至“八﹑”的布置。
１０﹑点击“方法”图标。
在打开的框图中，点击“一般”图标，选择“光度计”方式，选择“使用样品表”：点击“定量”图标，“定量”为波长，“校正曲线”为１级，“浓度”为ml/L, “小数点后位数”为1，点击“仪器”图标，在Ex和Em项填写获得的最佳激发波长发射波长数值，“重复”为3，“波长”为两者波长固定：点击“标准”图标，“样品数”为6，栏中分别输入相应溶液的浓度。
点击“确定”。
11﹑点击“样品”图标，选择测定的样品数目，点击“确定”。
12﹑将待测溶液倒入荧光比色皿，放入仪器荧光架。
点击“测量”，按提示逐步操作。
记录测量样品溶液的荧光强度﹑浓度﹑回归方程﹑相关系数和样品溶液浓度。
计量含量。
13﹑工作结束后，清洗荧光比色皿，关闭仪器工作程序窗口。
14﹑顺序关闭主板电源﹑主机电源。
